CN114681387A - 一种动物来源外泌体组合物及其在皮肤创伤修复中的应用 - Google Patents
一种动物来源外泌体组合物及其在皮肤创伤修复中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114681387A CN114681387A CN202210259777.4A CN202210259777A CN114681387A CN 114681387 A CN114681387 A CN 114681387A CN 202210259777 A CN202210259777 A CN 202210259777A CN 114681387 A CN114681387 A CN 114681387A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- animal
- parts
- exosome composition
- derived exosome
- chlorella
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 title claims abstract description 86
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 54
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 title claims abstract description 49
- 230000037314 wound repair Effects 0.000 title claims abstract description 11
- 206010072170 Skin wound Diseases 0.000 title claims abstract description 10
- 241000195649 Chlorella <Chlorellales> Species 0.000 claims abstract description 62
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims abstract description 28
- ZAKOWWREFLAJOT-CEFNRUSXSA-N D-alpha-tocopherylacetate Chemical compound CC(=O)OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C ZAKOWWREFLAJOT-CEFNRUSXSA-N 0.000 claims abstract description 21
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 21
- 229940042585 tocopherol acetate Drugs 0.000 claims abstract description 21
- 235000021119 whey protein Nutrition 0.000 claims abstract description 21
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 claims description 17
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 claims description 14
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims description 8
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims description 8
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims description 8
- 108010022355 Fibroins Proteins 0.000 claims description 6
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims description 5
- 239000007921 spray Substances 0.000 claims description 4
- 239000006071 cream Substances 0.000 claims description 3
- 239000006210 lotion Substances 0.000 claims description 2
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 abstract description 28
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 abstract description 28
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 abstract description 16
- 208000032544 Cicatrix Diseases 0.000 abstract description 14
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 abstract description 14
- 230000037387 scars Effects 0.000 abstract description 14
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 abstract description 13
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 abstract description 13
- 230000001969 hypertrophic effect Effects 0.000 abstract description 12
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 abstract description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 40
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 21
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 10
- 108010059820 Polygalacturonase Proteins 0.000 description 8
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 8
- 108010093305 exopolygalacturonase Proteins 0.000 description 8
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 6
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 5
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 5
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 5
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 4
- DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N Nicotinamide Chemical group NC(=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940096422 collagen type i Drugs 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RJZNPROJTJSYLC-LLINQDLYSA-N (4s)-4-acetamido-5-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-5-amino-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-amino-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-1,5-dioxopentan-2-yl]amino]-4-methylsulfanyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-car Chemical group OC(=O)CC[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O RJZNPROJTJSYLC-LLINQDLYSA-N 0.000 description 2
- DBGSRZSKGVSXRK-UHFFFAOYSA-N 1-[2-[5-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]-1,3,4-oxadiazol-2-yl]acetyl]-3,6-dihydro-2H-pyridine-4-carboxylic acid Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C1=NN=C(O1)CC(=O)N1CCC(=CC1)C(=O)O DBGSRZSKGVSXRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 2
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 2
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 2
- 230000002390 hyperplastic effect Effects 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 229960003966 nicotinamide Drugs 0.000 description 2
- 235000005152 nicotinamide Nutrition 0.000 description 2
- 239000011570 nicotinamide Substances 0.000 description 2
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 2
- 239000006072 paste Substances 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 2
- PQVHMOLNSYFXIJ-UHFFFAOYSA-N 4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]-1-[2-oxo-2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethyl]pyrazole-3-carboxylic acid Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C=1C(=NN(C=1)CC(N1CC2=C(CC1)NN=N2)=O)C(=O)O PQVHMOLNSYFXIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011725 BALB/c mouse Methods 0.000 description 1
- 241000195628 Chlorophyta Species 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710088172 HTH-type transcriptional regulator RipA Proteins 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 208000028990 Skin injury Diseases 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- JAWMENYCRQKKJY-UHFFFAOYSA-N [3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-ylmethyl)-1-oxa-2,8-diazaspiro[4.5]dec-2-en-8-yl]-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]methanone Chemical compound N1N=NC=2CN(CCC=21)CC1=NOC2(C1)CCN(CC2)C(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F JAWMENYCRQKKJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000002870 angiogenesis inducing agent Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000003796 beauty Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- RNFNDJAIBTYOQL-UHFFFAOYSA-N chloral hydrate Chemical compound OC(O)C(Cl)(Cl)Cl RNFNDJAIBTYOQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002327 chloral hydrate Drugs 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 210000003074 dental pulp Anatomy 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 239000013505 freshwater Substances 0.000 description 1
- 239000006481 glucose medium Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000003041 ligament Anatomy 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 1
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000011056 performance test Methods 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000000243 photosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000010814 radioimmunoprecipitation assay Methods 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000036573 scar formation Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000010008 shearing Methods 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001644 umbilical artery Anatomy 0.000 description 1
- 210000003606 umbilical vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/99—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from microorganisms other than algae or fungi, e.g. protozoa or bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
- A61K8/65—Collagen; Gelatin; Keratin; Derivatives or degradation products thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/67—Vitamins
- A61K8/678—Tocopherol, i.e. vitamin E
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
- A61K2800/59—Mixtures
- A61K2800/592—Mixtures of compounds complementing their respective functions
- A61K2800/5922—At least two compounds being classified in the same subclass of A61K8/18
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Birds (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本申请涉及生物医药技术领域,具体公开了一种动物来源外泌体组合物及其在皮肤创伤修复中的应用。一种动物来源外泌体组合物,按照重量份数计,包括外泌体10‑20份,小球藻生长因子10‑20份,生育酚乙酸酯0.5‑0.8份,乳清蛋白6‑10份。所述动物来源外泌体组合物能够促进成纤维细胞的增殖,增加Ⅰ型胶原蛋白的含量,使Ⅰ型胶原蛋白的含量提高46.88%以上,减小增生性瘢痕的面积。所述动物来源外泌体组合物能够用在皮肤创伤修复中,减小由创伤引起的增生性瘢痕的面积。
Description
技术领域
本申请涉生物医药技术领域,更具体地涉及一种动物来源外泌体组合物及其在皮肤创伤修复中的应用。
背景技术
增生性瘢痕(hypertrophic scars)是皮肤各类创伤、烧伤、感染、手术等原因引起的病理性变化,因其影响美观,可能造成患者心理上的负担。目前还不能控制创面愈合于适度的状态而避免瘢痕形成,特别是大面积深度皮肤损伤的更为复杂,涉及多种细胞及细胞因子参与细胞组织分化、血管形成等。
有报道指出,间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)是一种多功能的自我更新细胞,在再生医学中具有巨大的应用潜力,可用于多种疾病的治疗。间充质干细胞发挥作用的主要原因是间充质干细胞能够分泌一种直径为40-100nm的微小囊泡,这种微小囊泡被称为外泌体。外泌体中含有蛋白质、mRNAs、miRNAs和DNA,具有稳定、安全和便于保存的特点。因此,本申请以外泌体为研究对象,再通过与其它组分的相互配合,促进成纤维细胞、上皮细胞等多种细胞的增殖、分化及血管生成因子的分泌,提高Ⅰ型胶原蛋白的含量,从而修复受损的皮肤。
发明内容
为了提高Ⅰ型胶原蛋白的含量,减小增生性瘢痕的面积,本申请提供了一种动物来源外泌体组合物及其在皮肤创伤修复中的应用。
第一方面,本申请提供了一种动物来源外泌体组合物,按照重量份数计,包括外泌体10-20份,小球藻生长因子10-20份,生育酚乙酸酯0.5-0.8份,乳清蛋白6-10份。
在本申请中,动物来源外泌体组合物主要由外泌体、小球藻生长因子、生育酚乙酸酯和乳清蛋白构成,通过这四种元素的组成,可以促进成纤维细胞等生长细胞的增殖活性,提高Ⅰ型胶原蛋白的含量,从而减小增生性瘢痕的面积。
所述外泌体是间充质干细胞分泌的一种纳米级的小囊泡。外泌体具有多种与间充质干细胞相似的功能和作用。外泌体相较间充质干细胞而言,外泌体具有较高的稳定性,没有免疫原性。因此,外泌体可以用于化妆品领域中,具有广泛的应用前景。
据相关报道,间充质干细胞的来源较为广泛,主要存在于组织和器官中,如骨髓、肝脏、脾脏、肺肾、胃肠、骨骼肌、外周血、脂肪、韧带、胎盘、脐带、脐血、牙髓和皮肤等组织中。在本申请中,外泌体提取于胎生动物的脐带中,胎生动物选自羊、牛和猪。经过多次实验的验证,在保证动物来源外泌体组合物中组分的用量相同时,从羊脐带中获取的外泌体与小球藻生长因子、生育酚乙酸酯和乳清蛋白的协同能力较高,成纤维细胞的增殖活性和Ⅰ型胶原蛋白的含量较高,Ⅰ型胶原蛋白的含量提高72.88%;其次是从猪脐带中获取的外泌体,Ⅰ型胶原蛋白的含量提高65.99%;最后是从牛脐带中获取的外泌体,Ⅰ型胶原蛋白的含量提高64.87%。综上所述,在减小增生性瘢痕的面积上,外泌体优先选择在羊的脐带获得,其次是猪的脐带,最后是牛的脐带。
本申请所述外泌体的制备方法包括以下步骤:
S1,选用胎生动物的脐带培养带间充质干细胞,进行纯化,待细胞增殖融合至85%以上时,用胰蛋白酶消化传代培养;
S2,选取P3代脐带间充质干细胞继续传代培养,利用P4代细胞制备外泌体;
S3,外泌体的分离,去除细胞碎片,过滤后保存。
小球藻(Chlorella)为绿藻门小球藻属普生性单细胞绿藻,是一种球形单细胞淡水藻类,直径3-8微米。小球藻是地球上最早的生命之一,是世界上生长最快的植物之一,是一种高效的光合植物,以光合自养生长繁殖,分布极广。小球藻内包含有小球藻生长因子,这也是小球藻能够快速繁殖的原因。
所述小球藻生长因子的制备方法包括以下步骤:
S1,温浴:将原料为小球藻粉或小球藻泥放入40-50℃的水中浸泡,浸泡时间为12-15小时,使小球藻细胞壁扩张和软化;
S2,破壁:在温浴后的小球藻浆中加入果胶酶,将温度控制在40±3℃,使小球藻细胞壁发生水解反应,获得破壁的小球藻泥,其中原料与果胶酶的重量比为1:(1-3);
S3,酶解:再向步骤S2中加入核酸酶和蛋白酶,温度控制在45℃-55℃,使破壁的小球藻泥水解为小球藻生长因子的混合物,其中原料(原料为小球藻泥或小球藻粉)、核酸酶和蛋白酶的重量比为1:(0.5-0.8):(0.5-0.8);
S4,分离:用离心设备将小球藻生长因子的混合物离心分离,得到小球藻生长因子的液体。
在步骤S2中,所述小球藻粉或小球藻泥与所述果胶酶的重量比最低为1:1,当果胶酶的重量小于小球藻粉或小球藻泥的重量时,无法使小球藻粉或小球藻泥的细胞壁完全破碎。当果胶酶的重量大于小球藻粉或小球藻泥的重量的3倍时,小球藻粉或小球藻泥的细胞壁已经完全破碎,继续添加果胶酶,造成果胶酶的浪费。同理,在步骤S3中,所述小球藻粉或小球藻泥、核酸酶和蛋白酶的重量比为1:(0.5-0.8):(0.5-0.8),可以达到完全水解的目的,且不会造成核酸酶和蛋白酶的浪费。
在本申请中,动物来源外泌体组合物中外泌体、小球藻生长因子、生育酚乙酸酯和乳清蛋白按照(10-20份)/(10-20份)/(0.5-0.8份)/(6-10份)进行配合,能使这四种组分充分发挥增殖能力,抑制受损细胞的继续凋亡,再生细胞的快速增殖,Ⅰ型胶原蛋白的含量提高46.88%以上,减小增生性瘢痕的面积。
此外,将动物来源外泌体组合物中任一组分更换为其他组分时,比如,将生育酚乙酸酯更换为烟酰胺;将乳清蛋白更换为乙酰基六肽。动物来源外泌体组合物中的组分不能发挥相互促进作用,成纤维细胞的增殖活性不能得到提高,Ⅰ型胶原蛋白的含量也没有增加,所以增生性瘢痕的面积不能减小。
优选地,所述动物来源外泌体组合物包括外泌体15-20份,小球藻生长因子10-15份,生育酚乙酸酯0.5-0.6份,乳清蛋白6-8份。
在一个具体的实施方案中,所述动物来源外泌体组合物包括外泌体15份,小球藻生长因子15份,生育酚乙酸酯0.6份,乳清蛋白8份。该动物来源外泌体组合物能够使Ⅰ型胶原蛋白的含量提高72.88%以上。
优选地,所述动物来源外泌体组合物还包括丝素蛋白3-5份,类人胶原蛋白5-10份。
在本申请中,所述动物来源外泌体组合物还加入了丝素蛋白和类人胶原蛋白,使皮肤充满弹性、润泽、细腻、光滑。其中丝素蛋白中含有多种氨基酸成分,能够补充人体所需氨基酸,改变皮肤的状态。类人胶原蛋白的pH值为6.5-7.5,呈中性,不会破坏皮肤本身酸碱平衡,还能够促进成纤维细胞的增殖,进一步增加Ⅰ型胶原蛋白的含量,从而减小增生性瘢痕的面积。
第二方面,本申请提供了一种动物来源外泌体组合物在皮肤创伤修复中的应用,所述动物来源外泌体组合物用于护肤品中。
所述护肤品为膏剂、乳液或喷剂。
在本申请中,通过外泌体、小球藻生长因子、生育酚乙酸酯和乳清蛋白按照相应的比例进行混合制备动物来源外泌体组合物。动物来源外泌体组合物可以促进成纤维细胞等生长细胞的增殖活性,抑制受损组织细胞的凋亡,从而提高Ⅰ型胶原蛋白的含量,达到减小或淡化增生性瘢痕的目的。本申请制备的外泌体组合可以用于护肤品中,所述护肤品为膏剂、乳液或喷剂,便于日常使用。
综上所述,本申请具有以下有益效果:
1、本申请中动物来源外泌体组合物主要通过外泌体、小球藻生长因子、生育酚乙酸酯和乳清蛋白四种组分的相互促进和协同,能够提高成纤维细胞等多种细胞的增殖活性,增加Ⅰ型胶原蛋白的含量,减小增生性瘢痕的面积;
2、本申请所述动物来源外泌体组合物包括外泌体15份,小球藻生长因子15份,生育酚乙酸酯0.6份,乳清蛋白8份,使Ⅰ型胶原蛋白的含量提高72.88%;
3、本申请所述动物来源外泌体组合物可以用于护肤品中,将护肤品制备成膏剂、乳液或喷剂,便于日常的使用。
具体实施方式
以下结合实施例对本申请作进一步详细说明。
1、外泌体的提取
包括以下步骤:
选择新生羊的脐带,利用含1%双抗的PBS进行洗涤,去除残血并去除脐动、静脉,将新生羊脐带剪成0.8-1.0cm的脐带组织段;将脐带组织段贴壁接种在培养皿中,向培养皿中加入4mL的培养基,培养基选择含有10%胎牛血清和1%双抗的DMEM/F12培养基,在37℃、5%CO2、饱和湿度条件下进行培养,每3-4d换液1次。在倒置显微镜下观察细胞的形态和生长情况。待细胞增殖融合至90%时,胰蛋白酶消化传代培养。
取培养P3代脐带血干细胞于10cm培养皿中,待细胞增殖融合至90%时,按照1:4进行传代;P4细胞融合至对数生长期时,弃培养基,PBS漂洗两次,加入无FBS的DMEM/F12培养基6mL/皿,24h后收取培养基于离新管中,进行外泌体的分离:①预冷低温离心机,超速离心机至4℃;②300g,4℃离心10min,除细胞碎片;③将离心后上清液移植超速离心管中,用PBS补齐;④29500g,4℃离心20min,进一步去除细胞及碎片;⑤0.22μm滤器过滤离心后留上清液,去除大于200nm的粒子;⑥过滤后上清液于另一超速离心管中,120000g,4℃离心90min;⑦弃上清,无菌滤纸吸净管壁液体,管底即为外泌体,加入相应液体,-80保存待用。
2、小球藻生长因子的制备
S1,温浴:将30mg的小球藻泥放入45℃的水中浸泡,浸泡时间为15小时,使小球藻的细胞壁充分扩张和软化,获得小球藻浆;
S2,破壁:向小球藻浆中加入60mg的果胶酶,将温度控制在40±3℃,使小球藻细胞壁发生水解反应,获得破壁的小球藻泥;
S3,酶解:再向步骤S2中加入20mg的核酸酶和20mg的蛋白酶,将温度升温至50℃,使破壁的小球藻泥水解为小球藻生长因子的混合物;
S4,分离:用离心设备将小球藻生长因子的混合物离心分离,得到小球藻生长因子。
实施例
实施例1
将通过上述制备方法获得的外泌体15mg,小球藻生长因子15mg以及生育酚乙酸酯0.6mg,乳清蛋白8mg进行混合制备得到动物来源外泌体混合物。
实施例2-9与实施例1的区别如表2所示。
表2实施例2-9与实施例1的区别(单位:mg)
类别 | 外泌体 | 小球藻生长因子 | 生育酚乙酸酯 | 乳清蛋白 |
实施例1 | 15 | 15 | 0.6 | 8 |
实施例2 | 10 | 15 | 0.6 | 8 |
实施例3 | 20 | 15 | 0.6 | 8 |
实施例4 | 15 | 10 | 0.6 | 8 |
实施例5 | 15 | 20 | 0.6 | 8 |
实施例6 | 15 | 15 | 0.5 | 8 |
实施例7 | 15 | 15 | 0.8 | 8 |
实施例8 | 15 | 15 | 0.6 | 6 |
实施例9 | 15 | 15 | 0.6 | 10 |
实施例10
实施例10与实施例1不同之处在于,实施例10中所述外泌体源自猪的脐带。
实施例11
实施例11与实施例1不同之处在于,实施例11中所述外泌体源自牛的脐带。
实施例12
实施例12与实施例1不同之处在于,实施例12中所述动物来源外泌体组合物还包括4mg的丝素蛋白,7mg的类人胶原蛋。
实施例13
实施例13与实施例1不同之处在于,实施例13中所述动物来源外泌体组合物还包括5mg的丝素蛋白,10mg的类人胶原蛋。
对比例
对比例1-12与实施例1的区别如表2所示。
表2对比例1-12与实施例1的区别(单位:mg)
类别 | 外泌体 | 小球藻生长因子 | 生育酚乙酸酯 | 乳清蛋白 |
对比例1 | 8 | 15 | 0.6 | 8 |
对比例2 | 22 | 15 | 0.6 | 8 |
对比例3 | 15 | 8 | 0.6 | 8 |
对比例4 | 15 | 22 | 0.6 | 8 |
对比例5 | 15 | 15 | 0.3 | 8 |
对比例6 | 15 | 15 | 1.0 | 8 |
对比例7 | 15 | 15 | 0.6 | 4 |
对比例8 | 15 | 15 | 0.6 | 12 |
对比例9 | 0 | 15 | 0.6 | 8 |
对比例10 | 15 | 0 | 0.6 | 8 |
对比例11 | 15 | 15 | 0 | 8 |
对比例12 | 15 | 15 | 0.6 | 0 |
对比例13
对比例13与实施例1的区别在于,对比例13中将生育酚乙酸酯更换为烟酰胺。
对比例14
对比例14与实施例1的区别在于,对比例14中将乳清蛋白更换为乙酰基六肽。
性能检测试验
一、Ⅰ型胶原蛋白的含量测定
皮肤是机体重要的屏障,皮肤受损后,成纤维细胞等生长细胞增殖活性降低,导致Ⅰ型胶原蛋白的含量降低,进而大面积的形成增生性瘢痕。
1、成纤维细胞的培养
利用购自武汉普诺赛生命科技有限公司的人真皮成纤维细胞进行增殖活性测定。首先将人真皮成纤维细胞按照要求进行初步培养;然后取生长状态良好的对数生长期人真皮成纤维细胞,调整细胞浓度至1105个/mL,混匀后接种于96孔板中并加入含10%胎牛血清和1%双抗的DMEM高糖培养基。待人真皮成纤维细胞完全贴壁后,分别加入实施例1-13和对比例1-14制备的动物来源1外泌体组合物,对人真皮成纤维细胞进行培养,记为27组实验组并进行编号。设置对照,对照组内正常培养,培养基中不加入动物来源外泌体组合物。
2、人真皮成纤维细胞中蛋白的提取
将96孔板中的培养基去除,利用PBS清洗2次。每孔内加入100μL的RIPA裂解液(南京森贝伽生物科技有限公司)和1μL的PMSF蛋白酶抑制剂,在4℃下裂解20min。然后在4℃、12000r/min条件下离心30min。吸取上清液在-20℃储存备用。
3、Ⅰ型胶原蛋白的含量检测
利用购自上海酶联生物科技有限公司的人I型胶原蛋白(ColⅠ)ELISA试剂盒检测Ⅰ型胶原蛋白的含量,具体检测结果如表3所示。
表3Ⅰ型胶原蛋白的含量
结合实施例1-13和对比例1-14并结合表3可以看出,本申请制备的实施例1-13能够提高Ⅰ型胶原蛋白的含量,使Ⅰ型胶原蛋白的含量提高46.88%以上。
结合实施例1-9和对比例1-8并结合表3可以看出,所述动物来源外泌体组合物中外泌体、小球藻生长因子、生育酚乙酸酯和乳清蛋白按照(10-20份)/(10-20份)/(0.5-0.8份)/(6-10份)进行配合时,动物来源外泌体组合物能增加Ⅰ型胶原蛋白的含量,使Ⅰ型胶原蛋白的含量提高46.88%以上。
当外泌体组合物中小球藻生长因子、生育酚乙酸酯和乳清蛋白的用量一定时,随着外泌体用量的逐渐增加,Ⅰ型胶原蛋白的含量先增高后减少。
结合实施例1-9和对比例9-12并结合表3可以看出,所述动物来源外泌体组合物中外泌体、小球藻生长因子、生育酚乙酸酯和乳清蛋白相互配合时,使Ⅰ型胶原蛋白的含量提高46.88%以上。尤其是实施例1,动物来源外泌体组合物使Ⅰ型胶原蛋白的含量提高72.88%。
二、外泌体组合物的应用
根据Ⅰ型胶原蛋白的含量测定的结果,将实施例1、实施例8、对比例2、对比例10和对比例13制备成膏剂护肤品。选择无特定病原体级(SPF级)BALB/c小鼠50只,雄性,6-8周,饲养于无菌、恒温及暗明交替的清洁级环境中,可自由饮食、饮水及进行日常活动。
采用10%的水合氯醛(0.15mL/10g)将小鼠麻醉,剃去背部手术区域毛发,采用75%的酒精进行消毒处理,制备1cm1cm大小的全层皮肤缺损,采用3M辅料覆盖创面1天后暴露创面,小鼠背部创伤模型建立完成。
将50只小鼠分成5组,每组10只,创伤模型建立3d后将本申请实施例1、实施例8、对比例2、对比例10和对比例13制备的膏剂护肤品分别涂抹于小鼠创伤处,每天早晚各涂膜一次,记录涂抹前,涂抹后1个月,3个月和6个月创伤的面积(平均值)。具体检测结果如表4所示。
表4小鼠创伤的面积(单位:cm2)
组别 | 涂抹前 | 1个月 | 3个月 | 6个月 |
实施例1 | 0.987 | 0.754 | 0.461 | 0.127 |
实施例8 | 0.998 | 0.791 | 0.517 | 0.226 |
对比例2 | 0.986 | 0.973 | 0.941 | 0.912 |
对比例10 | 0.989 | 0.962 | 0.953 | 0.944 |
对比例13 | 0.993 | 0.980 | 0.973 | 0.962 |
结合实施例1、实施例8、对比例2、对比例10和对比例13并结合表4可以看出,实施例1和实施例8对小鼠的创伤修复有明显的作用,说明本申请制备的膏剂护肤品能够减小增生性瘢痕的面积。反观对比例2、对比例10和对比例13在6个月后小鼠的创伤面积和涂抹前相差不大,说明对比例2、对比例10和对比例13对小鼠的创伤修复作用不明显。
本具体实施例仅仅是对本申请的解释,其并不是对本申请的限制,本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改,但只要在本申请的权利要求范围内都受到专利法的保护。
Claims (9)
1.一种动物来源外泌体组合物,其特征在于,按照重量份数计,包括外泌体10-20份,小球藻生长因子10-20份,生育酚乙酸酯0.5-0.8份,乳清蛋白6-10份。
2.根据权利要求1所述的动物来源外泌体组合物,其特征在于,所述动物来源外泌体组合物包括外泌体15-20份,小球藻生长因子10-15份,生育酚乙酸酯0.5-0.6份,乳清蛋白6-8份。
3.根据权利要求1所述的动物来源外泌体组合物,其特征在于,所述动物来源外泌体组合物包括外泌体15份,小球藻生长因子15份,生育酚乙酸酯0.6份,乳清蛋白8份。
4.根据权利要求1-3任一项所述的动物来源外泌体组合物,其特征在于,所述动物来源外泌体组合物还包括丝素蛋白3-5份,类人胶原蛋白5-10份。
5.根据权利要求1-3任一项所述的动物来源外泌体组合物,其特征在于,所述动物来源外泌体源自胎生动物的脐带。
6.根据权利要求5所述的动物来源外泌体组合物,其特征在于,所述胎生动物选为羊。
7.一种动物来源外泌体组合物在皮肤创伤修复中的应用。
8.根据权利要求7所述的动物来源外泌体组合物在皮肤创伤修复中的应用,其特征在于,所述动物来源外泌体组合物用于护肤品中。
9.根据权利要求8所述的动物来源外泌体组合物在皮肤创伤修复中的应用,其特征在于,所述护肤品为膏剂、乳液或喷剂。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210259777.4A CN114681387B (zh) | 2022-03-16 | 2022-03-16 | 一种动物来源外泌体组合物及其在皮肤创伤修复中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210259777.4A CN114681387B (zh) | 2022-03-16 | 2022-03-16 | 一种动物来源外泌体组合物及其在皮肤创伤修复中的应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN114681387A true CN114681387A (zh) | 2022-07-01 |
CN114681387B CN114681387B (zh) | 2024-01-23 |
Family
ID=82138572
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202210259777.4A Active CN114681387B (zh) | 2022-03-16 | 2022-03-16 | 一种动物来源外泌体组合物及其在皮肤创伤修复中的应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN114681387B (zh) |
Citations (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2016069740A1 (en) * | 2014-10-29 | 2016-05-06 | The Regents Of The University Of California | Bioactive delivery vehicles |
CN109984991A (zh) * | 2019-05-13 | 2019-07-09 | 深圳市润科生物科技有限公司 | 一种改善皮肤损伤的化妆品组合物及其制备方法与制剂 |
CN110339147A (zh) * | 2018-11-27 | 2019-10-18 | 浙江梵泊细胞工程有限公司 | 一种皮肤外用组合物及其用途 |
WO2020018926A1 (en) * | 2018-07-19 | 2020-01-23 | Intrexon Corporation | Exosome delivery of skin care peptides |
CN111265441A (zh) * | 2020-03-13 | 2020-06-12 | 佛山市奥姿美生物科技有限公司 | 可增强皮肤夜间修复、再生能力的组合物及其应用 |
CN111557871A (zh) * | 2019-03-29 | 2020-08-21 | 刘启平 | 一种小球藻面膜及其制备方法 |
CN112285195A (zh) * | 2020-10-27 | 2021-01-29 | 江南大学 | 一种牛奶外泌体的特征性糖蛋白标志物和牛奶外泌体的特征性标志物分离方法 |
CN113041206A (zh) * | 2019-12-11 | 2021-06-29 | 春日花开生物科技(深圳)有限公司 | 一种含间充质干细胞因子的精华液及其制备方法 |
CN113544266A (zh) * | 2018-12-17 | 2021-10-22 | 博德研究所 | Crispr相关转座酶系统和其使用方法 |
CN113559047A (zh) * | 2020-04-28 | 2021-10-29 | 上海夏必拓生物科技有限公司 | 含间充质干细胞分泌的活性因子提取物的美容护肤品以及护肤精华液的制备方法 |
-
2022
- 2022-03-16 CN CN202210259777.4A patent/CN114681387B/zh active Active
Patent Citations (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2016069740A1 (en) * | 2014-10-29 | 2016-05-06 | The Regents Of The University Of California | Bioactive delivery vehicles |
US20180296490A1 (en) * | 2014-10-29 | 2018-10-18 | The Regents Of The University Of California | Bioactive delivery vehicles |
WO2020018926A1 (en) * | 2018-07-19 | 2020-01-23 | Intrexon Corporation | Exosome delivery of skin care peptides |
CN110339147A (zh) * | 2018-11-27 | 2019-10-18 | 浙江梵泊细胞工程有限公司 | 一种皮肤外用组合物及其用途 |
CN113544266A (zh) * | 2018-12-17 | 2021-10-22 | 博德研究所 | Crispr相关转座酶系统和其使用方法 |
CN111557871A (zh) * | 2019-03-29 | 2020-08-21 | 刘启平 | 一种小球藻面膜及其制备方法 |
CN109984991A (zh) * | 2019-05-13 | 2019-07-09 | 深圳市润科生物科技有限公司 | 一种改善皮肤损伤的化妆品组合物及其制备方法与制剂 |
CN113041206A (zh) * | 2019-12-11 | 2021-06-29 | 春日花开生物科技(深圳)有限公司 | 一种含间充质干细胞因子的精华液及其制备方法 |
CN111265441A (zh) * | 2020-03-13 | 2020-06-12 | 佛山市奥姿美生物科技有限公司 | 可增强皮肤夜间修复、再生能力的组合物及其应用 |
CN113559047A (zh) * | 2020-04-28 | 2021-10-29 | 上海夏必拓生物科技有限公司 | 含间充质干细胞分泌的活性因子提取物的美容护肤品以及护肤精华液的制备方法 |
CN112285195A (zh) * | 2020-10-27 | 2021-01-29 | 江南大学 | 一种牛奶外泌体的特征性糖蛋白标志物和牛奶外泌体的特征性标志物分离方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN114681387B (zh) | 2024-01-23 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
AU2018201536B2 (en) | Skin Substitutes And Methods For Hair Follicle Neogenesis | |
CN108721200A (zh) | 一种人间充质干细胞来源的外泌体美容制剂的制备方法及应用 | |
US20110177015A1 (en) | Skin and hair care using extract from conditioned medium cultured by mesenchymal stem cells and other regenerative cells | |
WO2013118877A1 (ja) | 非ヒト幹細胞の培養上清を原材料とする化粧品又は皮膚再生促進剤、及びタンパク質のイオン導入方法 | |
WO2008002063A1 (en) | Soft tissue filler composition comprising autologous dermis-derived cell culture product and hyaluronic acid | |
CN108265023B (zh) | 一种增殖促进剂及其应用 | |
CN112239746A (zh) | 一种人脐带间充质干细胞外泌体提取液的制备及外泌体乳霜的制备方法 | |
CN105477626A (zh) | 混合干细胞制剂及其制备方法 | |
CN113563452B (zh) | 一种生物活性肽及其与脂肪干细胞外泌体在皮肤增殖修复中的应用 | |
JP2020520630A (ja) | Hla−gタンパク質を常に分泌発現する細胞株及びその製造方法 | |
WO2018150440A1 (en) | Stem cell conditioned media for clinical and cosmetic applications | |
CN117106712B (zh) | 一种用于皮肤再生的干细胞外泌体及其应用和产品 | |
CN110903348A (zh) | 一种促进伤口愈合的小肽及其应用 | |
KR20100096447A (ko) | 돼지 태반 조직 유래 줄기세포의 배양물 및 그 추출 단백질을 함유한 화장료용 조성물 | |
CN113274410A (zh) | 外泌体水凝胶复合物在制备修复皮肤瘢痕的药物中的应用 | |
CN113957040A (zh) | 一种脂肪干细胞生长因子提取物及其制备方法和应用 | |
CN114681387A (zh) | 一种动物来源外泌体组合物及其在皮肤创伤修复中的应用 | |
CN115947790A (zh) | 成纤维细胞外基质制备的三型胶原蛋白组合物 | |
CN107468708A (zh) | 一种干细胞活性因子凝胶的制备方法及在难愈合伤口治疗中的应用 | |
CN113116970A (zh) | 一种含黄栀子提取物的干细胞皮肤修复液及制备方法 | |
CN114681386A (zh) | 一种动物来源外泌体组合物及其在制备皮肤抗衰老和抗过敏制剂中的应用 | |
CN110475534A (zh) | 一种基于多能干细胞分化再生的延缓机体衰老的美容制剂 | |
CN110157660A (zh) | 诱导成纤维细胞分泌抗菌肽的诱导培养基和方法、成纤维细胞及应用 | |
Khodaei et al. | The Effect of Mummy Substance on Matrix Protein Synthesis by Human Adipose-Derived Stem Cells and Dermal Fibroblast and Their Behavior on Plated PCL Scaffold. | |
CN1327911C (zh) | 组织工程表皮替代物及其制备方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |