CN114657080A - 一种二元复合菌制剂及其应用 - Google Patents

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章英
张虎
雍思龙
杨国军
李婵
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    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
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Abstract

本发明公开了一种二元复合菌制剂及其应用，所述制剂中的二元复合菌为乳酸肠球菌和反硝化芽孢杆菌按活菌含量比例0.5‑1︰1混合而成，本发明采用乳酸肠球菌和反硝化芽孢杆菌混合制成二元复合菌，在水产养殖中作为亚硝酸盐降解剂使用，能够有效去除水体中的亚硝酸盐，二元复合菌对水体中亚硝酸盐去除的最低使用活菌浓度为0.205亿/mL，去除率高达90%以上。

Description

一种二元复合菌制剂及其应用
技术领域
本发明涉及微生态制剂技术领域，更具体地说，尤其涉及一种二元复合菌制剂及其作为亚硝酸盐降解剂使用，用于去除水体中的亚硝酸盐。
背景技术
益生菌筛选于自然环境中或动物肠道内，安全、无残留、不产生耐药性。试验研究表明，在大规模养殖中，益生菌被认为是抗生素的潜在替代品。2001年，联合国粮农组织/世界卫生组织（FAO/WHO）将益生菌定义为“摄入量足够时对机体产生有益作用的活性微生物”。美国FDA和美国饲料控制官员协会（AAFCO）2009年公布允许46种微生物菌种作为饲料添加剂使用。我国到目前批准使用的微生物饲料添加剂品种有芽孢杆菌、双歧杆菌、粪肠球菌、乳酸肠球菌和乳杆菌等共16种，其中大部分属于乳酸菌类。
乳酸肠球菌通常作为饲料添加剂使用，有研究表明，乳酸肠球菌在提高日增重和促进免疫力方面有一定作用，能够抑制肠道大肠杆菌致病菌的生长，显著提高乳酸菌的数量，表明乳酸肠球菌可以改善肠道菌群，保证动物健康生长。
芽孢杆菌作为益生菌已得到广泛应用，目前虽有一些关于芽孢杆菌降解亚硝酸盐氮作用的报道，但由于受养殖水体环境的复杂多变与菌种降氮稳定性不足等因素影响，大都效果并不理想。
发明内容
本发明的目的在于针对上述现有技术的不足，提供一种能有效去除水体中亚硝酸盐的二元复合菌制剂，解决养殖水体有氧条件下亚硝酸盐的积累问题。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
一种二元复合菌制剂，所述制剂中的二元复合菌为乳酸肠球菌和反硝化芽孢杆菌按活菌含量比例0.5-1︰1混合而成。
上述二元复合菌制剂的一种应用，是作为亚硝酸盐降解剂使用，能够有效去除水体中的亚硝酸盐，所述二元复合菌对水体中亚硝酸盐去除的最低使用活菌浓度为0.205亿/mL。
与现有技术相比，本发明采用乳酸肠球菌和反硝化芽孢杆菌混合制成二元复合菌，在水产养殖中作为亚硝酸盐降解剂使用，能够有效去除水体中的亚硝酸盐，二元复合菌对水体中亚硝酸盐去除的最低使用活菌浓度为0.205亿/mL，去除率高达90%以上。
具体实施方式
为了便于本领域技术人员的理解，下面结合实施例对本发明作进一步的说明，实施方式提及的内容并非对本发明的限定。
实施例1
取乳酸肠球菌菌粉0.5kg和反硝化芽孢杆菌菌粉1kg，均匀混合，制成二元复合菌制剂。
实施例2
取乳酸肠球菌菌粉0.8kg和反硝化芽孢杆菌菌粉1kg，均匀混合，制成二元复合菌制剂。
实施例3
取乳酸肠球菌菌粉1kg和反硝化芽孢杆菌菌粉1kg，均匀混合，制成二元复合菌制剂。
实施例4
本实施例是对二元复合菌去除水体中亚硝酸盐的检测试验，其检测方法参考以下步骤：
1、用倾注法测乳酸肠球菌菌粉的活菌数：平皿放置培养箱，36℃培养24小时；计数培养基：牛肉膏10g/L，酵母膏5g/L，蛋白胨10g/L，葡萄糖20g/L，磷酸氢二钾2g/L，乙酸钠5g/L，七水硫酸镁 0.2g/L，硫酸锰0.05g/L，吐温80g/L，柠檬酸三铵2g/L，琼脂15g/L，灭菌前pH为6.2～6.6。
2、用倾注法测反硝化芽孢杆菌菌粉的活菌数：平皿放置培养箱，36℃培养24小时；计数培养基：牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，葡萄糖5g/L，琼脂15g/L，灭菌前pH为7.0～7.5。
3、配置1mg/L亚硝酸钠0.2g/L蔗糖检测液，取100mL于三角瓶中作为CK，做三个重复。
4、取1g乳酸肠球菌菌粉加99mL亚硝酸钠检测液于玻璃珠摇瓶中，摇瓶放入摇床，20℃、200r/min摇30分钟，充分混匀。
5、取1g反硝化芽孢杆菌菌粉加99mL亚硝酸钠检测液于玻璃珠摇瓶中，摇瓶放入摇床，20℃、200r/min摇30分钟，充分混匀。
6、将乳酸肠球菌菌粉和反硝化芽孢杆菌菌粉分别以实施例1-3所述比例混合均匀，各取1g复合菌菌粉加99mL亚硝酸钠检测液于玻璃珠摇瓶中，摇瓶放入摇床，20℃、200r/min摇30分钟，充分混匀。
7、上述三种菌液分别各取10mL、5mL、2mL、1mL、0.5mL、0.2mL、0.1mL，加亚硝酸钠检测液定容至100mL，分别做三个重复。
8、将步骤3的CK和步骤7的待测样放入培养箱32℃静置培养24小时。
9、第二天取待测样25mL于50mL离心管中，5000r/min离心10分钟，取上清。
10、CK、待测样上清分别取10mL于试管，分别加入亚硝酸盐检测试剂Ⅰ五滴，震荡混匀后静置5分钟，再加入亚硝酸盐检测试剂Ⅱ五滴，震荡混匀后静置10分钟显色，用水质检测仪测定亚硝酸盐含量。
11、计算三种作用方法不同浓度的亚硝酸盐去除率，得到亚硝酸盐去除率达到85%以上时三种方法加入的最低浓度，结合步骤1、2测定的菌粉活菌数计算出三种方法加入的最低浓度时的活菌含量，具体结果如下表1所示：
表1
最低使用活菌浓度（亿/mL） 亚硝酸盐去除率
乳酸肠球菌 0.275 92.7%
反硝化芽孢杆菌 0.54 87.8%
二元复合菌 0.205 93.9%
最终测得乳酸肠球菌最低加入量为0.275亿/mL，反硝化芽孢杆菌最低加入量为0.54亿/mL，二元复合菌最低加入量为0.205亿/mL，三种方法中二元复合菌使用量最少，效果最优。

Claims (3)

1.一种二元复合菌制剂，其特征在于：所述制剂中的二元复合菌为乳酸肠球菌和反硝化芽孢杆菌按活菌含量比例0.5-1︰1混合而成。
2.一种如权利要求1所述的二元复合菌制剂的应用，其特征在于：所述二元复合菌制剂作为亚硝酸盐降解剂使用，用于去除水体中的亚硝酸盐。
3.根据权利要求2所述的二元复合菌制剂的应用，其特征在于：所述二元复合菌对水体中亚硝酸盐去除的最低使用活菌浓度为0.205亿/mL。
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