CN110973356A - 可替代抗生素的饲料的添加剂及其使用方法 - Google Patents

可替代抗生素的饲料的添加剂及其使用方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于饲料添加剂领域，特别是指可替代抗生素的饲料的添加剂及其使用方法。所述饲料添加剂包括葡萄糖氧化酶、嗜酸乳杆菌、小檗碱或姜黄素中的两种或三种。试验采用体外共培养的方法，研究了葡萄糖氧化酶、嗜酸乳杆菌、小檗碱、姜黄素组合对大肠杆菌生长的抑制作用。结果表明，0.005%葡萄糖氧化酶与1×105 CFU/mL嗜酸乳杆菌二组合，0.005%GOD、0.0015%小檗碱、1×105 CFU/mL嗜酸乳杆菌三组合，以及0.005%GOD、0.01‑0.02%姜黄素、1×105 CFU/mL嗜酸乳杆菌三组合，体外抑制大肠杆菌生长的作用与75.0‑150.0 mg/kg有效金霉素相当。

Description

可替代抗生素的饲料的添加剂及其使用方法
技术领域
本发明属于饲料添加剂领域，特别是指可替代抗生素的饲料的添加剂及其使用方法。
背景技术
大约在20世纪50年代，我国就开始使用抗生素类饲料添加剂用来提高动物的生产性能，但是抗生素产生的毒副作用会导致动物肠胃功能紊乱，并产生抗药、耐药、残留、二重感染等很多问题，给畜禽生产带来了巨大的威胁，寻找可代替抗生素类的饲料添加剂势在必行。
嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）是一种能在动物胃肠道内定植的重要益生菌，属革兰氏阳性杆菌，耐酸、耐盐和耐胆汁性强。嗜酸乳杆菌具有调节动物胃肠道菌群平衡、抑制病原微生物生长、提高机体免疫力、提高乳糖消化能力及降低血清胆固醇等作用，已经被广泛应用于畜禽的生产中。
葡萄糖氧化酶（Glucose oxidase，GOD）是一种需氧脱氢酶，能专一氧化 β - D -葡萄糖为葡萄糖酸和过氧化氢，并在此过程中消耗 O2。目前，葡萄糖氧化酶已广泛应用于食品、医药等领域。1999年，农业部将葡萄糖氧化酶作为允许使用的饲料酶制剂之一。已经有资料报道，葡萄糖氧化酶具有抑菌、促生长作用，且无毒、无抗药性，具有广阔的应用前景。
小檗碱（Berberine，BBR），是从黄连根茎中提取的异喹林生物碱，是我国传统中药之一。小檗碱具有显著的抑菌作用，临床上主要作为非处方药治疗胃肠道炎症和细菌性痢疾[7]。本试验选择嗜酸乳杆菌、葡萄糖氧化酶、小檗碱作为抗生素替代品，以盐酸金霉素（CHH）作为抗生素标准品，利用体外抑制大肠杆菌生长试验，研制能够替代抗生素的新型饲料添加剂。
姜黄素（Curcumin）是一种从姜科植物姜黄等的根茎中提取，为酸性多酚类物质，通常用作肉类食品着色剂和酸碱指示剂，同时具有抗炎、抗氧化等药理作用。
专利CN104366008A，提供了一种竹醋液替代饲料抗生素促生长配方的制备及应用，该专利利用竹醋液替代饲料抗生素促生长配方对于替代抗生素，提高生产性能和减少粪便中氨气有很好的效果。该日粮对于提高肉鸡生产性能的作用优于添加25 mg/kg的金霉素。但这种效果并不能达到抑制大肠杆菌的要求，因此迫切需要一种与金霉素作用相当的抗生素替代添加剂。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提出可替代抗生素的饲料的添加剂及其使用方法，为抗生素的替代提供了一种新型饲料添加剂。
本发明的技术方案是这样实现的：
可替代抗生素的饲料的添加剂，所述饲料添加剂包括葡萄糖氧化酶、嗜酸乳杆菌、姜黄素或小檗碱中的两种或三种。
所述饲料添加剂包括使用浓度为0.0025 wt%-0.005wt%的葡萄糖氧化酶和1×105-1×107CFU/mL的嗜酸乳杆菌。
所述饲料添加剂包括使用浓度0.005wt%的葡萄糖氧化酶和1×105CFU/mL的嗜酸乳杆菌。
所述饲料添加剂包括使用浓度为0.0025 wt%-0.005wt%的葡萄糖氧化酶、0.0015wt%-0.009wt%的小檗碱、0.005wt%-0.04wt%姜黄素和1×105-1×107 CFU/mL的嗜酸乳杆菌。
所述饲料添加剂包括使用浓度为0.005wt%的葡萄糖氧化酶、0.0015wt%的小檗碱和1×105的嗜酸乳杆菌。
所述饲料添加剂包括使用浓度为0.005wt%的葡萄糖氧化酶、0.01%-0.02wt%的姜黄素和1×105的嗜酸乳杆菌。
所述的饲料添加剂的使用方法，步骤为：按比例向饲料中添加葡萄糖氧化酶、小檗碱、姜黄素和嗜酸乳杆菌，达到各自使用浓度后，混匀进行试验。
所述试验为流体状态。
本发明具有以下有益效果：
本试验采用体外共培养的方法，研究了葡萄糖氧化酶（GOD）、嗜酸乳杆菌、姜黄素、小檗碱（BBR）组合对大肠杆菌生长的抑制作用。单因素抑菌试验结果表明，0.025%GOD、0.009%BBR、0.04%姜黄素、1×107 CFU/mL嗜酸乳杆菌抑菌作用最强（P＜0.05）。组合试验结果表明，0.005%GOD与1×105 CFU/mL嗜酸乳杆菌二组合，0.005%GOD、0.0015%BBR、1×105 CFU/mL嗜酸乳杆菌三组合，以及0.005%GOD、0.01%-0.02%姜黄素、1×105 CFU/mL嗜酸乳杆菌三组合，体外抑制大肠杆菌生长的作用与75.0-150.0 mg/kg有效金霉素相当，为抗生素的替代提供了一种新型饲料添加剂。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有付出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
材料与方法
1.1 菌种选择
试验所用的大肠杆菌（Escherichia coli）、嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）均由河南农业大学生物技术与动物营养研究实验室保存。小檗碱（BBR）、姜黄素、葡萄糖氧化酶（酶活为10000 U/g）均由河南德邻生物制品有限公司提供，盐酸金霉素（Chlortetracycline Hydrochloride）由福建浦城正大生化有限公司提供，其有效成分含量为90%，试验中表示的金霉素含量皆为有效含量。
1.2 培养基
LB培养基：胰蛋白胨10 g，酵母浸粉5 g，氯化钠10 g，蒸馏水定容至1000 mL，pH为7.0-7.2，在121℃、0.15 MPa 条件下高压灭菌20 min，4℃保存备用。
MRS培养基：胰蛋白胨20 g，酵母浸粉10 g，葡萄糖20 g，吐温80 1 mL，磷酸氢二钾2 g，无水乙酸钠5 g，柠檬酸铵2 g，硫酸镁0.2 g，硫酸锰0.05 g，蒸馏水定容至1000 mL，pH为6.2-6.6，在121℃、0.15 MPa条件下高压灭菌20 min，4℃保存备用。
伊红美蓝培养基（北京奥博星生物技术有限责任公司）：称取42.5 g，蒸馏水定容1000 mL，pH为7.2±0.2，在121℃、0.15 MPa条件下高压灭菌20 min备用。
1.3 仪器设备
生物净化工作台（BVM-1000，苏州净化设备有限公司）、电热恒温隔水培养箱（PYX-DHS-BS-Ⅱ，上海跃进医疗器械有限公司）、立式高压蒸汽灭菌锅（LDZX-30 KBS，上海申安医疗器械厂）、冰箱（BCD-649 WE,青岛海尔股份有限公司）、酸度计（PHS-2 C，天津赛得利斯试验分析仪器制造厂）、磁力搅拌器（Jan-79-1，金坛市中大仪器厂）、电热鼓风干燥箱（101，北京中兴伟业仪器有限公司）、摇床（QYC-2102 C，上海新苗医疗器械制造有限公司）等。
1.4 菌种活化与计数
将实验室保存的鸡源大肠杆菌接种到LB培养基中，37℃、180 r/min摇床培养24 h后按照2%接种量接入新鲜的LB培养基中，再于37℃、180 r/min摇床培养24 h测定活菌数，并把培养液置于4℃冰箱中保存备用。
将实验室保存的嗜酸乳杆菌接种到MRS培养基中，37℃、恒温培养箱中静止培养24h 后按照2%接种量接入新鲜的MRS培养基中，37℃恒温培养箱中静止培养24 h 后计数，4℃保存备用。
分别将BBR、GOD、姜黄素、金霉素配制成0.03%、2.5%、0.3%、0.15%的母液，4℃保存备用。
1.5 试验方法
1.5.1 不同浓度GOD对大肠杆菌生长的抑制试验
利用已经配好的GOD母液用0.22 μm滤膜无菌操作过滤后，分别配制成GOD终浓度为0.005%、0.0125%、0.0025%的LB培养液，同时按照1%接种量接入大肠杆菌到含有GOD的LB培养液中，于37℃、180 r/min摇床培养8 h、16 h、24 h，对大肠杆菌进行取样培养计数，并测定培养液的pH，每个浓度做9个重复。在LB培养液中接入1%大肠杆菌，37℃、180 r/min摇床培养 8 h、16 h、24 h作为对照组，结果换算为自然对数（lg）。
1.5.2 不同浓度嗜酸乳杆菌对大肠杆菌生长的抑制试验
将已经计数好的嗜酸乳杆菌分别稀释成终浓度为1×105、1×106 、1×107 CFU/mL的MRS 培养液，并且大肠杆菌按照1%接种量接入含有不同浓度嗜酸乳杆菌的MRS培养液中，37℃、60 r/min摇床中培养8 h、16 h、24 h，对大肠杆菌进行取样培养计数，并测定培养液的pH，每个浓度做9个重复。以MRS培养液接入1%大肠杆菌，37℃、60 r/min摇床中培养8 h、16h、24 h作为对照组，结果换算为自然对数（lg）。
1.5.3 不同浓度BBR对大肠杆菌生长的抑制试验
将预先配制好的小檗碱母液配制成终浓度为0.0015%、0.003%、0.006%、0.009%的MRS培养液，在121℃、0.15 MPa条件下高压灭菌20 min后，再按照1%接种量接入大肠杆菌菌液后，37℃、180 r/min摇床培养8 h、16 h、24 h对大肠杆菌进行取样培养计数，并测定培养液的pH，每个浓度做9个重复。在MRS培养液中接入1%大肠杆菌，在37℃、180 r/min摇床中培养8 h、16 h、24 h 作为对照组，结果换算为自然对数（lg）。
1.5.4 不同浓度姜黄素对大肠杆菌生长的抑制试验
按照姜黄素终浓度分别为0.02%、0.04%、0.06%加入到已经灭菌的MRS培养液中，测定不同浓度姜黄素对大肠杆菌生长的抑制试验，其它操作同1.5.3项的BBR试验。
1.5.5 GOD与嗜酸乳杆菌组合对大肠杆菌生长抑制试验
利用已经配好的GOD母液用0.22 μm滤膜无菌操作过滤后，配制终浓度为0.005%GOD，并含有1×105、1×106、1×107 CFU/mL 嗜酸乳杆菌的MRS培养液，同时按照1%的接种量接入大肠杆菌，于37℃、60 r/min摇床中培养 8 h、16 h、24 h后，对大肠杆菌进行取样培养计数，并测定培养液的 pH，每个浓度做 9 个重复。在MRS培养液接入1%大肠杆菌，37℃、60 r/min摇床中培养8 h、16 h、24 h作为对照组，菌落计数结果换算为自然对数（lg）。
1.5.6 GOD、BBR和嗜酸乳杆菌组合对大肠杆菌生长的抑制试验
分别配制终浓度为0.005%GOD、0.0015%小檗碱及1×105、1×106、1×107 CFU/mL嗜酸乳杆菌的MRS 培养液，同时按照1%的接种量接入大肠杆菌，37℃、60 r/min摇床中培养8 h、16h、24 h，对大肠杆菌进行取样培养计数，并测定培养液的pH，每个浓度做9个重复。在MRS培养液中接入1%大肠杆菌，37℃、60 r/min摇床中培养 8 h、16 h、24 h作为对照组，菌落计数结果换算为自然对数（lg）。
1.5.7 GOD对不同浓度嗜酸乳杆菌生长的抑制试验
利用已经配好的GOD母液，用0.22 μm滤膜无菌操作过滤后，分别配制成GOD终浓度为0.005%的MRS培养液，其中含有1×105、1×106、1×107 CFU/mL的嗜酸乳杆菌，于37℃恒温培养箱中静止培养12 h、24 h、36 h、48 h后，对嗜酸乳杆菌进行培养计数，并测定培养液的pH，每个浓度做9个重复，并以浓度为1×105、1×106、1×107 CFU/mL的嗜酸乳杆菌的MRS 培养液作为对照组，菌落计数结果换算为自然对数（lg）。
1.5.8 GOD与BBR组合对不同浓度嗜酸乳杆菌生长的抑制试验
分别配制终浓度为0.005% GOD和0.0015% BBR，并含有1×105、1×106、1×107 CFU/mL嗜酸乳杆菌的MRS培养液，于37℃恒温培养箱中静止培养12 h、24 h、36 h、48 h后，对嗜酸乳杆菌进行培养计数，并以嗜酸乳杆菌浓度为1×105、1×106、1×107 CFU/mL的MRS培养液作为对照组，于 37℃恒温培养箱中静止培养 12 h、24 h、36 h、48 h，测定培养液的pH，每个浓度9个重复，菌落计数结果换算为自然对数（lg）。
1.5.9 0.005%GOD、0.0015%BBR、1×105 CFU/mL嗜酸乳杆菌组合与金霉素的抑菌试验
配制0.005%GOD、0.0015%BBR与1×105 CFU/mL嗜酸乳杆菌组合，并配制金霉素有效含量分别为 37.5、75、150 mg/kg的MRS培养液。按照1%的接种量接入大肠杆菌，37℃、60 r/min摇床中培养8 h、16 h、24 h，对大肠杆菌进行取样培养计数，每个浓度做9个重复。在MRS培养液中接入1%大肠杆菌，37℃、60 r/min摇床培养8 h、16 h、24 h作为对照组，并测定培养液的pH，菌落计数结果换算为自然对数（lg）。
1.5.10 0.005%GOD、1×105 cfu/mL嗜酸乳杆菌与不同浓度姜黄素配伍对大肠杆菌的抑制作用试验
分别配制终浓度为0.005%、0.01%、0.02%、0.03%、0.04%姜黄素，与0.005%GOD和1×105 cfu/mL嗜酸乳杆菌进行配伍。按照1%的接种量接入大肠杆菌，37℃、60 r/min摇床中培养8h、16 h、24 h，对大肠杆菌进行取样培养计数，并测定培养液的pH，每个浓度做9个重复。在MRS培养液中接入1%大肠杆菌，37℃、60 r/min摇床中培养 8 h、16 h、24 h作为对照组，菌落计数结果换算为自然对数（lg）。
1.5.11 统计分析
采用 SPSS Statistic 17 统计软件对所有数据进行显著性检验，采用单因素方差分析方法进行分析，结果用“平均数±标准差”来表示，差异显著以P＜0.05表示，差异不显著以P＞0.05表示。
结果与分析
2.1 不同浓度GOD对大肠杆菌生长的抑制作用
由表1可知，在不含葡萄糖的条件下，GOD与大肠杆菌共培养24 h，添加0.0125%和0.025%GOD组大肠杆菌数量与对照组差异不显著（P＞0.05），说明单一的GOD不具备抑制大肠杆菌生长的作用，而只能在有2%葡萄糖共同作用下才有抑制大肠杆菌的作用。单独加入葡萄糖对大肠杆菌有抑制作用，且与对照组差异显著（P＜0.05），这可能与葡萄糖氧化降低培养液的pH有关。葡萄糖 + 0.005%GOD组对大肠杆菌有抑制作用，但是24 h共培养仍然有大肠杆菌生长且与其它试验组差异显著（P＜0.05）。其中葡萄糖 + 0.025% GOD、葡萄糖 +0.0125% GOD试验组抑制大肠杆菌作用最强，共培养24 h已经检测不到大肠杆菌的生长，并且与对照组差异显著（P＜0.05），由此可以说明GOD与葡萄糖共培养抑制大肠杆菌作用的强弱与GOD的剂量有关。
表1 不同浓度GOD对大肠杆菌生长的抑制作用（lg，cfu/mL，n=9）
Figure DEST_PATH_IMAGE002
注：同列小写字母不同表示差异显著(P＜0. 05)，小写字母相同表示差异不显著(P＞0. 05)，下同。
2.2 不同浓度嗜酸乳杆菌对大肠杆菌生长的抑制作用
由表2可知，不同浓度的嗜酸乳杆菌对大肠杆菌均有抑制作用，且与对照组差异均显著（P＜0.05）。1×107 CFU/mL嗜酸乳杆菌抑制大肠杆菌作用最强，且与对照组、其它试验组差异显著（P＜0.05）。说明嗜酸乳杆菌抑制大肠杆菌作用的强弱有浓度依赖性。嗜酸乳杆菌能够抑制大肠杆菌主要是因为在其生长繁殖过程中产生的菌素和酸性代谢产物所致。
表2 不同浓度嗜酸乳杆菌对大肠杆菌生长的抑制作用（lg，cfu/mL，n=9）
Figure DEST_PATH_IMAGE004
2.3 不同浓度BBR对大肠杆菌生长的抑制作用
由表3可知，试验组0.0015%、0.003%、0.006%、0.009%BBR对大肠杆菌均有抑制作用，且与对照组差异显著（P＜0.05），其中以试验组0.009%BBR对大肠杆菌的抑制作用最强，与其它试验组同样差异显著（P＜0.05），试验组 0.0015%BBR对大肠杆菌的抑制作用最小，这也说明BBR对大肠杆菌的抑制作用的大小与BBR的浓度大小有关。
表3 不同浓度BBR对大肠杆菌生长的抑制作用（lg，cfu/mL，n=9）
Figure DEST_PATH_IMAGE006
2.4 GOD与不同浓度嗜酸乳杆菌组合对大肠杆菌生长的抑制作用
由表4可知，试验组与对照组相比具有明显的抑制大肠杆菌生长的效果，且与对照组差异均显著（P＜0.05）。在8 h和16 h时，0.005%GOD与1×107 CFU/mL嗜酸乳杆菌组合对大肠杆菌的抑制作用最强，与其它试验组差异显著（P＜0.05）；在24 h时，除对照组仍有大肠杆菌生长外，所有试验组的培养液中已经检测不到大肠杆菌的生长，与表1、表2的结果相比较，初步证明了0.005%GOD与不用浓度的嗜酸乳杆菌组合具有一定协同抑制大肠杆菌生长的作用。
表4 GOD与不同浓度嗜酸乳杆菌组合对大肠杆菌生长的抑制作用（lg，cfu/mL，n=9）
Figure DEST_PATH_IMAGE008
注：GOD浓度为0.005%。
2.5 GOD、BBR和不同浓度嗜酸乳杆菌组合对大肠杆菌生长的抑制作用
由表5可以看出，在8 h时与对照组，0.005%GOD、0.0015% BBR和不同浓度嗜酸乳杆菌组合对大肠杆菌都具有显著的抑制作用（P＜0.05），且各个试验组间差异显著（P＜0.05）。在16 h和24 h时，除对照组培养液中有大肠杆菌生长外，其它试验组均检测不到大肠杆菌生长。与前面的单一因素和双因素组合相比，0.005%GOD、00015%BBR与嗜酸乳杆菌组合具有更强的抑制大肠杆菌生长作用。
表5 GOD和BBR与不同浓度嗜酸乳杆菌组合对大肠杆菌生长的抑制作用（lg，cfu/mL，n=9）
Figure DEST_PATH_IMAGE010
注：GOD浓度为0.005%，BBR浓度为0.0015%。
2.6. GOD、BBR和嗜酸乳杆菌的不同组合及金霉素对大肠杆菌生长的抑制作用
由表6可知，在8 h时，所有试验组的抑菌作用皆显著地高于对照组（P＜0.05），以150.0mg/L金霉素抑菌作用最强。在 16 h 时，GOD + BBR + L.acidophilus组的抑菌作用与150.0 mg/L 金霉素组相当，具有较强的抑菌作用（P＜0.05）。在 24 h 时，GOD + L.acidophilus和GOD + BBR + L.acidophilus两组的抑菌作用与 75.0-150.0 mg/L 金霉素组相当，具有较强的抑菌作用（P＜0.05），从而获得了一种新型的抗生素替代品。
表6 GOD和BBR与嗜酸乳杆菌不同组合及金霉素对大肠杆菌生长的抑制作用（lg，cfu/mL，n=9）
Figure DEST_PATH_IMAGE012
注：GOD 浓度为0.005%，BBR 浓度为0.0015%，嗜酸乳杆菌的活菌数为1×105 cfu/mL。
2.7 不同浓度姜黄素对大肠杆菌生长的抑制作用
从表7可以看出，金霉素组在24 h时候已经检测不到大肠杆菌的生长，0.04%、0.06%姜黄素组8 h就已经检测不到大肠杆菌的生长，说明0.04%、0.06%姜黄素抑制大肠杆菌的作用较强，其抑菌能力优于75 mg/kg金霉素。
表7不同浓度姜黄素、甘草酸对大肠杆菌的抑制作用结果（lg，cfu/mL，n=9）
Figure DEST_PATH_IMAGE014
2.8 GOD、嗜酸乳杆菌与不同浓度姜黄素配伍对大肠杆菌生长的抑制作用
从表8可知，与对照组相比较，试验组对大肠杆菌都具有明显的抑制作用。以0.005%GOD、1×105 cfu/mL嗜酸乳杆菌、0.04%姜黄素组合对大肠杆菌的抑制作用最强，以0.005%GOD、1×105 cfu/mL嗜酸乳杆菌、0.02%姜黄素组合，0.005%GOD、1×105 cfu/mL嗜酸乳杆菌、0.03%姜黄素组合对大肠杆菌的抑制作用次之。试验组0.005%GOD、1×105 cfu/mL嗜酸乳杆菌、0.01%姜黄素组合在24 h已经检测不到大肠杆菌的生长，试验组以0.005%GOD、1×105cfu/mL嗜酸乳杆菌、0.005%姜黄素组合对大肠杆菌的抑制作用最弱。从经济角度考虑的话，选择试验组0.005%GOD、1×105 cfu/mL嗜酸乳杆菌与0.01%-0.02%姜黄素组合为最佳。
表8 GOD、嗜酸乳杆菌与不同浓度姜黄素组合对大肠杆菌生长的抑制作用（lg，cfu/mL，n=9）
Figure DEST_PATH_IMAGE016
注：GOD的浓度为0.005%，嗜酸乳杆菌的活菌数为1×105 cfu/ml。
结论
3.1 葡萄糖氧化酶、嗜酸乳杆菌、小檗碱、姜黄素、金霉素在体外具有明显抑制大肠杆菌生长的作用，随着浓度的增加对大肠杆菌的抑制作用明显增强。
3.2 0.005%GOD与1×105 CFU/mL嗜酸乳杆菌二组合，0.005%GOD、0.0015%BBR、1×105 CFU/mL嗜酸乳杆菌三组合，以及0.005%GOD、1×105 cfu/mL嗜酸乳杆菌与0.01%-0.02%姜黄素三组合，体外抑制大肠杆菌生长的作用最佳，与75.0-150.0 mg/kg金霉素相当。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.可替代抗生素的饲料的添加剂，其特征在于：所述饲料添加剂包括葡萄糖氧化酶、嗜酸乳杆菌、姜黄素或小檗碱中的两种或三种。
2. 根据权利要求1所述的可替代抗生素的饲料的添加剂，其特征在于：所述饲料添加剂包括使用浓度为0.0025 wt%-0.005wt%的葡萄糖氧化酶和1×105 -1×107CFU/mL的嗜酸乳杆菌。
3.根据权利要求2所述的可替代抗生素的饲料的添加剂，其特征在于：所述饲料添加剂包括使用浓度0.005wt%的葡萄糖氧化酶和1×105CFU/mL的嗜酸乳杆菌。
4. 根据权利要求1所述的可替代抗生素的饲料的添加剂，其特征在于：所述饲料添加剂包括使用浓度为0.0025 wt%-0.005wt%的葡萄糖氧化酶、0.0015wt%-0.009wt%的小檗碱、0.005wt%-0.04wt%姜黄素和1×105-1×107 CFU/mL的嗜酸乳杆菌。
5. 根据权利要求4所述的可替代抗生素的饲料的添加剂，其特征在于：所述饲料添加剂包括使用浓度为0.005wt%的葡萄糖氧化酶、0.0015wt%的小檗碱和1×105的嗜酸乳杆菌三组合，以及0.005%GOD、0.01%-0.02%姜黄素、1×105 CFU/mL嗜酸乳杆菌三组合。
6.权利要求4或5所述的饲料添加剂的使用方法，其特征在于，步骤为：按比例向饲料中添加葡萄糖氧化酶、小檗碱、姜黄素和嗜酸乳杆菌，达到各自使用浓度后，混匀使用。
7.根据权利要求7所述的饲料添加剂的使用方法，其特征在于：所述试验为流体状态。
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