CN114624357B - 一种中药复方制剂特征图谱及其建立方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于药物分析领域，具体涉及一种中药复方制剂特征图谱及其建立方法。本发明提供的中药复方制剂特征图谱的建立方法具有准确度高、稳定性高、重复性好的特点。本发明通过对3个不同批次的中药复方制剂进行检测，结果表明，相同位置的色谱峰的相对保留时间的RSD均在5％之内，该建立方法具有较好的重现性和较高的可靠性。且得到的特征图谱具有6个达到有效分离的共有峰，能够有效表征中药复方制剂的质量水平，有利于实现中药复方制剂质量的全面貌监控。

Description

一种中药复方制剂特征图谱及其建立方法

技术领域

本发明属于药物分析领域，具体涉及一种中药复方制剂特征图谱及其建立方法。

背景技术

治疗慢阻肺的中药复方制剂由红景天、丹参、五味子、矮地茶、橘红、炙黄芪、黄精、法半夏、葶苈子、炙甘草等药味组成，本方以炙黄芪、麦冬益肺气养肺阴；黄精补肾阳益肾气养肾精；红景天益气活血，通脉平喘；法半夏、炙甘草止咳、和胃；当归配黄精养阴血；葶苈子配五味子一泻一敛双调肺气，且可平喘；橘红、丹参气血双调，炙黄芪配防风补肺益气祛风，防止感冒。故全方有补肺益肾健脾，调补气血阴阳之功，以调补为主，酌情加用少量平喘止咳嗽和胃药，标本兼治，以治本为主。

中药特征图谱是近年来用于控制中药复方及其制剂质量的有效方法，中药特征图谱技术为中药复方的质量控制研究提供了更广阔的视野。中药特征图谱具有整体性的特点，突出中药复方的完整面貌。同时，同类药材特征图谱具有相似性的特点，依靠该图谱实现了对中药内在化学成分的综合评价和整体质量的全面控制，使中药制剂的成分更加可控。

HPLC特征图谱是目前应用最广泛的色谱分析法。HPLC法是检测中药中各种化学成分的一种普通适用的分析方法，其以高压力、高灵敏度、高效率以及自动化等优点广泛应用于中药化学成分检测中，使中药制剂的成分更加可控。

发明内容

有鉴于此，本发明的第一个目的是针对现有技术中存在的问题，提供一种中药复方制剂特征图谱，所述图谱能够全面反应中药复方制剂的成分，实现中药制剂的质量控制。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种中药复方制剂特征图谱，以橙皮苷色谱峰为参照，所述中药复方制剂特征图谱包括6个共有峰，分别为：

1号峰，相对保留时间为0.16；

2号峰，相对保留时间为0.41；

3号峰，相对保留时间为0.45；

4号峰，相对保留时间为1.00；

5号峰，相对保留时间为1.11；

6号峰，相对保留时间为1.64。

优选的，以橙皮苷色谱峰为参照，特征图谱中的2号峰是红景天苷、3号峰是岩白菜素、4号峰是橙皮苷、5号峰是丹酚酸B、6号峰是五味子醇甲。

值得说明的是，所述中药复方制剂特征图谱中各共有峰的饮片归属见表2：

表2中药复方制剂特征图谱共有峰的饮片归属

本发明的第二个目的在于，提供一种如上所述的中药复方制剂特征图谱的建立方法，包括如下步骤：

(1)采用50％甲醇对中药复方制剂进行超声提取，得到供试品溶液；

(2)采用高效液相色谱法对供试品溶液进行测试，根据《高效液相色谱法(通则0512)》，由得到的色谱数据生成中药复方制剂特征图谱；

所述高效液相色谱法的色谱条件为：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶填充柱，柱长为100mm，内径为4.6mm，粒径为2.7μm；

柱温：30℃；

检测波长：210nm；

进样体积：10μL；

进样浓度：50μg/mL；

理论板数：以红景天苷峰计算，不低于3000；

流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0.1％磷酸水溶液；

洗脱方式为梯度洗脱，所述梯度洗脱的洗脱程序如表1所示：

表1梯度洗脱程序

优选的，所述中药复方制剂包括红景天、丹参、五味子、矮地茶和橘红；所述红景天、丹参、五味子、矮地茶、橘红的质量比为200～300：100～200：100～200：150～200：100～200。

值得说明的是，本发明使用的中药复方制剂为委托湖南新汇制药股份有限公司依据上述复方制备供研究用的慢阻肺颗粒。

进一步优选的，所述供试品溶液的制备方法包括：取中药复方制剂细粉约2g，精密称定，置带塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇50ml，称定重量，超声20min，静置至常温，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

进一步优选的，所述中药复方制剂特征图谱的建立方法还包括配制混合对照品溶液。

更进一步优选的，所述混合对照品溶液的配制方法包括：取红景天苷、岩白菜素、橙皮苷、丹酚酸B、五味子醇甲对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得混合对照品溶液；

采用与供试品溶液相同的高效液相色谱条件对混合对照品溶液进行测试，得到混合对照品溶液的色谱图，将混合对照品溶液的色谱图与中药复方制剂特征图谱进行对比，以指认中药复方制剂特征图谱中的色谱峰。

与现有技术相比，本发明提供的中药复方制剂特征图谱的建立方法具有准确度高、稳定性高、重复性好的特点。本发明通过对3个不同批次的中药复方制剂进行检测，结果表明，相同位置的色谱峰的相对保留时间的RSD均在5％之内，该建立方法具有较好的重现性和较高的可靠性。且得到的特征图谱具有6个达到有效分离的共有峰，能够有效表征中药复方制剂的质量水平，有利于实现中药复方制剂质量的全面貌监控。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图

图1为本发明实施例4中的对照品溶液的液相色谱图。

图2为本发明对比例1的不同流动相体系下供试品的色谱图。

图3为本发明对比例2的不同流动相梯度洗脱程序下供试品的色谱图。

图4为本发明对比例3的三维图谱。

图5为本发明对比例4的不同提取方式的供试品的色谱图。

图6为本发明对比例5的不同提取溶剂的供试品的色谱图。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

在这里专用的词“实施例”，作为“示例性”所说明的任何实施例不必解释为优于或好于其它实施例。本申请实施例中性能指标测试，除非特别说明，采用本领域常规试验方法。应理解，本申请中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本申请公开的内容。

除非另有说明，否则本文使用的技术和科学术语具有本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义；作为本申请中其它未特别注明的试验方法和技术手段均指本领域内普通技术人员通常采用的实验方法和技术手段。

本文所用的术语“基本”和“大约”用于描述小的波动。例如，它们可以是指小于或等于±5％，如小于或等于±2％，如小于或等于±1％，如小于或等于±0.5％，如小于或等于±0.2％，如小于或等于±0.1％，如小于或等于±0.05％。在本文中以范围格式表示或呈现的数值数据，仅为方便和简要起见使用，因此应灵活解释为不仅包括作为该范围的界限明确列举的数值，还包括该范围内包含的所有独立的数值或子范围。例如，“1～5％”的数值范围应被解释为不仅包括1％至5％的明确列举的值，还包括在所示范围内的独立值和子范围。因此，在这一数值范围中包括独立值，如2％、3.5％和4％，和子范围，如1％～3％、2％～4％和3％～5％等。这一原理同样适用于仅列举一个数值的范围。此外，无论该范围的宽度或所述特征如何，这样的解释都适用。

为了更好的说明本申请内容，在下文的具体实施例中给出了众多的具体细节。本领域技术人员应当理解，没有某些具体细节，本申请同样可以实施。在实施例中，对于本领域技术人员熟知的一些方法、手段、仪器、设备等未作详细描述，以便凸显本申请的主旨。

在不冲突的前提下，本申请实施例公开的技术特征可以任意组合，得到的技术方案属于本申请实施例公开的内容。

本发明提供了一种中药复方制剂特征图谱，以橙皮苷色谱峰为参照，包括6个共有峰，分别为：

1号峰，相对保留时间为0.16；

2号峰，相对保留时间为0.41；

3号峰，相对保留时间为0.45；

4号峰，相对保留时间为1.00；

5号峰，相对保留时间为1.11；

6号峰，相对保留时间为1.64。

其中，2号峰是红景天苷、3号峰是岩白菜素、4号峰是橙皮苷、5号峰是丹酚酸B、6号峰是五味子醇甲。

本发明还提供了上述中药复方制剂特征图谱的建立方法，包括如下步骤：

(1)采用50％甲醇对中药复方制剂进行超声提取，得到供试品溶液；

(2)采用高效液相色谱法对供试品溶液进行测试，根据《高效液相色谱法(通则0512)》，由得到的色谱数据生成中药复方制剂特征图谱；

所述高效液相色谱法的色谱条件为：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶填充柱，柱长为100mm，内径为4.6mm，粒径为2.7μm；

柱温：30℃；

检测波长：210nm；

进样体积：10μL；

进样浓度：50μg/mL；

理论板数：以红景天苷峰计算，不低于3000；

流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0.1％磷酸水溶液；

洗脱方式为梯度洗脱，所述梯度洗脱的洗脱程序如表1所示：

表1梯度洗脱程序

在本发明中，所述中药复方制剂包括红景天、丹参、五味子、矮地茶和橘红；所述红景天、丹参、五味子、矮地茶、橘红的质量比为200～300：100～200：100～200：150～200：100～200。

在本发明中，所述中药复方制剂为委托湖南新汇制药股份有限公司生产的供研究用的慢阻肺颗粒。

在本发明中，所述供试品溶液的制备方法包括：取中药复方制剂细粉约2g，精密称定，置带塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇50ml，称定重量，超声20min，静置至常温，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

在本发明中，所述中药复方制剂特征图谱的建立方法还包括配制混合对照品溶液。

所述混合对照品溶液的配制方法包括：取红景天苷、岩白菜素、橙皮苷、丹酚酸B、五味子醇甲对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得混合对照品溶液；

采用与供试品溶液相同的高效液相色谱条件对混合对照品溶液进行测试，得到混合对照品溶液的色谱图。将混合对照品溶液的色谱图与中药复方制剂特征图谱进行对比，以指认中药复方制剂特征图谱中的色谱峰。

为更好地理解本发明，下面通过以下实施例对本发明作进一步具体的阐述，但不可理解为对本发明的限定，对于本领域的技术人员根据上述发明内容所作的一些非本质的改进与调整，也视为落在本发明的保护范围内。

本发明实施例中使用的仪器设备、药品试剂如下：

仪器设备：

Ailgent 1260Ⅱ高效液相色谱仪，VWD检测器，岛津审计追踪软件；

KM-500DE型超声波清洗器(昆山美美超声仪器有限公司)；

XPE105分析天平(METTLER)。

对照品、供试品及饮片：

红景天苷(中国食品药品检定研究院，批号：110818-201708)；

丹酚酸B(中国食品药品检定研究院，批号：111562-201917)；

五味子醇甲(中国食品药品检定研究院，批号：110857-201815)；

岩白菜素(中国食品药品检定研究院，批号：11532-201604)；

橙皮苷(中国食品药品检定研究院，批号：110721-201818)；

委托生产的供研究用的慢阻肺颗粒(批号：200901、200908、200910，湖南新汇制药股份有限公司)；

红景天、丹参、五味子、矮地茶、橘红等药材购自湖南上药控股(湖南)有限公司。

实施例1

精密度实验

取本品细粉约2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇50ml，称定重量，超声20分钟，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

连续进样6次，以橙皮苷为参照峰，计算相对保留时间和相对峰面积，结果显示相对保留时间和相对峰面积RSD值均小于5％，表明，本方法精密度良好。

表3精密度试验相对保留时间结果

表4精密度试验相对峰面积结果

实施例2

稳定性实验

取本品细粉约2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇50ml，称定重量，超声20分钟，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

分别在0h、2h、4h、6h、8h和12h进样，结果显示相对保留时间和相对峰面积RSD值小于5％，结果表明，供试品溶液在12h内基本稳定。

表5稳定性试验相对保留时间结果

表6稳定性试验相对峰面积结果

实施例3

重复性实验

取本品细粉约2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇50ml，称定重量，超声20分钟，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。平行制备6份样品溶液，分别进样，以橙皮苷为参照峰，计算相对保留时间和相对峰面积，重复性结果显示相对保留时间和相对峰面积RSD值小于5％，结果表明，本方法重复性良好。

表7重复性试验相对保留时间结果

表8重复性试验相对峰面积结果

实施例4

中药复方制剂特征图谱的建立

(1)供试品溶液的制备

取以上3个批次的慢阻肺颗粒(批号：200901、200908、200910)细粉各约2g，精密称定，置带塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇50ml，称定重量，超声20min，静置至常温，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

(2)混合对照品溶液的制备

取红景天苷、岩白菜素、橙皮苷、丹酚酸B、五味子醇甲对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。

(3)高效液相色谱条件

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶填充柱，柱长为100mm，内径为4.6mm，粒径为2.7μm；

柱温：30℃；

检测波长：210nm；

进样体积：10μL；

进样浓度：50μg/mL；

理论板数：以红景天苷峰计算，不低于3000；

流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0.1％磷酸水溶液；

洗脱方式为梯度洗脱，所述梯度洗脱的洗脱程序如表1所示。

表1梯度洗脱程序

(4)测定

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，分别得到供试品溶液的液相色谱和对照品溶液的液相色谱。

对照品溶液的液相色谱如图1所示，图1中峰2为红景天苷、峰3为岩白菜素、峰4(S)为橙皮苷、峰5为丹酚酸B、峰6为五味子醇甲。

实施例5

按实施例4方法，分别测定中药复方制剂中红景天、丹参、五味子、黄芪、防风的阳性对照色谱图和阴性对照色谱图，通过对中药复方制剂特征图谱与各药材阳性对照色谱图及阴性对照色谱图中的色谱峰进行分析，比较色谱峰的保留时间，最终确认中药复方制剂特征图谱中共有峰的归属峰，结果如表2所示。

为了进一步证明本发明的有益效果以更好地理解本发明，通过以下对比例确定本发明的技术进步，但不可理解为对本发明的限定，对于本领域的技术人员根据上述发明内容所作的其他测定实验得到的产品性质及根据上述性质进行的应用，也视为落在本发明的保护范围内。

对比例1

按照实施例4中供试品溶液的配制方法以及测试方法进行试验，区别在于，采用流动相A为甲醇、流动相B为0.1％磷酸水溶液的流动相系统进行实验。将实施例4中供试品的色谱图与对比例1中不同流动相体系下供试品的色谱图(图2)进行对比，结果表明，当流动相A为乙腈、流动相B为0.1％磷酸水溶液时，色谱峰的分离度较好，峰形对称，柱效较高。

对比例2

按照实施例4中供试品溶液的配制方法以及测试方法进行试验，区别在于，采用如表9、10不同的流动相梯度洗脱程序进行实验。将实施例4中供试品的色谱图与对比例2中不同流动相梯度洗脱程序下供试品的色谱图(图3a和图3b)进行对比，结果表明，表9和表10所示流动相梯度洗脱程序的色谱峰分离效果不佳。

表9流动相梯度洗脱程序a

表10流动相梯度洗脱程序b

对比例3

按照实施例4中供试品溶液的配制方法以及测试方法进行试验，区别在于，采用二极管阵列检测器对慢阻肺颗粒特征图谱的检测波长进行确定，从所得的三维图谱(图4)中，可以看出在210nm波长处检测到的色谱峰数较多、峰的信息较全面，故选定特征图谱的检测波长为210nm。

对比例4

按照实施例4中供试品溶液的配制方法以及测试方法进行试验，区别在于，将超声30min处理替换为回流30min处理。将实施例4中供试品的色谱图与对比例4中不同提取方式的供试品的色谱图(图5)进行对比，结果表明，样品通过两种方式提取得到的色谱峰个数差异不大，由于超声操作较简单，故选择超声提取。

对比例5

按照实施例4中供试品溶液的配制方法以及测试方法进行试验，区别在于，将提取溶剂替换为甲醇(图6a)、75％甲醇(图6b)和30％甲醇(图6c)。将实施例4中供试品的色谱图与对比例5中不同提取溶剂的供试品的色谱图(图6)进行对比，结果表明，采用50％甲醇为溶剂对慢阻肺颗粒进行提取，得到的色谱峰较全面，峰形对称，分离度好。

对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (4)

1.一种中药复方制剂特征图谱的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）采用50%甲醇对中药复方制剂进行超声提取，得到供试品溶液；

（2）采用高效液相色谱法对供试品溶液进行测试，根据《高效液相色谱法（通则0512）》，由得到的色谱数据生成中药复方制剂特征图谱；

所述高效液相色谱法的色谱条件为：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶填充柱，柱长为100 mm，内径为 4.6 mm，粒径为2.7 µm；

柱温：30℃；

检测波长：210 nm；

进样体积：10 µL；

进样浓度：50 µg/mL；

理论板数：以红景天苷峰计算，不低于3000；

流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0.1%磷酸水溶液；

洗脱方式为梯度洗脱，所述梯度洗脱的洗脱程序如表1所示：

表1 梯度洗脱程序

所述中药复方制剂包括红景天、丹参、五味子、矮地茶和橘红；所述红景天、丹参、五味子、矮地茶、橘红的质量比为200～300：100～200：100~200：150～200：100～200；

还包括配制混合对照品溶液，且所述混合对照品溶液的配制方法包括：取红景天苷、岩白菜素、橙皮苷、丹酚酸B、五味子醇甲对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50µg的溶液，即得混合对照品溶液；

采用与供试品溶液相同的高效液相色谱条件对混合对照品溶液进行测试，得到混合对照品溶液的色谱图，将混合对照品溶液的色谱图与中药复方制剂特征图谱进行对比，以指认中药复方制剂特征图谱中的色谱峰。

2.根据权利要求1所述的一种中药复方制剂特征图谱的建立方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备方法包括：取中药复方制剂细粉约2g，精密称定，置带塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，称定重量，超声20 min，静置至常温，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

3.根据权利要求1或2所述的一种中药复方制剂特征图谱的建立方法，其特征在于，所述中药复方制剂特征图谱以橙皮苷色谱峰为参照，所述中药复方制剂特征图谱包括6个共有峰，分别为：

1号峰，相对保留时间为0.16；

2号峰，相对保留时间为0.41；

3号峰，相对保留时间为0.45；

4号峰，相对保留时间为1.00；

5号峰，相对保留时间为1.11；

6号峰，相对保留时间为1.64。

4.根据权利要求3所述的一种中药复方制剂特征图谱的建立方法，其特征在于，所述中药复方制剂特征图谱以橙皮苷色谱峰为参照，特征图谱中的2号峰是红景天苷、3号峰是岩白菜素、4号峰是橙皮苷、5号峰是丹酚酸B、6号峰是五味子醇甲。

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