CN114621946A - 一种防治大豆根腐病的生防菌剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种防治大豆根腐病的生防菌剂及其制备方法，属于农用微生物技术领域。本发明生防菌剂包括以下重量份的原料制备而成：微生物载体10‑30份、微生物菌剂5‑20份、分散剂1‑5份、保护剂3‑8份、尿素1‑5份、海藻酸钠0.5‑3份、壳聚糖0.1‑1.5份。本发明生防菌剂高效、无毒、环境友好，产品呈固体颗粒状，方便施用，稳定性好，作用时间长，在有效防治大豆根腐病的同时，可以促进大豆生长，是一种高效绿色环保的生防菌剂，具有广泛的市场应用潜力，值得推广使用。

Description

一种防治大豆根腐病的生防菌剂及其制备方法
技术领域
本发明属于农用微生物技术领域，具体涉及一种防治大豆根腐病的生防菌剂及其制备方法。
背景技术
大豆根腐病是大豆整个生长发育期都能发生并可引起大豆根部腐烂的世界性土传病害。大豆根腐病病原菌主要有大豆疫霉菌、尖孢镰孢菌、腐霉菌和立枯丝核菌。不同地区引发大豆根腐病的病原菌种类各有差异，其中大豆疫霉菌和尖孢镰孢菌是世界各地报道和研究最多的大豆根腐病致病菌种类。大豆根腐病主要危害大豆根系，使大豆植株根部酶或其他类物质的活性、数量受到不同程度影响，从而减弱植株根系对土壤中水分和养分的吸收，使大豆减产，严重时甚至绝产。
对于该病的诱发因素较多，涉及物理、化学和生物等几方面。由于该病害的病原菌为土壤习居菌，因此土壤环境极其重要，温度及湿度等会直接影响病原菌的繁殖和侵入，一般土壤温度为18℃左右，潮湿的环境较适宜病原菌生长。
一旦土壤环境适宜病原菌生存，病原菌会大量繁殖，此时病原菌的致病力达到最大，植株的发病程度也最严重。也可通过植物表面的破损处进行侵染，进而在体内繁殖，危害植物生长。长期施用化肥农药造成土壤板结，养分缺失，通风性差，植物产生抗药性，各种有害生物的攻击导致植物体本身防御反应失衡，出现病变；由于轮作实施困难，土壤中潜在的病原菌以菌丝或者分生孢子等形式越冬越夏，随着时间的积累，导致原土壤成为“病土”，病态环境为病原菌提供便捷的入侵机会，从而增加病害的发生率。
目前，大豆根腐病的防治普遍采用是化学药剂种子包衣处理。随着农业生产的可持续发展，微生物农药在农业生产上的应用不断扩大。在防控农作物土传病害、促进植物生长等方面，利用根际促生真菌、细菌的研究取得了显著成果。但目前微生物类菌剂，对于根腐病的防治没有针对性，作用效果不稳定，需要反复施加，使其在农业生产中很难得到实际有效的利用，因此，亟需开发一种高效防治大豆根腐病的微生物菌剂，以满足目前农业生产的需求。
发明内容
本发明针对目前大豆根腐病防治过程中出现的问题，开发一种有效抑制大豆主要根腐病病原菌-疫霉菌和尖孢镰孢菌活性的微生物菌剂，提升大豆抗病性，同时可以有效促进大豆生长的微生物菌剂。
为实现上述技术目的，本发明所采用的技术方案为：
一种防治大豆根腐病的生防菌剂，包括以下重量份的原料制备而成：微生物载体10-30份、微生物菌剂5-20份、分散剂1-5份、保护剂3-8份、尿素1-5份、海藻酸钠0.5-3份、壳聚糖0.1-1.5份。
进一步的，所述微生物载体为改性的活性炭，具体制备方法为：取活性炭，加入水浸没活性炭，配置为浆料，再加入活性炭质量5-10％的淀粉、0.5-1％的碳酸钙和1-3％的六偏磷酸钠，混合搅拌均匀自然沉降，底层沉淀物制得2-5mm颗粒，充分干燥，得到所述微生物载体。
进一步的，所述微生物菌剂是由牛微杆菌YJJK-2、解淀粉芽孢杆菌YH-20和里氏木霉菌组成。
更进一步的，所述牛微杆菌YJJK-2的保藏编号为CGMCCNo.17951，购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2019年6月18日。
更进一步的，所述解淀粉芽孢杆菌YH-20的保藏编号为CCTCC NO.M2018361，购自中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉大学，保藏日期为2018年06月11日。
更进一步的，所述里氏木霉菌的保藏编号为CCTCC HF 2008710，购自中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉大学，保藏日期为2005年06月01日。
进一步的，所述分散剂为木质素磺酸钠或者十二烷基磺酸钠。
进一步的，所述保护剂为糊精或者麦芽糖糊精。
一种防治大豆根腐病的生防菌剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备微生物菌剂：将牛微杆菌YJJK-2、解淀粉芽孢杆菌YH-20和里氏木霉菌分别活化、扩大培养菌株至对数生长期，离心收集菌体，用无菌生理盐水洗涤、稀释、混合制备复合菌株悬浮液，使复合菌株悬浮液中各菌株菌数含量为(1-5)×108个/ml，得到微生物菌剂；
(2)制备载体：取活性炭，加入水浸没活性炭，配置为浆料，再加入活性炭质量5-10％的淀粉、0.5-1％的碳酸钙和1-3％的六偏磷酸钠，混合搅拌均匀自然沉降，底层沉淀物制得2-5mm颗粒，充分干燥，得到所述微生物载体；
(3)将微生物菌剂加入到微生物载体中，加入去离子水没过载体，再加入分散剂、保护剂、尿素、海藻酸钠、壳聚糖充分搅拌浸润，静置8-12h后，充分干燥，得到终产品，分装入库。
其中，其中扩大培养的条件如下：25-45℃、100-120r/min水浴摇床培养24-32h。扩大培养基的组成为：玉米粉30-35g、胰蛋白胨2-2.5g、酵母粉1-1.5g、磷酸二氢钾1.0g、硫酸镁1.0g、硫酸锰0.2g、水1000mL，初始pH7.5-8。
本发明各原料均市售可得。
有益效果
相比较于农业防治和化学防治手段，生物防治可有效、持久地防治大豆根腐病，至今已发现的大豆根腐病生防菌主要为真菌、细菌和放线菌链霉菌及其他变种3大类。虽然生防菌对病原菌有很好的防治效果，但因为受到外界条件(土壤物理条件和生物条件等)的影响，生防菌的防治效果并不稳定。这就要求生防菌具有多种功能性和稳定性，并且对于病原菌有着极强的抗性，以实现持续有效的发挥作用。因此，利用2种或者2种以上相互没有拮抗作用的生防菌按一定的比例进行混合应用，将极大拓宽了生防菌的作用范围，使生防菌的作用机制更加多样化，效果更好。
牛微杆菌YJJK-2具有良好的生物耐受性，耐盐碱，具有产IAA和溶磷能力；解淀粉芽孢杆菌YH-20对10种植物病原真菌均具有较好的拮抗效果，且对植物本身没有危害，可以明显的促进植物的生长；而里氏木霉菌，可产生蛋白酶、纤维素酶和嗜铁素等生物活性物质溶解致病菌细胞壁，同时，具有促生作用，提高植株的品质，加强抗病能力；三者混合后产生协同增效的作用，可以有效防治大豆由于疫霉-尖孢尖孢镰孢菌所引起的根腐病，防病促生效果显著。
为进一步增效功效，提升稳定性和延长使用时间，本发明对载体活性炭进行了改性，经过改性的活性炭孔隙率更高、吸附性粘性更强，可以有效的吸附并固定微生物菌剂，起到对微生物的保护作用和稳定作用，同时对于微生物释放的活性物质或者其它营养物质起到缓释作用，以延长产品的使用时间。
最后本发明加入分散剂促进微生物的均匀分散、保护剂保护辅助微生物发挥效用、尿素提供营养物质同时防冻；海藻酸钠、壳聚糖促进功效物质延展成膜；再主要功能成分和辅助成分的共同作用下，实现对大豆根腐病的有效防治。
本发明生防菌剂高效、无毒、环境友好，产品呈固体颗粒状，方便施用，稳定性好，作用时间长，在有效防治大豆根腐病的同时，可以促进大豆生长，是一种高效绿色环保的生防菌剂，具有广泛的市场应用潜力，值得推广使用。
附图说明
图1为本发明实施例3以及对比例2-4所得微生物菌剂对于疫霉的平板对峙实验图；
图2为本发明实施例1-3以及对比例2-4所得微生物菌剂对于尖孢镰孢菌的平板对峙实验图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明的技术方案做进一步说明，但不限于此。
实施例1
一种防治大豆根腐病的生防菌剂，包括以下重量份的原料制备而成：微生物载体10份、微生物菌剂5份、分散剂1份、保护剂3份、尿素1份、海藻酸钠0.5份、壳聚糖0.1份。
所述微生物载体为改性的活性炭，具体制备方法为：取活性炭，加入水浸没活性炭，配置为浆料，再加入活性炭质量5-10％的淀粉、0.5-1％的碳酸钙和1-3％的六偏磷酸钠，混合搅拌均匀自然沉降，底层沉淀物制得2-5mm颗粒，充分干燥，得到所述微生物载体。
所述微生物菌剂是由牛微杆菌YJJK-2、解淀粉芽孢杆菌YH-20和里氏木霉菌组成。
所述牛微杆菌YJJK-2的保藏编号为CGMCCNo.17951，购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2019年6月18日。
所述解淀粉芽孢杆菌YH-20的保藏编号为CCTCC NO.M2018361，购自中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉大学，保藏日期为2018年06月11日。
所述里氏木霉菌的保藏编号为CCTCC HF 2008710，购自中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉大学，保藏日期为2005年06月01日。
所述分散剂为木质素磺酸钠。
所述保护剂为糊精。
一种防治大豆根腐病的生防菌剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备微生物菌剂：将牛微杆菌YJJK-2、解淀粉芽孢杆菌YH-20和里氏木霉菌分别活化、扩大培养菌株至对数生长期，离心收集菌体，用无菌生理盐水洗涤、稀释、混合制备复合菌株悬浮液，使复合菌株悬浮液中各菌株菌数含量为1×108个/ml，得到微生物菌剂；
(2)制备载体：取活性炭，加入水浸没活性炭，配置为浆料，再加入活性炭质量5％的淀粉、0.5％的碳酸钙和1％的六偏磷酸钠，混合搅拌均匀自然沉降，底层沉淀物制得2-5mm颗粒，充分干燥，得到所述微生物载体；
(3)将微生物菌剂加入到微生物载体中，加入去离子水没过载体，再加入分散剂、保护剂、尿素、海藻酸钠、壳聚糖充分搅拌浸润，静置8h后，充分干燥，得到终产品，分装入库。
其中，其中扩大培养的条件如下：25-45℃、100-120r/min水浴摇床培养24-32h。扩大培养基的组成为：玉米粉30-35g、胰蛋白胨2-2.5g、酵母粉1-1.5g、磷酸二氢钾1.0g、硫酸镁1.0g、硫酸锰0.2g、水1000mL，初始pH7.5-8。
实施例2
一种防治大豆根腐病的生防菌剂，包括以下重量份的原料制备而成：微生物载体20份、微生物菌剂12份、分散剂3份、保护剂5份、尿素3份、海藻酸钠2份、壳聚糖1份。
所述微生物载体为改性的活性炭，具体制备方法为：取活性炭，加入水浸没活性炭，配置为浆料，再加入活性炭质量8％的淀粉、0.8％的碳酸钙和2％的六偏磷酸钠，混合搅拌均匀自然沉降，底层沉淀物制得2-5mm颗粒，充分干燥，得到所述微生物载体。
所述微生物菌剂是由牛微杆菌YJJK-2、解淀粉芽孢杆菌YH-20和里氏木霉菌组成。
所述牛微杆菌YJJK-2的保藏编号为CGMCCNo.17951，购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2019年6月18日。
所述解淀粉芽孢杆菌YH-20的保藏编号为CCTCC NO.M2018361，购自中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉大学，保藏日期为2018年06月11日。
所述里氏木霉菌的保藏编号为CCTCC HF 2008710，购自中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉大学，保藏日期为2005年06月01日。
所述分散剂为十二烷基磺酸钠。
所述保护剂为麦芽糖糊精。
一种防治大豆根腐病的生防菌剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备微生物菌剂：将牛微杆菌YJJK-2、解淀粉芽孢杆菌YH-20和里氏木霉菌分别活化、扩大培养菌株至对数生长期，离心收集菌体，用无菌生理盐水洗涤、稀释、混合制备复合菌株悬浮液，使复合菌株悬浮液中各菌株菌数含量为3×108个/ml，得到微生物菌剂；
(2)制备载体：取活性炭，加入水浸没活性炭，配置为浆料，再加入活性炭质量8％的淀粉、0.8％的碳酸钙和2％的六偏磷酸钠，混合搅拌均匀自然沉降，底层沉淀物制得2-5mm颗粒，充分干燥，得到所述微生物载体；
(3)将微生物菌剂加入到微生物载体中，加入去离子水没过载体，再加入分散剂、保护剂、尿素、海藻酸钠、壳聚糖充分搅拌浸润，静置10h后，充分干燥，得到终产品，分装入库。
其中，其中扩大培养的条件如下：25-45℃、100-120r/min水浴摇床培养24-32h。扩大培养基的组成为：玉米粉30-35g、胰蛋白胨2-2.5g、酵母粉1-1.5g、磷酸二氢钾1.0g、硫酸镁1.0g、硫酸锰0.2g、水1000mL，初始pH7.5-8。
实施例3
一种防治大豆根腐病的生防菌剂，包括以下重量份的原料制备而成：微生物载体30份、微生物菌剂20份、分散剂5份、保护剂8份、尿素5份、海藻酸钠3份、壳聚糖1.5份。
所述微生物载体为改性的活性炭，具体制备方法为：取活性炭，加入水浸没活性炭，配置为浆料，再加入活性炭质量10％的淀粉、1％的碳酸钙和3％的六偏磷酸钠，混合搅拌均匀自然沉降，底层沉淀物制得2-5mm颗粒，充分干燥，得到所述微生物载体。
所述微生物菌剂是由牛微杆菌YJJK-2、解淀粉芽孢杆菌YH-20和里氏木霉菌组成。
所述牛微杆菌YJJK-2的保藏编号为CGMCCNo.17951，购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2019年6月18日。
所述解淀粉芽孢杆菌YH-20的保藏编号为CCTCC NO.M2018361，购自中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉大学，保藏日期为2018年06月11日。
所述里氏木霉菌的保藏编号为CCTCC HF 2008710，购自中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉大学，保藏日期为2005年06月01日。
所述分散剂为木质素磺酸钠。
所述保护剂为麦芽糖糊精。
一种防治大豆根腐病的生防菌剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备微生物菌剂：将牛微杆菌YJJK-2、解淀粉芽孢杆菌YH-20和里氏木霉菌分别活化、扩大培养菌株至对数生长期，离心收集菌体，用无菌生理盐水洗涤、稀释、混合制备复合菌株悬浮液，使复合菌株悬浮液中各菌株菌数含量为5×108个/ml，得到微生物菌剂；
(2)制备载体：取活性炭，加入水浸没活性炭，配置为浆料，再加入活性炭质量10％的淀粉、1％的碳酸钙和3％的六偏磷酸钠，混合搅拌均匀自然沉降，底层沉淀物制得2-5mm颗粒，充分干燥，得到所述微生物载体；
(3)将微生物菌剂加入到微生物载体中，加入去离子水没过载体，再加入分散剂、保护剂、尿素、海藻酸钠、壳聚糖充分搅拌浸润，静置12h后，充分干燥，得到终产品，分装入库。
其中，其中扩大培养的条件如下：25-45℃、100-120r/min水浴摇床培养24-32h。扩大培养基的组成为：玉米粉30-35g、胰蛋白胨2-2.5g、酵母粉1-1.5g、磷酸二氢钾1.0g、硫酸镁1.0g、硫酸锰0.2g、水1000mL，初始pH7.5-8。
对比例1
一种防治大豆根腐病的生防菌剂，包括以下重量份的原料制备而成：微生物载体30份、微生物菌剂20份、分散剂5份、保护剂8份、尿素5份、海藻酸钠3份、壳聚糖1.5份。
所述微生物载体为商品化活性炭。
所述微生物菌剂是由牛微杆菌YJJK-2、解淀粉芽孢杆菌YH-20和里氏木霉菌组成。
所述牛微杆菌YJJK-2的保藏编号为CGMCCNo.17951，购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2019年6月18日。
所述解淀粉芽孢杆菌YH-20的保藏编号为CCTCC NO.M2018361，购自中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉大学，保藏日期为2018年06月11日。
所述里氏木霉菌的保藏编号为CCTCC HF 2008710，购自中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉大学，保藏日期为2005年06月01日。
所述分散剂为木质素磺酸钠。
所述保护剂为麦芽糖糊精。
一种防治大豆根腐病的生防菌剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备微生物菌剂：将牛微杆菌YJJK-2、解淀粉芽孢杆菌YH-20和里氏木霉菌分别活化、扩大培养菌株至对数生长期，离心收集菌体，用无菌生理盐水洗涤、稀释、混合制备复合菌株悬浮液，使复合菌株悬浮液中各菌株菌数含量为5×108个/ml，得到微生物菌剂；
(2)将微生物菌剂加入到微生物载体中，加入去离子水没过载体，再加入分散剂、保护剂、尿素、海藻酸钠、壳聚糖充分搅拌浸润，静置12h后，充分干燥，得到终产品，分装入库。
其中，其中扩大培养的条件如下：25-45℃、100-120r/min水浴摇床培养24-32h。扩大培养基的组成为：玉米粉30-35g、胰蛋白胨2-2.5g、酵母粉1-1.5g、磷酸二氢钾1.0g、硫酸镁1.0g、硫酸锰0.2g、水1000mL，初始pH7.5-8。
本对比例除不进行活性炭的改性外，即直接使用活性炭，其余原料和制备方法均同实施例3。
对比例2
一种防治大豆根腐病的生防菌剂，包括以下重量份的原料制备而成：微生物载体30份、微生物菌剂20份、分散剂5份、保护剂8份、尿素5份、海藻酸钠3份、壳聚糖1.5份。
所述微生物载体为改性的活性炭，具体制备方法为：取活性炭，加入水浸没活性炭，配置为浆料，再加入活性炭质量10％的淀粉、1％的碳酸钙和3％的六偏磷酸钠，混合搅拌均匀自然沉降，底层沉淀物制得2-5mm颗粒，充分干燥，得到所述微生物载体。
所述微生物菌剂是由解淀粉芽孢杆菌YH-20和里氏木霉菌组成。
所述解淀粉芽孢杆菌YH-20的保藏编号为CCTCC NO.M2018361，购自中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉大学，保藏日期为2018年06月11日。
所述里氏木霉菌的保藏编号为CCTCC HF 2008710，购自中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉大学，保藏日期为2005年06月01日。
所述分散剂为木质素磺酸钠。
所述保护剂为麦芽糖糊精。
一种防治大豆根腐病的生防菌剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备微生物菌剂：将解淀粉芽孢杆菌YH-20和里氏木霉菌分别活化、扩大培养菌株至对数生长期，离心收集菌体，用无菌生理盐水洗涤、稀释、混合制备复合菌株悬浮液，使复合菌株悬浮液中各菌株菌数含量为5×108个/ml，得到微生物菌剂；
(2)制备载体：取活性炭，加入水浸没活性炭，配置为浆料，再加入活性炭质量10％的淀粉、1％的碳酸钙和3％的六偏磷酸钠，混合搅拌均匀自然沉降，底层沉淀物制得2-5mm颗粒，充分干燥，得到所述微生物载体；
(3)将微生物菌剂加入到微生物载体中，加入去离子水没过载体，再加入分散剂、保护剂、尿素、海藻酸钠、壳聚糖充分搅拌浸润，静置12h后，充分干燥，得到终产品，分装入库。
其中，其中扩大培养的条件如下：25-45℃、100-120r/min水浴摇床培养24-32h。扩大培养基的组成为：玉米粉30-35g、胰蛋白胨2-2.5g、酵母粉1-1.5g、磷酸二氢钾1.0g、硫酸镁1.0g、硫酸锰0.2g、水1000mL，初始pH7.5-8。
本对比例除微生物菌剂中不使用牛微杆菌YJJK-2外，其余原料和制备方法部分均同实施例3。
对比例3
一种防治大豆根腐病的生防菌剂，包括以下重量份的原料制备而成：微生物载体30份、微生物菌剂20份、分散剂5份、保护剂8份、尿素5份、海藻酸钠3份、壳聚糖1.5份。
所述微生物载体为改性的活性炭，具体制备方法为：取活性炭，加入水浸没活性炭，配置为浆料，再加入活性炭质量10％的淀粉、1％的碳酸钙和3％的六偏磷酸钠，混合搅拌均匀自然沉降，底层沉淀物制得2-5mm颗粒，充分干燥，得到所述微生物载体。
所述微生物菌剂是由牛微杆菌YJJK-2和里氏木霉菌组成。
所述牛微杆菌YJJK-2的保藏编号为CGMCCNo.17951，购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2019年6月18日。
所述里氏木霉菌的保藏编号为CCTCC HF 2008710，购自中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉大学，保藏日期为2005年06月01日。
所述分散剂为木质素磺酸钠。
所述保护剂为麦芽糖糊精。
一种防治大豆根腐病的生防菌剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备微生物菌剂：将牛微杆菌YJJK-2和里氏木霉菌分别活化、扩大培养菌株至对数生长期，离心收集菌体，用无菌生理盐水洗涤、稀释、混合制备复合菌株悬浮液，使复合菌株悬浮液中各菌株菌数含量为5×108个/ml，得到微生物菌剂；
(2)制备载体：取活性炭，加入水浸没活性炭，配置为浆料，再加入活性炭质量10％的淀粉、1％的碳酸钙和3％的六偏磷酸钠，混合搅拌均匀自然沉降，底层沉淀物制得2-5mm颗粒，充分干燥，得到所述微生物载体；
(3)将微生物菌剂加入到微生物载体中，加入去离子水没过载体，再加入分散剂、保护剂、尿素、海藻酸钠、壳聚糖充分搅拌浸润，静置12h后，充分干燥，得到终产品，分装入库。
其中，其中扩大培养的条件如下：25-45℃、100-120r/min水浴摇床培养24-32h。扩大培养基的组成为：玉米粉30-35g、胰蛋白胨2-2.5g、酵母粉1-1.5g、磷酸二氢钾1.0g、硫酸镁1.0g、硫酸锰0.2g、水1000mL，初始pH7.5-8。
本对比例除微生物菌剂中不使用解淀粉芽孢杆菌YH-20外，其余原料和制备方法部分均同实施例3。
对比例4
一种防治大豆根腐病的生防菌剂，包括以下重量份的原料制备而成：微生物载体30份、微生物菌剂20份、分散剂5份、保护剂8份、尿素5份、海藻酸钠3份、壳聚糖1.5份。
所述微生物载体为改性的活性炭，具体制备方法为：取活性炭，加入水浸没活性炭，配置为浆料，再加入活性炭质量10％的淀粉、1％的碳酸钙和3％的六偏磷酸钠，混合搅拌均匀自然沉降，底层沉淀物制得2-5mm颗粒，充分干燥，得到所述微生物载体。
所述微生物菌剂是由牛微杆菌YJJK-2和解淀粉芽孢杆菌YH-20组成。
所述牛微杆菌YJJK-2的保藏编号为CGMCCNo.17951，购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2019年6月18日。
所述解淀粉芽孢杆菌YH-20的保藏编号为CCTCC NO.M2018361，购自中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉大学，保藏日期为2018年06月11日。
所述分散剂为木质素磺酸钠。
所述保护剂为麦芽糖糊精。
一种防治大豆根腐病的生防菌剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备微生物菌剂：将牛微杆菌YJJK-2、解淀粉芽孢杆菌YH-20分别活化、扩大培养菌株至对数生长期，离心收集菌体，用无菌生理盐水洗涤、稀释、混合制备复合菌株悬浮液，使复合菌株悬浮液中各菌株菌数含量为5×108个/ml，得到微生物菌剂；
(2)制备载体：取活性炭，加入水浸没活性炭，配置为浆料，再加入活性炭质量10％的淀粉、1％的碳酸钙和3％的六偏磷酸钠，混合搅拌均匀自然沉降，底层沉淀物制得2-5mm颗粒，充分干燥，得到所述微生物载体；
(3)将微生物菌剂加入到微生物载体中，加入去离子水没过载体，再加入分散剂、保护剂、尿素、海藻酸钠、壳聚糖充分搅拌浸润，静置12h后，充分干燥，得到终产品，分装入库。
其中，其中扩大培养的条件如下：25-45℃、100-120r/min水浴摇床培养24-32h。扩大培养基的组成为：玉米粉30-35g、胰蛋白胨2-2.5g、酵母粉1-1.5g、磷酸二氢钾1.0g、硫酸镁1.0g、硫酸锰0.2g、水1000mL，初始pH7.5-8。
本对比例除微生物菌剂中不使用里氏木霉菌外，其余原料和制备方法部分均同实施例3。
性能测试
供试菌株：大豆疫霉菌株，为临沂农业科学院冷鹏研究员赠送。
大豆根腐尖孢镰孢菌菌株，由临沂市农业科学院研究室分离自大豆根腐病样，并鉴定和保存。
大豆品种：黑农69
大豆根腐病原接种体制备
将保存至斜面的疫霉菌、尖孢镰孢菌菌株分别活化转接到PDA培养基，培养7天，备用。将高粱粒沸水煮30分钟，取200g放入罐头瓶中，高压灭菌12min。每瓶接入活化后的病原菌，25±1℃培养10天，备用。
平板对峙试验
在PDA培养基平皿中央接种植物病原菌菌碟，在菌碟周围距培养皿边缘1cm处等距离打孔(φ＝7mm)，每孔接入本发明实施例3、对比例2-4微生物菌剂20μL，置25±1℃培养箱培养，待对照菌落长满培养皿，观察抑菌圈，结果如图1-2所示，对于大豆疫霉，大豆根腐尖孢镰孢菌，本发明实施例微生物菌剂均表现出了良好的抑菌效果，而对比例2-4缺少了菌种的微生物菌剂，均呈现了减弱的趋势，可以说明，本发明三种菌种之间具有良好的协同增效作用，对于大豆的两种主要致病菌具有良好的防效。
盆栽试验
种子处理：将大豆种子用0.1％次氯酸钠表面消毒，再用蒸馏水反复冲洗，晾干备用。
将本发明实施例1-3所得生防菌剂、对比例1-4所得生防菌剂以及疫霉和大豆根腐尖孢镰孢菌病原菌接种体与无菌土壤混匀装盆，加水保持含水量40-50％。每盆播10粒，出苗后，间苗保留每盆5株。试验设接种病原菌和空白对照，另选500倍液多菌灵每盆灌100mL做处理，每处理3次重复取平均值。待28d左右，三出复叶期，调查病情指数及植株的株高干重等指标。
病情指数＝100×∑(各级病根数×相对级数值)/(调查总根数×最高级数)
每千克土壤中，生防菌剂施用量：50-80g/kg；病原菌接种体：40g/kg。
盆栽试验结果如表1所示：
表1盆栽试验结果
株高cm 干重g 根长cm 茎粗cm 病情指数％ 防治效果％
实施例1 25.69 2.12 11.23 1.47 11.5 78.01
实施例2 26.23 2.36 11.12 1.48 10.9 79.16
实施例3 27.15 2.42 11.52 1.48 10.1 80.69
对比例1 24.56 2.05 10.96 1.39 18.5 64.63
对比例2 24.23 1.89 10.53 1.38 21.6 58.70
对比例3 24.11 1.92 10.36 1.39 23.8 54.49
对比例4 25.01 2.01 10.58 1.41 23.7 54.68
空白对照 21.36 1.69 8.98 1.15 3.8 -
接病原菌对照 18.34 1.41 8.12 1.05 52.3 -
由表中数据可以看出，本发明实施例生防菌剂呈现了优异的防治效果，而对比例1-4试验组，防治效果均呈现了不同程度的下降。这是由于不经过改性的活性炭，其很难对微生物起到有效的保护，对于其分泌的活性物质释放快，作用时间短，导致了防控效果的下降。而对比例2-4，由于缺少了菌种的添加，三种菌之间的协同增效平衡被打破，因此导致了防控效果的下降。
需要说明的是，上述实施例仅仅是实现本发明的优选方式的部分实施例，而非全部实施例。显然，基于本发明的上述实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的其他所有实施例，都应当属于本发明保护的范围。

Claims (9)

1.一种防治大豆根腐病的生防菌剂，其特征在于，包括以下重量份的原料制备而成：微生物载体10-30份、微生物菌剂5-20份、分散剂1-5份、保护剂3-8份、尿素1-5份、海藻酸钠0.5-3份、壳聚糖0.1-1.5份。
2.根据权利要求1所述防治大豆根腐病的生防菌剂，其特征在于，所述微生物载体为改性的活性炭，具体制备方法为：取活性炭，加入水浸没活性炭，配置为浆料，再加入活性炭质量5-10％的淀粉、0.5-1％的碳酸钙和1-3％的六偏磷酸钠，混合搅拌均匀自然沉降，底层沉淀物制得2-5mm颗粒，充分干燥，得到所述微生物载体。
3.根据权利要求1所述防治大豆根腐病的生防菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂是由牛微杆菌YJJK-2、解淀粉芽孢杆菌YH-20和里氏木霉菌组成。
4.根据权利要求3所述防治大豆根腐病的生防菌剂，其特征在于，所述牛微杆菌YJJK-2的保藏编号为CGMCCNo.17951。
5.根据权利要求3所述防治大豆根腐病的生防菌剂，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌YH-20的保藏编号为CCTCC NO.M2018361。
6.根据权利要求3所述防治大豆根腐病的生防菌剂，其特征在于，所述里氏木霉菌的保藏编号为CCTCC HF 2008710。
7.根据权利要求1所述防治大豆根腐病的生防菌剂，其特征在于，所述分散剂为木质素磺酸钠或者十二烷基磺酸钠。
8.根据权利要求1所述防治大豆根腐病的生防菌剂，其特征在于，所述保护剂为糊精或者麦芽糖糊精。
9.一种权利要求1-8任意一项所述防治大豆根腐病的生防菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)制备微生物菌剂：将牛微杆菌YJJK-2、解淀粉芽孢杆菌YH-20和里氏木霉菌分别活化、扩大培养菌株至对数生长期，离心收集菌体，用无菌生理盐水洗涤、稀释、混合制备复合菌株悬浮液，使复合菌株悬浮液中各菌株菌数含量为(1-5)×108个/mL，
得到微生物菌剂；
(2)制备载体：取活性炭，加入水浸没活性炭，配置为浆料，再加入活性炭质量5-10％的淀粉、0.5-1％的碳酸钙和1-3％的六偏磷酸钠，混合搅拌均匀自然沉降，底层沉淀物制得2-5mm颗粒，充分干燥，得到所述微生物载体；
(3)将微生物菌剂加入到微生物载体中，加入去离子水没过载体，再加入分散剂、保护剂、尿素、海藻酸钠、壳聚糖充分搅拌浸润，静置8-12h后，充分干燥，得到终产品，分装入库。
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