CN110331114A - 一株耐盐碱抗病促生菌天牛微杆菌及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一株耐盐碱抗病促生菌天牛微杆菌及其应用。本发明从盐碱地黄瓜根际土壤分离到一株天牛微杆菌(Microbacterium saperdae)YJJK‑2，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC NO.17951。该菌株耐盐碱能力较强，在盐碱土壤中定植率高，具有产IAA和溶磷能力，对于黄瓜枯萎病病原菌尖孢镰刀菌具有较强的拮抗作用，可用于生产盐碱地专用微生物肥料，具有提高土壤肥力、促进植物生长和防治黄瓜枯萎病的优势。

Description

一株耐盐碱抗病促生菌天牛微杆菌及其应用
技术领域
本发明涉及一株耐盐碱抗病促生菌天牛微杆菌及其应用，属于农业生物技术领域。
背景技术
盐碱地是我国重要的土地资源，具有巨大的开发潜力。据中国科学院南京土壤研究所报道，我国盐碱地和盐碱障碍耕地总面积超过5亿亩，其中具有农业利用潜力的多达2亿亩，占中国耕地面积的10％左右，主要分布在我国西北、东北及东部沿海地区。合理开发利用盐碱地，对保障我国粮食安全、促进农业可持续发展、改善生态环境及推动区域经济协调发展具有重要意义。
生物肥料在盐碱地生物改良中扮演着重要角色，它不仅具有促进植物生长、拮抗病原菌、缓解重茬效应、增加作物产量与质量等作用，还具有改良土壤、提高肥力、改善生态等作用。生物肥料中的有效微生物能否适应盐碱环境并在盐碱土壤中大量繁殖是决定其有效性的重要因素。针对盐碱土壤的特点，筛选能够耐受盐碱环境的功能性微生物，研发盐碱地专用生物肥料具有重要意义。
黄瓜(Cucumis sativivus L.)属于中等耐盐性蔬菜，可在轻度盐碱地上种植。近年来，在轻度盐碱地绿色开发利用中，黄瓜成为广为种植的蔬菜之一。由于重茬种植很难避免，黄瓜枯萎病(Cucumber Fusarium wilt)逐年加重。黄瓜枯萎病菌阻碍了植株的水分传输进而导致植株萎蔫枯死，具有爆发性强、破坏力大、防控性难的特征，严重影响黄瓜的产量和品质。
黄瓜枯萎病是一种由半知菌亚门镰孢属尖孢镰刀菌黄瓜专化型Fusariumoxysporum f.sp.Cucumerinum引起的土传病害，生产上以化学防治为主，但存在药剂易残留、对人畜伤害大、污染环境等问题。相比之下，生物防治安全、无毒、环保，极具发展潜力。黄瓜枯萎病生防机理以竞争、拮抗和诱导植物抗性为主。哈茨木霉菌(Trichodermaharzianum)、绿色木霉菌(Trichoderma viride)、丛枝菌根真菌(Arbuscular mycorrhiza)等真菌，假单胞菌属(Pseudomonas)和芽孢杆菌属(Bacillus)等细菌均有用于防治黄瓜枯萎病的报道，均有较好的应用效果。但这些菌株耐盐碱能力较差，用于盐碱地黄瓜枯萎病的生物防治效果相对较差。
从盐碱土壤中分离耐盐碱抗病促生菌，用于盐碱地蔬菜土传病害的生物防治，可以提高功能菌在土壤中的定植率，提高防治效果。但目前这方面的研究较少。
发明内容
针对上述现状，本发明提供了一株天牛微杆菌YJJK-2(Microbacterium saperdaeYJJK-2)及其应用方法。天牛微杆菌YJJK-2分离自盐碱地黄瓜根际土壤，具有耐盐碱、促进植物生长、拮抗植物病原菌(尤其是拮抗黄瓜枯萎病病原菌)等多种优良特性，可用于生产微生物肥料。
本发明的目的采用如下技术方案实现：
一株分离自盐碱地黄瓜根际土壤的天牛微杆菌(Microbacterium saperdae)YJJK-2，该菌株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)的保藏编号为CGMCC No.17951；保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2019年6月18日。
所述天牛微杆菌YJJK-2菌株的菌落及菌体特征：在NA培养基上于37℃培养48h，菌落直径约0.5-0.8mm，黄色半透明，圆形，表面光滑，隆起，湿润，粘稠，有光泽，质地均匀，边缘整齐(图1)；菌体呈短杆状，革兰氏阳性(图2)。
所述天牛微杆菌YJJK-2菌株的生理生化特征：革兰氏阳性杆状菌，不能在厌氧条件下生长；媒介酶试验阳性，过氧化氢酶试验阳性，脲酶试验阳性；淀粉水解试验阴性，V-P试验阴性，明胶液化试验阴性，硝酸盐还原试验阳性，D-葡萄糖发酵试验阴性、D-甘露醇发酵试验阴性、甘露糖发酵试验阳性、乳糖发酵试验阴性、蔗糖发酵试验阳性、阿拉伯糖发酵试验阴性、山梨醇发酵试验阴性、鼠李糖发酵试验阴性。
本发明还公开了一种以天牛微杆菌YJJK-2为主要有效成分的活菌制剂。
所述天牛微杆菌YJJK-2活菌制剂的制备方法，其特征是，将天牛微杆菌YJJK-2经过扩大培养(采用NB培养基)后，接种于发酵培养基(接种量2-5％)中，35-40℃培养24-28h，得到天牛微杆菌YJJK-2发酵液。向天牛微杆菌YJJK-2发酵液中加入叔丁基对羟基茴香醚
0.005-0.02％(优选0.01％)、生化黄腐酸粉3-10％(优选5％)和卡松0.005-0.02％(优选0.01％)，搅拌均匀，获得活菌制剂。
所述发酵培养基的配方为：豆粕粉10-15g、玉米粉30-35g、蛋白胨2-2.5g、酵母浸粉1-1.5g、磷酸二氢钾1.0g、硫酸镁1.0g、硫酸锰0.2g、复合酶制剂0.1g、水1000mL，初始pH7.5。所述复合酶制剂的组成为：按重量计，碱性蛋白酶70％、纤维素酶30％。
本发明还公开了上述的天牛微杆菌菌株YJJK-2或者上述的活菌制剂在提高土壤肥力、防治黄瓜枯萎病和促进黄瓜生长方面的应用。
本发明还公开了一种防治盐碱地黄瓜枯萎病的方法：将天牛微杆菌YJJK-2活菌制剂加水稀释100～200倍，在黄瓜植株移苗时蘸根或对黄瓜植株浇水时随水冲施。
本发明的有益效果：
本发明天牛微杆菌YJJK-2分离自盐碱地土壤，耐盐碱能力较强，在盐碱土壤中定植率高，具有产IAA、溶磷、拮抗黄瓜枯萎病病原菌尖孢镰刀菌的作用能力，可用于生产盐碱地专用微生物肥料，具有提高土壤肥力、促进植物生长、防治黄瓜枯萎病的作用。
本发明天牛微杆菌YJJK-2活菌制剂的生产方法科学，发酵液活菌数高，生产成本低。发酵培养基中添加复合酶制剂，灭菌时在升温过程中对豆粕与玉米粉等原料进行水解，可缩短延迟期，提高原料利用率，提高发酵液活菌浓度。发酵液中加入抗氧化剂叔丁基对羟基茴香醚与对活菌具有保护作用的生化黄腐酸粉，可以减少菌剂存放过程中的活菌损失，提高产品的生物稳定性。
说明附图
图1为天牛微杆菌YJJK-2菌株的菌落形态，其中右图为左图的局部放大图；
图2为天牛微杆菌YJJK-2菌株的菌体形态，其中右图为左图的局部放大图；
图3为基于16S rDNA部分序列构建的系统发育树；
图4为天牛微杆菌YJJK-2菌株分解磷酸钙形成的溶磷圈，图中内环为菌落，外环为溶磷透明圈；
图5为天牛微杆菌YJJK-2菌株的产IAA能力，从左至右接种的菌株依次为：CK、YJJK-11、YJJK-2；结果显示：含有L-色氨酸(200mg/L)的LB液体培养基中接种YJJK-2后颜色变红，接种YJJK-11后略显浅红色。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
实施例1：天牛微杆菌YJJK-2菌株的筛选
(1)天牛微杆菌YJJK-2分离自黄瓜根际土壤。土壤取样于山东省东营市垦利区，为盐碱土壤。具体分离方法为：土样混匀，称取5g，放入盛有95mL无菌水和10粒玻璃珠的三角瓶中，于37℃、180rpm振荡30min。取土壤悬液1mL进行10-1-10-7系列浓度梯度稀释，然后取10-5、10-6、10-7三个稀释度涂布至含选择培养基的平板上，于37℃倒置培养2d。分别挑取单菌落划线至含选择培养基的平板上，于37℃倒置培养2d。挑取单菌落转接至保藏培养基试管斜面上，于37℃培养2d，长满菌苔后，置于4℃冰箱中保存备用。共筛选到耐盐碱菌株206株。
所述选择培养基的配方为：蛋白胨10g、酵母膏5g、复合无机盐(NaCl∶KCl∶MgCl2＝10∶1∶1)20g、琼脂20g、蒸馏水1000mL、pH9.0，121℃灭菌20min。
所述保藏培养基的配方为：蛋白胨10g、酵母膏5g、NaCl 10g、琼脂20g、蒸馏水1000mL、pH7.5，121℃灭菌20min。
(2)将步骤(1)筛选的耐盐碱菌株分别转接到无机磷细菌培养基，测定其是否具有溶磷的能力。共筛选出具有溶磷的能力的菌株93株。
所述无机磷细菌培养基配方为：葡萄糖10.0g、(NH4)2SO4 0.5g、MgSO4·7H2O 0.3g、MnSO4·4H2O 0.03g、KCl 0.3g、FeSO4·7H2O 0.03g、NaCl 0.3g、Ca3(PO4)2 10.0g、琼脂20g、蒸馏水1000mL、pH＝7.5，121℃灭菌20min。
(3)产IAA(吲哚乙酸)菌筛选：向含有L-色氨酸(200mg/L)的LB液体培养基中接种步骤(2)筛选到的功能性菌株，28℃，180r/min，震荡培养4d。取50μL菌悬液滴于白色陶瓷板上，同时加50μL Salkowski比色液。将加入50μL 50mg/L IAA的比色液作为阳性对照。白色陶瓷板于室温避光放置30min后观察，颜色变红者表示能够分泌IAA。共筛选出产IAA的菌株36株。
所述LB液体培养基配方为：蛋白胨10.0g、酵母膏5.0g、NaCl 10.0g、蒸馏水1000mL；121℃灭菌20min；pH＝7.0。所述的Salkowski比色液配方为：35％HClO4 50mL、0.5mol/L FeCl31mL。
(4)采用对峙培养法筛选黄瓜枯萎病拮抗菌。将直径5mm黄瓜枯萎病病原菌菌块接种到PDA培养基平板的中心，在距平板中心2.5cm处等距离处接种初筛菌株，以不接种细菌的平板为对照，每个处理3次重复，28℃培养10d，选取抑菌圈直径较大的菌株，保存备用。
通过上述多重筛选，综合考虑菌株的生长速度、磷酸钙溶解能力、IAA产生能力和对黄瓜枯萎病病原菌的拮抗能力，得到一株耐盐碱能力强，且具有溶磷、产IAA能力的黄瓜枯萎病拮抗菌，编号为YJJK-2。
实施例2天牛微杆菌YJJK-2的鉴定
(1)形态与生理生化特征
所述YJJK-2菌株的形态特征为：在NA培养基上于37℃培养48h，菌落直径约0.5-0.8mm，黄色半透明，圆形，表面光滑，隆起，湿润，粘稠，有光泽，质地均匀，边缘整齐；菌体呈短杆状，如图1和图2所示。所述NA培养基即营养琼脂培养基，其配方为牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl 5g、琼脂20g、水1000mL、pH 7.0。
所述YJJK-2菌株的生理生化特征为：革兰氏阳性杆状菌，不能在厌氧条件下生长；媒介酶试验阳性，过氧化氢酶试验阳性，脲酶试验阳性；淀粉水解试验阴性，V-P试验阴性，明胶液化试验阴性，硝酸盐还原试验阳性，D-葡萄糖发酵试验阴性、D-甘露醇发酵试验阴性、甘露糖发酵试验阳性、乳糖发酵试验阴性、蔗糖发酵试验阳性、阿拉伯糖发酵试验阴性、山梨醇发酵试验阴性、鼠李糖发酵试验阴性。
(2)16S rDNA序列分析
将YJJK-2菌株接种到NB培养基中，于37℃，180r/min摇床培养24h。所述NB培养基，其配方为牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl 5g、水1000ml、pH 7.0。收集菌体，提取总DNA，然后以其为模板，在原核生物16S rRNA基因的通用引物F27:5′-AGA GTT TGA TCA TGG CTC AG-3′和F27:5′-AGA GTT TGA TCA TGG CTC AG-3′的引导下进行16S rDNA基因的PCR扩增。扩增产物经1％琼脂糖凝胶电泳分离后，采用胶回收试剂盒回收，交由上海生工生物技术有限公司测序，所得序列如序列表SEQ No.1所示。将所测16S rDNA序列与GenBank数据库中的序列比对，并用MEGA 7.0软件进行多序列同源性分析，并构建系统发育树，如图3所示。
通过形态、生理生化特征和16S rDNA序列分析可知，该菌株为天牛微杆菌，命名为天牛微杆菌(Microbacterium saperdae)YJJK-2。该菌株已经于2019年6月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为：CGMCC No.17951。
实施例3天牛微杆菌YJJK-2菌株溶磷与产IAA的能力
制备无机磷细菌培养基，其配方为：葡萄糖10.0g、(NH4)2SO4 0.5g、MgSO4·7H2O0.3g、MnSO4·4H2O 0.03g、KCl 0.3g、FeSO4·7H2O 0.03g、NaCl 0.3g、Ca3(PO4)2 10.0g、琼脂20g、蒸馏水1000mL、pH＝7.5，121℃灭菌20min。
天牛微杆菌YJJK-2的溶磷能力：将天牛微杆菌YJJK-2菌株用灭菌的牙签接种到无机磷培养基平板上，28℃培养2-5d后，测定透明圈及菌落直径，计算透明圈与菌落直径比(HC)。YJJK-2在无机磷培养基上产生的溶磷透明圈直径为0.79mm，菌落直径为0.26mm，HC值为3.04，说明菌株YJJK-2具有较强的溶解无机磷的能力(图4)。
天牛微杆菌YJJK-2产IAA能力的验证：向含有L-色氨酸(200mg/L)的LB液体培养基中分别接入天牛微杆菌YJJK-2和YJJK-11(实施例1步骤(3)分离到的36株菌株中的一株)，28℃，180r/min，摇床培养4d。取50μL菌悬液滴于白色陶瓷板上，同时加50μLSalkowski比色液。将加入50μL50mg/L IAA的比色液作为阳性对照CK。白色陶瓷板于室温避光放置30min后观察，颜色变红者表示能够分泌IAA。菌株YJJK-2菌悬液在经过试验处理后，颜色呈红色，说明菌株YJJK-2具有较强的分泌IAA的能力(图5)。所述LB液体培养基的配方为：蛋白胨10.0g、酵母膏5.0g、NaCl 10.0g、蒸馏水1000mL；121℃灭菌20min；pH＝7.0。所述的Salkowski比色液配方为：35％HClO4 50mL、0.5mol/L FeCl3 1mL。
实施例4天牛微杆菌YJJK-2菌株活菌制剂的制备
所述天牛微杆菌YJJK-2菌株活菌制剂的制备方法包括以下步骤：
1)菌种活化：将天牛微杆菌YJJK-2菌种转接入NA培养基试管斜面，于37℃培养24h进行活化。所述NA培养基的配方为：牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl 5g、琼脂20g、水1000ml、pH7.0。
2)三角瓶种子制备：用接种环刮取活化后的天牛微杆菌YJJK-2菌苔，接种于NB培养基中，37℃培养24h。所述NB培养基即营养肉汤培养基，其配方为牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl5g、水1000ml、pH 7.0。
3)种子罐菌种制备：将三角瓶种子以2％的接种量转接入装有6L NB培养基的10L种子罐中，于37℃培养20h，全程搅拌转速200rpm，0-6h通风量为3L/min，6-20h通风比为6L/min。
4)发酵培养：将种子罐菌种以2％的接种量转接入500L的发酵罐。发酵罐内装发酵培养基中300L，37℃培养28h，即为天牛微杆菌YJJK-2的发酵液。全程搅拌转速为180rpm，0-6h通风量为200L/min，6-28h通风量为300L/min。发酵结束后，发酵液中天牛微杆菌YJJK-2的活菌数为(0.5～1.5)×1010cfu/ml。
步骤4)所述发酵培养基的配方为：豆粕粉10g、玉米粉30g、蛋白胨2g、酵母浸粉1g、磷酸二氢钾1.0g、硫酸镁1.0g、硫酸锰0.2g、复合酶制剂0.1g、水1000mL，初始pH7.5。所述复合酶制剂的组成为：按重量计，碱性蛋白酶70％、纤维素酶30％。碱性蛋白酶和纤维素酶均由泰安信得利生物科技有限公司生产，产品规格均为20万U/g。碱性蛋白酶的活力单位定义与检测方法执行国家标准GB/T 23527-2009《蛋白酶制剂》，纤维素酶的酶活力单位定义与检测方法执行中华人民共和国轻工行业标准QB 2583-2003《纤维素酶制剂》。
步骤4)所述发酵培养基的制备方法为：按照配方称取原料，溶于水中，加热至50-55℃，保温1-1.5h，然后升温至121℃，保温20-30min进行灭菌。
5)制备活菌制剂：发酵结束后，向所述天牛微杆菌YJJK-2发酵液中加入叔丁基对羟基茴香醚(BHA)0.01％(w/w)、生化黄腐酸粉5％(w/w)和卡松0.01％，搅拌均匀，获得活菌制剂，其活菌含量优选为(0.5～1.5)×1010cfu/ml。所述生化黄腐酸粉由山东泉林嘉有肥料有限责任公司生产，其黄腐酸含量为40％。
实施例5天牛微杆菌YJJK-2菌剂对黄瓜的促生与抗病作用
黄瓜品种采用长春密刺，购买于山东新泰市裕园种业有限公司。黄瓜枯萎病病原菌尖孢镰刀菌黄瓜专化型Fusarium oxysporum f.sp.CucumerinumOwen由山东农业大学农业微生物工程实验室提供。供试土壤取自山东省东营市垦利区，土壤类型为滨海盐渍土，pH8.01，全盐含量2.21‰，有机质含量7.4g/kg，全氮含量719mg/kg，速效氮含量52.6mg/kg，速效磷含量22.54mg/g，速效钾含量79.54mg/g。
试验在山东省平阴县安城镇山东佐田氏生物科技有限公司实验温室内进行，试验用土于100℃灭菌1h，装入长34.5cm、宽24cm、高11cm的育苗盘中，黄瓜种子经催芽后进行播种，每盘100粒，出苗后进行疏苗，保留50株长势均匀的幼苗。播种后5d，真叶初展时，挑选长势较一致的植株，采用随水灌根的方式接种天牛微杆菌YJJK-2菌剂和/或黄瓜枯萎病菌致病菌孢子悬浮液。试验设置4个处理，每个处理3盘，随机区组设计，设置3次重复。
处理如下：
T1:接种5mL天牛微杆菌YJJK-2菌剂和5mL黄瓜枯萎病致病菌的孢子悬浮液；
T2：接种5mL黄瓜枯萎病致病菌的孢子悬浮液和5mL预灭菌的天牛微杆菌YJJK-2菌剂；
T3：接种5mL天牛微杆菌YJJK-2菌剂和5mL预灭菌的黄瓜枯萎病致病菌孢子悬浮液；
T4：接种5mL预灭菌的天牛微杆菌YJJK-2菌剂和5mL预灭菌的黄瓜枯萎病致病菌孢子悬浮液。
处理7d后，测定黄瓜幼苗生长指标和抗病性指标。采用游标卡尺于子叶节下1cm处测定茎粗；采用直尺测定茎基部到生长点之间的距离，即为株高。植株采用清水反复冲洗，再用卫生纸吸干游离水，用万分之一的电子天平测定鲜重。
黄瓜苗期枯萎病分级标准：
0级：无症状；
1级：真叶、子叶黄化或萎蔫面积不超过总面积的50％；
2级：真叶、子叶黄化或萎蔫面积超过总面积的50％；
3级：叶片萎蔫或枯死，仅生长点存活；
4级：全株严重萎蔫，以致枯死。
病情指数＝[∑(病级株数×代表级数)/(植株总数×最高代表级值)]×100；
防治效率＝(对照病情指数－处理病情指数)/对照病情指数×100％。
天牛微杆菌YJJK-2对黄瓜幼苗生长及枯萎病发生的影响如表1所示。由表1可知，只接种天牛微杆菌YJJK-2菌剂的处理(T3)比空白对照(T4)的株高、茎粗和全株鲜重分别增加了7.61％、6.51％和10.24％，达到了显著水平(p<0.05)；与空白对照(T4)相比，只接种病原菌的处理(T2)，辣椒幼苗的生长受到明显抑制(p<0.05)，但同时接种天牛微杆菌YJJK-2菌剂和病原菌的处理(T1)，辣椒幼苗的生长未受到明显的抑制(p>0.05)。这说明天牛微杆菌YJJK-2菌剂对黄瓜幼苗具有促生作用。同时接种天牛微杆菌YJJK-2与病原菌的处理(T1)与仅接种病原菌的处理(T2)相比，发病率与病情指数显著降低(p<0.05)，生防效率高达71.75％。
表1天牛微杆菌YJJK-2对黄瓜幼苗生长的影响及对黄瓜枯萎病的防治效果
注：表中数值分别代表平均值±标准差，同一行中数据无相同字母标识者，标识差异显著(p<0.05)。
SEQUENCE LISTING
<110> 山东佐田氏生物科技有限公司
<120> 一株耐盐碱抗病促生菌天牛微杆菌及其应用
<130> 0
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 1397
<212> DNA
<213> 天牛微杆菌（Microbacterium saperdae）YJJK-2的16S rDNA 序列
<400> 1
atgcagtcga acggtgaaca cggagcttgc tctgtgggat cagtggcgaa cgggtgagta 60
acacgtgagc aacctgcccc tgactctggg ataagcgctg gaaacggcgt ctaatactgg 120
atatgtgacg tgaccgcatg gtctgcgttt ggaaagattt ttcggttggg gatgggctcg 180
cggcctatca gcttgttggt gaggtaatgg ctcaccaagg cgtcgacggg tagccggcct 240
gagagggtga ccggccacac tgggactgag acacggccca gactcctacg ggaggcagca 300
gtggggaata ttgcacaatg ggcgaaagcc tgatgcagca acgccgcgtg agggatgacg 360
gccttcgggt tgtaaacctc ttttagcagg gaagaagcga aagtgacggt acctgcagaa 420
aaagcgccgg ctaactacgt gccagcagcc gcggtaatac gtagggcgca agcgttatcc 480
ggaattattg ggcgtaaaga gctcgtaggc ggtttgtcgc gtctgctgtg aaatcccgag 540
gctcaacctc gggcctgcag tgggtacggg cagactagag tgcggtaggg gagattggaa 600
ttcctggtgt agcggtggaa tgcgcagata tcaggaggaa caccgatggc gaaggcagat 660
ctctgggccg taactgacgc tgaggagcga aagggtgggg agcaaacagg cttagatacc 720
ctggtagtcc accccgtaaa cgttgggaac tagttgtggg gtccattcca cggattccgt 780
gacgcagcta acgcattaag ttccccgcct ggggagtacg gccgcaaggc taaaactcaa 840
aggaattgac ggggacccgc acaagcggcg gagcatgcgg attaattcga tgcaacgcga 900
agaaccttac caaggcttga catatacgag aacgggccag aaatggtcaa ctctttggac 960
actcgtaaac aggtggtgca tggttgtcgt cagctcgtgt cgtgagatgt tgggttaagt 1020
cccgcaacga gcgcaaccct cgttctatgt tgccagcacg taatggtggg aactcatggg 1080
atactgccgg ggtcaactcg gaggaaggtg gggatgacgt caaatcatca tgccccttat 1140
gtcttgggct tcacgcatgc tacaatggcc ggtacaaagg gctgcaatac cgtgaggtgg 1200
agcgaatccc aaaaagccgg tcccagttcg gattgaggtc tgcaactcga cctcatgaag 1260
tcggagtcgc tagtaatcgc agatcagcaa cgctgcggtg aatacgttcc cgggtcttgt 1320
acacaccgcc cgtcaagtca tgaaagtcgg taacacctga agccggtggc ctaacccttg 1380
tggagggagc cgtcgaa 1397

Claims (6)

1.一株耐盐碱抗病促生菌天牛微杆菌(Microbacterium saperdae)YJJK-2，所述菌株的保藏编号为CGMCC No.17951。
2.权利要求1所述的天牛微杆菌YJJK-2在提高土壤肥力、防治黄瓜枯萎病和促进黄瓜生长方面的应用。
3.一种以权利要求1所述的天牛微杆菌YJJK-2为主要有效成分的活菌制剂。
4.权利要求3所述的活菌制剂的制备方法，其特征是，将天牛微杆菌YJJK-2经过扩大培养后，接种于发酵培养基中，35-40℃培养24-28h，得到天牛微杆菌YJJK-2发酵液，然后向天牛微杆菌YJJK-2发酵液中加入叔丁基对羟基茴香醚、生化黄腐酸粉和卡松，搅拌均匀，获得活菌制剂；
所述发酵培养基为：豆粕粉10-15g、玉米粉30-35g、蛋白胨2-2.5g、酵母浸粉1-1.5g、磷酸二氢钾1.0g、硫酸镁1.0g、硫酸锰0.2g、复合酶制剂0.1g、水1000mL，初始pH7.5；所述复合酶制剂的组成为：按重量计，碱性蛋白酶70％、纤维素酶30％。
5.权利要求3所述的活菌制剂在提高土壤肥力、防治黄瓜枯萎病和促进黄瓜生长方面的应用。
6.一种防治盐碱地黄瓜枯萎病的方法，其特征是，将权利要求3所述的天牛微杆菌YJJK-2活菌制剂加水稀释100～200倍，在黄瓜植株移苗时蘸根或对黄瓜植株浇水时随水冲施。
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