CN114609321A - 一种辣木叶桑叶植物饮料指纹图谱的建立方法及其指纹图谱 - Google Patents
一种辣木叶桑叶植物饮料指纹图谱的建立方法及其指纹图谱 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供一种辣木叶桑叶植物饮料指纹图谱的建立方法及其指纹图谱，具体涉及产品质量检测技术领域。本发明采用高效液相指纹图谱技术结合指纹图谱评价软件，通过对测定波长、流动相洗脱程序、流速、柱温、进样量进行筛选和优化，得出了分离度良好、基线平稳、无负吸收色谱峰，且成分种类丰富、含量高的样品制备方法和指纹图谱色谱条件，经过多批次产品指纹图谱相似度比较分析，得出各指纹图谱相似度均在0.97以上，表明本发明方法能够准确、稳定、可靠地将辣木叶桑叶植物饮料产品中各种成分信息反映在指纹图谱中，能够对产品的质量进行全面、客观、科学地评价和控制，从而保证了产品质量的稳定性及有效性。
Description
【技术领域】
本发明涉及食品质量控制技术领域，具体涉及一种辣木叶桑叶植物饮料指纹图谱的建立方法及其指纹图谱。
【背景技术】
辣木，又称为鼓槌树，原产于印度，被世界誉为“生命之树”、“植物中的钻石”、“素食黄金”的神奇之树，印度传统医学认为辣木叶有护肝、利尿、消炎、止痛、降压、强心、催乳等功效，常用来预防和治疗糖尿病、高血压病、皮肤病、免疫力弱、贫血、坏血病、肥胖症、关节炎、消化器官肿瘤等疾病，是一种富含黄酮及多酚类成分的新资源食品原料，可应用于食品、保健品、化妆品等行业。
辣木叶桑叶植物饮料的商品名为平嵩饮，是我公司针对中老年亚健康人群常见失衡状态，专门研制的功能性食品，该产品符合《社区老年中医健康驿站功能性食品规范》。辣木叶桑叶植物饮料主要由辣木叶、显齿蛇葡萄叶、火麻仁、桑叶、银耳和辅料等原料组成，含有黄酮类、酚类、甾醇类和多糖类等多种有效成分，具有调节代谢、降三高、辅助降尿酸、缓解痛风症状、润肠排便、抗癌等功效，同时能增强营养，提高人体免疫力。辣木叶桑叶植物饮料是由多种主要原料有机搭配制成的功能性食品，其成分较为复杂。
目前，对于辣木叶桑叶植物饮料的质量控制指标，仅按照常规定量检测其中的单一成分，我公司前述研究了辣木药材的指纹图谱，但是应用该方法测定平嵩饮时，得到的指纹图谱化合物信息很少，特征峰响应值很小，不足以全面表征平嵩饮的质量与特点；远不能达到产品质量控制的要求，而且在常规色谱条件下，同时分离定性定量多类成分较为困难。
因此，本发明提供一种辣木叶桑叶植物饮料指纹图谱的建立方法及其指纹图谱，建立一种特征峰数量多、高效、全面的指纹图谱方法及指纹图谱，能对其质量进行全面、准确、快速的检测和监控，实现对辣木叶桑叶植物饮料的高质量品质控制，满足公司规模化生产和客户不断提出高品质产品的需求。
【发明内容】
本发明的发明目的在于：针对背景技术中提出的问题，提供一种辣木叶桑叶植物饮料指纹图谱的建立方法及其指纹图谱，该方法能检测出包括二氢杨梅素、芦丁和槲皮苷在内的共 11个特征峰，并且具有检测时间短(45分钟完成)、基线平稳、噪音干扰少、检测重复性好、色谱峰信息多、灵敏度高的特点。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种辣木叶桑叶植物饮料指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：
a.供试品溶液的制备：量取辣木叶桑叶植物饮料，加入水，振荡摇匀后，用滤膜过滤，得供试品溶液；
b.对照品溶液的制备：分别称取二氢杨梅素、芦丁和槲皮苷对照品，加入有机溶剂使溶解，得对照品溶液；
c.溶液测定：分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪进行测定，得供试品指纹图谱和对照品图谱；所述高效液相色谱仪的色谱条件为：色谱柱固定相以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，以乙腈为流动相A、以体积百分比为0.05-0.15％的无机酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱；所述梯度洗脱按如下程序进行：按体积百分比计：
0～15分钟，流动相A由10％上升至12.5％，流动相B由90％下降至87.5％；
15～23分钟，流动相A由12.5％上升至14％，流动相B由87.5％下降至86％；
23～25分钟，流动相A由14％上升至20％，流动相B由86％下降至80％；
25～28分钟，流动相A由20％上升至21％，流动相B由80％下降至79％；
28～45分钟，流动相A由21％上升至25％，流动相B由79％下降至75％；
d.相似度评价：将按步骤a至c的方法得到多批次试品指纹图谱和对照品图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统分析，得到辣木叶桑叶植物饮料的指纹图谱。
优化的，一种辣木叶桑叶植物饮料指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：
a.供试品溶液的制备：称取辣木叶桑叶植物饮料，加入料液比为1:5～1:15的纯化水，振荡摇匀后，用滤膜过滤，得供试品溶液；
b.对照品溶液的制备：分别称取二氢杨梅素、芦丁和槲皮苷对照品对照品置于容量瓶中，加入料液比为1:200～1:3000的甲醇和/或乙腈使溶解，得对照品溶液；
c.溶液测定：分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪进行测定，得指纹图谱和对照品图谱；所述高效液相色谱仪的色谱条件为：色谱柱固定相以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，以乙腈为流动相A、以0.01-0.1％的磷酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱，流速为0.8～1.2mL/min，检测波长为320～330nm，进样量为5～15μL，柱温为25～35℃。
d.相似度评价：取6-15批次辣木叶桑叶植物饮料按步骤a至c的方法得到多批次试品指纹图谱和对照品图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统分析，得到辣木叶桑叶植物饮料的指纹图谱。
进一步优化的，辣木叶桑叶植物饮料指纹图谱的建立方法，所述色谱条件为：所述流动相B为体积百分比为0.1％的磷酸水溶液，所述检测波长为326nm。
进一步优化的，辣木叶桑叶植物饮料指纹图谱的建立方法，所述色谱条件为：所述色谱柱为Diamonsil 5μm C18柱，所述流速为1mL/min，所述进样量为10μL，所述柱温为30℃。
进一步优化的，一种辣木叶桑叶植物饮料指纹图谱的建立方法，其特征在于，制得指纹图谱后，进行相似度评价，所述相似度评价方法为：将指纹图谱导入相似度评价软件进行相似度评价分析，确定相似度≥0.99，确定出11个共有峰，编号依次为1～11号峰。
进一步优化的，一种辣木叶桑叶植物饮料指纹图谱的建立方法，6号峰为二氢杨梅素、8 号峰为芦丁、11号峰为槲皮苷，以6号峰为参照峰。
进一步优化的，一种辣木叶桑叶植物饮料指纹图谱的建立方法，6号峰为参考峰，1号峰的相对保留时间为0.346～0.349，2号峰的相对保留时间为0.532～0.537，3号峰的相对保留时间为0.576～0.584，4号峰的相对保留时间为0.658～0.667，5号峰的相对保留时间为 0.79～0.791，7号峰的相对保留时间为1.197～1.204，8号峰的相对保留时间为1.341～1.395，9号峰的相对保留时间为1.398～1.436，10号峰的相对保留时间为1.5～1.539，11号峰的相对保留时间为1.556～1.595。
进一步优化的，一种辣木叶桑叶植物饮料指纹图谱的建立方法，以6号峰为参照，1号峰的相对峰面积为0.19～0.203，2号峰的相对峰面积为0.024～0.026，3号峰的相对峰面积为0.044～0.049，4号峰的相对峰面积为0.125～0.134，5号峰的相对峰面积为0.053～0.056，7号峰的相对峰面积为0.095～0.104，8号峰的相对峰面积为0.05～0.053，9号峰的相对峰面积为0.097～0.108，10号峰的相对峰面积为0.031～0.034，11号峰的相对峰面积为0.017～ 0.02。
综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：
1、本发明建立了9个批次辣木叶桑叶植物饮料的指纹图谱，相似度均大于等于0.97，可以更加全面的反应辣木叶桑叶植物饮料所含有的成分信息，更好的表征辣木叶桑叶植物饮料的质量。指纹图谱为了获得丰富的图谱信息，通常通过长时间检测以达到获得更多共有峰、以及提高共有峰的分离度，而本发明获得11个共有峰，且用时仅为45分钟，且各峰之间分离度好。
2、本发明标定了11个共有峰，共有峰中6号峰为二氢杨梅素、8号峰为芦丁、11号峰为槲皮苷。本发明以二氢杨梅素作为参照峰，其在指纹图谱中保留时间适中，与前后色谱峰之间分离度均大于1.5，用于计算相对保留时间和相对峰面积精确度高、重复性好，能够准确反映指纹图谱所包含的成分信息，能够有效保证产品质量的稳定性和有效性。
3、由于指纹图谱不是为了测定某个成分的精确含量，而是要充分反映化学成分的信息，因此，本发明扫描了辣木叶桑叶植物饮料HPLC三维图谱，选择了在320～330nm、最优326nm 波长处进行测定，其出峰较多，反映的信息较完全；各个峰吸收值良好，基线平稳，也避免了近紫外杂质峰较大吸收情况。
4、辣木叶桑叶植物饮料主要由辣木叶、显齿蛇葡萄叶、火麻仁、桑叶、银耳等五味原料和其他辅料经过复杂工艺制成，化学成分较为复杂，单一成分的含量测定往往带有片面性，不能反映产品的整体成分信息。本发明建立的高效液相指纹图谱方法首次实现了对辣木叶桑叶植物饮料全方的质量控制，不是对单一化合物或药材进行鉴别，能更加有效地指导投料，严格规范生产操作，确保临床用药安全、有效。
【附图说明】
图1不同色谱柱色谱叠加图
图2辣木叶桑叶植物饮料HPLC三维图谱
图3不同流动相色谱叠加图
图4流动相不同洗脱梯度色谱叠加图
图5精密度试验色谱叠加图
图6重复性试验色谱叠加图
图7稳定性试验色谱叠加图
图8 为9批产品指纹图谱对比叠加图
图9辣木叶桑叶植物饮料产品共有模式对照图谱
图10二氢杨梅素对照品与指纹图谱比对图
图11芦丁对照品色与指纹图谱比对图
图12槲皮苷对照品与指纹图谱比对图
【具体实施方式】
下面结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“及/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
一、实验材料
器材：岛津LC-10AT高效液相色谱仪、Diamonsil C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)、Platisil ODS色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)、AUW220D型电子天平(日本岛津公司)
试剂：乙腈(色谱纯，美国迪马公司)、甲醇(色谱纯，美国迪马公司)、磷酸(分析纯，成都市科龙化工试剂厂)、对照品二氢杨梅素(北京仪化通标科技有限公司，批号17031501)、芦丁(中国药品生物制品检定所，批号100080-200306)、槲皮苷(中国药品生物制品检定所，批号111538-200504)、一级水。
样品：辣木叶桑叶植物饮料(20191101、20191102、20191103、20200301、20200302、20200303、20200401、20200402、20200403)。
实施例1
供试品溶液的制备：取适量辣木叶桑叶植物饮料过滤，精密量取续滤液1mL加入水振荡摇匀后，至10mL容量瓶中用水定容，用滤膜过滤，例如本实施例中采用0.45μm滤膜滤过，取续滤液适量，备用。
对照品溶液的制备：分别精密称取适量二氢杨梅素、芦丁、槲皮苷对照品于10mL容量瓶中，用甲醇或乙腈定容，本实施例采用甲醇定容，对照品的料液比为1:200～1:3000，即得二氢杨梅素对照品溶液、芦丁对照品溶液、槲皮苷对照品溶液。
实施例2色谱条件的选择
1.色谱柱的选择：
根据同一液相条件进样分析，用Diamonsi C18(4.6mm×250mm，5μm)、PlatisilODS 色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)进行分析，如图1所示，用Diamonsi C18所得色谱图信息量丰富、基线平稳，因此本发明后期实验以Diamonsi C18色谱柱进样分析。
2.检测波长的选择：
检测波长经过DAD检测器检测三维图谱分析，如图2所示，在避免吸收太强而干扰整体峰概貌的条件下，优选出320～330nm下谱图成分种类吸收强，干扰小，且分离度良好、基线平稳，再次分析、经发明人综合研究确定，本发明实验选用326nm波长作为最佳检测波长。
3.流动相系统的选择：
以甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.1％磷酸水、乙腈-0.1％磷酸水为流动相系统，于同一液相条件进样分析，结果显示乙腈-0.1％磷酸水所得色谱图信息量丰富，分离度良好，因此本发明后期实验以乙腈-0.1％磷酸水为流动相，如图3所示。
同时考察了流速的选择，分别采用流速为0.8、1.0、1.2mL/min，结果显示1mL/min流速最佳。
还考察了进样量为8μL、10μL、15μL，结果显示10μL进样量最佳。
在乙腈-0.1％磷酸水为流动相的基础上，进一步考察了磷酸的体积百分比计，分别考察乙腈-0.01％磷酸水、乙腈-0.02％磷酸水、乙腈-0.05％磷酸水、乙腈-0.08％磷酸水、乙腈-0.1％磷酸水、乙腈-0.12％磷酸水，结果显示乙腈-0.1％磷酸水为流动相最佳。
4.柱温的选择：考察25℃、30℃、35℃不同柱温对色谱峰的影响，结果显示不同柱温下各个色谱峰分离度、峰面积和理论塔板数相差不大，因此本发明采用30℃作为柱温。
5.流动相洗脱梯度的优化：
以乙腈(A)-0.1％磷酸水(B)溶液为流动相，按照以下3个实验进行梯度优化
梯度一：0～20min，5％～20％A；20～35min，20％～25％A；35～50min，25％～33％A；50～60 min，33％～41％A。
梯度二：0～20min，5％～20％A；20～45min，20％～25％A；45～60min，25％～35％A。
梯度三：0～20min，10％～20％A；20～35min，20％～25％A；35～50min，25％～33％A。
经过各谱图分析，如图4所示，梯度二的洗脱效果较好，但出峰时间较晚，洗脱时间较长，本发明将对部分峰进行具体优化。
经过不断试验、分析，得到梯度四，如表1所示：
表1辣木叶桑叶植物饮料指纹图谱流动相洗脱条件
梯度四用时仅为45分钟，且各峰之间分离度好，各个峰吸收值良好，基线平稳，也避免了近紫外杂质峰较大吸收情况；做为本方便的最优流动相洗脱程度。
实施例3方法学考察
综合实施例1和实施例2分析，确定最佳色谱条件确定为：采用Diamonsi C18(4.6mm ×250mm，5μm)色谱柱，以以乙腈(A)-0.1％磷酸水(B)溶液为流动相进行梯度洗脱，流速为1mL/min，波长为326nm，进样量为10μL，柱温为30℃；洗脱程序为梯度四，具体见表1，即：
0～15分钟，流动相A由10％上升至12.5％，流动相B由90％下降至87.5％；
15～23分钟，流动相A由12.5％上升至14％，流动相B由87.5％下降至86％；
23～25分钟，流动相A由14％上升至20％，流动相B由86％下降至80％；
25～28分钟，流动相A由20％上升至21％，流动相B由80％下降至79％；
28～45分钟，流动相A由21％上升至25％，流动相B由79％下降至75％；。
1.精密度试验：
取同批次(20191103)辣木叶桑叶植物饮料，按照供试品溶液制备方法制备样品，以最终优化的最佳色谱条件测定色谱图，连续进样6次，考察各共有峰相对保留时间、相对峰面积的RSD。结果相对保留时间的RSD≤1.7％(表2所示)，相对峰面积的RSD≤5.0％(表3所示)，且各色谱图相似度均在0.99以上(表4所示)，表明仪器精密度良好，符合指纹图谱的技术要求，如图5所示。
色谱图相似度采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012版)软件分析，选取分离度较好的色谱峰，6次辣木叶桑叶植物饮料样品HPLC色谱图有11个共有峰。
表2精密度试验各共有峰相对保留时间
表3精密度试验各共有峰相对峰面积
表4精密度图谱相似度评价
2.重复性试验
取同批次(20191103)的辣木叶桑叶植物饮料，按照供试品溶液制备方法制备6次样品，记录各指纹图谱，得到的样品图谱分别命名为C1、C2、C3、C4、C5、C6。考察各共有峰相对保留时间、相对峰面积。结果相对保留时间的RSD≤1.0％(表5所示)，相对峰面积的RSD≤5.0％ (表6所示)，且各色谱图相似度均在0.99以上(表7所示)，表明重现性良好，符合指纹图谱的技术要求，如图6所示。
表5重复性试验各共有峰相对保留时间
表6重复性试验各共有峰相对峰面积
表7重复性图谱相似度评价
3.稳定性试验
取同批次(20191103)辣木叶桑叶植物饮料，按照供试品溶液制备方法制备样品，分别在0、2、4、6、8、24h以最终色谱条件测定色谱图，考察各共有峰相对保留时间、相对峰面积的RSD。结果相对保留时间的RSD≤3.0％(表8所示)，相对峰面积的RSD≤5.0％(表9 所示)，且各色谱图相似度均在0.99以上(表10所示)，表明样品稳定性良好，符合指纹图谱的技术要求，如图7所示。
表8稳定性试验各共有峰相对保留时间
表9稳定性试验各共有峰相对峰面积
表10稳定性图谱相似度评价
实施例4指纹图谱的建立及共有峰的指认
将9批次辣木叶桑叶植物饮料(批次分别为：20191101、20191102、20191103、20200301、 20200302、20200303、20200401、20200402、20200403)按照供试品溶液制备方法制备样品，样品图谱分别得到标记为S1-S9，按最佳色谱条件进行试验，测定指纹图谱，结果见图8。
采用平均数法，时间窗宽度为0.1s，设批次S3为参照图谱，生成辣木叶桑叶植物饮料产品共有模式对照图谱(图9)。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012版)软件分析，选取分离度较好的色谱峰，不同批次辣木叶桑叶植物饮料样品HPLC色谱图有11个共有峰。二氢杨梅素对照品与指纹图谱比对图，如图10；芦丁对照品与指纹图谱比对图，如图11；槲皮苷对照品与指纹图谱比对图，如图12。
各批样品共有峰的相对保留时间与相对峰面积见表11和表12，结果显示各批准样品的相对保留时间的RSD≤1.4％，相对峰面积的RSD≤5.0％，各共有峰稳定，具有指纹图谱特征性，可初步拟定为辣木叶桑叶植物饮料产品的指标成分群。生产的多批次辣木叶桑叶植物饮料 (20191101-20200403)色谱图相似度均在0.97以上，(表13所示)，符合指纹图谱的技术要求。
表11不同批次批辣木叶桑叶植物饮料样品各共有峰相对保留时间
表12不同批次批辣木叶桑叶植物饮料样品各共有峰相对峰面积
表13不同批次批辣木叶桑叶植物饮料样品指纹图谱相似度评价
上述说明是针对本发明较佳可行实施例的详细说明，但实施例并非用以限定本发明的专利申请范围，凡本发明所提示的技术精神下所完成的同等变化或修饰变更，均应属于本发明所涵盖专利范围。
Claims (9)
1.一种辣木叶桑叶植物饮料指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：
a.供试品溶液的制备：量取辣木叶桑叶植物饮料，加入水，振荡摇匀后，用滤膜过滤，得供试品溶液；
b.对照品溶液的制备：分别称取二氢杨梅素、芦丁和槲皮苷对照品，加入有机溶剂使溶解，得对照品溶液；
c.溶液测定：分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪进行测定，得供试品指纹图谱和对照品图谱；所述高效液相色谱仪的色谱条件为：色谱柱固定相以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，以乙腈为流动相A、以体积百分比为0.01-0.1％的无机酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱；所述梯度洗脱按如下程序进行：按体积百分比计：
0～15分钟，流动相A由10％上升至12.5％，流动相B由90％下降至87.5％；
15～23分钟，流动相A由12.5％上升至14％，流动相B由87.5％下降至86％；
23～25分钟，流动相A由14％上升至20％，流动相B由86％下降至80％；
25～28分钟，流动相A由20％上升至21％，流动相B由80％下降至79％；
28～45分钟，流动相A由21％上升至25％，流动相B由79％下降至75％；
d.相似度评价：将按步骤a至c的方法得到多批次试品指纹图谱和对照品图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统分析，得到辣木叶桑叶植物饮料的指纹图谱。
2.根据权利要求1所述的一种辣木叶桑叶植物饮料指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：
a.供试品溶液的制备：称取辣木叶桑叶植物饮料，加入料液比为1:5～1:15的纯化水，振荡摇匀后，用滤膜过滤，得供试品溶液；
b.对照品溶液的制备：分别称取二氢杨梅素、芦丁和槲皮苷对照品对照品置于容量瓶中，加入料液比为1:200～1:3000的甲醇和/或乙腈使溶解，得对照品溶液；
c.溶液测定：分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪进行测定，得指纹图谱和对照品图谱；所述高效液相色谱仪的色谱条件为：色谱柱固定相以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，以乙腈为流动相A、以0.05-0.15％的磷酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱，流速为0.8～1.2mL/min，检测波长为320～330nm，进样量为5～15μL，柱温为25～35℃。
d.相似度评价：取6-15批次辣木叶桑叶植物饮料按步骤a至c的方法得到多批次试品指纹图谱和对照品图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统分析，得到辣木叶桑叶植物饮料的指纹图谱。
3.根据权利要求2所述的一种辣木叶桑叶植物饮料指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述色谱条件为：所述流动相B为体积百分比为0.1％的磷酸水溶液，所述检测波长为326nm。
4.根据权利要求2所述的一种辣木叶桑叶植物饮料指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述色谱条件为：所述色谱柱为Diamonsil 5μm C18柱，所述流速为1mL/min，所述进样量为10μL，所述柱温为30℃。
5.根据权利要求1-4任一项所述的一种辣木叶桑叶植物饮料指纹图谱的建立方法，其特征在于，制得指纹图谱后，进行相似度评价，所述相似度评价方法为：将指纹图谱导入相似度评价软件进行相似度评价分析，确定相似度≥0.99，确定出11个共有峰，编号依次为1～11号峰。
6.根据权利要求5所述的一种辣木叶桑叶植物饮料指纹图谱的建立方法，其特征在于，6号峰为二氢杨梅素、8号峰为芦丁、11号峰为槲皮苷，以6号峰为参照峰。
7.根据权利要求5或6所述的一种辣木叶桑叶植物饮料指纹图谱的建立方法，其特征在于，6号峰为参考峰，1号峰的相对保留时间为0.346～0.349，2号峰的相对保留时间为0.532～0.537，3号峰的相对保留时间为0.576～0.584，4号峰的相对保留时间为0.658～0.667，5号峰的相对保留时间为0.79～0.791，7号峰的相对保留时间为1.197～1.204，8号峰的相对保留时间为1.341～1.395，9号峰的相对保留时间为1.398～1.436，10号峰的相对保留时间为1.5～1.539，11号峰的相对保留时间为1.556～1.595。
8.根据权利要求5所述的一种辣木叶桑叶植物饮料指纹图谱的建立方法，其特征在于，以6号峰为参照，1号峰的相对峰面积为0.19～0.203，2号峰的相对峰面积为0.024～0.026，3号峰的相对峰面积为0.044～0.049，4号峰的相对峰面积为0.125～0.134，5号峰的相对峰面积为0.053～0.056，7号峰的相对峰面积为0.095～0.104，8号峰的相对峰面积为0.05～0.053，9号峰的相对峰面积为0.097～0.108，10号峰的相对峰面积为0.031～0.034，11号峰的相对峰面积为0.017～0.02。
9.一种按权利要求1所述一种辣木叶桑叶植物饮料指纹图谱的建立方法所得到的指纹图谱。
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Denomination of invention: A Method for Establishing a Fingerprint of Spicy Mulberry Leaf Beverage and Its Fingerprint Effective date of registration: 20231220 Granted publication date: 20230822 Pledgee: CITIC Bank Co.,Ltd. Guangzhou Branch Pledgor: GUANGZHOU ZELI PHARMTECH CO.,LTD. Registration number: Y2023980073010 |
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