CN114533772B - 一种元宝枫叶总黄酮的提取及纯化方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种元宝枫叶总黄酮的提取及纯化方法，属于天然产物分离提取技术领域。该提取方法包括以下步骤：将元宝枫叶进行醇提，醇提至少包括：先用88‑92vt％的乙醇对元宝枫叶进行A提取，分离获得第一提取液和第一原料渣；用68‑72vt％的乙醇对第一原料渣进行B提取，分离获得第二提取液和第二原料渣；用48‑52vt％的乙醇对第二原料渣进行C提取，分离获得第三提取液和第三原料渣，合并第一提取液、第二提取液和第三提取液。该方法操作简单、提取率高。相应的纯化方法包括将上述提取方法提取得到的元宝枫叶总黄酮进行重结晶，纯化后的元宝枫叶总黄酮纯度高。

Description

一种元宝枫叶总黄酮的提取及纯化方法

技术领域

本发明涉及天然产物分离提取技术领域，具体而言，涉及一种元宝枫叶总黄酮的提取及纯化方法。

背景技术

目前关于元宝枫的药理活性研究主要集中在元宝枫叶提取物和元宝枫油的活性研究。其中元宝枫叶提取物中主要的活性物质之一是黄酮类化合物，这类化合物具有一定的抗肿瘤、抗氧化、抑制脂肪酸合酶的活性、减肥等作用。

元宝枫叶黄酮类化合物抗肿瘤作用在很多体内体外实验中都已被证明。其主要是通过抑制癌细胞中的信号转导、抑制蛋白激本酶活力、延缓或阻滞癌细胞增殖以及诱发癌细胞调亡等作用机制发挥抗癌作用。元宝枫叶黄酮类提取物是其起抗氧化作用的主要成分之一，其含量变化对其抗氧化能力有明显的关系。元宝枫叶总黄酮不仅具有较强的自由基清除能力，而且还具有耐热、耐光、在酸性介质及氯化钠溶液中也能稳定存在的特点，具有良好的综合抗氧化能力。

但目前元宝枫叶黄酮提取方法普遍存在提取率低、提取工艺流程复杂、成本高、污染严重等缺点。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的之一包括提供一种元宝枫叶总黄酮的提取方法，可解决或避免至少一种上述问题。

本发明的目的之二包括提供一种元宝枫叶总黄酮的纯化方法，可提高提取所得的元宝枫叶总黄酮的纯度。

本申请可这样实现：

第一方面，本申请提供一种元宝枫叶总黄酮的提取方法，包括以下步骤：将元宝枫叶进行醇提。醇提至少包括：先用88-92vt％的乙醇对元宝枫叶进行A提取，分离获得第一提取液和第一原料渣；用68-72vt％的乙醇对第一原料渣进行B提取，分离获得第二提取液和第二原料渣；用48-52vt％的乙醇对第二原料渣进行C提取，分离获得第三提取液和第三原料渣，合并第一提取液、第二提取液和第三提取液。

在可选的实施方式中，A提取、B提取以及C提取均是于超声功率为100-500W、超声频率为30KHz-100KHz的条件下进行。

在可选的实施方式中，A提取、B提取以及C提取的总提取时间为30-60min。

在可选的实施方式中，A提取、B提取以及C提取中的超声均为间隔超声。

在可选的实施方式中，每超声2.5-3.5min间隔1.5-2.5min。

在可选的实施方式中，A提取的料液比为1kg：9.5-10.5L，B提取的料液比为1kg：7.5-8.5L，C提取的料液比为1kg：5.5-6.5L。

在可选的实施方式中，整个醇提过程于30-60℃的条件下进行。

在可选的实施方式中还包括将醇提后的提取液进行脱色。

在可选的实施方式中，脱色采用的脱色剂包括硅藻土。

在可选的实施方式中，脱色剂与提取液的质量比为1-5：100。

在可选的实施方式中，将脱色剂分别对第一提取液、第二提取液和第三提取液进行脱色。

在可选的实施方式中，还包括对脱色后的物质进行酸沉淀。

在可选的实施方式中，酸沉淀是在pH值为2-4以及温度为2-10℃的条件下静置4-8h。

在可选的实施方式中，脱色与酸沉淀之前还具有浓缩步骤。

在可选的实施方式中，浓缩是于30-60℃、0.08-0.09MPa的条件下进行。

在可选的实施方式中，浓缩所得的浓缩液的密度为0.9-0.95g/mL。

在可选的实施方式中还包括将酸沉淀后的液体进行过柱。

在可选的实施方式中，过柱所用的填料为大孔吸附树脂。

在可选的实施方式中，大孔吸附树脂为D101大孔吸附树脂。

在可选的实施方式中，过柱所用的洗脱剂为68-72vt％的乙醇。

在可选的实施方式中，洗脱剂的流速为4-6BV/h。

在可选的实施方式中，还包括在醇提前，将所述元宝枫叶进行干燥和粉碎。

在可选的实施方式中，干燥是于不超过60℃的条件下将所述元宝枫叶的水分控制在不超过12wt％。

在可选的实施方式中，粉碎后取过10-30目筛的筛下物进行醇提。

第二方面，本申请还提供了一种元宝枫叶总黄酮的纯化方法，将由前述实施方式任一项的提取方法提取得到的元宝枫叶总黄酮进行重结晶。

在可选的实施方式中，重结晶包括：将由主溶剂溶解后的元宝枫叶总黄酮与反溶剂混合，于10-30℃的条件下析出结晶物。

主溶剂为无水乙醇，反溶剂为正己烷。

在可选的实施方式中，主溶剂与反溶剂的体积比为1：10-30。

在可选的实施方式中，还包括将析出的结晶物于30-60℃的条件下进行真空干燥。

本申请的有益效果包括：

采用不同浓度的提取溶剂对元宝枫叶进行分次提取，能够使不同类型的黄酮物质均得以充分提取，从而提高了元宝枫叶总黄酮物质的提取率。并且，该方法操作简单、成本较低，基本不会产生污染。相应的纯化方法包括将上述提取方法提取得到的元宝枫叶总黄酮进行重结晶，可获得较高纯度的元宝枫叶总黄酮。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为本申请元宝枫叶总黄酮的提取和纯化步骤的流程图。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

下面对本申请提供的元宝枫叶总黄酮的提取及纯化方法进行具体说明。

发明人经研究提出：目前提取总黄酮的方法大致分为热水提取、碱液提取、甲醇提取、丙酮水浸泡加热提取和乙醇提取五种。其中，热水提取容易导致提取杂质较多，提取物中含量大量的水溶性杂质(如：蛋白质、鞣质、糖类等)，后继过滤、纯化、干燥处理时操作费时且难度大，贮存过程中易腐败变质，提取率和总黄酮的含量较低。碱液提取法提取费用成本比乙醇提取法低，但提取率低。甲醇提取及丙酮水浸泡加热提取这两种方法，提取工艺流程复杂、成本高、污染严重。

值得强调的是，发明人发现目前造成乙醇提取总黄酮提取率也不高的原因可能在于乙醇提取总黄酮的方法均是在单一浓度下进行，而总黄酮的成分较多，在单一浓度提取溶剂溶解度有限。

鉴于此，发明人特提出以下元宝枫叶总黄酮的提取方法，请参照图1，包括以下步骤：将元宝枫叶进行醇提。醇提至少包括：先用88-92vt％的乙醇对元宝枫叶进行A提取，分离获得第一提取液和第一原料渣；用68-72vt％的乙醇对第一原料渣进行B提取，分离获得第二提取液和第二原料渣；用48-52vt％的乙醇对第二原料渣进行C提取，分离获得第三提取液和第三原料渣，合并第一提取液、第二提取液和第三提取液。

可参考地，A提取过程所用的乙醇浓度可以为88vt％、88.5vt％、89vt％、89.5vt％、90vt％、90.5vt％、91vt％、91.5vt％或92vt％等，B提取过程所用的乙醇浓度可以为68vt％、68.5vt％、69vt％、69.5vt％、70vt％、70.5vt％、71vt％、71.5vt％或72vt％等，C提取过程所用的乙醇浓度可以为48vt％、48.5vt％、49vt％、49.5vt％、50vt％、50.5vt％、51vt％、51.5vt％或52vt％等。

值得说明的是，实际操作中，不排除在A提取过程之前、C提取过程之后以及A提取过程至C提取过程之间采用其它浓度的乙醇进行提取。

在优选的实施方式中，元宝枫叶总黄酮提取方法中的醇提仅进行3次醇提，分别为90vt％的乙醇进行A提取、70vt％的乙醇进行B提取、50vt％的乙醇进行C提取。该方式能够在最少成本和最简醇提步骤的条件下将总黄酮提取率最大化。

在可选的实施方式中，A提取、B提取以及C提取均可以在超声条件下进行。相对于热回流提取而言，超声条件下提取具有提取温度低、时间短以及效率高的优势，并且不会对热敏活性物质造成影响。

可参考地，超声功率可以为100-500W(如100W、200W、300W、400W或500W等)，超声频率可以为30KHz-100KHz(如30KHz、50KHz、80KHz或100KHz等)的条件下进行。

上述A提取过程、B提取过程以及C提取过程的总提取时间可以为30-60min(如30min、40min、50min或60min等)。

上述A提取过程、B提取过程以及C提取过程中的超声均为间隔超声。具体可以为：每超声2.5-3.5min间隔1.5-2.5min，例如每超声3min间隔2min。

值得说明的是，本申请中采用间隔超声方式进行作用提取，未采用传统的持续超声方式，主要是因为超声波在媒质中传播时，会产生周期性激波、空化气泡和激烈而快速变化的机械运动，所产生的振动能量会不断被媒质吸收转化为热量而使媒质温度升高。媒质温度升高后会对热敏性的目标物质不稳定发生分解，同时温度升高后会使其它杂质成分浸出，对后续分离、纯化增加难度。

故，间隔超声与持续超声方式相比，具有以下优势:

1、间隔超声能在间隔时间内将超声作用时升高的温度冷却，能把媒质的温度控制在一定温度范围内；

2、提取的药液杂质少，有效成分易于分离、纯化；

3、最重要的是对遇热不稳定、易水解或氧化的有效成分具有保护作用；

4、提取温度低，有利于节约能源、降低成本、延长超声波发生器及设备的使用寿命。

上述超声可采用超声萃取釜进行，超声发生装置可以为它激式超声发生装置以及径向振动柱状换能器。

进一步地，超声过程中还可伴有搅拌，搅拌方式可以为气升式搅拌。

值得说明的是，各提取过程的超声工艺条件均可一致，也可以不同。

在可选的实施方式中，A提取过程的料液比可以为1kg：9.5-10.5L(如1kg：9.5L、1kg：10L或1kg：10.5L等，优选为1kg：10L)，B提取过程的料液比可以为1kg：7.5-8.5L(如1kg：7.5L、1kg：8L或1kg：8.5L等，优选为1kg：8L)，C提取过程的料液比为1kg：5.5-6.5L(如1kg：5.5L、1kg：6L或1kg：6.5L等，优选为1kg：6L)。

可参考地，上述整个醇提过程可以于30-60℃(如30℃、40℃、50℃或60℃等)的条件下进行。

值得进一步说明的是，后一提取过程的原料为前一提取过程所得的固体物质。也即，每次提取后，将所得的提取物质进行过滤，滤渣即作为下一提取过程的原料，每次提取过滤后的滤液合并起来即为最终的提取液。

较佳地，在醇提前，还可将所述元宝枫叶进行干燥和粉碎。

干燥可以于不超过60℃(如30℃、40℃、50℃或60℃)的条件下将元宝枫叶的水分控制在不超过12wt％。以避免温度过高造成有效成分损失或发生变化。水分过高会降低后续的醇提效果。

粉碎可提高原料与乙醇的接触面积，提高醇提效果。具体可以是取粉碎后过10-30目筛的筛下物进行醇提。

进一步地，对超声提取后的提取液进行脱色。

本申请中，脱色采用的脱色剂例如可以包括(为)硅藻土。脱色可在搅拌条件下进行。

可参考地，脱色剂与提取液的质量比可以为1-5：100，如1：100、2：100、3：100、4：100或5：100等。

在一些可选的实施方式中，可以是将脱色剂对A提取过程、B提取过程和C提取过程所得的提取液分别进行脱色，也可以是将脱色剂对由各提取过程分别所得的提取液混合后的总提取液进行脱色。

进一步地，脱色与酸沉淀之前还可具有浓缩步骤。

可参考地，浓缩可以于30-60℃(如30℃、40℃、50℃或60℃等)及0.08-0.09MPa(如0.08MPa、0.085MPa或0.09MPa等)的条件下进行。浓缩至浓缩液的密度为0.9-0.95g/mL(如0.9g/mL、0.92g/mL或0.95g/mL)即可。

进一步地，对脱色后的物质进行酸沉淀。

酸沉淀是用酸溶液将浓缩液的pH值调节至2-4，随后于2-10℃的条件下静置4-8h(如4h、5h、6h、7h或8h等)。

其中，酸溶液可以为盐酸，盐酸的浓度可以为5-8wt％。具体操作时，可以是先将浓缩液搅拌1-2min，随后缓慢加入5-8wt％的盐酸溶液，边加边搅拌，调节pH至2-4，置于2-10℃的条件下或冷库中静置4-8h，过滤所得的沉淀即为总酮粗品。

进一步地，将酸沉淀后的液体进行过柱。

本申请中，过柱所用的填料为大孔吸附树脂，具体可以为D101大孔吸附树脂。过柱所用的洗脱剂可以为68-72vt％(优选70vt％)的乙醇。洗脱剂的流速可以为4-6BV/h(如4BV/h、5BV/h或6BV/h)。

具体的，过柱过程可以参照：将酸沉淀后所得的沉淀加68-72vt％的乙醇溶解，随后过D101大孔吸附树脂柱，用68-72vt％的乙醇洗脱至无黄酮，流速为4-6BV/h，收集洗脱液，洗脱液减压回收乙醇后，经真空减压30-60℃干燥后，得总黄酮提取物。

此外，本申请还提供了一种元宝枫叶总黄酮的纯化方法，将上述提取方法提取得到的元宝枫叶总黄酮进行重结晶。

在可选的实施方式中，重结晶包括：将由主溶剂溶解后的元宝枫叶总黄酮与反溶剂混合，于10-30℃的条件下析出结晶物。

其中，主溶剂可以为无水乙醇，反溶剂可以为正己烷。主溶剂与反溶剂的体积比可以为1：10-30，如1：10、1：15、1：20、1：25或1：30等。

进一步地，还可包括将析出的结晶物于30-60℃的条件下进行真空干燥。

承上，本申请提供的元宝枫叶总黄酮的提取方法和纯化方法操作工艺简单、成本低、提取时间较短，能耗低，与现有的元宝枫叶中总黄酮提取和纯化方法中相比，提取率和提取物的纯度都得到了较大的提高，同时减少了对热敏性活性物质，适用于工业化生产，有利于元宝枫叶的开发利用。

以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。

实施例1

本实施例提供了一种从元宝枫叶中提取总黄酮的提取及纯化方法，按如下步骤进行：

步骤1、元宝枫叶前处理：将元宝枫叶于60℃以下的条件下晒干，拣选、除杂，控制其水分不超过12wt％；

步骤2、粉碎：将拣选后的元宝枫叶粉碎，过筛(10-30目)，得元宝枫叶粉干粉，称取50kg(总黄酮含量4.62wt％，水分9.1％)，备用；

步骤3、提取：将元宝枫叶粉干粉装入超声萃取釜中，第一次提取加入90vt％乙醇，料液比(kg:L)1:10，超声波振荡提取60min(超声波功率：200W；频率：40KHz；提取方式：间隔2min，超声作用一次，超声作用时间3min，总提取时间60min；提取温度：30℃；搅拌方式：气升式搅拌)，过滤，得滤液A；滤渣加入70vt％乙醇进行第二次提取，料液比(kg:L)1:8，超声波振荡提取60min，过滤，得滤液B；滤渣加入50vt％乙醇进行第三次提取，料液比(kg:L)1:6，超声波振荡提取60min，过滤，滤渣用50％乙醇润洗，过滤，合并滤液，得滤液C；三次提取过程超声条件相同；

步骤4、脱色：将滤液A、B、C分别加5wt％的硅藻土，搅拌5分钟，过滤，将三次滤液合并，得合并滤液D；

步骤5、浓缩：滤液在温度为50℃，压力为0.08-0.09Mpa的条件下减压浓缩至密度为0.95g/mL，得浓缩液；

步骤6、加稀酸：先将浓缩液搅拌2min，缓缓加入5wt％的盐酸溶液，边加边搅拌，调节pH值至3，置8℃条件下静置4小时，过滤，得沉淀(总黄酮粗品)；

步骤7、过柱：沉淀加70vt％的乙醇溶解，过D101大孔吸附树脂柱，用70vt％的乙醇洗脱至无黄酮，流速5BV/h，收集洗脱液，洗脱液减压回收乙醇后，经真空减压50℃干燥后，得总黄酮提取物；

步骤8、重结晶：总黄酮提取物用无水乙醇溶解，在搅拌的条件下逐滴加到反溶剂中，主溶剂与反溶剂的体积比为1:20，结晶温度为10℃，反溶剂为正己烷，提取物析出，主溶剂溶液加完后，继续搅拌时间为5min，得到悬浊液，过滤，沉淀，用反溶剂洗涤沉淀三次，沉淀经真空减压50℃干燥后，称重，得高纯度的总黄酮提取物。

本次原料中总黄酮的提取率能达到91.99％，固体提取物的重量为2.21kg，固体提取物中总黄酮含量能达到87.4％。

上述原料中总黄酮的提取率＝[(固体提取物的重量×固体提取物中总黄酮含量)/原料中总黄酮的含量]×100％，下同。

实施例2

本实施例提供了一种从元宝枫叶中提取总黄酮的提取及纯化方法，按如下步骤进行：

步骤1、元宝枫叶前处理：将元宝枫叶于60℃以下的条件下烘干，拣选、除杂，控制其水分不超过12wt％；

步骤2、粉碎：将拣选后的元宝枫叶粉碎，过筛(10-30目)，得元宝枫叶粉干粉，称取50kg(黄酮含量4.62wt％)，备用；

步骤3、提取：将元宝枫叶粉干粉装入超声萃取釜中，第一次提取加入88vt％乙醇，料液比(kg:L)1:9.5，超声波振荡提取60min(超声波功率：100W；频率：30KHz；提取方式：间隔1.5min，超声作用一次，超声作用时间2.5min，总提取时间30min；提取温度：45℃；搅拌方式：气升式搅拌)，过滤，得滤液A；滤渣加入68vt％乙醇进行第二次提取，料液比(kg:L)1:7.5，超声波振荡提取30min，过滤，得滤液B；滤渣加入48vt％乙醇进行第三次提取，料液比(kg:L)1:5.5，超声波振荡提取30min，过滤，滤渣用48％乙醇润洗，过滤，合并滤液，得滤液C；三次提取过程超声条件相同；

步骤4、脱色：将滤液A、B、C分别加1wt％的硅藻土，搅拌5分钟，过滤，将三次滤液合并，得合并滤液D；

步骤5、浓缩：滤液在温度为30℃，压力为0.08-0.09Mpa的条件下减压浓缩至密度为0.90g/mL，得浓缩液；

步骤6、加稀酸：先将浓缩液搅拌1min，缓缓加入6.5wt％的盐酸溶液，边加边搅拌，调节pH值至2，置5℃条件下静置8小时，过滤，得沉淀(总黄酮粗品)；

步骤7、过柱：沉淀加70％的乙醇溶解，过D101大孔吸附树脂柱，用70％的乙醇洗脱至无黄酮，流速4BV/h，收集洗脱液，洗脱液减压回收乙醇后，经真空减压30℃干燥后，得总黄酮提取物；

步骤8、重结晶：总黄酮提取物用无水乙醇溶解，在搅拌的条件下逐滴加到反溶剂中，主溶剂与反溶剂的体积比为1:10，结晶温度为20℃，反溶剂为正己烷，提取物析出，主溶剂溶液加完后，继续搅拌时间为5min，得到悬浊液，过滤，沉淀，用反溶剂洗涤沉淀三次，沉淀经真空减压30℃干燥后，称重，得高纯度的总黄酮提取物。

本次原料中总黄酮的提取率能达到83.41％，固体提取物的重量为2.02kg，固体提取物中总黄酮含量能达到86.7％。

实施例3

本实施例提供了一种从元宝枫叶中提取总黄酮的提取及纯化方法，按如下步骤进行：

步骤1、元宝枫叶前处理：将元宝枫叶于60℃以下的条件下晒干，拣选、除杂，控制其水分不超过12wt％；

步骤2、粉碎：将拣选后的元宝枫叶粉碎，过筛(10-30目)，得元宝枫叶粉干粉，称取50kg(黄酮含量4.62wt％)，备用；

步骤3、提取：将元宝枫叶粉干粉装入超声萃取釜中，第一次提取加入92vt％乙醇，料液比(kg:L)1:10.5，超声波振荡提取60min(超声波功率：500W；频率：100KHz；提取方式：间隔2.5min，超声作用一次，超声作用时间3.5min，总提取时间45min；提取温度：60℃；搅拌方式：气升式搅拌)，过滤，得滤液A；滤渣加入72vt％乙醇进行第二次提取，料液比(kg:L)1:8.5，超声波振荡提取45min，过滤，得滤液B；滤渣加入52vt％乙醇进行第三次提取，料液比(kg:L)1:6.5，超声波振荡提取45min，过滤，滤渣用52％乙醇润洗，过滤，合并滤液，得滤液C；

步骤4、脱色：将滤液A、B、C合并后加入10wt％的硅藻土，搅拌5分钟，过滤，得到滤液D；

步骤5、浓缩：滤液在温度为60℃，压力为0.08-0.09Mpa的条件下减压浓缩至密度为0.92g/mL，得浓缩液；

步骤6、加稀酸：先将浓缩液搅拌1.5min，缓缓加入8wt％的盐酸溶液，边加边搅拌，调节pH值至4，置10℃条件下静置6小时，过滤，得沉淀(总黄酮粗品)；

步骤7、过柱：沉淀加70％的乙醇溶解，过D101大孔吸附树脂柱，用70％的乙醇洗脱至无黄酮，流速6BV/h，收集洗脱液，洗脱液减压回收乙醇后，经真空减压60℃干燥后，得总黄酮提取物；

步骤8、重结晶：总黄酮提取物用无水乙醇溶解，在搅拌的条件下逐滴加到反溶剂中，主溶剂与反溶剂的体积比为1:30，结晶温度为30℃，反溶剂为正己烷，提取物析出，主溶剂溶液加完后，继续搅拌时间为5min，得到悬浊液，过滤，沉淀，用反溶剂洗涤沉淀三次，沉淀经真空减压60℃干燥后，称重，得高纯度的总黄酮提取物。

本次原料中总黄酮的提取率能达到81.53％，固体提取物的重量为1.97Kg，固体提取物中总黄酮含量能达到86.9％。

实施例4

本实施例与实施例1的区别在于：超声时间30分钟，温度30℃，超声功率500W，频率100KHz。

本次原料中总黄酮的提取率能达到79.41％，固体提取物的重量为1.91kg，固体提取物中总黄酮含量能达到87.3％。

实施例5

本实施例与实施例1的区别在于：超声时间60分钟，温度60℃，超声功率500W，频率100KHz。

本次原料中总黄酮的提取率能达到80.10％，固体提取物的重量为1.94kg，固体提取物中总黄酮含量能达到86.7％。

实施例6

本实施例与实施例1的区别在于：酸沉调pH＝2，放置温度2℃，放置时间4小时。

本次原料中总黄酮的提取率能达到79.64％，固体提取物的重量为1.92kg，固体提取物中总黄酮含量能达到87.1％。

实施例7

本实施例与实施例1的区别在于：酸沉调pH＝4，放置温度10℃，放置时间8小时。

本次原料中总黄酮的提取率能达到81.11％，固体提取物的重量为1.96kg，固体提取物中总黄酮含量能达到86.9％。

实施例8

本实施例与实施例1的区别在于：主溶剂与反溶剂的体积比1:10。

本次原料中总黄酮的提取率能达到82.13％，固体提取物的重量为1.98kg，固体提取物中总黄酮含量能达到87.1％。

实施例9

本实施例与实施例1的区别在于：主溶剂与反溶剂的体积比1:30。

本次原料中总黄酮的提取率能达到81.90％，固体提取物的重量为1.97kg，固体提取物中总黄酮含量能达到87.3％。

对比例1

本对比例提供了一种从元宝枫叶中提取总黄酮的提取及纯化方法，按如下步骤进行：

步骤1、元宝枫叶前处理：将元宝枫叶于60℃以下的条件下晒干，拣选、除杂，控制其水分不超过12wt％；

步骤2、粉碎：将拣选后的元宝枫叶粉碎，过筛(10-30目)，得元宝枫叶粉干粉，称取50kg(黄酮含量4.62wt％)，备用；

步骤3、提取：将元宝枫叶粉干粉装入超声萃取釜中，第一次提取加入50vt％乙醇，料液比(kg:L)1:10，超声波振荡提取60min(超声波功率：100W；频率：33KHz；提取方式：间隔2min，超声作用一次，超声作用时间3min，总提取时间60min；提取温度：30℃；搅拌方式：气升式搅拌)，过滤，得滤液A；滤渣加入50vt％乙醇进行第二次提取，料液比(kg:L)1:8，超声波振荡提取60min，过滤，得滤液B；滤渣加入50vt％乙醇进行第三次提取,料液比(kg:L)1:6，超声波振荡提取60min，过滤，滤渣用50％乙醇润洗，过滤，合并滤液，得滤液C；

步骤4、脱色：将滤液A、B、C分别加2wt％的硅藻土，搅拌5分钟，过滤，将三次滤液合并，得合并滤液D；

步骤5、浓缩：滤液在温度为50℃，压力为0.08-0.09Mpa的条件下减压浓缩至密度为0.95g/mL，得浓缩液；

步骤6、加稀酸：先将浓缩液搅拌2min，缓缓加入5wt％的盐酸溶液，边加边搅拌，调节pH值至3，置于8℃条件下静置4小时，过滤，得沉淀(总黄酮粗品)；

步骤7、过柱：沉淀加70vt％的乙醇溶解，过D101大孔吸附树脂柱，用70vt％的乙醇洗脱至无黄酮，流速5BV/h，收集洗脱液，洗脱液减压回收乙醇后，经真空减压50℃干燥后，得总黄酮提取物；

步骤8、重结晶：总黄酮提取物用无水乙醇溶解，在搅拌的条件下逐滴加到反溶剂中，主溶剂与反溶剂的体积比为1:10，结晶温度为30℃，反溶剂为正己烷，提取物析出，主溶剂溶液加完后，继续搅拌时间为5min，得到悬浊液，过滤，沉淀，用反溶剂洗涤沉淀三次，沉淀经真空减压50℃干燥后，称重，得高纯度的总黄酮提取物。

本次原料中总黄酮的提取率为70.66％，固体提取物的重量为1.76kg，固体提取物中总黄酮含量能达到84.3％。

对比例2

本对比例提供了一种从元宝枫叶中提取总黄酮的提取及纯化方法，按如下步骤进行：

步骤1、元宝枫叶前处理：将元宝枫叶于60℃以下的条件下晒干，拣选、除杂，控制其水分不超过12wt％；

步骤2、粉碎：将拣选后的元宝枫叶粉碎，过筛(10-30目)，得元宝枫叶粉干粉，称取50kg(黄酮含量4.62wt％)，备用；

步骤3、提取：将元宝枫叶粉干粉装入超声萃取釜中，第一次提取加入70vt％乙醇，料液比(kg:L)1:10，超声波振荡提取30min(超声波功率：200W；频率：60KHz；提取方式：间隔2min，超声作用一次，超声作用时间3min，总提取时间30min；提取温度：30℃；搅拌方式：气升式搅拌)，过滤，得滤液A；滤渣加入70vt％乙醇进行第二次提取，料液比(kg:L)1:8，超声波振荡提取30min，过滤，得滤液B；滤渣加入70vt％乙醇进行第三次提取，料液比(kg:L)1:6，超声波振荡提取30min，过滤，滤渣用70％乙醇润洗，过滤，合并滤液，得滤液C；

步骤4、脱色：将滤液A、B、C分别加2wt％的硅藻土，搅拌5分钟，过滤，将三次滤液合并，得合并滤液D；

步骤5、浓缩：滤液在温度为50℃，压力为0.08-0.09Mpa的条件下减压浓缩至密度为0.95g/mL，得浓缩液；

步骤6、加稀酸：先将浓缩液搅拌2min，缓缓加入8wt％的盐酸溶液，边加边搅拌，调节pH值至2.5，置于8℃条件下静置4小时，过滤，得沉淀(总黄酮粗品)；

步骤7、过柱：沉淀加70％的乙醇溶解，过D101大孔吸附树脂柱，用70％的乙醇洗脱至无黄酮，流速5BV/h，收集洗脱液，洗脱液减压回收乙醇后，经真空减压50℃干燥后，得总黄酮提取物；

步骤8、重结晶：总黄酮提取物用无水乙醇溶解，在搅拌的条件下逐滴加到反溶剂中，主溶剂与反溶剂的体积比为1:10，结晶温度为30℃，反溶剂为正己烷，提取物析出，主溶剂溶液加完后，继续搅拌时间为5min，得到悬浊液，过滤，沉淀，用反溶剂洗涤沉淀三次，沉淀经真空减压60℃干燥后，称重，得高纯度的总黄酮提取物。

本次原料中总黄酮的提取率为72.54％，固体提取物的重量为1.79kg，固体提取物中总黄酮含量能达到85.1％。

对比例3：

本对比例提供了一种从元宝枫叶中提取总黄酮的提取及纯化方法，按如下步骤进行：

步骤1、元宝枫叶前处理：将元宝枫叶于60℃以下的条件下烘干或晒干，拣选、除杂，控制其水分不超过12wt％；

步骤2、粉碎：将拣选后的元宝枫叶粉碎，过筛(10～30目)，得元宝枫叶粉干粉，称取50.00kg(黄酮含量4.62wt％)，备用；

步骤3、提取：将元宝枫叶粉干粉装入超声萃取釜中，第一次提取加入90vt％乙醇，料液比(kg:L)1:10，超声波振荡提取60min(超声波功率：200W；频率：40KHz；提取方式：间隔2min，超声作用一次，超声作用时间3min，总提取时间60min；提取温度：30℃；搅拌方式：气升式搅拌)，过滤，得滤液A；滤渣加入90vt％乙醇进行第二次提取，料液比(kg:L)1:8，超声波振荡提取60min，过滤，得滤液B；滤渣加入90vt％乙醇进行第三次提取，料液比(kg:L)1:6，超声波振荡提取60min，过滤，滤渣用90％乙醇润洗，过滤，合并滤液，得滤液C；三次提取过程超声条件相同；

步骤4、脱色：将滤液A、B、C分别加5wt％的硅藻土，搅拌5分钟，过滤，将三次滤液合并，得合并滤液D；

步骤5、浓缩：滤液在温度为50℃，压力为0.08～0.09Mpa的条件下减压浓缩至密度为0.95g/mL，得浓缩液；

步骤6、加稀酸：先将浓缩液搅拌2min，缓缓加入5wt％的盐酸溶液，边加边搅拌，调节pH值至3，置8℃条件下静置4小时，过滤，得沉淀(总黄酮粗品)；

步骤7、过柱：沉淀加80％的乙醇溶，过D101大孔吸附树脂柱，用80vt％的乙醇洗脱至无黄酮，流速5BV/h，收集洗脱液，洗脱液减压回收乙醇后，经真空减压50℃干燥后，得总黄酮提取物；

步骤8、重结晶：总黄酮提取物用无水乙醇溶解，在搅拌的条件下逐滴加到反溶剂中，主溶剂与反溶剂的体积比为1:20，结晶温度为10℃，反溶剂为正己烷，提取物析出，主溶剂溶液加完后，继续搅拌时间为5min，得到悬浊液，过滤，沉淀，用反溶剂洗涤沉淀三次，沉淀经真空减压50℃干燥后，称重，得高纯度的总黄酮提取物。

本次原料中总黄酮的提取率为74.45％，固体提取物的重量为1.82kg，固体提取物中总黄酮含量能达到85.9％。

对比例4

本对比例与实施例1的区别在于：醇提过程不含第三次提取过程，只进行第一次提取和第二次提取。

本次原料中总黄酮的提取率为75.03％，固体提取物的重量为1.86kg，固体提取物中总黄酮含量能达到84.7％。

对比例5

本对比例与实施例1的区别在于：醇提过程不含第二次提取过程，在第一次提取完后直接进行第三次提取的步骤。

本次原料中总黄酮的提取率为68.24％，固体提取物的重量为1.71kg，固体提取物中总黄酮含量能达到83.8％。

对比例6

本对比例与实施例1的区别在于：醇提过程不含第一次提取过程，直接进行第二次提取和第三次提取的步骤。

本次原料中总黄酮的提取率为66.89％，固体提取物的重量为1.67kg，固体提取物中总黄酮含量能达到84.1％。

对比例7

本对比例与实施例1的区别在于：醇提过程中无超声工艺。

本次原料中总黄酮的提取率能达到71.75％，固体提取物的重量为1.76kg，固体提取物中总黄酮含量仅能达到85.6％。

对比例8

本对比例与实施例1的区别在于：醇提过程中超声为持续超声。

本次原料中总黄酮的提取率能达到70.77％，固体提取物的重量为1.72kg，固体提取物中总黄酮含量能达到86.4％。

综上所述，本申请选用提取溶剂时，考虑总黄酮的成分比较多，成分在不同浓度的乙醇中溶解度不同，采用不同的乙醇浓度分次提取，可使提取效率更高。采用超声波提取方法，其提取温度低、时间短、效率高，不会对热敏活性物质造成影响。在纯化时采用稀酸调pH值至2-4、过大孔吸附树脂和重结晶方法进行纯化，使其得到的总黄酮化合物纯度更高。本申请与以往方法中相比，使元宝枫叶总黄酮的提取率和纯度都得到了较大的提高。此外，本申请还具有操作工艺简单、成本低、能源消耗少，提取时间较短的优势，适用于工业化生产。

以上仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种元宝枫叶总黄酮的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：将元宝枫叶进行醇提；

醇提至少包括：先用88-92vt％的乙醇对所述元宝枫叶进行A提取，分离获得第一提取液和第一原料渣；用68-72vt％的乙醇对所述第一原料渣进行B提取，分离获得第二提取液和第二原料渣；用48-52vt％的乙醇对所述第二原料渣进行C提取，分离获得第三提取液和第三原料渣，合并所述第一提取液、所述第二提取液和所述第三提取液；

所述A提取、所述B提取以及所述C提取均是于超声功率为100-500W、超声频率为30KHz-100KHz的条件下进行；

所述A提取、所述B提取以及所述C提取的总提取时间为30-60min；所述A提取、所述B提取以及所述C提取中的超声均为间隔超声；每超声2.5-3.5min间隔1.5-2.5min；

还包括：将醇提后的提取液进行脱色，对脱色后的物质进行酸沉淀，将酸沉淀后的液体进行过柱，将过柱后得到的元宝枫叶总黄酮进行重结晶；

脱色采用的脱色剂包括硅藻土；所述脱色剂与所述提取液的质量比为1-5：100；

酸沉淀是在pH值为2-4以及温度为2-10℃的条件下静置4-8h；

过柱所用的填料为大孔吸附树脂所述大孔吸附树脂为D101大孔吸附树脂；过柱所用的洗脱剂为68-72vt％的乙醇；所述洗脱剂的流速为4-6BV/h；

重结晶包括：将由主溶剂溶解后的所述元宝枫叶总黄酮与反溶剂混合，于10-30℃的条件下析出结晶物；所述主溶剂为无水乙醇，所述反溶剂为正己烷；所述主溶剂与所述反溶剂的体积比为1：10-30。

2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述A提取的料液比为1kg：9.5-10.5L，所述B提取的料液比为1kg：7.5-8.5L，所述C提取的料液比为1kg：5.5-6.5L。

3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，整个醇提过程于30-60℃的条件下进行。

4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，将所述脱色剂分别对所述第一提取液、所述第二提取液和所述第三提取液进行脱色。

5.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，脱色与酸沉淀之前还具有浓缩步骤。

6.根据权利要求5所述的提取方法，其特征在于，浓缩是于30-60℃、0.08-0.09MPa的条件下进行。

7.根据权利要求6所述的提取方法，其特征在于，浓缩所得的浓缩液的密度为0.9-0.95g/mL。

8.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，还包括在醇提前，将所述元宝枫叶进行干燥和粉碎。

9.根据权利要求8所述的提取方法，其特征在于，干燥是于不超过60℃的条件下将所述元宝枫叶的水分控制在不超过12wt％。

10.根据权利要求8所述的提取方法，其特征在于，粉碎后取过10-30目筛的筛下物进行醇提。

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