CN114522193A - 一种治疗甲状腺肿大的蒙药组合物、制备方法和质控方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于蒙药技术领域，涉及一种治疗甲状腺肿大的蒙药组合物及其制备方法和质控方法，由以下重量份的原料组成，夏枯草球1份、沙棘1份、红景天1份、金腰草1份、大花龙胆1份、制草乌1份、板蓝根1份、紫贝灰1份组成，该蒙药组合物用于治疗甲状腺肿大。该蒙药组合物无毒副作用，治疗效果好，标本兼治，不易复发，费用低廉，能够提高甲状腺功能，特别是对严重的甲状腺肿大的症状具有很好的疗效。

Description

一种治疗甲状腺肿大的蒙药组合物、制备方法和质控方法

技术领域

本发明属于蒙药技术领域，涉及一种治疗甲状腺肿大的蒙药组合物及其制备方法和质控方法。

背景技术

甲状腺是人体最大的内分泌腺体，位于甲状软骨下紧贴在气管第三，四软骨环前面，由两侧叶和峡部组成，平均重量成大约20-25g，女性略大略重。甲状腺后面有甲状旁腺4枚及喉返神经，血液供应有上下左右四条动脉，所以甲状腺血供较丰富，腺体受颈交感神经节的交感神经和迷走神经支配。甲状腺的主要功能是合成甲状腺激素，调节机体代谢。

单纯性甲状腺肿俗称“粗脖子”、“大脖子”或“瘻脖子”，是以缺碘为主的代偿性甲状腺肿大，青年女性多见，一般伴有甲状腺功能异常。造成甲状腺肿大的因素主要有先天性甲状腺激素合成缺陷、碘缺乏和高碘、自身免疫因素以及环境污染。传统医学认为，单纯性甲状腺肿大多由饮食不洁，损伤脾胃气机，肝气伐胃而产生痰瘀，或由于先天不足，冲任失调，或由情志不遂，情志伤肝，气机不畅，以致气郁生痰，结于咽喉而成为单纯性甲状腺肿大。蒙医学认为甲状腺肿大主要是水土不服而致，它归属于蒙医学“巴胡病”范畴，是蒙医理论中的“巴达干赫依”聚集所引起的一种疾病，故治宜软坚散结，疏肝解郁，利湿祛痰消核，清热解毒，活血祛瘀，健脾开胃才能有效治愈单纯性甲状腺肿大。

目前对该病的治疗方法一般采用手术治疗，然而手术后往往会出现甲状腺功能的衰退，甚至会留下永久的疤痕。临床医生常用左旋甲状腺素治疗甲状腺肿，但疗效慢、疗程长,效果不明显，复发率也高。

发明内容

针对现有技术中的问题，本发明的目的是要提供一种治疗甲状腺肿大的蒙药组合物及其制备方法和质控方法，通过该方法制备的蒙药组合物安全可靠，无毒副作用，见效快，价格低廉,根据蒙医理论复方配伍规律，对甲状腺肿大具有很好的疗效，对甲状腺功能减退具有很好的改善作用。

本发明的具体技术方案如下：

一种蒙药组合物，由以下重量份的原料组成，夏枯草球1份、沙棘1份、红景天1份、金腰草1份、大花龙胆1份、制草乌1份、板蓝根1份、紫贝灰1 份组成，该蒙药组合物用于治疗甲状腺肿大。

可选择，夏枯草球50～100g、沙棘50～100g、红景天50～100g、金腰草 50～100g、大花龙胆50～100g、制草乌50～100g、板蓝根50～100g、紫贝灰 50～100g。优选择，夏枯草球80g、沙棘80g、红景天80g、金腰草80g、大花龙胆80g、制草乌80g、板蓝根80g、紫贝灰80g。

可选择，该蒙药组合物能够制备成蒙药片剂、颗粒剂、丸剂、散剂或者汤剂。

本发明还提供一种蒙药组合物的制备方法，包括如下步骤：

1)按等重量份称取夏枯草球、沙棘、红景天、金腰草、大花龙胆、制草乌、板蓝根、紫贝灰原药材，筛分除杂，较大的原料切成黄豆大小的小块,混合均匀后在紫外线灭菌灯下灭菌处理1小时，然后研磨成粉，过500-800目筛分后，得蒙药粉末；

2)将步骤1)得到的蒙药粉末制成片剂、颗粒剂、丸剂、散剂或者汤剂。

本发明还提供一种蒙药组合物的质量监控方法，包括如下步骤：

1)采用显微鉴别法对蒙药组合物中的沙棘、制草乌、大花龙胆进行了显微鉴别；

2)采用薄层色谱法分别对蒙药组合物中的夏枯草球、板蓝根、红景天进行鉴别；

3)采用理化鉴别法对蒙药组合物中的金腰草进行鉴别；

4)采用高效液相色谱法对蒙药组合物中的沙棘所含的异鼠李素和总黄酮的含量进行鉴别。

可选择，在步骤1)的显微鉴别过程中，取蒙药组合物供试品少许(需要明确克数范围)，研细，制备沙棘、制草乌、大花龙胆水合氯醛装片，加热，置显微镜下观察。

可选择，在步骤2)的薄层鉴别夏枯草球的过程中，

1)取蒙药组合物供试品5-12g，研细，加稀盐酸8ml、乙醚20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液；

2)取以相同工艺制备的模拟样品和阴性对照(缺夏枯草球)各5-12g，加稀盐酸8ml、乙醚20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇lml 使溶解，作为模拟样品溶液和阴性对照溶液；

3)取单药0.5-1.5g，加稀盐酸1ml、乙醚20ml，加热回流30-60分钟，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇lml使溶解，作为单药溶液；

4)取迷迭香酸对照品，加乙醇制成每lml含0.lmg的溶液，作为对照品溶液；

5)按照薄层色谱法试验，吸取上述阴性对照溶液5μl、对照药材10μl、单药20μl、模拟样品溶液20μl、供试品溶液20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲酸(浓度比为15:3:3.5:0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，置于紫外灯下检视。

可选择，在步骤2)的薄层鉴别红景天的过程中，

1)取权利要求1所述的药物组合物供试品4-10g、以相同工艺制备的模拟样品和阴性对照(缺红景天)各4-10g、单药0.4-1.0g，分别加70％甲醇10ml，超声处理30-60分钟，滤过，滤液作为供试品溶液、模拟样品溶液和阴性对照溶液；

2)另取红景天苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；

3)按照薄层色谱法试验，吸取上述阴性对照溶液10μl，对照品溶液10μl，单药溶液10μl，模拟、供试品溶液20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-丙酮-水(体积比为6：3：1：1)的下层溶液为展开剂，展开，展距18cm，取出，晾干，置碘蒸气中熏。

可选择，在步骤2)中的薄层鉴别板蓝根的过程中，

1)取根据权利要求1所述的蒙药组合物供试品4-10g、以相同工艺制备的模拟样品和阴性对照(缺板蓝根)各4-10g、单药0.5-1.2g，加80％甲醇20ml，超声处理30-60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液、模拟样品溶液和阴性对照溶液；

2)在表告依春对照品，加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，作为对照品的溶液；

3)按照薄层色谱法试验，吸取上述阴性对照溶液10μl，对照品溶液10μl，单药溶液10μl，模拟、供试品溶液20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚

-乙酸乙酯(体积比为1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视。

本发明的有益效果：该蒙药组合物无毒副作用，治疗效果好，标本兼治，不易复发，费用低廉，能够提高甲状腺功能，特别是对严重的甲状腺肿大的症状具有很好的疗效。

附图说明

图1-1示出单药沙棘表皮鳞毛的显微照片。

图1-2示出蒙药组合物供试品中沙棘表皮鳞毛的显微照片。

图2-1示出了单药草乌石细胞的显微照片。

图2-2示出了蒙药组合物供试品中草乌石细胞的显微照片。

图3-1示出了单药大花龙胆螺纹导管的显微照片。

图3-2示出了蒙药组合物供试品中大花龙胆螺纹导管的显微照片。

图4-1示出了蒙药组合物供试品中夏枯草球的薄层色谱照片(其中，1是阴性对照(缺夏枯草球)，2是迷迭香酸对照品，3是夏枯草单药，4是模拟样品， 5是供试品(批号：438SW150828)，6是供试品(批号：438SW150604)) (考察温度25℃、考察相对湿度36％)。

图4-2示出了蒙药组合物供试品中夏枯草球的薄层色谱照片(其中，1是阴性对照(缺夏枯草球)，2是迷迭香酸对照品，3是夏枯草单药，4是模拟样品， 5是供试品(批号：438SW150828)，6是供试品(批号：438SW150604)) (考察温度6℃、考察相对湿度20％)。

图5-1示出了蒙药组合物供试品中红景天的薄层色谱照片(其中，1是阴性对照(缺红景天)，2是红景天苷对照品，3是红景天单药，4.是模拟样品，5 是供试品(批号：438SW150828)，6是供试品(批号：438SW150604))(考察温度25℃、考察相对湿度36％)。

图5-2示出了蒙药组合物供试品中红景天的薄层色谱照片(其中，1是阴性对照(缺红景天)，2是红景天苷对照品，3是红景天单药，4.是模拟样品，5 是供试品(批号：438SW150828)，6是供试品(批号：438SW150604))(考察温度6℃、相对湿度20％)。

图6-1示出了蒙药组合物供试品中板蓝根的薄层色谱照片(其中，1是阴性对照(缺板蓝根)，2是表告依春对照品，3是板蓝根单药，4是模拟样品，5 是供试品(批号：438SW150828)，6是供试品(批号：438SW150604))， (考察温度25℃、相对湿度36％)

图6-2示出了蒙药组合物供试品中板蓝根的薄层色谱照片(其中，1是阴性对照(缺板蓝根)，2是表告依春对照品，3是板蓝根单药，4是模拟样品，5 是供试品(批号：438SW150828)，6是供试品(批号：438SW150604))， (考察温度6℃、相对湿度20％)。

图7示出了蒙药组合物对甲状腺肿大大鼠甲状腺病理学变化的影响结果。

图8示出了蒙药组合物对甲状腺肿大大鼠甲状腺功能的影响结果。

图9示出了蒙药组合物对甲状腺肿大鼠甲状腺功能的影响结果。

图10示出了蒙药组合物对大鼠甲状腺组织中PCNA基因、蛋白的影响结果。

具体实施方式

下面对本发明的具体实施例进行详细描述。

一种治疗甲状腺肿大的蒙药组合物由以下重量份的原料组成：夏枯草球80g、沙棘80g、红景天80g、金腰草80g、大花龙胆80g、制草乌80g、板蓝根80g、紫贝灰80g组成。

该蒙药组合物可以制备成蒙药片剂、颗粒、蒙药丸等多种形式，并不局限为汤剂和散剂，适用于多种治疗方式和用药方式。

本发明中各类药材的药理如下：

1)夏枯草为唇形科夏枯草属多年生草本植物夏枯草Prunella vulgaris L.的干燥果穗，“夏枯草”之名始载汉代《神农本草经》，历代本草著作多有记载。其味辛、苦，性寒，归肝、胆经，具有清肝明目、消肿散结等功效，常用于治疗甲状腺肿大、乳腺增生、高血压、淋巴瘤等病症。

2)沙棘Hippophae rhanmoides L.为胡颓子科Elaeagnaceae酸刺属的灌木或小乔木。其味酸，热，干而润。它具有丰富的药理功能,抗心肌缺血、抗心律失常、抗血栓形成、降血糖、提高免疫、抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抗过敏、抑菌、增强免疫力等药理作用。

3)红景天是景天科(Crassulaceae)红景天属(Rhodiola L.)植物，为多年生草本或亚灌木，常具有肉质匍匐的根状茎，是珍稀的药用植物。红景天性平、清热、滋补元气、利气养血、能补肾、主周身乏力、活血化瘀、抗氧化、抗疲劳及提高免疫力等。

4)大花龙胆是龙胆科植物大花龙胆Gentiana czechenyii Kantiz的干燥花，现只对其生药学鉴别进行了部分研究。

5)板蓝根为十字花科菘蓝属植物菘蓝Isantis indigotica Fort.的干燥根，味苦性寒，归心、肝、胃经。具有清热、解毒、凉血、利咽之功效。临床上常用于治疗瘟毒发斑、高热头痛、大头瘟疫、烂喉丹疹、疼腮、喉痹、疮肿、水痘、麻疹、肝炎、流行性感冒等病症。

6)紫贝灰为宝贝科动物阿文绶贝Mauritia arabica(Linnaeus)的贝壳。我国分布于福建、台湾、广东、海南、广西及南沙群岛。具有镇惊安神，平肝明目之功效。用于小儿高热抽搐，头晕目眩，惊悸心烦，失眠多梦，目赤肿痛，热毒目翳。灰具有燥湿、破穿功效。

7)金腰草为虎耳草科植物裸茎金腰子的全草，是一种产于青藏高原的中草药,在藏医药中已经有多年的使用和研究，对多种肿瘤细胞有抑制作用。

本发明的蒙药组合物的制备方法具体包括以下步骤：按上述比例混合原药材，筛分除杂，较大的原料切成黄豆大小的小块,混合均匀后在紫外线灭菌灯下灭菌处理1小时，然后研磨成粉，过500-800目筛分后，得蒙药粉末。

本发明的蒙药组合物的质量监控方法，包括如下步骤：

1)采用显微鉴别法对蒙药组合物中的沙棘、制草乌、大花龙胆进行了显微鉴别；

2)采用薄层色谱法分别对蒙药组合物中的夏枯草球、板蓝根、红景天进行鉴别；

3)采用理化鉴别法对蒙药组合物中的金腰草进行鉴别；

4)采用高效液相色谱法对蒙药组合物中的沙棘所含的异鼠李素和总黄酮的含量进行鉴别。

具体鉴别细节如下：

1.采用的仪器：

KQ-500DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，电热鼓风干燥器(上海一恒科学仪器有限公司)，ZF-7型暗箱三用紫外线分析仪(上海嘉鹏科技有限公司)，电子天平(赛多利斯科学仪器(北京)有限公司)，硅胶G 板和GF254板(青岛海洋化工厂分厂)，水浴恒温震荡器(上海跃进医疗器械有限公司)，投入式恒温水槽NTT-2200(上海爱朗仪器有限公司)，尼康Ti-U 倒置荧光显微镜，层析缸，毛细管，帆船牌载玻片，盖玻片等。

2.药材与试剂：

蒙药组合物(又称夏枯草八味丸，准哈它嘎其八味丸)(批号为438SW150828、438SW150604，内蒙古自治区国际蒙医医院)；夏枯草球、紫贝灰、沙棘、红景天、制草乌、板蓝根、大花龙胆、金腰草等均由内蒙古自治区国际蒙医医院提供，经内蒙古药检所康双龙教授鉴定为均为正品。迷迭香酸对照品(批号 PO5M6R3)、红景天苷对照品(批号C16J6Q1)、表告依春对照品(批号H29J6X1)、板蓝根对照药材(批号Z15O6B4550)以上对照药材及对照品均购于上海源叶生物科技有限公司。其它试剂均为分析纯。

3.方法与结果

3.1显微鉴别

取夏枯草八味丸(1-2mg)，研细，制备沙棘、制草乌、大花龙胆水合氯醛装片，加热，置显微镜下观察。

3.1.1沙棘的鉴别：本品粉末类黄色，细胞壁薄，内含众多橙黄色或鲜黄色颗粒状物及油滴。表皮鳞毛较多，呈扇形，见图1-1，图1-2。

3.1.2制草乌的鉴别：石细胞黄色，类长方形或方形网状裂纹，壁稍厚，见图 2-1，图2-2。

3.1.3大花龙胆的鉴别：本品粉末呈灰绿色。可见螺纹状导管，见图3-1，图 3-2。

3.2薄层鉴别

3.2.1蒙药组合物供试品中夏枯草球的TLC鉴别

参照《中国药典》2015年版一部“夏枯草”和“养血清脑丸”项下的薄层鉴别方法，以迷迭香酸对照品为对照进行条件摸索。按蒙药组合物处方比例折算，取供试品粉末6g，研细，加稀盐酸8ml、乙醚20ml,加热回流30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。取以相同工艺制备的模拟样品和阴性对照(缺夏枯草球)各6g，加稀盐酸8ml、乙醚20ml,加热回流30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇lml使溶解，作为模拟样品溶液和阴性对照溶液。取单药0.6g，加稀盐酸1ml、乙醚20ml,加热回流30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇lml使溶解，作为单药溶液。另取迷迭香酸对照品，加乙醇制成每lml 含0.lmg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述阴性对照溶液5μl，对照药材10μl，单药、模拟、供试品溶液20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上。以环己烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲酸(浓度比为15:3:3.5:0.5) 为展开剂，展开，取出，晾干。置于紫外灯下(365nm)检视。

以迷迭香酸为对照进行薄层色谱实验，结果显示：在供试品色谱中，在与对照品、单药、模拟样品色谱相应的位置(Rf值0.62)上显相同颜色的荧光斑点，且同工艺同法制备的阴性对照(缺夏枯草球)色谱中在相应的位置上未出现斑点，表明蒙药组合物处方中其他组分对夏枯草球鉴别无干扰，具专属性。供试品薄层色谱结果见图片4-1。

耐用性考察

按确定的方法，考察了室温25℃、相对湿度35％(图片4-1)和低温(6℃)、低湿(相对湿度20％)对薄层结果的影响，结果低温、低湿条件下对整体分离效果无太大影响(Rf值0.59)。低温(6℃)、低湿(相对湿度20％)见图片4-2。

3.2.2蒙药组合物处方中红景天的TLC鉴别

参照《中国药典》2015年版一部红景天项下的薄层鉴别方法，以红景天苷对照品为对照进行条件摸索，按蒙药组合物处方比例折算，取供试品4g、以相同工艺制备的模拟样品和阴性对照(缺红景天)各4g、单药0.4g，分别加70％甲醇10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液、模拟样品溶液和阴性对照溶液。另取红景天苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述阴性对照溶液10μl，对照品溶液10μl，单药溶液10μl，模拟、供试品溶液20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-丙酮-水(浓度比为6：3：1：1)的下层溶液为展开剂，展开，展距18cm，取出，晾干，置碘蒸气中熏。以红景天苷为对照进行薄层色谱实验，结果显示：在供试品色谱中，在与对照品、单药、模拟样品色谱相应的位置(Rf值0.56)上显相同颜色的斑点，且同工艺同法制备的阴性对照(缺红景天)色谱中在相应的位置上未出现斑点，表明蒙药组合物处方中其他组分对红景天鉴别无干扰，具专属性。供试品薄层色谱结果见图片5-1。

耐用性考察

按确定的方法，考察了室温(25℃)、相对湿度36％(图5-1)和低温(6℃)、低湿(相对湿度20％)(图5-2)对薄层结果的影响，结果低温、低湿条件下对整体分离效果无太大影响(Rf值0.47)。

3.2.3蒙药组合物处方中板蓝根的TLC鉴别

参照《中国药典》2015年版一部板蓝根项下的薄层鉴别方法，以表告依春对照品为对照进行条件摸索，按蒙药组合物处方比例折算，取供试品4g、以相同工艺制备的模拟样品和阴性对照(缺板蓝根)各4g、单药0.6g，加80％甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。再表告依春对照品，加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，作为对照品的溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述阴性对照溶液10μl，对照品溶液10μl，单药溶液10μl，模拟、供试品溶液20μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚

-乙酸乙酯(1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。以表告依春为对照进行薄层色谱实验，结果显示：在供试品色谱中，在与对照品、单药、模拟样品色谱相应的位置(Rf值0.423)上显相同颜色的斑点，且同工艺同法制备的阴性对照(缺板蓝根)色谱中在相应的位置上未出现斑点，表明处方中其他组分对板蓝根鉴别无干扰，具专属性。供试品薄层色谱结果见图6-1。

耐用性考察：

按确定的方法，考察了室温25℃、相对湿度36％(图6-1)和低温6℃、低湿相对湿度20％(图6-2)对薄层结果的影响，结果低温、低湿条件下对整体分离效果无太大影响(Rf值0.433)。

3.3处方中金腰草的理化鉴别

参照青海省藏药炮制规范2010年版金腰草鉴别方法，取夏枯草八味丸细粉 2g，加乙醇20ml，浸泡30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加2％盐酸溶解，滤过，取滤液加碘化铋钾，即发生橙黄色沉淀。

3.4含量测定

参照中国药典2015年版一部沙棘含量测定项下方法进行了实验条件摸索，建立了处方沙棘中异鼠李素和总黄酮的含量测定方法。测定结果达到了较好的效果，方法考察如下：

3.4.1仪器与试剂试药

3.4.1.1仪器

Thermo Ultimate 3000型高效液相色谱仪，变色龙7色谱工作站，AS 5150A 超声清洗仪，754N紫外可见分光光度计。

3.4.1.2试剂与试药

异鼠李素对照品(批号P14J6R1)、芦丁对照品(批号Y225653719)购于上海源叶生物科技有限公司；甲醇为色谱纯，其他均为分析纯试剂，水为超纯水。

3.4.1.3蒙药组合物供试品由内蒙古自治区国际蒙医医院提供。阴性供试品由药物实验室自制。模拟样品由药物实验室自制。

3.4.2 HPLC法测定异鼠李素含量

3.4.2.1色谱条件

3.4.2.1.1色谱柱

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，本实验研究采用nacalai tesque5C18-MS-II 250×4.6mm 5μm柱。

3.4.2.1.2流动相的选择

参考《中国药典》2015年版一部沙棘含量测定项下异鼠李素测定方法，将流动相选择为甲醇-0.4％磷酸溶液(体积比为42:58)，结果分离效果好、保留时间适中，故确定其作为本品含量测定的流动相。

3.4.2.1.3柱温

实验中对25℃和30℃柱温进行了比较，结果保留时间略有差异，但分离度及理论板数没有变化，本实验研究选择柱温为30℃。

3.4.2.1.4检测波长的选择

参考《中国药典》2015年版一部沙棘项下选择370nm作为检测波长。

3.4.2.1.5理论板数的确定

对多批蒙药组合物供试品测定结果表明，异鼠李素的理论板数在5000以上即能达到与相邻峰分开，并符合《中国药典》规定R＞1.5的要求，本标准规定理论板数按没食子酸峰计应不低于5000。

4.药效学实验

方法选取40只雄性Wistar大鼠(180-200g)，随机选取其中10只作为空白组(灌胃生理盐水3ml/d)，其余30只给予丙硫氧嘧啶(PTU)15mg/kg，1 次/d，持续灌胃24天。造模第24天，大鼠眼眶取血，根据测量血清中FT3\FT4 的含量，确定造模成功，之后将30只大鼠随机分为3组，即模型组(生理盐水 3ml/d)、阳性对照组(优甲乐100mg/kg)、蒙药组(730mg/kg)。空白组与模型组一致(生理盐水3ml/d)，4组继续给药14d后，称各组大鼠体质量，戊巴比妥钠麻醉，腹主动脉取血，离心(4℃，3000r.min^-1,15min,离心半径：10cm), 留取上清液，分装，于-80℃保存，待检血清中相关指标，迅速剥离甲状腺和其它器官，称定质量后，根据公式1计算各脏器系数(公式1：脏器系数＝脏器质量/大鼠体质量)，然后将甲状腺组织的一侧至于无RNA酶的冻存管中，待检分子生物学相关指标，另一侧至于4％多聚甲醛中，进行常规苏木精-伊红(HE)染色，以观察甲状腺组织病理形态学的变化。

实验结果：

1.蒙药组合物对甲状腺肿大鼠模型大鼠甲状腺系数及其他组织系数的影响

与空白组(正常组)比较，模型组大鼠甲状腺系数均显著升高(P<0.01)。与模型组比较，蒙药组大鼠甲状腺系数均降低明显著(P＜0.01)，优于阳性对照组。(如下表1)

蒙药组合物对甲状腺肿大鼠脏器系数的影响

由表可见，蒙药组合物与模型组比较，能够较好的抑制丙基硫氧嘧啶引起的大鼠的甲状腺肿，各组甲状腺系数差异有显著性，。提示该药方有降低丙基硫氧嘧啶致大鼠甲状腺肿作用。

2.蒙药组合物对甲状腺肿大鼠模型大鼠甲状腺组织形态的影响

如图7所示，肉眼观察模型组大鼠甲状腺较空白组(正常组)体积明显增大；镜下观察模型组与空白组对比，甲状腺滤泡间的差异明显，大小不一，呈圆形或椭圆形，滤泡腔变窄，呈现不规则的形状，腔内胶质数量明显降低。模型组与正常组不同，大部分甲状腺滤泡增生，部分结节状增生，滤泡腔扩张，充满胶质，滤泡上皮细胞胞浆粉染，增生，局灶小乳头形成。显微镜下观察大鼠甲状腺HE染色示：蒙药组甲状腺滤泡与上皮细胞恢复明显好，形态较为规则，基本恢复正常；而优甲乐组(图7阳性对照组)仍然可见到少许浸润的炎性细胞存在于滤泡腔和间质。蒙药组甲状腺细胞恢复程度明显优于优甲乐组，并能使大鼠甲状腺肿组织形态得到改善。蒙药组接近于正常组，甲状腺滤泡轻度增生，滤泡上皮细胞胞浆淡染，滤泡腔胶质部分淡染，部分吸收空泡。

3.蒙药组合物对甲状腺肿大鼠模型大鼠血清中激素水平的影响

放射免疫法检测血清中游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、促甲状腺激素(TSH)水平。

如图8所示，与空白组(正常组)比较，模型组大鼠血清中FT3、FT4水平均显著降低(P<0.05)。与模型组比较，蒙药组大鼠血清中的FT3水平明显升高 (P<0.005)，胜于阳性对照组。蒙药组大鼠血清中的FT4水平也有升高(P<0.05)，但阳性对照组更加明显(P<0.005)。蒙药组的FT3/FT4值大于阳性对照组。结果显示，蒙药组合物具有促进血清FT3/FT4分泌的作用。夏药为蒙药组合物，夏加药为蒙药组合物加另外一种药。

如图9所示，与正常组比较，模型组大鼠血清中TSH水平均显著升高 (P<0.001)。与模型组比较，蒙药组合物组(即图9中所示夏丸组)大鼠血清中的TSH水平明显降低(P<0.001)，水平变化胜于阳性对照组。结果显示蒙药组合物具有抑制血清中TSH分泌的作用。

4.蒙药组合物对甲状腺肿大鼠模型大鼠甲状腺组织中PCNA基因和蛋白的影响

如图10所示，根据qPCR和WB法测定的结果，与空白组(正常组)比较，模型组大鼠甲状腺组织中PCNA mRNA和蛋白的表达量均显著上升(P<0.001)。与模型组比较，阳性对照组和蒙药组大鼠甲状腺组织中PCNA mRNA和蛋白表达量明显降低(P<0.005)，蒙药组的变化大于阳性对照组。RT-qPCR和WB结果显示，与正常组相比，模型组的PCNA基因、蛋白表达量明显升高，而阳性对照组降低，蒙药组的PCNA基因、蛋白被明显抑制。

结论：

1、该蒙药组合物具有较强的抗甲状腺重大作用。改善甲状腺功能及组织形态结构。

2、它具有调节甲状腺激素水平的作用。

3、它能够明显的抑制甲状腺细胞增值。

4、该蒙药组合物治疗甲状腺肿的作用可能与其抑制甲状腺组织及细胞的增生有关。

本发明制备的蒙药组合物满足以下质量要求：薄层色谱法分别鉴别蒙药组方中的夏枯草球、板蓝根、红景天时，蒙药组合物在迷迭香酸、表告依春、红景天苷对照品对应处显相同蓝色斑点，阴性无干扰；高效液相色谱法鉴别蒙药组合物中异鼠李素和总黄酮时，蒙药组合物分别在标准品异鼠李素和芦丁对应处有吸收峰，阴性无干扰。

本发明利用蒙药相互间的协同或抵抗作用，提高了治疗效果，减少了不良反应，标本兼治，诸药配伍，祛巴达干，调赫依养血、强精补体之功效，有软坚散结、活血化瘀、疏肝解郁、理气化痰的作用，能从根本上整体调理治疗，更有针对性的治疗甲状腺肿，达到恢复健康的目的，具有安全可靠，疗效确切，无毒副作用。本发明药物具有配伍严谨，药性平和，疗效显著的特点，标本兼治，便于在临床上大面积推广应用。

Claims (9)

1.一种蒙药组合物，其特征在于：由以下重量份的原料组成，夏枯草球1份、沙棘1份、红景天1份、金腰草1份、大花龙胆1份、制草乌1份、板蓝根1份、紫贝灰1份组成，该蒙药组合物用于治疗甲状腺肿大。

2.根据权利要求1所述的蒙药组合物，其特征在于：夏枯草球50～100g、沙棘50～100g、红景天50～100g、金腰草50～100g、大花龙胆50～100g、制草乌50～100g、板蓝根50～100g、紫贝灰50～100g。

3.根据权利要求1所述的蒙药组合物，其特征在于：该蒙药组合物能够制备成蒙药片剂、颗粒剂、丸剂、散剂或者汤剂。

4.一种蒙药组合物的制备方法，包括如下步骤：

1)按等重量份称取夏枯草球、沙棘、红景天、金腰草、大花龙胆、制草乌、板蓝根、紫贝灰原药材，筛分除杂，较大的原料切成黄豆大小的小块,混合均匀后在紫外线灭菌灯下灭菌处理1小时，然后研磨成粉，过500-800目筛分后，得蒙药粉末；

2)将步骤1)得到的蒙药粉末制成片剂、颗粒剂、丸剂、散剂或者汤剂。

5.一种蒙药组合物的质量监控方法，包括如下步骤：

1)采用显微鉴别法对权利要求1所述的蒙药组合物中的沙棘、制草乌、大花龙胆进行了显微鉴别；

2)采用薄层色谱法分别对权利要求1所述的蒙药组合物中的夏枯草球、板蓝根、红景天进行鉴别；

3)采用理化鉴别法对权利要求1所述的蒙药组合物中的金腰草进行鉴别；

4)采用高效液相色谱法对权利要求1所述的蒙药组合物中的沙棘所含的异鼠李素和总黄酮的含量进行鉴别。

6.根据权利要求5所述的一种质量监控方法，其特征在于：在步骤1)的显微鉴别过程中，取权利要求1所述的蒙药组合物供试品1-2mg，研细，制备沙棘、制草乌、大花龙胆水合氯醛装片，加热，置显微镜下观察。

7.根据权利要求5所述的质量监控方法，其特征在于：在步骤2)的薄层鉴别夏枯草球的过程中，

1)取权利要求1所述的蒙药组合物供试品5-12g，研细，加稀盐酸8ml、乙醚20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液；

2)取以相同工艺制备的模拟样品和阴性对照(缺夏枯草球)各5-12g，加稀盐酸8ml、乙醚20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇lml使溶解，作为模拟样品溶液和阴性对照溶液；

3)取单药0.5-1.5g，加稀盐酸1ml、乙醚20ml，加热回流30-60分钟，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇lml使溶解，作为单药溶液；

4)取迷迭香酸对照品，加乙醇制成每lml含0.lmg的溶液，作为对照品溶液；

5)按照薄层色谱法试验，吸取上述阴性对照溶液5μl，夏枯草球对照药材10μl，夏枯草球饮片或药材单药20μl、模拟样品溶液20μl、供试品溶液20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲酸(浓度配比为15:3:3.5:0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，置于紫外灯下检视。

8.根据权利要求5所述的质量监控方法，其特征在于：在步骤2)的薄层鉴别红景天的过程中，

1)取权利要求1所述的药物组合物供试品4-10g、以相同工艺制备的模拟样品和阴性对照(缺红景天)各4-10g、单药0.4-1.0g，分别加70％甲醇10ml，超声处理30-60分钟，滤过，滤液作为供试品溶液、模拟样品溶液和阴性对照溶液；

2)另取红景天苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；

3)按照薄层色谱法试验，吸取上述阴性对照溶液10μl，对照品溶液10μl，单药溶液10μl，模拟、供试品溶液20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-丙酮-水(浓度比为6：3：1：1)的下层溶液为展开剂，展开，展距18cm，取出，晾干，置碘蒸气中熏。

9.根据权利要求5所述的质量监控方法，其特征于：在步骤2)中的薄层鉴别板蓝根的过程中，

1)取根据权利要求1所述的蒙药组合物供试品4-10g、以相同工艺制备的模拟样品和阴性对照(缺板蓝根)各4-10g、单药0.5-1.2g，加80％甲醇20ml，超声处理30-60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液、模拟样品溶液和阴性对照溶液；

2)在表告依春对照品，加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，作为对照品的溶液；

3)按照薄层色谱法试验，吸取上述阴性对照溶液10μl，对照品溶液10μl，单药溶液10μl，模拟、供试品溶液20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚

-乙酸乙酯(体积比为1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视。

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