CN114517160A - 一种米曲霉菌株在富集硒中的应用 - Google Patents
一种米曲霉菌株在富集硒中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114517160A CN114517160A CN202210391722.9A CN202210391722A CN114517160A CN 114517160 A CN114517160 A CN 114517160A CN 202210391722 A CN202210391722 A CN 202210391722A CN 114517160 A CN114517160 A CN 114517160A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- selenium
- aspergillus oryzae
- strain
- culture
- thallus
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N Selenium Chemical compound [Se] BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 116
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 102
- 239000011669 selenium Substances 0.000 title claims abstract description 102
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 title claims abstract description 63
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 title claims abstract description 63
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 15
- 229940091258 selenium supplement Drugs 0.000 claims description 100
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 17
- BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L disodium selenite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Se]([O-])=O BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 15
- 229960001471 sodium selenite Drugs 0.000 claims description 15
- 235000015921 sodium selenite Nutrition 0.000 claims description 15
- 239000011781 sodium selenite Substances 0.000 claims description 15
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims description 8
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 7
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 5
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 5
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 5
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 4
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 4
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 4
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 3
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 claims description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 2
- 238000013048 microbiological method Methods 0.000 claims description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 abstract 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 abstract 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 11
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 10
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 9
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 9
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 6
- 241001052560 Thallis Species 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- FDKWRPBBCBCIGA-REOHCLBHSA-N (2r)-2-azaniumyl-3-$l^{1}-selanylpropanoate Chemical compound [Se]C[C@H](N)C(O)=O FDKWRPBBCBCIGA-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- RJFAYQIBOAGBLC-BYPYZUCNSA-N Selenium-L-methionine Chemical compound C[Se]CC[C@H](N)C(O)=O RJFAYQIBOAGBLC-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- RJFAYQIBOAGBLC-UHFFFAOYSA-N Selenomethionine Natural products C[Se]CCC(N)C(O)=O RJFAYQIBOAGBLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 229960002718 selenomethionine Drugs 0.000 description 3
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FDKWRPBBCBCIGA-UWTATZPHSA-N D-Selenocysteine Natural products [Se]C[C@@H](N)C(O)=O FDKWRPBBCBCIGA-UWTATZPHSA-N 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 229920005610 lignin Polymers 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- ZKZBPNGNEQAJSX-UHFFFAOYSA-N selenocysteine Natural products [SeH]CC(N)C(O)=O ZKZBPNGNEQAJSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000016491 selenocysteine Nutrition 0.000 description 2
- 229940055619 selenocysteine Drugs 0.000 description 2
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 2
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 2
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMYDPQQPEAYXKD-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxy-n-naphthalen-2-ylnaphthalene-2-carboxamide Chemical compound C1=CC=CC2=CC(NC(=O)C3=CC4=CC=CC=C4C=C3O)=CC=C21 PMYDPQQPEAYXKD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 208000002177 Cataract Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 102000006587 Glutathione peroxidase Human genes 0.000 description 1
- 108700016172 Glutathione peroxidases Proteins 0.000 description 1
- 206010061192 Haemorrhagic fever Diseases 0.000 description 1
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000011845 Iodide peroxidase Human genes 0.000 description 1
- 108010036012 Iodide peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 description 1
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 206010039921 Selenium deficiency Diseases 0.000 description 1
- 108010074686 Selenoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000008114 Selenoproteins Human genes 0.000 description 1
- 241001655322 Streptomycetales Species 0.000 description 1
- 102000013090 Thioredoxin-Disulfide Reductase Human genes 0.000 description 1
- 108010079911 Thioredoxin-disulfide reductase Proteins 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000009098 adjuvant therapy Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001095 inductively coupled plasma mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 239000007320 rich medium Substances 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 229910000058 selane Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003748 selenium group Chemical group *[Se]* 0.000 description 1
- 150000003346 selenoethers Chemical class 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 229960001881 sodium selenate Drugs 0.000 description 1
- 235000018716 sodium selenate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011655 sodium selenate Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 231100000816 toxic dose Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
- A23K10/18—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions of live microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/20—Inorganic substances, e.g. oligoelements
- A23K20/30—Oligoelements
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/16—Inorganic salts, minerals or trace elements
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/02—Separating microorganisms from their culture media
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/04—Preserving or maintaining viable microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P60/00—Technologies relating to agriculture, livestock or agroalimentary industries
- Y02P60/80—Food processing, e.g. use of renewable energies or variable speed drives in handling, conveying or stacking
- Y02P60/87—Re-use of by-products of food processing for fodder production
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Botany (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physiology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开一种米曲霉菌株A02在富集硒方面的应用，包括在培养阶段在培养基中添加无机硒，使硒元素在米曲霉菌体内高效地有机转化富集。本发明的米曲霉菌体产品可以广泛应用于畜禽及水产饲料产品中，提高硒元素的生物利用率。
Description
技术领域
本发明属于微生物和食品技术领域，涉及一种米曲霉菌株富集硒元素的应用。
背景技术
硒元素是瑞典化学家 Bezeliu 在 1817 年发现并命名。1973 年，世 界 卫 生组 织( WHO) 向 全 世 界宣布:硒是人类和动物生命中必须的微量元素，补硒可以有效预防多种疾病。硒主要以硒半胱氨酸的形式存在人体中，能有效增加谷胱甘肽过氧化物酶、硫氧还蛋白还原酶、脱碘酶等含硒酶的活性，可以增加机体防病、抗病能力，预防癌症，抵抗有害金属，抗辐射等方面的作用。硒对治疗肝炎，关节炎，白内障，出血热有显著作用，并且硒对肿瘤患者的放化疗也有显著的辅助治疗作用。硒的一个显著特征就是其营养剂量和毒性剂量之间范围很窄。近些年来，探索高生物活性和高安全性的硒源 成 为 研 究 焦 点。硒主 要 以 3 种 形 式 存在:(1)无机 硒:代 表 性 物 质 为 硒 酸 钠，亚 硒 酸 钠 和硒化氢。(2)有机硒:代表性物质为硒蛋白，还有一些利用有机化合物与无机硒作用，生成有机态硒化物，如硒氨酸。(3)单质硒。对于补硒来说，有机硒相比于无机 硒，硒 的 吸 收 利用 价 值 高，急 性 毒 性 更小，被认为是较好的硒制品，但是近年的研究表明，利用微生物还原亚硒酸钠而产生的纳米红色单质硒，比传统无机硒和有机硒更 具有高效高安全性。从生物功效来看，单质硒在体外清除羟基自由基的效率为无机硒的 5 倍，为有机硒的 2.5倍。
硒是人体必须的微量元素。缺硒会导致许多疾病的产生,严重影响人体的健康。因此,补硒越来越受到各界的重视。然而天然食品中的硒含量普遍偏低,不能满足人体对硒的需求,而无机硒毒性较高、生物利用率低,不易用于食品中,所以通过微生物合成法,研发含硒食品具有很好的应用前景。
发明内容
本发明提出了一种米曲霉在富硒方面的培养方法及应用，本发明选用米曲霉为富硒载体通过微生物转化法把无机态的亚硒酸钠转化成容易被人体吸收利用的有机硒，富含在米曲霉菌体细胞中，从而使有机硒富含在米曲霉菌体来开发富硒食品。
因此，本发明首先提供一种米曲霉（Aspergillus oryzae）菌株A02在富集硒元素中的应用，所述米曲霉菌株A02的保藏号为：CGMCC No.40043。
进而本发明提供一种微生物法富集硒元素的方法，添加无机硒元素的培养基培养保藏号为：CGMCC No.40043的米曲霉菌株A02，收集培养后得到的菌体。
优选地，培养基中添加无机硒元素是以亚硒酸钠形式添加。
更优选地，亚硒酸钠添加的浓度为0.5-3.5g/L。
进一步地，其中基本培养基为1%葡萄糖，2%蛋白胨，1%酵母粉。
具体实施方式中，培养温度为26℃~28℃，转速180~200 rpm，培养60-180h。
具体操作中，收集菌体是将培养后的培养液于12000rpm离心10min,菌体用蒸馏水洗涤次，收集的菌体用真空冷冻干燥至绝干。
本发明因而还提供所述的方法获得的米曲霉菌株A02菌体。
进一步提供所述的米曲霉菌株A02菌体在制备富硒饲用产品中的应用。具体地，米曲霉菌株A02菌体作为饲用添加剂使用。
本发明的富硒米曲霉的培养方法，使硒和米曲霉两者相辅相成，协同作用，发酵周期短，合成效率高，使生产获得的富硒米曲霉更加安全易于人体的吸收；实验中，本发明的菌体中硒含量高达30505ppm，明显优于传统的微生物转化法制备有机硒的方法（例如中国专利CN109439554B中在菌体蛋白中硒含量为16076ppm±94.1；中国专利CN110317757B中的植物乳杆菌HJ-S2的菌体蛋白中硒含量为700ppm； 中国专利申请CN109561722 A中提到的米曲霉生产富硒菌体蛋白，在菌体蛋白中硒含量为42.3ppm）。
同时米曲霉A02菌体富集的硒存在方式包括硒代氨基酸和单质硒两种方式，单质硒和有机硒均存在安全性更高，生物活性高等优势，能够广泛的运用于饲料行业、食品以及营养品产业中。
附图说明
图1米曲霉A02菌体干粉比较。
图2富硒米曲霉菌体蛋白氨基酸组成分析的色谱图。
图3扫描电镜观察米曲霉菌体表面单质硒的情况。
相关的生物材料保藏信息如下：
本发明涉及的米曲霉（Aspergillus oryzae）菌株A02保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其简称为CGMCC，保藏单位地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏时间为：2022年1月17日，该菌株的分类命名为：米曲霉Aspergillus oryzae，保藏号编号为：CGMCC No.40043。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明作进一步的阐述，以便更好的理解本发明，但并不构成对本发明的限制。
实施例1：米曲霉菌株A02的获得
1、原始菌株的获得
2021年05月在河北省唐山市采集腐木微生物中分离获得。
分离过程：刮取腐木微生物，放入盛有95 mL无菌水和10粒玻璃珠的三角瓶中，于30℃、180 rpm振荡30 min。取菌悬液1 mL进行10 -1 -10 -7 系列浓度梯度稀释，然后取10-5、10-6、10-7三个稀释度涂布至以木质素为唯一碳源的培养基平板上，于28℃倒置培养5d。
纯化：菌落在以木质素为唯一碳源的培养基平板形成后，选取生长最快的一株菌，挑取单菌落边缘处的菌丝于PDA培养基平板上，继续28℃恒温培养。最终获得一株米曲霉纯菌落，将获得菌落4℃保存。
对该菌株进行鉴定，其中ITS测序序列结果如下： GACGCTCGTAAGATCTTCCGTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTACCGAGTGTAGGGTTCCTAGCGAGCCCAACCTCCCACCCGTGTTTACTGTACCTTAGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCATTCATGGCCGCCGGGGGCTCTCAGCCCCGGGCCCGCGCCCGCCGGAGACACCACGAACTCTGTCTGATCTAGTGAAGTCTGAGTTGATTGTATCGCAATCAGTTAAAACTTTCAACAATGGATCTCTTGGTTCCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAACTAGTGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAGTCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGTATTCCGGGGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCATCAAGCACGGCTTGTGTGTTGGGTCGTCGTCCCCTCTCCGGGGGGGACGGGCCCCAAAGGCAGCGGCGGCACCGCGTCCGATCCTCGAGCGTATGGGGCTTTGTCACCCGCTCTGTAGGCCCGGCCGGCGCTTGCCGAACGCAAATCAATCTTTTTCCAGGTTGACCTCGGATCAGGTAGGGATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATAAGCGGAGGAAATCTTCCTGTG。
结果显示，该菌的ITS序列与米曲霉RP-1菌株相似度达到100%，说明该菌株是米曲霉菌株。
2、突变菌株A02的获得
对上述获得的米曲霉菌株进行ARTP诱变及分选：
a. 诱变时间确定：采用100µl新鲜的米曲霉孢子悬液，孢子浓度为105, 诱变不同时间。当诱变设置0s，60 s，90 s，120 s，150 s的诱变时间，分别凃板统计每个诱变时间的致死率，以70%致死率为理想诱变时间(0s情况作为对照)；
b.诱变后菌落孔板法评价：诱变后菌落挑入含有高浓度无机硒培养基（2% 葡萄糖+3%亚硒酸钠）的24孔板内，30℃、130 rpm培养1d，测定其OD600判断诱变后菌落生长速度。挑选能够耐硒、生长速度最快的菌株（编号A02）, 将获得菌落4℃保存.
实施例2：米曲霉菌株A02的富集硒实验
1、不同无机硒浓度对米曲霉菌株A02生长的影响
米曲霉富硒培养基中亚硒酸钠的浓度选择由0.5-3.5g/L，基础培养基选择YPD（1%葡萄糖，2%蛋白胨，1%酵母粉）。
从米曲霉菌株A02的平板上洗下孢子悬液浓度107个/mL，加入富硒培养基，培养温度为26℃~28℃，转速180~200 rpm，培养120h。
12000rpm离心10min, 收集菌体；菌体用蒸馏水洗涤3次，收集的菌体用真空冷冻干燥至绝干。测定其生物量，并采用电感耦合等离子体-质谱法测定菌体中硒元素。
结果如表1所示。可以看出来，当亚硒酸钠浓度为0.5-3g/L时，菌体的生长的确是有抑制，是因为无机硒是有毒性的；但是可以看到米曲霉A02耐硒的能力很好，在3g/L亚硒酸钠的条件下，仍然可以正常生长，菌体生物量略有降低；但是从富集硒的能力看，当亚硒酸钠浓度在3g/L时，菌体有机转化硒总量达到最高，30505±52.1ppm。确定以后实验中，最优无机硒浓度为3g/L。
表1不同无机硒浓度对米曲霉菌株A02生长的影响及富硒
2、不同培养时间富硒实验
米曲霉富硒培养基：1%葡萄糖，2%蛋白胨，1%酵母粉，3g/L亚硒酸钠。
从米曲霉菌株A02的平板上洗下孢子悬液浓度107个/mL，加入富硒培养基，培养温度为26℃~28℃，转速180~200 rpm，培养120h。
培养96h，120h，144h后，12000rpm离心10min, 收集菌体；菌体用蒸馏水洗涤3次，收集的菌体用真空冷冻干燥至绝干。
菌体形态：如图1所示，左图为未添加亚硒酸钠培养的米曲霉菌体，右图为通过富硒培养基培养得到米曲霉菌体干粉。可以从图片清晰看到富硒培养基培养的米曲霉菌体颜色变成暗红色，是因为米曲霉菌体已经完成富硒过程，无机硒有机转化成为菌体硒后，颜色变成暗红色。
菌体的硒元素和氨基酸的测定：称取菌体样品0.5克，置于消解罐中，加入8mL硝酸与1mL 30％(质量分数)过氧化氢溶液进行微波密闭消解，冷却后，将样品溶液赶酸至少于0.5 mL，用水定容至25 mL，根据硒元素标准品标准曲线，样品吸光值计算样品中硒元素含量。
培养96h，120h，144h的米曲霉菌体中硒元素含量分别为22542±31.2ppm，29362±56.3 ppm， 30505±52.1ppm。富硒米曲霉菌体蛋白中总硒按量为30505±52.1ppm，明显优于传统的微生物硒元素有机转化效率。
菌体的氨基酸的测定:菌体氨基酸含量测定采用A200型amino Nova氨基酸分析仪进行测定144h的富硒米曲霉菌体氨基酸含量测定结果如下表2，菌体总氨基酸含量为45.26%。
表2富硒米曲霉菌体氨基酸含量
可见富硒米曲霉菌体中，首先菌体蛋白中氨基酸含量为45.26%，含有8种必需氨基酸，必需氨基酸占总氨基酸的比例为42.96%， 为优质的蛋白质资源。另一方面从米曲霉菌体蛋白的氨基酸组成可以看到，出现硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸的出现，其中硒代胱氨酸含量为0.52%，硒代蛋氨酸含量为0.38%。也说明米曲霉菌体富硒后，菌体蛋白有机转化后除了表面形成单质硒以外，也形成硒代氨基酸的有机硒的形式。
菌体表面附着物的观察：冻干的菌体喷金前处理后，通过扫描电镜在90万倍条件下，观察米曲霉菌体表面（观察结果如图3所示），可以看到一些附着于细胞表面的微小颗粒，这些颗粒是以蛋白质为核，红色单质硒为膜的硒-蛋白质复合物，称之为单质硒。基于之前报道的文献报道(蒋华东，何晓红，张礼霞，陶勇，王晓梅，高平，李大平， 一株假单胞菌好氧还原亚硒酸钠为红色单质硒，微生物学报，2010.50:1347-1352.；昌青青，张园园，曹圆圆，卢存龙，陆鹏，刘爱民，富硒链霉菌Wh63的鉴定及富硒特性研究，湖北农业科学，2016.55:867-871.)，生物方式获得的单质硒毒性小，对热稳定，生物活性高，具有较高的应用价值。所以本发明中看到的富硒后的米曲霉菌体干粉为暗红色（如图1所示），是与菌体表面的红色单质硒有关。
由此可见，米曲霉富硒转化过程，除了转化为有机硒，和菌体氨基酸结合以外，还能在菌体表面形成单质硒颗粒；纳米级红色单质硒，比传统无机硒和有机硒具有更高效功效和更高安全性。
<110> 中国科学院天津工业生物技术研究所
<120> 一种米曲霉菌株在富集硒中的应用
<160> 1
<210> 1
<211> 623
<212> DNA
<213> 米曲霉（Aspergillus oryzae）
<400> 1
GACGCTCGTAAGATCTTCCGTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTACCGAGTGTAGGGTTCCTAGCGAGCCCAACCTCCCACCCGTGTTTACTGTACCTTAGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCATTCATGGCCGCCGGGGGCTCTCAGCCCCGGGCCCGCGCCCGCCGGAGACACCACGAACTCTGTCTGATCTAGTGAAGTCTGAGTTGATTGTATCGCAATCAGTTAAAACTTTCAACAATGGATCTCTTGGTTCCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAACTAGTGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAGTCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGTATTCCGGGGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCATCAAGCACGGCTTGTGTGTTGGGTCGTCGTCCCCTCTCCGGGGGGGACGGGCCCCAAAGGCAGCGGCGGCACCGCGTCCGATCCTCGAGCGTATGGGGCTTTGTCACCCGCTCTGTAGGCCCGGCCGGCGCTTGCCGAACGCAAATCAATCTTTTTCCAGGTTGACCTCGGATCAGGTAGGGATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATAAGCGGAGGAAATCTTCCTGTG 623
Claims (10)
1.一种米曲霉（Aspergillus oryzae）菌株A02在富集硒元素中的应用，其特征在于，所述米曲霉菌株A02的保藏号为：CGMCC No.40043。
2.一种微生物法富集硒元素的方法，其特征在于，添加无机硒元素的培养液培养保藏号为：CGMCC No.40043的米曲霉菌株A02，并在培养后收集菌体。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，培养液中添加无机硒元素是以亚硒酸钠形式添加。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，亚硒酸钠添加的浓度为0.5-3.5 g/L。
5.如权利要求2或3所述的方法，其特征在于，其中基本培养基为1%葡萄糖，2%蛋白胨，1%酵母粉。
6.如权利要求2或3所述的方法，其特征在于，培养温度为26℃~28℃，转速180~200rpm，培养60-180h。
7.如权利要求2或3所述的方法，其特征在于，收集菌体是将培养后的培养液于12000rpm离心10min，菌体用蒸馏水洗涤数次，收集的菌体用真空冷冻干燥至绝干。
8.如权利要求2至7任一项所述的方法获得的米曲霉菌株A02菌体。
9.如权利要求8所述的米曲霉菌株A02菌体在制备富硒饲用产品中的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，米曲霉菌株A02菌体作为饲用添加剂使用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210391722.9A CN114517160B (zh) | 2022-04-14 | 2022-04-14 | 一种米曲霉菌株在富集硒中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210391722.9A CN114517160B (zh) | 2022-04-14 | 2022-04-14 | 一种米曲霉菌株在富集硒中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114517160A true CN114517160A (zh) | 2022-05-20 |
| CN114517160B CN114517160B (zh) | 2023-07-25 |
Family
ID=81600529
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210391722.9A Active CN114517160B (zh) | 2022-04-14 | 2022-04-14 | 一种米曲霉菌株在富集硒中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114517160B (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105907652A (zh) * | 2016-06-30 | 2016-08-31 | 北京源生元科技发展有限公司 | 一种米曲霉菌株ysy035和富硒米曲霉的分离筛选方法及其应用 |
| US20180237815A1 (en) * | 2015-08-07 | 2018-08-23 | Kikkoman Corporation | Method for producing selenoneine |
| CN109777742A (zh) * | 2019-02-23 | 2019-05-21 | 湖北和诺生物工程股份有限公司 | 一种富硒米曲霉的分离筛选方法及其应用 |
-
2022
- 2022-04-14 CN CN202210391722.9A patent/CN114517160B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20180237815A1 (en) * | 2015-08-07 | 2018-08-23 | Kikkoman Corporation | Method for producing selenoneine |
| CN105907652A (zh) * | 2016-06-30 | 2016-08-31 | 北京源生元科技发展有限公司 | 一种米曲霉菌株ysy035和富硒米曲霉的分离筛选方法及其应用 |
| CN109777742A (zh) * | 2019-02-23 | 2019-05-21 | 湖北和诺生物工程股份有限公司 | 一种富硒米曲霉的分离筛选方法及其应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| WILLIAM J. HUNTER: "An Azospira oryzae (syn Dechlorosoma suillum) Strain That Reduces Selenate and Selenite to Elemental Red Selenium", 《CURRENT MICROBIOLOGY》, vol. 54, pages 376, XP019514831, DOI: 10.1007/s00284-006-0474-y * |
| 潘艳等: "响应面法优化富硒米曲霉的培养条件的研究", 《中国调味品》, vol. 34, no. 7, pages 48 - 52 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114517160B (zh) | 2023-07-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109504635B (zh) | 利用地衣芽孢杆菌发酵生产纳米硒的方法 | |
| CN102816707B (zh) | 一株产朊假丝酵母菌株及其在制备富硒酵母产品中的应用 | |
| CN110373359B (zh) | 一种白色链霉菌X-18及利用该菌生产ε-聚赖氨酸的方法 | |
| CN110982706B (zh) | 一株白地霉及用其处理高氨氮沼液产单细胞蛋白的方法 | |
| CN114107073B (zh) | 一种利用糖蜜生产菌丝蛋白的方法 | |
| CN114854630B (zh) | 一种耐硒芽孢杆菌及其选育方法和应用 | |
| CN114921377B (zh) | 一种希腊魏斯氏菌、筛选方法及其应用 | |
| CN117025400A (zh) | 产纳米硒的蛋白核小球藻及其应用和纳米硒制备方法 | |
| CN110396480A (zh) | 一种凝结芽孢杆菌xp及其在饲料生产中的应用 | |
| CN110218670B (zh) | 一株具有良好定殖能力的硒氧化型根瘤菌t3f4及其应用 | |
| CN109402014B (zh) | 一种产纤维素酶的芽孢杆菌及其应用 | |
| CN113322211B (zh) | 一株具有良好硒转化和Se(0)氧化能力的LX-88菌及其应用 | |
| CN114517160B (zh) | 一种米曲霉菌株在富集硒中的应用 | |
| CN114250153B (zh) | 高耐硒灵芝Ganoderma lucidum JNUSE-200及其富硒发酵策略 | |
| CN113308419B (zh) | 一株发酵用的谷糠乳杆菌及其应用 | |
| CN115895974A (zh) | 一株富硒且高产γ-氨基丁酸的植物乳杆菌及其应用 | |
| CN114276944A (zh) | 一种富硒的酵母新菌株及酵母硒的生产方法 | |
| CN110305797B (zh) | 一株花青素产生菌株cj6及其应用 | |
| Kaushik et al. | Utilization of anaerobically digested distillery effluent for the production of Spirulina platensis (ARM 730) | |
| CN112501027A (zh) | 一种冠突散囊菌菌株及驯化和发酵方法 | |
| CN111979171A (zh) | 利用异麦芽酮糖母液和小球藻废液生产富硒酵母的方法 | |
| CN114480146B (zh) | 一种米曲霉菌株在富集铜铁锰锌中的应用 | |
| CN118291284B (zh) | 一种提高红法夫酵母虾青素和有机硒含量的生产方法 | |
| KR101173468B1 (ko) | 엔터로박터속 균주 ｅｓ392 ｋａｃｃ 91568ｐ 및 이에 의한 수소 생산 방법 | |
| CN109439554B (zh) | 一种空间富硒酵母以及富硒产品 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |