CN114502199B - 用于抑制由壬烯醛引起的皮肤损伤的药剂及方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供对由壬烯醛引起的皮肤损伤抑制有效的剂、和使用这样的剂来抑制由壬烯醛引起的皮肤损伤的方法。选自苯甲醛、二氢月桂烯醇、芳樟醇、苯基乙基醇、乙酸苄酯、和茴香醛组成的组中的1个或多个化合物这样的壬烯醛掩蔽剂,对由壬烯醛引起的皮肤细胞增殖抑制和/或皮肤变薄等皮肤损伤抑制是有效的。
Description
技术领域
本发明涉及用于抑制由壬烯醛引起的皮肤损伤的药剂以及方法。
背景技术
壬烯醛等不饱和醛作为老年臭是已知的,作为掩蔽这样的老年臭的物质,开发出了各种物质(专利文献1、2)。此外,也已知壬烯醛等羰基化诱导物质诱发皮肤黄色化(专利文献3)。
另一方面,也已知通过令人喜欢的香气来减轻压力等会间接地使皮肤状态变得良好。例如,报导了包含蔷薇花油等的香水制品具有使催产素分泌的作用,所述催产素具有促进真皮细胞和表皮细胞中的IGF-1产生的作用(专利文献4)。
然而,迄今为止,对壬烯醛等恶臭物质对皮肤带来何种影响,进而在对皮肤具有不良影响的情况下,如何抑制该不良影响并未充分阐明。
现有技术文献
专利文献
专利文献1:日本特开平11-286423号公报
专利文献2:日本特开平11-286428号公报
专利文献3:日本特开2012-32287号公报
专利文献4:日本特开2011-98898号公报
非专利文献
非专利文献1:Takeuchi等人,The Journal of General Physiology.Vol.133No.6,pp583-601
发明内容
发明所要解决的课题
本发明的课题是提供用于抑制由壬烯醛引起的皮肤损伤的药剂。
用于解决课题的方法
本发明人等发现壬烯醛抑制皮肤细胞的增殖和导致皮肤变薄这样的皮肤损伤。基于这样的发现,对多种多样的原材料反复深入研究,发现以苯甲醛、二氢月桂烯醇、芳樟醇、苯基乙基醇、乙酸苄酯、和茴香醛为代表的壬烯醛掩蔽剂显示皮肤损伤抑制作用,从而完成了本发明。
本申请包含下述发明:
(1)一种用于抑制由壬烯醛引起的皮肤损伤的药剂,是壬烯醛掩蔽剂。
(2)一种包含壬烯醛掩蔽剂的药剂,是皮肤损伤抑制剂。
(3)根据(1)或(2)所述的药剂,上述壬烯醛掩蔽剂为选自苯甲醛、二氢月桂烯醇、芳樟醇、苯基乙基醇、乙酸苄酯、和茴香醛组成的组中的1个或多个化合物。
(4)根据(1)~(3)中任一项所述的药剂,所述皮肤损伤为皮肤变薄。
(5)一种组合物,其包含(1)~(4)中任一项所述的药剂。
(6)一种美容方法,其通过施与壬烯醛掩蔽剂来抑制由壬烯醛引起的皮肤损伤。
(7)根据(6)所述的美容方法,所述壬烯醛掩蔽剂为选自苯甲醛、二氢月桂烯醇、芳樟醇、苯基乙基醇、乙酸苄酯、和茴香醛中的1个或多个化合物。
(8)根据(6)或(7)所述的美容方法,所述皮肤损伤为皮肤变薄。
(9)一种用于抑制由壬烯醛引起的皮肤损伤的方法,其通过在需要抑制由壬烯醛引起的皮肤损伤的对象中,施与选自苯甲醛、二氢月桂烯醇、芳樟醇、苯基乙基醇、乙酸苄酯、和茴香醛组成的组中的1个或多个化合物来抑制由壬烯醛引起的皮肤损伤。
(10)根据(9)所述的方法,所述皮肤损伤为皮肤变薄。
(11)用于治疗由壬烯醛引起的皮肤损伤的、选自苯甲醛、二氢月桂烯醇、芳樟醇、苯基乙基醇、乙酸苄酯、和茴香醛组成的组中的1个或多个化合物。
(12)根据(11)所述的化合物,所述皮肤损伤为皮肤变薄。
(13)用于抑制由壬烯醛引起的皮肤损伤的药物的制造中的选自苯甲醛、二氢月桂烯醇、芳樟醇、苯基乙基醇、乙酸苄酯、和茴香醛中的1个或多个化合物的应用。
发明的效果
根据本发明,提供对由壬烯醛引起的皮肤损伤有效的剂和方法。如果抑制由壬烯醛引起的皮肤损伤,则对皮肤的老化抑制是有效的。
附图说明
图1为实验1-2的结果,将添加了各种恶臭物质的情况下的细胞生存率(%)以对照(control)的结果设为100.0的相对值显示(对照对各恶臭物质的双侧t检验,****P<0.001)。
图2为实验2的结果,将添加了各浓度的壬烯醛的情况下的细胞生存率(%)以对照(control)的结果设为100.0的相对值显示(对照对各浓度的壬烯醛的双侧t检验,****P<0.001)。
图3为实验3-2的结果,将添加了各种浓度的各种评价对象物质的情况下的细胞生存率(%)以对照的结果设为100.0的相对值显示(对照对各评价对象物质的双侧t检验,**P<0.01,***P<0.001)。
图4为实验3-3的结果,将添加了各种评价对象物质和各浓度的壬烯醛的情况下的细胞生存率(%)以对照的结果设为100.0的相对值显示(对照对壬烯醛添加、壬烯醛添加对各评价对象物质的双侧t检验,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001)。
图5为显示在实验4中制作的3D皮肤模型的结果的照片,仅添加了溶剂(乙醇)的情况下(左上:对照)、仅添加了壬烯醛的情况下(左下:50μM壬烯醛)、或添加了壬烯醛和各种评价对象物质的情况下(中央和右:50μM壬烯醛+50μM各种评价对象物质)。
图6是将在实验4中制作的3D皮肤模型中仅添加了溶剂(乙醇)的情况下(对照:control)、仅添加了壬烯醛的情况下(nonenal)、或添加了壬烯醛和各种评价对象物质的情况下(nonenal+各种评价对象物质)的皮肤的厚度以左图那样的截面图中的横向的皮肤的每1μm长度的皮肤部分的截面积(面积μm2/μm)而显示(右图)(对照对壬烯醛添加、壬烯醛添加对各评价对象物质的双侧t检验,**P<0.01,***P<0.005)。
图7为显示在实验4中制作的3D皮肤模型中仅添加了溶剂(乙醇)的情况下(左上:对照)、仅添加了壬烯醛的情况下(左下:50μM壬烯醛)、或添加了壬烯醛和各种评价对象物质的情况下(中央和右:50μM壬烯醛+50μM各种评价对象物质)的BrdU阳性细胞的照片。
图8为将在实验4中制作的3D皮肤模型中仅添加了溶剂(乙醇)的情况下(对照:control)、仅添加了壬烯醛的情况下(nonenal)、或添加了壬烯醛和各种评价对象物质的情况下(nonenal+各种评价对象物质)的BrdU阳性细胞数作为图7所示的皮肤部分的截面图中的横向的每1mm长度的BrdU阳性细胞数(cells/mm)而显示的柱状图(对照对壬烯醛添加、壬烯醛添加对各评价对象物质的Dunnet检验,*P<0.05,**P<0.01)。
具体实施方式
壬烯醛(2-壬烯醛)为具有以下结构的不饱和醛,在本说明书中是指反式体(t-2-壬烯醛)。
虽然报导了壬烯醛与老年臭、皮肤黄色化有关系(专利文献1~3),但是对皮肤带来何种作用并未进行充分的阐明。然而,本发明人等发现,壬烯醛引起以皮肤变薄为代表的皮肤损伤。进一步,本发明人等发现,苯甲醛、二氢月桂烯醇、芳樟醇、苯基乙基醇、乙酸苄酯、和茴香醛这样的壬烯醛掩蔽剂显示抑制由壬烯醛引起的皮肤损伤的作用。本发明是基于这样的发现。
所谓壬烯醛掩蔽剂,是指具有掩蔽由壬烯醛引起的臭的壬烯醛掩蔽作用的物质。所谓壬烯醛掩蔽作用,是指遮盖由壬烯醛引起的不适的臭。
嗅觉是指,一旦在嗅上皮的嗅觉细胞中存在的嗅觉受体接受气味物质,则通过离子通道的作用而转变为电信号,该信号从嗅神经传向脑,在脑中作为气味而被识别。作为离子通道,存在于嗅细胞的纤毛膜的非选择性离子通道即环状核苷酸门控离子通道(cyclicnucleotide-gated ion(CNG)channels,以下称为CNG通道)作用,在这里也被各种气味分子结合(非专利文献1)。
因此,在本发明中,所谓壬烯醛掩蔽作用,可以为与壬烯醛结合、通过其它手段减少或阻止壬烯醛对CNG通道的结合、减少或阻止通过壬烯醛对嗅觉受体结合而产生的电信号等。例如,在非专利文献1中,报导了苯甲醛、二氢月桂烯醇、芳樟醇、苯基乙基醇、乙酸苄酯、茴香醛等物质的对壬烯醛的电信号减少率(current reduction rate(%))和掩蔽分数高。因此,作为本发明的壬烯醛掩蔽剂,虽然没有限定,但是可以使用通过非专利文献1所记载那样的方法测定的对壬烯醛的电信号减少率、掩蔽分数高的物质。或者,可以使用已知具有壬烯醛掩蔽作用的、例如专利文献1、2等所记载那样的公知的物质,也可以通过使用臭气判定士、特定的专门小组的各种感官试验这样的方法、或调查对壬烯醛的结合性、结合方式这样的方法等来探索壬烯醛掩蔽作用高的物质进行使用。
本发明的皮肤损伤抑制剂含有上述那样的壬烯醛掩蔽剂作为有效成分。本发明的皮肤损伤抑制剂和壬烯醛掩蔽剂(以下有时将它们总称为“本发明的剂”)可以单独含有上述有效成分的任1种,也可以以任意的组合和比率含有2种以上。
皮肤损伤没有限定,可举出由包含人的动物的皮肤的变薄和/或皮肤细胞增殖抑制引起的皮肤损伤。通过本发明人等证明了如果在皮肤模型中添加壬烯醛则会使皮肤变薄以及抑制皮肤细胞增殖。如果抑制皮肤细胞增殖和/或皮肤变薄,则会有皱纹、萎缩、松弛、皮肤老化、弹性降低、皮肤功能降低、对疲劳、外部刺激的耐性的降低等不良影响。如果抑制由壬烯醛引起的皮肤损伤,则可期待预防/改善皱纹、萎缩、松弛、皮肤老化等、以及皮肤弹性、皮肤功能、耐性等的改善这样的效果。
本发明的皮肤损伤抑制剂,可以认为是壬烯醛掩蔽剂经由壬烯醛掩蔽而抑制皮肤变薄等损伤和/或由细胞增殖抑制等引起的损伤。虽然其作用机理未被阐明,但是可以认为可能与下列内容相关,即通过壬烯醛掩蔽剂与壬烯醛结合等这样的手段会减少或阻止壬烯醛对CNG通道的结合、或减少或阻止壬烯醛对嗅觉受体结合而产生的电信号。
在一实施方式中,本发明的剂含有选自苯甲醛、二氢月桂烯醇、芳樟醇、苯基乙基醇、乙酸苄酯、和茴香醛组成的组中的1个或多个化合物作为有效成分或由这样的化合物构成。
苯甲醛(别名:苯甲醛)为具有以下结构的芳香族醛。苯甲醛可以人工合成,也可以使用市售品,此外,由于存在于扁桃、杏、桃的种子等天然物中因此可以以它们的精油、提取物的形态使用。
二氢月桂烯醇(别名:2,6-二甲基-7-辛烯-2-醇)为具有以下结构的有机化合物。二氢月桂烯醇可以人工合成,也可以使用市售品,也可以以天然物的精油、提取物的形态使用。
芳樟醇为具有以下结构的单萜醇。可以为R体、S体、外消旋体中的任一形态。芳樟醇可以人工合成,也可以使用市售品,由于存在于红木、橙花、薰衣草、香柠檬、鼠尾草、芫荽等因此也可以以它们的精油、提取物的形态使用。
苯基乙基醇(别名:2-苯基乙醇、2-苯基乙基醇、β-苯基乙基醇)为具有以下结构的芳香族醇。苯基乙基醇可以人工合成,也可以使用市售品,由于存在于蔷薇等中因此也可以以它们的精油、提取物的形态使用。
乙酸苄酯为具有以下结构的酯。乙酸苄酯可以人工合成,也可以使用市售品,由于存在于茉莉、依兰、栀子、其它许多花等中因此也可以以它们的精油、提取物的形态使用。
茴香醛(别名:对茴香醛,4-甲氧基苯甲醛)为具有以下结构的有机化合物。茴香醛可以人工合成,也可以使用市售品,由于存在于茴芹等中因此也可以以它们的精油、提取物的形态使用。
在使用精油的情况下,可以使用使上述植物体的花、叶、果皮、树皮、根、种子等干燥而通过水蒸气蒸馏法、压榨法、溶剂提取法等任意的方法而获得的精油。在使用提取物的情况下,提取方法没有特别限定,可以使用通过使用了乙醇等低级醇、己烷等有机溶剂、或己烷/乙醇这样的它们的混合溶剂的提取法而获得的提取物。通过精油/提取操作,可以获得包含有效成分的精油/提取物,可以直接使用,但也可以施加灭菌、洗涤、过滤、脱色、脱臭等惯用的精制处理后使用。此外,可以根据需要进行浓缩或稀释后使用。
本发明的剂也可以制成将上述有效成分与1种或2种以上其它成分例如赋形剂、载体和/或稀释剂等组合了的组合物。组合物的组成、形态是任意的,只要根据有效成分、用途等条件来适当选择即可。该组合物可以根据其剂型通过与赋形剂、载体和/或稀释剂等和其它成分适当组合了的处方使用常规方法来制造。
例如,本发明的剂以皮肤变薄的预防/改善、皱纹、萎缩、松弛、皮肤老化等的预防/改善、皮肤弹性、皮肤功能、耐性等的改善等作为目的,能够混配于化妆品、准药品、药品、功能性食品等组合物。在混配于化妆品的情况下,可以混配于防晒、化妆水、美容液、美容霜、护理液等被应用于皮肤的任意的化妆品中。优选混配于可以直接应用于皮肤的皮肤外用剂。本发明的剂可以在不损害其效果的范围,根据需要适当混配化妆品、药品等组合物所使用的任意混配成分。作为上述任意混配成分,可举出例如,油分、表面活性剂、粉末、色料、水、醇类、增稠剂、螯合剂、聚硅氧烷类、抗氧化剂、紫外线吸收剂、保湿剂、香料、各种药效成分、防腐剂、pH调节剂、中和剂等。例如,可以包含促进壬烯醛掩蔽作用、皮肤损伤抑制的其它药效成分等。
在将本发明应用于化妆品、药品、准药品等皮肤外用剂的情况下,本发明的剂或组合物中的壬烯醛掩蔽剂,只要不损害本发明的壬烯醛掩蔽作用,就没有限定,可以根据种类、目的、形态、利用方法等来适当确定。例如,在化妆品总量中,可以将选自苯甲醛、二氢月桂烯醇、芳樟醇、苯基乙基醇、乙酸苄酯、和茴香醛组成的组中的1个或多个化合物等壬烯醛掩蔽剂以例如0.0001~0.001重量%、0.001~0.005重量%、0.005~0.01重量%、0.01~0.02重量%、0.02~0.05重量%、0.05~0.1重量%、0.1~1.0重量%、1.0~10重量%、10~50重量%、50~100重量%等任意的比例混配。
然而,本发明的剂、组合物能够采用的形态不限定于上述剂型、形态。
此外,本发明也提供通过施与本发明的剂或组合物来抑制由壬烯醛引起的皮肤损伤的方法。本发明的方法是以美容作为目的的方法,不是通过医师、医疗从业者进行的治疗。
施与本发明的剂或组合物的对象可以为客观或主观确认到由壬烯醛引起的皮肤损伤的对象,也可以为希望想要预防由壬烯醛引起的皮肤损伤的对象。例如,可以为判断壬烯醛量多、肤色黄色化、变薄、观察到细胞增殖的降低、具有老年臭等的对象,或者,也可以为介意老年臭、由壬烯醛引起的皮肤损伤例如皮肤变薄、皱纹、萎缩、松弛、皮肤弹性降低等的对象。
此外,本发明也提供以壬烯醛掩蔽作用作为指标的、皮肤损伤抑制剂的筛选方法。本发明的筛选方法可以包含下述工序:测定候选药剂的壬烯醛掩蔽作用的工序;基于候选药剂的壬烯醛掩蔽作用,来选择皮肤损伤抑制剂的工序。通过本发明的方法,能够进行关于候选药剂是否具有抗光老化效果的筛选,能够进行制品开发、新的肌肤护理的提出。
实施例
接下来通过实施例进一步详细地说明本发明。另外,本发明不受此限定。
实验1:恶臭物质的评价
实验1-1:恶臭物质的调制
作为具有恶臭的物质,使用了下述公知物质。
表1
实验1-2:由恶臭物质引起的对皮肤的作用
为了确认在实验1-1中调制出的恶臭物质对皮肤的作用,进行了以下实验。
将人表皮细胞(4000个)利用Humedia-KG2(クラボウ)培养基在37℃下培养3天后,将实验1的物质以成为50μM的方式添加到培养基中。在对照中添加了相同量的作为溶剂的乙醇。添加后在37℃下培养24小时,计数添加后的细胞数。通过以下式子计算添加了物质时的细胞数相对于对照的细胞数的比例(%),求出生存率。
将结果示于图1中。如图1所示那样显示出与其它恶臭物质相比,如果使用壬烯醛则细胞生存率显著减少,对皮肤细胞具有毒性。
实验2:由壬烯醛浓度的不同引起的细胞毒性的评价
接下来,将在实验1中观察到毒性的壬烯醛以各种浓度(0μM、5μM、10μM、25μM、50μM)使用,除此以外,通过与实验1-2同样的方法求出细胞生存率,由此调查了由壬烯醛引起的细胞毒性的浓度依赖性。
将结果示于图2中。如图2所示那样,显示出壬烯醛的浓度越高则细胞生存率越显著减少,壬烯醛的细胞毒性依赖于浓度。
实验3:具有壬烯醛掩蔽作用的物质的评价
实验3-1:评价对象物质的调制
使用了下述具有或不具有壬烯醛掩蔽作用的物质作为评价对象物质
表2
*壬烯醛掩蔽作用的有无在非专利文献1中由电信号减少率和掩蔽分数这点来确认。
实验3-2:评价对象物质的细胞毒性
代替恶臭物质而使用各种浓度(5μM、50μM、500μM)的评价对象物质,除此以外,通过与实验1-2同样的方法求出细胞生存率,由此调查了评价对象物质的细胞毒性。
将结果示于图3中。由图3确认了,除β-二氢大马酮以外的上述评价对象物质不具有细胞毒性。
实验3-3:评价对象物质的由壬烯醛引起的皮肤损伤抑制效果
使用5μM的评价对象物质和各种浓度(5μM、50μM、500μM)的壬烯醛,除此以外,通过与实验1-2同样的方法求出细胞生存率,由此调查了评价对象物质的由壬烯醛引起的皮肤损伤抑制效果。
将结果示于图4中。根据图4可知,如果仅添加壬烯醛,则细胞生存率浓度依赖性地减少,但如果添加具有壬烯醛掩蔽作用的物质,则抑制了细胞生存率的减少。另一方面,即使添加不具有壬烯醛掩蔽作用的物质,也未见这样的细胞生存率的减少的抑制。
实验4:使用了3D皮肤模型的由壬烯醛引起的皮肤损伤抑制效果
实验4-1:3D皮肤模型的制作
在用在DPBS中进行了50倍稀释的CellStart(Invitrogen Life Technologies)液体涂布了的细胞培养插入物(φ12mm,多孔膜的平均孔径:0.4μm)中接种在CnT Prime培养基(CELLnTEC)溶液中进行了稀释的人表皮细胞细胞(2.2×105个/500μl),将CnT Prime培养基(CELLnTEC)溶液1ml加入到插入物下并在37℃下培养3天。然后,将插入物上的培养基用加入了维生素C(50μg/ml)的CnT-PR-3D培养基(CELLnTEC)置换500μl,将插入物下的培养基置换1ml,在37℃下培养了1天。1天后,吸取插入物上的培养基,将插入物下的培养基置换成加入了维生素C(50μg/ml)的CnT-PR-3D培养基(CELLnTEC)500μl,在37℃下培养了1天。将该作业进行8天从而构建3D皮肤模型。
实验4-2:通过皮肤厚评价对象物质的由壬烯醛引起的皮肤损伤抑制效果
在实验4-1中制作的皮肤模型的皮肤模型完成的3天前仅添加50μM壬烯醛、或50μM壬烯醛和50μM的各种评价对象物质,进而在对照中添加相同量的溶剂乙醇,在37℃下培养了3天。
将结果示于图5、6中。由这些图可知,如果添加壬烯醛,则观察到皮肤的变薄,但如果添加具有壬烯醛掩蔽作用的评价对象物质,则抑制了皮肤的变薄。另一方面,即使添加不具有壬烯醛掩蔽作用的物质,也未见这样的皮肤变薄的抑制。这些结果与实验2~3的结果一致。
实验4-3:通过增殖细胞数评价对象物质的由壬烯醛引起的皮肤损伤抑制效果
在实验4-1中制作的皮肤模型的皮肤模型完成的3天前仅添加50μM壬烯醛、或50μM壬烯醛和50μM的各种评价对象物质,进而在对照中添加相同量的溶剂乙醇,在37℃下培养2天,将BrdU一抗(Abcam社制,Ab6326)以成为50μM的方式添加于培养基,进一步在37℃下培养了1天。然后通过BrdU二抗(DAKO社制,#E0468)(1/5000稀释)将皮肤模型染色,计数BrdU阳性细胞的数,除以皮肤模型的长度(皮肤模型横向的全长)从而算出每1mm长度的BrdU阳性细胞数(细胞/mm)。
将结果示于图7、8中。由这些图可知,如果添加壬烯醛,则皮肤中的增殖细胞数减少而抑制了细胞增殖,但如果添加具有壬烯醛掩蔽作用的评价对象物质则抑制了增殖细胞数的减少。另一方面,即使添加不具有壬烯醛掩蔽作用的物质也未见这样的增殖细胞数减少的抑制。这些结果与实验2~3的结果一致。
通过以上结果可知,壬烯醛具有促进由皮肤细胞增殖抑制引起的皮肤损伤和/或皮肤变薄这样的皮肤损伤的作用,但如果使用苯甲醛、二氢月桂烯醇、芳樟醇、苯基乙基醇、乙酸苄酯、和茴香醛等壬烯醛掩蔽剂,则可以抑制这样的皮肤损伤。期待这些物质抑制皮肤损伤,进而预防/改善皱纹、萎缩、松弛、皮肤老化等,或改善皮肤弹性、皮肤功能、耐性等等。
Claims (1)
1.壬烯醛掩蔽剂用于制备皮肤损伤抑制剂的用途,所述皮肤损伤是由壬烯醛引起的皮肤变薄,所述壬烯醛掩蔽剂为选自苯甲醛、二氢月桂烯醇、芳樟醇、苯基乙基醇、乙酸苄酯、和茴香醛组成的组中的1个或多个化合物。
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