KR102082580B1

KR102082580B1 - 죽여 추출물의 안정화 방법 및 안정화된 죽여 추출물을 함유하는 화장료 조성물

Info

Publication number: KR102082580B1
Application number: KR1020180140514A
Authority: KR
Inventors: 하정욱
Original assignee: 하정욱
Priority date: 2018-11-15
Filing date: 2018-11-15
Publication date: 2020-02-27

Abstract

본 발명은 죽여 추출물의 안정화 방법 및 안정화된 죽여 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 구체적으로는 제형 내에서 죽여 추출물의 활성을 장기간 유지할 수 있도록 죽여 추출물을 베시클(vesicle) 내에 봉입하여 안정화하고 이를 화장료로 이용하는 기술에 관한 것이다.

Description

죽여 추출물의 안정화 방법 및 안정화된 죽여 추출물을 함유하는 화장료 조성물{Stabilizing method of Bambusae caulis in Taeniam extract and cosmetic composition containing the stabilized Bambusae caulis in Taeniam extract}

본 발명은 죽여 추출물의 안정화 방법 및 안정화된 죽여 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 구체적으로는 제형 내에서 죽여 추출물의 활성을 장기간 유지할 수 있도록 죽여 추출물을 안정화하고 이를 화장료로 이용하는 기술에 관한 것이다.

최근 미세먼지(particulate matter) 등 대기오염이 호흡기질환을 비롯한 여러 질환을 유발하고 있으며, 중국에서 건너 온 미세먼지가 우리나라의 국민건강에 악영향을 미치고 있다. 미세먼지는 입자의 크기에 따라 지름이 10㎛ 이하인 미세먼지 PM10과, 지름이 2.5㎛이하인 초미세먼지 PM2.5로 분류된다. 미세먼지는 연소작용에 의해 발생하는 이온인 황산염, 암모늄, 질산염과 금속화합물, 탄소화합물 등으로 이루어져 있다.

피부는 미세먼지와 직접적으로 접촉하는 가장 바깥쪽 장벽이다. PM2.5의 경우입자가 작아서 피부 표면에 접촉하면 각질세포의 세포내 Aryl hydrocarbon receptor(AhR) 분자와 함께 직접적인 상호작용에 의해 체내에 침투하기가 쉽다. 또한 AhR과 바인딩된 미세먼지는 신호 전달 기능을 통해 세포내 산화성 스트레스를 유도시킨다. 그리고 세포핵 내에서 염증반응의 전사인자인 nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells (NF-kB)와 activator protein 1 (AP-1)의 유도를 통해 prostaglandin E2 (PGE2) 및 cyclooxygenase (COX-2) 등 염증 인자가 체내에서 발현이 증가하게 된다. 이러한 과량 발현은 체내 염증으로 인해서 피부장벽도 손상된다.

피부 유지에 중요한 피부보습은 표피의 가장 바깥층에 존재하는 천연보습인자에 의해 유지되는데, 이것은 젖산, 요소, 구연산 및 유리 아미노산과 pyrrolidone carboxylic acid(PCA), urocanic acid와 같은 아미노산 유도체의 혼합물로 각질층 무게의 20~30%를 차지한다. 이 중 유리 아미노산은 표피 분화의 최종 단계에서 생성되는 특정 단백질인 필라그린의 대사산물이며, 필라그린은 표피 과립층에서 케라토히알린 과립을 형성하는 단백질인 프로필라그린의 형태로 존재하다가, 각질형성세포의 최종 분화과정에서 필라그린으로 분해된 후에 각질세포막을 형성할 때 케라틴 필라멘트를 응집하여 각질세포의 단단하고 편평한 구조를 만들어 피부장벽에서 벽돌의 역할을 수행하게 된다. 그리고 각질층에서 각질세포 단백질막을 구성하는 단백질로는 로리크린(loricrin)이 있다. 각질세포단백질막을 구성하는 단백질 중 로리크린 (loricrin)이 가장 많은 70%를 차지하고 있고 인볼루크린(involucein)은 2%, 그 외의 단백질은 대부분 10% 미만을 구성한다. 하지만 이러한 피부장벽의 기능도 외부로부터 침투된 미세먼지에 쉽게 노출되고, 염증반응 때문에 손상되는데, TSLP(thymic stromal lymphopoietin)는 알레르기 염증반응의 master switch라고도 불리는데 비만세포, 호염구, 호산구 등 피부염증을 일으키는 중요한 세포에 영향을 주고 선천면역 및 후천면역 반응 모두에 영향을 주며, Th2 면역반응을 유도하여 피부장벽 기능에 문제를 야기시킨다. 그리고 다양한 자극에 의해 피부 각질세포 등으로부터 TARC(Thymus and activation regulated chemo kine)의 생산이 유도 및 증가되며 이때 생산된 TARC가 병변 국소 부위로 Th2 세포들을 불러들여 장벽손상의 기능이 악화가 된다.

이제까지 화장품의 소재로서 사용된 원료들은 단순히 활성만을 억제하는 것이 대부분이었기 때문에, AhR에 바인딩된 미세먼지로부터 세포 내 염증 반응 및 피부장벽 기능 약화에 대해 알아보고자 했으며 그 발현이 유도되는 mRNA 발현 양 및 활성을 조절하고자 노력하였다.

죽여(竹茹, Bambusae Caulis in Taeniam)는 솜대, 왕대 또는 기타 동속 근연식물의 겉껍질을 제거한 중간층이고, 생약명이 죽여이며 식물명으로는 솜대 또는 왕대이다. INCI 명으로 왕대는 Phyllostachys Bambusoides Extract, Phyllostachys Bambusoides Juice, Phyllostachys Bambusoides Rhizome Extrac가 있으며, 솜대는 Phyllostachys Nigra Extract, Phyllostachys Nigra Juice(중국), Phyllostachys Nigra Leaf Extract(중국), Phyllostachys Nigra Stem Extract, Phyllostachys Nigra Stem Powder가 있다. 이 중 중국리스트에 INCI 명도 2종이 있으므로 중국을 비롯하여 해외로 수출하는 데에 문제가 없어 국내 제품 출시 및 해외 수출에도 기여할 것으로 기대된다. 또한 죽여는 폐열로 인한 해수와 가래, 담열로 인한 담과 위 기능 부조화로 가슴이 답답하고 잠을 못 이룰 때 하는 구토, 위열과 위허로 인한 구토, 딸꾹질, 임신구토에 효과적이며 태아를 편안하게 하는 효능이 있고 약리작용으로 대장균 등에 강력한 억제작용이 보고되어 있으며 동의보감에는 구토 및 해열, 불면증, 거담 등의 증상에 효능이 있는 것으로 알려져 있다.

죽여에 대한 국내 연구로는 각질세포에서 자외선 B가 유도한 세포 사멸, 산화적 스트레스 및 matrix metalloproteinase 발현에 대한 죽여 추출물의 영향, 죽여의 멜라닌 생성억제 효과 및 관련 단백질 동향분석 등이 있으며, 해외 연구 중에는 항염 효과에 관련된 논문, 콜레스테롤 감소에 의한 다이어트 효과 등이 있다. 현재까지 죽여 추출물의 안정화나 미세먼지로 유발되는 염증 및 피부장벽 기능 약화를 개선하는 죽여 추출물의 효과에 대한 연구는 전무한 실정이다.

한편, 최근에 화장품이나 의약품의 유효성분의 안정성을 유지하면서 효율적으로 피부에 흡수시킬 수 있는 피부경피흡수시스템에 대한 연구도 활발하게 이루어지고 있다.

일 예로서 리포좀은 생체막의 주요성분인 인지질로 만들어지며 자기 스스로 회합하는 콜로이드 입자들의 구형 인지질 베지클로 1960년대 초 Alec Bangham은 물 속에서 인지질 베지클 구조로 형성되는 것을 처음 발견하였으며, 친수성 부분과 친유성 부분을 가진 양친매성 분자의 상호 작용에 의해 자발적으로 정렬된 구조를 만든다. 인지질은 생체막의 주요 구성성분이기 때문에 리포좀의 인지질막 또한 생체막과 유사한 생리학적 기능 및 특성을 나타내며 피부 친화적이며 안정성이 우수하기 때문에 제약 및 화장품 분야 등에서 효과적인 유효성분 전달체로써 응용되고 있다. 그런데 기존의 에멀젼 제형이나 리포좀 제형이 각각 지용성 또는 수용성 성분의 봉입만 가능하거나, 양쪽성 약물의 봉입에 한계가 있었으므로 보다 다양한 종류의 활성성분을 담지 가능하고 경피 투과성이 높은 시스템에 대한 요구가 있어왔다.

본 발명자들은 천연소재로부터 화장품으로의 응용 가능성을 연구하는 과정에서 죽여 추출물이 미세먼지 등으로부터 유발되는 피부 염증을 억제하고, 피부 장벽강화효과가 우수하다는 것을 확인하였으며, 이를 특정 방법으로 안정화하여 제형 내에 첨가하는 경우에 그 활성이 장기간 유지되며 경피흡수가 촉진된다는 것을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

(0001) 대한민국 공개특허 10-2001-0018665(2001.03.15.) (0002) 대한민국 공개특허 10-2004-0091858(2004.11.02.)

본 발명은 죽여 추출물을 안정화하는 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.

또한 본 발명은 상기 방법에 의하여 안정화된 죽여 추출물을 함유하여 피부염증완화 및 피부장벽강화 효과가 우수한 화장료 조성물을 제공하는 것을 다른 목적으로 한다.

상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 따르면, (A)세척 건조된 죽여에 10~30배 중량의 용매를 가하여 추출하는 단계; (B)잔사 제거 후 용매를 제거하고 농축하여 죽여 추출물을 제조하는 단계; (C)글리세릴올리에이트(Glyceryl Oleate) 82~88 중량%, 폴리에틸렌-폴리프로필렌 글리콜(Polyethylene-polypropylene glycol, Pluronic F127) 8~15 중량% 및 에틸헥실글리세린(Ethylhexylglycerin) 2~4 중량%를 혼합하고, 80~100℃, 500~1000bar조건에서 마이크로 플루다이저를 사용하여 베시클(vesicle) 베이스를 제조하는 단계; 및 (D)상기 베시클(vesicle) 베이스를 30~50℃로 냉각한 후, 상기 죽여 추출물과 정제수를 첨가하고 500~1000bar 조건에서 마이크로 플루다이저에 통과시키는 단계를 포함하는 죽여 추출물의 안정화 방법이 제공된다.

상기 (A)단계에서 용매는 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올(예를 들면 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올), 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 에틸 아세테이트, 클로로포름, 부틸 아세테이트, 디에틸에테르, 디클로로메탄 및 헥산으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 것이며, 바람직하게는 70% 에탄올이다.

상기 (D)단계에서 죽여 추출물은 베시클 베이스 전체 중량에 대하여 0.1 ~ 5 중량%의 비율로 첨가되는 것이 바람직하다.

상기 다른 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 따르면, 상기 방법에 의하여 안정화된 죽여 추출물을 전체 중량에 대하여 5~20 중량% 함유하는 화장료 조성물이 제공된다.

상기 화장료 조성물은 피부염증 개선용 또는 피부장벽 강화용인 것을 특징으로 한다.

본 발명에 따라 안정화된 죽여 추출물은 제형 내에서 안정성이 우수하며, 안정화된 죽여 추출물을 함유하는 화장료 조성물은 피부염증 개선 및 피부장벽 강화효과가 우수하다.

이하, 본 발명을 더욱 상세히 설명한다.

본 발명에 따르면, (A)세척 건조된 죽여에 10~30배 중량의 용매를 가하여 추출하는 단계; (B)잔사 제거 후 용매를 제거하고 농축하여 죽여 추출물을 제조하는 단계; (C)글리세릴올리에이트(Glyceryl Oleate) 82~88 중량%, 폴리에틸렌-폴리프로필렌 글리콜(Polyethylene-polypropylene glycol, Pluronic F127) 8~15 중량% 및 에틸헥실글리세린(Ethylhexylglycerin) 2~4 중량%를 혼합하고, 80~100℃, 500~1000bar조건에서 마이크로 플루다이저를 사용하여 베시클(vesicle) 베이스를 제조하는 단계; 및 (D)상기 베시클(vesicle) 베이스를 30~50℃로 냉각한 후, 상기 죽여 추출물과 정제수를 첨가하고 500~1000bar 조건에서 마이크로 플루다이저에 통과시키는 단계를 포함하는 죽여 추출물의 안정화 방법이 제공된다.

먼저 죽여를 세척을 통해 이물질을 제거하고 건조시켜 사용한다. 준비된 죽여를 용매로 추출한다. 상기 용매로는 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올(예를 들면 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올), 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 에틸 아세테이트, 클로로포름, 부틸 아세테이트, 디에틸에테르, 디클로로메탄 및 헥산으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 것이 사용된다.

열수 추출, 침적 추출 또는 초임계 추출 방법과 같은 통상의 방법에 의해 추출할 수 있지만, 30~50℃에서 2~5일 동안 70% 에탄올에 침적하여 추출하는 것이 수율이나 피부개선활성에 있어서 더욱 바람직하다.

본 발명의 일 구체예에 따르면 상기 방법에 의하여 얻어진 추출물을 1~2㎛ 여과지로 여과한 후, 회전감압농축기(Rotary vaccum evaporator)를 이용하여 용매를 제거하고 추출물을 농축한다. 이때 수득양은 추출에 사용한 죽여의 3~7%이며 갈색의 점성이 있는 상태이다.

상기 죽여 추출물을 안정화하기 위한 베시클(vesicle) 베이스를 준비한다.

상기 베시클(vesicle) 베이스를 제조하기 위해 글리세릴올리에이트 82~88 중량%, 폴리에틸렌-폴리프로필렌 글리콜(Polyethylene-polypropylene glycol, Pluronic F127) 8~15 중량% 및 에틸헥실글리세린(Ethylhexylglycerin) 2~4 중량%를 혼합한다. 마이크로 플루다이저를 사용하여 80~100℃에서 500~1,000bar 압력으로 베시클(vesicle) 베이스를 제조한다.

이렇게 제조한 베시클 베이스를 30~50℃로 냉각하고, 앞서 제조한 죽여 추출물과 정제수를 첨가한다. 이어서 500~1000bar의 압력으로 마이크로 플루다이저에 통과시켜 죽여 추출물을 베시클 내에 봉입하여 안정화한다. 이때, 죽여 추출물은 상기 베시클 베이스에 대하여 0.1 ~ 5 중량%의 비율로 첨가되는 것이 바람직하다. 정제수는 상기 베시클 베이스에 대하여 15~25 중량%의 비율로 사용될 수 있다.

이와 같은 방법에 의하여 안정화된 죽여 추출물은 제형 내에서 장기간 활성을 유지하는 것을 확인하였다. 상기 안정화된 죽여 추출물은 항염 관련 인자인 AhR의 발현 억제(시험예 2), NF-kB 발현 억제(시험예 3) 및 PGE2의 발현 억제 (시험예 4) 활성이 우수하여 피부염증개선활성이 우수하고, 피부장벽 관련 인자인 FLG의 발현 증가(시험예 5), LOR의 발현 증가(시험예 6) 효과가 우수하여 피부장벽강화활성이 우수함을 확인할 수 있었다. 특히 미세먼지로 유발된 염증 및 피부장벽기능 약화에 대해서 그 활성이 우수하였다.

유효성분으로서의 상기 안정화된 죽여 추출물은 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 5~20 중량% 함유된다. 상기 화장료 조성물은 피부염증개선용 또는 피부장벽강화용으로 사용될 수 있다.

상기 화장료 조성물은 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없으며, 예를 들면, 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지 크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더 또는 아이섀도의 제형으로 이루어질 수 있다.

또한, 각 제형의 화장료 조성물에 있어서, 다른 성분들을 기타 화장료의 제형 또는 사용목적 등에 따라 임의로 선정하여 배합할 수 있다. 예를 들어, 착색제(색소), 착향제(향료), 현탁화제, 유화제, 용해보조제, 안정제, 등장제, pH조절제, 점도조절제, 용제 등을 포함할 수 있다. 또한 본 발명의 화장료 조성물은 안정화된 죽여 추출물 이외에 피부염증개선 및 피부 장벽강화 효과를 나타내는 다른 유효 성분을 1가지 이상 포함할 수 있다.

[실시예]

이하, 하기의 실시예와 시험예들을 통하여 본 발명을 상세하게 설명하지만, 본 발명이 이 예들에 의하여 한정되는 것은 아니다.

비교예 1: 죽여 추출물 제조

세척 건조된 죽여 1kg을 70% 에탄올 15kg과 혼합하였다. 40℃에서 3일간 추출한 후 1㎛ 여과지로 잔사를 제거하였다. 상기 추출물을 회전감압농축기(Rotary vaccum evaporator)를 이용하여 용매를 제거하고 추출물을 농축하였다. 이때 47g의 죽여 추출물을 수득하였다.

이렇게 얻은 죽여 추출물 20g을 3/7의 Dipropyleneglycol과 정제수 혼합용매 1kg에 용해시키고 방부처리를 하여 시험에 사용하였다.

비교예 2: 죽여 추출물 제조

상기 비교예 1에서 제조한 죽여 추출물을 35℃에서 3개월간 보관한 죽여 추출물을 비교예 2로 하였다.

실시예 1: 안정화된 죽여 추출물 제조

글리세릴올리에이트 700g, Polyethylene-polypropylene glycol(Pluronic F127) 100g, Ethylhexylglycerin 20g을 혼합한 후, 마이크로 플루다이저를 사용하여 80℃에서 700bar로 베시클(vesicle) 베이스를 제조하였다. 이렇게 제조한 베시클 베이스를 35℃로 냉각하고 상기 비교예 1에서 제조한 죽여 추출물 2g과 정제수 178g을 첨가하여 700bar의 압력에서 마이크로 플루다이저에 통과시켜 안정화된 죽여 추출물을 제조하였다.

실시예 2: 안정화된 죽여 추출물 제조

상기 실시예1에서 제조된 안정화된 죽여 추출물을 35℃에서 3개월간 보관한 것을 실시예 2로 하였다.

시험예 1: 4-Hydroxybenzaldehyde 함량분석

죽여 추출물의 안정화 여부를 확인하고자 죽여 추출물의 대표적인 유효성분인 4-Hydroxybenzaldehyde(4-HBA)의 함량을 HPLC로 분석하였으며 그 결과를 표 1에 나타내었다.

시료명	4-HBA 함량(ppm)
비교예 1	58.6
비교예 2	35.2
실시예 1	58.3
실시예 2	58.4

상기 표 1에서 확인되는 바와 같이, 본 발명의 안정화 방법에 따라 안정화된 죽여 추출물은 3개월 경과 후(실시예 2)에도 유효성분의 함량변화가 없었으나, 비교예 2의 경우에는 유효성분의 함량이 현저히 감소하였음을 알 수 있다.

시험예 2: AhR 발현 억제 효과 확인

각질형성세포(HaCaT)를 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지를 이용하여 5×10⁵cell/well로 조절한 후, 12 well plate에 접종하고 36시간 동안 배양하였다. 배양한 뒤 시료와 PMs(25ppm)을 처리하고 24시간 동안 배양하였다. 배양된 세포에서 RNA를 추출하여 RT-PCR(Reverse transcription polymerase chain reaction)을 통해 AhR의 발현 억제 효과를 확인하였다. AhR 발현 억제율은 하기 식에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 표 2에 나타내었다. 대조군으로는DEX(Dexamethasone)을 사용하였다.

시료명	처리농도(%)	AhR발현량(%)	AhR 발현억제율(%)
Blank	0.0	100.00	0.00
비교예 1	3.0	80.27	19.54
비교예 2	3.0	88.08	12.79
실시예 1	3.0	75.54	23.46
실시예 2	3.0	74.67	24.33
DEX	0.05	71.11	27.82

상기 표 2에서 확인되는 바와 같이, 본 발명 실시예 1 내지 2의 안정화된 죽여 추출물은 비교예 1 내지 2의 죽여 추출물에 비하여 우수한 AhR 발현 억제 효과를 나타내었으며, 특히 경시에 따른 효능 안정성이 비교예보다 매우 우수함을 알 수 있다.

시험예 3: NF-kB 발현 억제효과 확인

각질형성세포(HaCaT)를 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지를 이용하여 5×10⁵cell/well로 조절한 후, 12 well plate에 접종하고 36시간 동안 배양하였다. 배양한 뒤 시료와 PMs(25ppm)을 처리하고 24시간 동안 배양하였다. 배양된 세포에서 RNA를 추출하여 RT-PCR(Reverse transcription polymerase chain reaction)을 통해 NF-kB의 발현 억제 효과를 확인하였다. NF-kB 발현 억제율은 하기 식에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 표 3에 나타내었다. 대조군으로는 DEX(Dexamethasone)을 사용하였다.

시료명	처리농도(w/v%)	NF-kB발현량(%)	NF-kB 발현억제율(%)
Blank	0.0	100.00	0.00
비교예 1	3.0	83.33	17.54
비교예 2	3.0	90.38	10.85
실시예 1	3.0	73.40	24.64
실시예 2	3.0	74.77	23.79
DEX	0.05	72.62	25.38

본 발명 실시예 1 내지 2의 안정화된 죽여 추출물은 비교예 1 내지 2의 죽여 추출물에 비하여 우수한 NF-kB 발현 억제 효과를 나타내었으며, 특히 경시에 따른 효능 안정성이 비교예보다 매우 우수함을 알 수 있다. 3개월이 경과한 후에도 대조군인 DEX와 유사한 억제 효과를 나타냈다.

시험예 4: PGE2 발현 억제 효과 확인

각질형성세포(HaCaT)를 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지를 이용하여 5×10⁵cell/well로 조절한 후, 12 well plate에 접종하고 36시간 동안 배양하였다. 배양한 뒤 시료와 PMs(25ppm)을 처리하고 24시간 동안 배양하였다. 배양된 세포에서 RNA를 추출하여 RT-PCR(Reverse transcription polymerase chain reaction)을 통해 PGE2의 발현 억제 효과를 확인하였다. PGE2 발현 억제율은 하기 식에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 표 4에 나타내었다. 대조군으로는 DEX(Dexamethasone)을 사용하였다.

시료명	처리농도(w/v%)	PGE₂발현량(%)	PGE₂발현억제율(%)
Blank	0.0	100.00	0.00
비교예 1	3.0	85.27	15.53
비교예 2	3.0	91.18	9.55
실시예 1	3.0	77.06	21.94
실시예 2	3.0	77.52	21.48
DEX	0.05	76.81	22.49

상기 표 4에서 확인되는 바와 같이, 본 발명 실시예 1 내지 2의 안정화된 죽여 추출물은 비교예 1 내지 2의 죽여 추출물에 비하여 우수한 PGE2 발현 억제 효과를 나타내었으며, 특히 경시에 따른 효능 안정성이 비교예보다 매우 우수함을 알 수 있다. 3개월이 경과한 후에도 대조군인 DEX와 유사한 억제 효과를 나타냈다.

시험예 5: Filaggrin 발현 효과 확인

각질형성세포(HaCaT)를 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지를 이용하여 5×10⁵cell/well로 조절한 후, 12 well plate에 접종하고 36시간 동안 배양하였다. 배양한 뒤 시료와 PMs(25ppm)을 처리하고 24시간 동안 배양하였다. 배양된 세포에서 RNA를 추출하여 RT-PCR(Reverse transcription polymerase chain reaction)을 통해 filaggrin의 발현 효과를 확인하였다. Filaggrin발현율은 하기 식에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 표 5에 나타내었다. 대조군으로는 R.A(Retinoic acid)을 사용하였다.

시료명	처리농도(w/v%)	Filaggrin발현율(%)
비교예 1	3.0	125.80
비교예 2	3.0	114.14
실시예 1	3.0	134.22
실시예 2	3.0	134.75
R.A	0.05	139.33

상기 표 5에서 확인되는 바와 같이, 본 발명 실시예의 안정화된 죽여 추출물은 비교예에 비하여 우수한 filaggrin 발현 효과를 나타내어 피부장벽강화효과가 우수함을 알 수 있었다. 3개월이 지난 후에도 그 활성이 그대로 유지될 정도로 경시에 따른 효능 안정성이 우수하였다.

시험예 6: Loricrin 발현 효과 확인

각질형성세포(HaCaT)를 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지를 이용하여 5×10⁵cell/well로 조절한 후, 12 well plate에 접종하고 36시간 동안 배양하였다. 배양한 뒤 시료와 PMs(25ppm)을 처리하고 24시간 동안 배양하였다. 배양된 세포에서 RNA를 추출하여RT-PCR(Reverse transcription polymerase chain reaction)을 통해 loricrin의 발현 효과를 확인하였다. Loricrin발현율은 하기 식에의해 산출되었고, 그 결과는 하기 표 6에 나타내었다. 대조군으로는 R.A(Retinoic acid)을 사용하였다.

시료명	처리농도(w/v%)	Loricrin발현율(%)
비교예 1	3.0	127.35
비교예 2	3.0	116.27
실시예 1	3.0	138.55
실시예 2	3.0	137.28
R.A	0.05	140.88

상기 표 6에서 확인되는 바와 같이, 본 발명 실시예의 안정화된 죽여 추출물은 비교예의 죽여 추출물에 비하여 우수한 loricrin 발현 효과를 나타내어 피부장벽강화효과가 우수함을 알 수 있었다. 3개월이 지난 후에도 그 활성이 그대로 유지될 정도로 경시에 따른 효능 안정성이 우수하였다.

제조 실시예 1: 안정화된 죽여 추출물을 함유하는 크림 제조

하기 표 7의 조성에 따라, 안정화된 죽여 추출물을 함유하는 크림을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

번호	성분	함량(중량%)
1	안정화된 죽여 추출물(실시예 1)	10.0
2	친유형 모노스테아린산글리세린	2.0
3	스테아릴알콜	2.2
4	스테아린산	1.5
5	밀납	1.0
6	폴리솔베이트 60	1.5
7	솔비탄스테아레이트	0.6
8	정화식물유	1.0
9	스쿠알란	3.0
10	광물유	5.0
11	트리옥타노인	5.0
12	디메치콘	1.0
13	소듐마그네슘실리케이트	0.1
14	글리세린	5.0
15	베타인	3.0
16	트리에탄올아민	1.0
17	소듐히아루로네이트	4.0
18	방부제, 향, 색소	미량
19	정제수	잔량
	합계	100.0

제조 실시예 2: 안정화된 죽여 추출물을 함유하는 토너의 제조

하기 표 8의 조성에 따라, 안정화된 죽여 추출물을 함유하는 유연 화장수를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

번호	성분	함량(중량%)
1	안정화된 죽여 추출물(실시예 1)	10.0
2	1,3-부틸렌글라이콜	5.2
3	올레일알코올	1.5
4	에탄올	3.2
5	폴리솔베이트 20	3.2
6	벤조페논-9	2.0
7	카르복실비닐폴리머	1.0
8	글리세린	3.5
9	향	미량
10	방부제	미량
11	정제수	잔량
	합계	100.0

시험예 7: 제형 안정성 시험

냉장 및 고온 안정성을 확인을 위해 상기 제조 실시예 1 내지 2의 화장료 조성물을 냉장(4℃) 내지 고온(40℃) 조건에서의 안정성 관찰을 위해 경시변화에 따른 분리현상을 관찰하여 표 9에 나타내었다.

보관온도	보관기간	제조 실시예1	제조 실시예 2
4℃	1주	○	○
	2주	○	○
	4주	○	○
40℃	1주	○	○
	2주	○	○
	4주	○	○

(○:변화없음 △:일부 분리 ×:분리)

상기 표 9에서 확인되는 바와 같이, 본 발명에 의한 제조 실시예 1 내지 2의 화장료 조성물은 장기 보관 안정성이 우수하게 나타났다.

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims

(A)세척 건조된 죽여를 30~50℃에서 2~5일 동안 10~30배 중량의 70% 에탄올에 침적하여 추출하는 단계;
(B)잔사 제거 후 용매를 제거하고 농축하여 죽여 추출물을 제조하는 단계;
(C)글리세릴올리에이트(Glyceryl Oleate) 82~88 중량%, 폴리에틸렌-폴리프로필렌 글리콜(Polyethylene-polypropylene glycol, Pluronic F127) 8~15 중량% 및 에틸헥실글리세린(Ethylhexylglycerin) 2~4 중량%를 혼합하고, 80~100℃, 500~1000bar조건에서 마이크로 플루다이저를 사용하여 베시클(vesicle) 베이스를 제조하는 단계; 및
(D)상기 베시클(vesicle) 베이스를 30~50℃로 냉각한 후, 상기 베시클 베이스 전체 중량에 대하여 0.1 ~ 5 중량% 비율의 죽여 추출물과 정제수를 첨가하고 500~1000bar 조건에서 마이크로 플루다이저에 통과시키는 단계를 포함하는 죽여 추출물의 안정화 방법.
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제1항에 의하여 안정화된 죽여 추출물을 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 5~20 중량% 함유하는 미세먼지로 인한 피부염증 개선용 화장료 조성물.
제1항에 의하여 안정화된 죽여 추출물을 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 5~20 중량% 함유하는 피부장벽 강화용 화장료 조성물.