CN114502185B - 骆驼刺植物提取物(变体)的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及制药业和医疗业，适用于医药领域，更具体地涉及用于新用途的植物骆驼刺的生物活性提取物的用途，以及涉及基于该提取物的药物组合物。提出了有效量的骆驼刺植物提取物用于预防人或动物的青光眼和大脑黑质的侵袭性病变以及用于降低人或动物的眼内压的用途，所述骆驼刺植物提取物包含聚合原花青素、类异戊二烯、黄酮类化合物和碳水化合物。还提出了显示类似活性并包含以上骆驼刺植物提取物的药物组合物。本发明可以预防青光眼和大脑黑质的侵袭性病变(帕金森病的进展)以及降低眼内压。
Description
发明的技术领域
本发明涉及制药业和医疗业，用于医药领域，更具体地涉及用于新用途的来自属于蝶形花科(Fabaceae)或豆科(Leguminosae)的骆驼刺(Alhagi pseudalhagi)植物的生物活性提取物的用途，特别是预防青光眼进展、避免大脑“黑质”的破坏性变化(帕金森病)以及降低眼内压的用途，并且本发明还涉及基于上述提取物的药物组合物。换言之，本发明提出了预防青光眼进展和避免大脑“黑质”的破坏性变化(帕金森病)以及降低眼内压的新方法。
本发明描述了一种包含上述提取物的药物组合物以及其作为活性剂的用途，所述活性剂具有以下特性：
——抗青光眼特性；和
——神经保护特性。
根据本发明的药物组合物以水溶液形式口服给药或以包含作为活性物质的干燥提取物的片剂的形式给药。根据本发明的药物组合物中的提取物的量可以取决于患者的状况、体重和年龄。
背景技术
现有技术已知法国第2949060号发明专利和俄罗斯联邦第2402345号专利，二者均被选择作为公开了被认为最接近本发明的类似技术方案的已知信息来源。具体而言，这些最接近的类似方案专利公开了来自属于蝶形花科(Fabaseae)或豆科(Leguminosae)的骆驼刺植物的生物活性提取物，基于所述提取物的药物和化妆品组合物，以及降低血清和动物器官中总胆固醇和甘油三酯水平的方法，降低脂质过氧化产物水平的方法，改善器官和组织中的抗氧化特性、微循环过程、能量供应以及因此改善代谢过程的方法，改善皮肤状况和增加胶原蛋白合成，以及促进伤口愈合的方法和减少皮肤炎症的方法。
作为实验和测试的结果，本发明的发明人发现了上述骆驼刺植物提取物的新的、先前未知的有用特性。
发明内容
本发明的技术效果提出了骆驼刺提取物的用途，并且还提供了由上述提取物制备的药物组合物，所述提取物具有预防青光眼进展、避免大脑“黑质”的破坏性变化(帕金森病进展)以及降低眼内压的活性(获得更广泛的要使用的手段)。
为了实现上述技术效果，本发明提出了来自骆驼刺植物的提取物的用途，并且还提出了提供具有预防青光眼进展、避免大脑“黑质”破坏性变化(帕金森病进展)和降低眼内压的活性的药物组合物。
此外，为了实现上述技术效果，本发明提出了骆驼刺植物的提取物用于预防人或动物受试者的大脑“黑质”的破坏性变化的用途，所述提取物包含含量为约16.03重量％的聚合原花青素，含量为约36.71重量％的类异戊二烯，含量为约8.0重量％的黄酮类化合物，余量为碳水化合物。
此外，为了实现上述技术效果，本发明提出了骆驼刺植物的提取物用于降低人或动物受试者的眼内压的用途，所述提取物包含含量为约16.03重量％的聚合原花青素，含量为约36.71重量％的类异戊二烯，含量为约8.0重量％的黄酮类化合物，余量为碳水化合物。
此外，本发明提出了具有预防青光眼进展、避免大脑“黑质”的破坏性变化(帕金森病进展)以及降低眼内压的活性的药物组合物，所述组合物包含来自骆驼刺植物的提取物，所述提取物包含有效量的含量为约16.03重量％的聚合原花青素，含量为约36.71重量％的类异戊二烯，含量为约8.0重量％的黄酮类化合物，余量为碳水化合物。
附图简述
图1.在图1中显示了正常动物中的视网膜和脉管系统半薄切片的40倍放大显微图像。使用1％四氧化锇溶液染色。被破坏的区域用黑线圈出。
图2.在图2中显示了实验性青光眼中的视网膜和脉管系统半薄切片的40倍放大显微图像。使用1％四氧化锇溶液染色。变化区域用黑线圈出。
图3.在图3中显示了在从实验第一天起注射提取物的情况下的视网膜和脉管系统半薄切片的40倍放大显微图像。变化区域用黑线圈出。
图4.在图4中显示了在从实验第60天起注射提取物的情况下的视网膜和脉管系统半薄切片的40倍放大显微图像。使用1％四氧化锇溶液染色。变化区域用黑线圈出。
图5.在图5中显示了正常动物中的视神经纤维半薄切片的40倍放大显微图像。使用1％四氧化锇溶液染色。
图6.在图6中显示了实验性青光眼中的视神经纤维半薄切片的40倍放大显微图像。使用1％四氧化锇溶液染色。
图7.在图7中显示了在从实验第一天起注射提取物的情况下的视神经纤维半薄切片的40倍放大显微图像。使用1％四氧化锇溶液染色。
图8.在图8中显示了具有大量微血管(MV)和小神经元(SN)的正常动物大脑黑质的半薄切片的40倍放大显微图像。使用1％四氧化锇溶液染色。
图9.在图9中显示了实验性青光眼中的大脑黑质半薄切片的40倍放大显微图像，其具有大量小型和中型神经元、空血管(EV)和无细胞区域(CFZ)。使用1％四氧化锇溶液染色。被破坏区域用黑线圈出。
图10.在图10中显示了在从实验第一天起注射提取物之后的大脑黑质半薄切片的40倍放大显微图像。显示了具有增色细胞质的大神经元和具有扩张的内腔的毛细血管分支和中型神经元。使用1％四氧化锇溶液染色。发生变化的区域用黑线圈出。
图11.在图11中显示了在从实验第60天起注射提取物之后的大脑黑质半薄切片的40倍放大显微图像。显示了具有“多汁”内皮(ENT)的扩张的毛细血管内腔(CL)，中型神经元(MN)的数量超过了大型神经元(LN)。使用1％四氧化锇溶液染色。发生变化的区域用黑线圈出。
图12.在图12中显示了眼内压变化动力学(М±m，n＝6)。
发明的实施方案
来自骆驼刺植物的生物活性提取物最初具有降血脂、抗氧化、抗缺氧作用，有助于增加细胞的ATP含量、糖原和氧化还原电位，从而改善器官和组织(如心肌、皮肤、肌肉组织)的代谢过程，以及具有伤口愈合、抗炎、水合、刺激胶原蛋白合成的特性以及改善皮肤状况的特性。
获得该物质的方法包括利用化学和制药工业中使用的各种溶剂对粉碎的整株植物(包括地上部分和根)进行提取，并通过使用超滤膜连续过滤进行纯化，所述溶剂包括水、醇(乙醇、甲醇、正丁醇、异丙醇、丙三醇、丙二醇、丁二醇)及其水溶液、丙酮、乙酸乙酯。
因此，骆驼刺植物提取物是一种生物活性物质的复合物，具有广泛的治疗和美容作用，这允许将提取物和基于该提取物的产品用于：
—降低动物血清和器官中总胆固醇和甘油三酯的水平；
—降低脂质过氧化产物的水平；
—改善器官和组织的微循环和能量供应，从而改善其代谢过程；
—改善水合作用和增加胶原蛋白合成；
—促进伤口愈合和缓解皮肤炎症。
可以使用整株植物和植物的部分，但优选使用植株的所有部分来获得目标产物。
当使用醇或丙酮的水溶液时，建议水浓度范围为0-50体积％。
当使用水与甲醇或乙醇的混合物进行提取时，优选使用由50-90体积％的醇和50-10体积％的水组成的混合物。由50体积％的乙醇或甲醇和50体积％的水组成的混合物是优选的。
当使用水与丙三醇、丙二醇或丁二醇的混合物提取时，优选使用由40-60体积％的丙三醇、丙二醇或丁二醇和60-40体积％的水组成的混合物。由50体积％丙三醇、丙二醇或丁二醇和50体积％的水组成的混合物是优选的。
当使用乙酸乙酯提取时，优选使用纯溶剂提取。
使用经典分析方法对所得提取物进行分析，即：
—特定化学反应；
—高效液相色谱法(HPLC)；
—薄层色谱法。
根据得到的结果，提取物中包含以下化合物：聚合原花青素(约16.03重量％)、类异戊二烯(约36.71重量％)、黄酮类化合物(约8.0重量％)、碳水化合物和其余部分(约39.26重量％)。
将根据本发明的提取物以治疗有效剂量给予人或动物受试者，所述剂量取决于患者的状况、年龄和体重。优选地，提取物的水溶液经口服给药或以注射剂的形式皮下、肌肉内或静脉内给药，或以包含作为活性物质的干燥提取物的片剂的形式给药。
目前，本发明的发明人发现上述骆驼刺植物提取物具有新的、先前未知的有用特性，特别是可以使用该提取物预防青光眼进展、避免大脑“黑质”的破坏性变化(帕金森病进展)以及降低眼内压，以及使用基于该提取物的药物组合物的可能性。
用于新用途的骆驼刺提取物的用途以及其新发现的生物活性的研究可由以下实施例支持，但这些实施例仅用于举例说明，并非将本发明限制于特定实施方案。
实施例
实施例1.抗青光眼和神经保护作用
在肾上腺素诱导的体重为2.5-3kg的青紫蓝兔的青光眼模型中研究提取物的抗青光眼活性。通过肌肉内注射肾上腺素(每隔一天注射0.1ml0.1％的溶液)诱导青光眼。注射肾上腺素3个月。从诱导病理的第一天起以及从实验的第60天起(即在形成青光眼之后)，以1ml的量以3.5％水溶液的形式给予提取物。
实验结束时，在浅乙醚麻醉下对动物进行断头处理，取出大脑黑质以及带有视神经的眼球。切除后立即将生物材料固定在2.5％的戊二醛在0.1M pH值7.4的磷酸盐缓冲液中的溶液中2-12小时，然后在磷酸盐缓冲液中清洗，使用1％的四氧化锇溶液进行预固定，在醇-丙酮中脱水后，倒入Epin和爱牢达环氧树脂(Araldite)的混合物中。
使用Reichert Yong公司生产的Ultracut牌超微切片机由获得的块状物制备半薄切片(1μm)。半薄切片用1％的亚甲基蓝碱性品红溶液进行染色。在Ultrastainer LKB微处理器上使用乙酸双氧铀和柠檬酸铅溶液使超薄切片形成反差。
从图1可以看出，正常动物的视网膜脉管系统含有大量口径不同的血管。脉络膜毛细血管层位于血管层上，接着是视网膜色素上皮细胞的第一层。兔的视杆细胞和视锥细胞层相当窄，单个细胞延伸到第一层中。边界膜是不连续的，形成格状膜，光感受器的外部部分穿过该格状膜。视网膜的外核层发育良好，由几排相当大的细胞核形成。在外核层和内核层之间是未充分呈现的外视网膜层。兔的神经节细胞层含有相当大的细胞核。神经纤维层发育良好。
在实验性青光眼中(图2)，在眼睛的脉管系统中存在水肿区和血管多态性。大多数血管都具有塌陷的内腔。在色素细胞层中注意到液泡出现，细胞核呈多态性，并且细胞核数量减少，细胞核分布呈多态性。神经节细胞层与内核层融合。在色素上皮细胞层中，这些细胞呈有序排列。它们的特征在于具有大细胞核的明显边界。视杆细胞和视锥细胞层显著增厚。
在从实验第1天起注射提取物的情况下(图3)，色素上皮细胞呈有序排列，其特征在于具有大细胞核的明显边界。视杆细胞和视锥细胞层显著增厚。外核层和内核层中的细胞核数量增加，并且细胞核紧密排列。外网状层和内网状层增厚。神经节细胞层与内核层难以区分。在神经纤维层中没有“无定形”区域被确定，完整性完全恢复。
从图4可以看出，在从实验第60天起注射提取物的情况下，在神经纤维层完整性基本得以保持以及视杆细胞和视锥细胞层增厚的条件下，在一些区域仍观察到无定形位点的存在。
对于视神经，其在正常动物中由无髓鞘神经纤维、少量毛细血管和支持性神经胶质组织组成。许多细胞核主要属于具有支持功能的细胞。纤维之间限定了无定形空间(图5)。
实验性青光眼导致神经纤维层中出现大液泡以及细胞核数量减少。微血管变窄(图6)。无髓鞘神经纤维之间的空间增加，这表明发生纤维间肿胀。
给予提取物导致视神经结构正常化。纤维间水肿减轻(图7)。微血管充满血液，“无定形”区域的体积比降低。
从图8可以看出，正常兔的大脑黑质的神经元有大、中、小三种类型。在中神经元尤其是大神经元中，轴突清晰可辨。在小神经元中，无法检测到轴突。大量不同口径的微血管位于此。许多微血管的内腔扩大，并在其中可见大量红细胞。在某些微血管中，尤其是在大口径的微血管中，内皮细胞具有立方体形状。它们位于轮廓分明的基底层上。
在实验性青光眼中对“黑质”形态进行的研究表明，神经元排列的体积和比密度降低(图9)。沿着缺乏这些细胞的区域，细胞出现局部聚集。同时，小细胞占主导地位。在某些位置出现了广泛的无定形区域，这是由渗出液聚集形成的。还检测到具有收缩内腔的微血管和位于其周围的均匀染色的皱缩神经元。
在从实验第一天起注射提取物的动物大脑切片中，发现大型神经元占优势(图10)。微血管网络显著增加，注意到神经元增大，着色特性强度显著增加，其相对体积比增加。其内腔非常宽。在较大口径的血管内腔中检测到红细胞。
在从实验第60天起注射提取物的动物大脑切片中，也发现神经元增大，着色特性强度增加，神经元的相对体积比增加，但程度较轻(图11)。未发现所谓的“无定形区域”—因为这些区域充满了中等口径的神经元。
实施例2.降低眼内压(IOP)
在实验性青光眼实验中，采用马克拉科夫(Maklakov)眼压计(砝码为10g)测量所有动物的眼内压(IOP)。首先将兔固定，头部保持水平，给予2％的利多卡因水溶液进行局部麻醉。对于麻醉，进行单次滴注，每只眼睛滴入2滴麻醉剂。在实验的第1天、第50天、第75天和第100天测量动物受试者双眼的IOP。使用波利亚科夫(Polyakov)标尺计算IOP。测量结果显示在图12中，并以mmHg表示。
一般来说，对治疗的积极反应的标准是与实验性青光眼相比眼内压下降30％或更多。从图12可以看出，在实验的第100天，与实验性青光眼相比，提取物使IOP平均降低31.8-38％，结果与正常动物的数据相当。在从实验第60天起给予提取物的组中，眼内压与病理相比降低了14-17.2％。
因此，从骆驼刺植物中获得的提取物能够预防青光眼的进展以及大脑“黑质”的病理形态变化(帕金森病)，使水动力和代谢过程正常化，并且有助于保护微血管网络以及维持神经元数量。
Claims (6)
1.骆驼刺植物提取物在制备用于预防青光眼进展的药物中的用途，所述骆驼刺植物提取物包含含量为16.03重量％的聚合原花青素、含量为36.71重量％的类异戊二烯、含量为8.0重量％的黄酮类化合物和余量为碳水化合物，所述骆驼刺植物提取物是利用化学和制药工业中使用的各种溶剂对粉碎的整株植物包括地上部分和根进行提取，并通过使用超滤膜连续过滤进行纯化获得的，其中所述溶剂选自：水、乙醇、甲醇、正丁醇、异丙醇、丙三醇、丙二醇、丁二醇、所述醇的水溶液、丙酮和乙酸乙酯。
2.基于骆驼刺植物提取物的药物组合物在制备用于预防青光眼进展的药物中的用途，所述药物组合物包含有效量的骆驼刺提取物，所述药物组合物以水溶液形式口服给药或以包含作为活性物质的干燥提取物的片剂的形式给药，所述骆驼刺植物提取物包含含量为16.03重量％的聚合原花青素、含量为36.71重量％的类异戊二烯、含量为8.0重量％的黄酮类化合物和余量为碳水化合物，所述骆驼刺植物提取物是利用化学和制药工业中使用的各种溶剂对粉碎的整株植物包括地上部分和根进行提取，并通过使用超滤膜连续过滤进行纯化获得的，其中所述溶剂选自：水、乙醇、甲醇、正丁醇、异丙醇、丙三醇、丙二醇、丁二醇、所述醇的水溶液、丙酮和乙酸乙酯。
3.骆驼刺植物提取物在制备用于预防大脑“黑质”的破坏性变化的药物中的用途，所述骆驼刺植物提取物包含含量为16.03重量％的聚合原花青素、含量为36.71重量％的类异戊二烯、含量为8.0重量％的黄酮类化合物和余量为碳水化合物，所述骆驼刺植物提取物是利用化学和制药工业中使用的各种溶剂对粉碎的整株植物包括地上部分和根进行提取，并通过使用超滤膜连续过滤进行纯化获得的，其中所述溶剂选自：水、乙醇、甲醇、正丁醇、异丙醇、丙三醇、丙二醇、丁二醇、所述醇的水溶液、丙酮和乙酸乙酯。
4.基于骆驼刺植物提取物的药物组合物在制备用于预防大脑“黑质”的破坏性变化的药物中的用途，所述药物组合物包含有效量的骆驼刺提取物，所述药物组合物以水溶液形式口服给药或以包含作为活性物质的干燥提取物的片剂的形式给药，所述骆驼刺植物提取物包含含量为16.03重量％的聚合原花青素、含量为36.71重量％的类异戊二烯、含量为8.0重量％的黄酮类化合物和余量为碳水化合物，所述骆驼刺植物提取物是利用化学和制药工业中使用的各种溶剂对粉碎的整株植物包括地上部分和根进行提取，并通过使用超滤膜连续过滤进行纯化获得的，其中所述溶剂选自：水、乙醇、甲醇、正丁醇、异丙醇、丙三醇、丙二醇、丁二醇、所述醇的水溶液、丙酮和乙酸乙酯。
5.骆驼刺植物提取物在制备用于降低眼内压的药物中的用途，所述骆驼刺植物提取物包含含量为16.03重量％的聚合原花青素、含量为36.71重量％的类异戊二烯、含量为8.0重量％的黄酮类化合物和余量为碳水化合物，所述骆驼刺植物提取物是利用化学和制药工业中使用的各种溶剂对粉碎的整株植物包括地上部分和根进行提取，并通过使用超滤膜连续过滤进行纯化获得的，其中所述溶剂选自：水、乙醇、甲醇、正丁醇、异丙醇、丙三醇、丙二醇、丁二醇、所述醇的水溶液、丙酮和乙酸乙酯。
6.基于骆驼刺植物提取物的药物组合物在制备用于降低眼内压的药物中的用途，所述药物组合物包含有效量的骆驼刺提取物，所述药物组合物以水溶液形式口服给药或以包含作为活性物质的干燥提取物的片剂的形式给药，所述骆驼刺植物提取物包含含量为16.03重量％的聚合原花青素、含量为36.71重量％的类异戊二烯、含量为8.0重量％的黄酮类化合物和余量为碳水化合物，所述骆驼刺植物提取物是利用化学和制药工业中使用的各种溶剂对粉碎的整株植物包括地上部分和根进行提取，并通过使用超滤膜连续过滤进行纯化获得的，其中所述溶剂选自：水、乙醇、甲醇、正丁醇、异丙醇、丙三醇、丙二醇、丁二醇、所述醇的水溶液、丙酮和乙酸乙酯。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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