FR2949060A1 - Extrait de la plante alhagi pseudalhagi, compositions le contenant et leurs utilisations - Google Patents
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Abstract
L'invention concerne un extrait de la plante d'Alhagi pseudalhagi comprenant des proanthocyanidines, des isoprénoïdes, des flavonoïdes et des glucides. Elle concerne également un procédé de préparation dudit extrait, ainsi que des compositions pharmaceutiques et cosmétiques contenant ledit extrait.
Description
-1- EXTRAIT DE LA PLANTE ALHAGI PSEUDALHAGI, COMPOSITIONS LE CONTENANT ET LEURS UTILISATIONS
L'invention se rapporte à l'industrie biochimique et médicale mais également au domaine de la cosmétologie. En particulier, l'invention se rapporte à un extrait biologiquement actif de la plante d'Alhagi pseudalhagi de la famille Fabaceae ou Leguminosae, à des compositions pharmaceutiques et cosmétiques contenant ledit extrait et à leurs utilisations. En particulier, l'extrait ou les compositions le contenant peuvent être utilisés : - comme moyen hypolipidémique pour diminuer le taux de cholestérol général et de triglycérides dans le sérum sanguin et les organes des animaux et de l'homme, - comme antioxydant pour diminuer la quantité des produits de peroxydation des lipides, - pour améliorer le processus de microcirculation, d'économie d'énergie et améliorer les propriétés anti-oxydantes chez l'homme et l'animal, - pour améliorer les processus métaboliques dans les organes et les tissus des animaux et de l'homme tels que par exemple, le myocarde, l'épiderme, le tissu musculaire, et permettre l'augmentation du contenu d'ATPh, de glycogène et du potentiel oxydant ù régénérateur des cellules, - pour améliorer la cicatrisation, - pour améliorer l'état des épidermes, et limiter les phénomènes inflammatoires de l'épiderme en particulier en hydratant et stimulant la synthèse du collagène, - comme moyen géroprotecteur.
L'extrait de la plante du désert telle que l'Ajuga turkestanica (plante vivace du Turkestan de la famille Labiae) est connu. Il contient des ecdistéroïdes et iridoïdes et peut être obtenu par extraction par des solvants ou un mélange de solvants contenant de l'eau, de l'alcool éthylique ou méthylique, du butylène glycol ou propylène glycol. Il peut être utilisé en cosmétologie comme moyen d'humidification de l'épiderme (FR 2 801 504).
L'invention se rapporte à un extrait de la plante d'Alhagi pseudalhagi contenant un ensemble de substances biologiques actives. Préférentiellement, les substances biologiques actives comprennent des proanthocyanidines, des isoprénoïdes et des flavonoïdes. Les extraits selon l'invention peuvent également 10 contenir des glucides et éventuellement d'autres composés. L'extrait de la plante d'Alhagi pseudalhagi selon l'invention peut préférentiellement comprendre environ de 10 à 20% en poids de proanthocyanidines, environ de 30 à 40% en poids d'isoprénoïdes, environ de 1 à 10 % en poids de flavonoïdes, des glucides et éventuellement d'autres composés. 15 Encore préférentiellement, l'extrait de la plante d'Alhagi pseudalhagi selon l'invention peut comprendre 16,03 % en poids de proanthocyanidines, 36,71 % en poids d'isoprénoïdes, 8,0 % en poids de flavonoïdes, ainsi que des glucides et éventuellement d'autres composés. L'extrait selon l'invention peut être obtenu par tous les procédés connus par 20 l'homme du métier. En particulier, l'extrait selon l'invention peut être obtenu par extraction. Les solvants utilisés pour l'extraction peuvent être choisis dans le groupe constitué des alcools, par exemple le méthanol, l'éthanol, le n-butanol et l'isopropanol, de la glycérine, du propylène glycol, du butylène glycol et leurs solutions aqueuses, de 25 l'acétone, de l'éthylacétate et de leurs mélanges. Préférentiellement, le solvant utilisé est de l'éthylacétate. Lors de l'extraction par de l'éthylacétate, on utilise avantageusement un solvant propre. Lorsque l'extraction est réalisée avec des solvants aqueux comprenant de l'alcool ou de l'acétone, la teneur en eau dans la solution est de préférence 30 inférieure ou égale à 50%. Lorsque l'extraction est réalisée avec des solvants aqueux à base de méthanol ou d'éthanol, le mélange utilisé est composé de préférence de 50-90 0/0 vol. d'alcool et 50-10 % vol. d'eau. De façon encore préférée, le mélange est composé de 50 % vol. d'éthanol ou de méthanol et 50 % vol. d'eau. 35 Lorsque l'extraction est réalisée avec des solvants aqueux à base de glycérine ou de propylène glycol ou de butylène glycol, le mélange utilisé est composé de préférence de 40-60 % vol. de glycérine ou de propylène glycol ou de -2- -3- butylène glycol et 60-40 % vol. d'eau. De façon encore plus préférée, le mélange est composé de 50 % vol. de glycérine ou de propylène glycol ou de butylène glycol et 50 % vol. d'eau. Il est possible d'utiliser une seule partie, plusieurs parties de la plante ou toutes les parties de la plante complète pour obtenir l'extrait selon l'invention.
Toutefois, il est préférable d'utiliser toutes les parties de la plante complète pour obtenir un extrait complet. L'extrait obtenu par les procédés selon l'invention peut être analysé en utilisant des méthodes analytiques classiques et notamment : - par réactions chimiques spécifiques ; - par chromatographie liquide haute performance (CLHP) ; - par chromatographie sur couches minces. L'extrait selon l'invention peut par exemple, être utilisé: - comme moyen hypolipidémique pour diminuer le taux de cholestérol général et de triglycérides dans le sérum sanguin et les organes des animaux et 20 de l'homme, - comme antioxydant pour diminuer la quantité des produits de peroxydation des lipides, - pour améliorer le processus de microcirculation, d'économie d'énergie et améliorer les propriétés anti-oxydantes chez l'homme et l'animal, 25 - pour améliorer les processus métaboliques dans les organes et les tissus des animaux et de l'homme tels que par exemple, le myocarde, l'épiderme, le tissu musculaire, et permettre l'augmentation du contenu d'ATPh, de glycogène et du potentiel oxydant ù régénérateur des cellules, - pour améliorer la cicatrisation, 30 - pour améliorer l'état des épidermes, et limiter les phénomènes inflammatoires de l'épiderme en particulier en hydratant et stimulant la synthèse du collagène, - comme moyen géroprotecteur. L'invention se rapporte en particulier à l'extrait selon l'invention pour son 35 utilisation pour diminuer le taux de cholestérol général et de triglycérides dans le sérum sanguin chez les animaux et l'homme. La quantité de l'extrait selon l'invention pour son utilisation pour diminuer le taux de cholestérol général et de -4- triglycérides dans le sérum sanguin chez les animaux et l'homme est préférentiellement autour de 50mg/ml, plus préférentiellement de 50 mg/ml. L'invention se rapporte également à l'extrait selon l'invention pour son utilisation pour diminuer la quantité des produits de peroxydation des lipides et également pour améliorer les propriétés anti-oxydantes et la microcirculation chez l'homme et les animaux. L'invention se rapporte également à l'extrait selon l'invention pour son utilisation pour améliorer les processus métaboliques dans les organes et les tissus de l'homme et des animaux. La quantité d'extrait selon l'invention pour son utilisation pour améliorer les processus métaboliques dans les organes et les tissus de l'homme et des animaux est préférentiellement autour de 10 mg/ml, encore préférentiellement de 10 mg/ml. L'invention concerne également l'extrait selon l'invention pour son utilisation pour améliorer l'état des épidermes et stimuler la formation de collagène chez l'homme et les animaux, ou pour son utilisation pour stimuler la cicatrisation de tissus chez l'homme ou chez les animaux. L'invention concerne également l'extrait selon l'invention pour son utilisation comme moyen géroprotecteur, c'est-à-dire comme moyen favorisant le prolongement de la vie. L'invention concerne également des compositions pharmaceutiques contenant l'extrait selon l'invention. Les compositions pharmaceutiques peuvent contenir des excipients pharmaceutiquement acceptables. La quantité d'extrait dans les compositions pharmaceutiques selon l'invention peut dépendre de l'état, de l'âge et du poids du patient à traiter. L'invention se rapporte également à des compositions cosmétiques contenant une quantité cosmétologiquement efficace d'extrait selon l'invention, en particulier en combinaison avec au moins un véhicule acceptable en cosmétique ou leur mélange. Le véhicule selon l'invention est préférentiellement choisi dans le groupe comprenant de l'hydroxyéthyl-urée, de l'huile d'olive, du cétéaryléthylhexanoate, de l'isopropylmyristate, de la glycérine, du propylène glycol, du polyacrylate de sodium, de l'isopropylisostéarate, une substance odorante de parfumerie, du carbamide, de l'alcool benzylique et du 2-méthyl-4-isothiazolone-3-one. -5- Les compositions cosmétiques selon l'invention contiennent de préférence environ 0,2% à 5 % en poids, préférentiellement entre 0,2 % à 5 % en poids d'extrait selon l'invention. Lors de l'utilisation en cosmétologie la composition cosmétique peut être sous n'importe quelle forme cosmétologiquement acceptable comme par exemple, des gels, lotions ou crèmes cosmétiques. De préférence, les compositions selon l'invention sont introduites sous forme de solution aqueuse, préférentiellement par voie orale ou sous la forme d'injection sous-cutanée, intramusculaire ou intraveineuse. Les doses préférées sont d'environ de 10 à 250 mg/kg du poids de la personne ou de l'animal. Les compositions cosmétiques selon l'invention peuvent également être utilisées pour stimuler la cicatrisation et la diminution de l'inflammation des tissus de l'homme et des animaux. Lorsque la composition est utilisée pour stimuler la cicatrisation et la diminution de l'inflammation des tissus de l'homme et des animaux, elle est alors appliquée de préférence sur la blessure ou à l'endroit de l'inflammation. Le procédé d'obtention de l'extrait d'Alhagi et l'étude de son activité biologique sont illustrés par les exemples suivants qui sont présentés pour illustration et sans limiter la portée de l'invention.
Brève description des dessins. Figure 1. La figure représente une vue microscopique de la biopsie de l'épiderme avec un grossissement X40. Elle montre l'influence de l'utilisation cutanée de l'extrait d'Alhagi durant 14 jours sur la biosynthèse de collagène.
Coloration selon la méthode modifiée Mallory. Fibres de collagène désignées par la flèche. Figure 2. La figure représente une vue microscopique de contrôle de la biopsie de l'épiderme avec un grossissement X40 sans utilisation de l'extrait d'Alhagi. Coloration selon la méthode modifiée Mallory.
Figure 3. La figure représente une vue microscopique de la biopsie de l'épiderme avec un grossissement X200. Elle montre l'influence de l'utilisation cutanée de l'extrait d'Alhagi durant 14 jours sur la biosynthèse de collagène. -6- Coloration selon la méthode modifiée Mallory. Fibres de collagène désignées par la flèche. Figure 4. La figure représente une vue microscopique de contrôle de la biopsie de l'épiderme avec un grossissement X200 sans utilisation de l'extrait d'Alhagi.
Figure 5. La figure représente l'impact de l'extrait selon l'invention sur le poids des rats irradiés (au cours de la période de la 1 e à la 50e semaine après l'irradiation).
Exemples Exemple 1. Obtention de l'extrait Un volume de 60 litres (17 kilogrammes) (0,5-0,8mm) de matière première écrasée sèche d'Alhagi a été plongé dans un extracteur et a été extrait par la méthode de l'infusion avec les solvants évoqués ci-dessus ou leur mélange. La proportion solvant / eau qui été utilisée est de 1:10 lors de l'utilisation d'éthanol, et de 1:4 en cas d'utilisation d'éthylacétate et de 1:2 en cas d'utilisation de méthanol et glycérine. L'extraction a été réalisée dans un intervalle de températures de 25 - 352C. L'extraction a été réalisée quatre fois, puis les extraits obtenus ont été réunis et filtrés à travers la couche d'une toile de coton. Ensuite, l'extrait a été condensé dans un appareil à vide ù vapeur pour éliminer le solvant. Le mélange a été refroidi jusqu'à la température ambiante. Le mélange refroidi a ensuite été filtré à travers une couche de toile de coton et un papier filtrant pour éliminer le dépôt. Le concentré ainsi obtenu a été dissous dans de l'eau et transmis dans une installation ultra-filtrante pour épuration des proanthocyanidines et isoprénoïdes.
Le concentré obtenu a été traité, en plus, par du charbon actif. Conformément aux résultats obtenus par la CLHP, l'extrait contient les composés suivants : proanthocyanidines (16,03 % en poids), isoprénoïdes (36,71 0/0 en poids), flavonoïdes (8,0 % en poids), glucides et autres (39,26 % en poids). Le produit final a été utilisé pour étudier son activité biologique.35 -7- Exemple 2. Effet hypolipidémique. L'activité hypolipidémique a été estimée selon l'effet hypocholestérinémique et hypo triglycéride de l'extrait chez les lapins de la race chinchilla. L'introduction dans l'estomac de lapins d'un poids de 2,5-3,0 kg, d'une solution de cholestérol dans de l'huile de coton (0,3g de cholestérol pour 1 kg de poids) a provoqué une athérosclérose expérimentale. Le cholestérol a été introduit durant 3 mois. L'extrait d'Alhagi (EDA) a été introduit sous la forme de solution aqueuse en dose de 50mg/kg durant les 4 dernières semaines. A la fin de l'expérience, les animaux ont été décapités sous anesthésie légère à l'éther. Le contenu de cholestérol général et de triglycérides dans le sérum sanguin a été déterminé sur un auto-analyseur AA-F1 de la société Techicon (USA), dans les tissus ù par des méthodes standards. Un clofibrate à dose thérapeutiquement optimale (250mg/kg) a été utilisé en guise de préparation contrôle. Tableau 1. Influence de l'extrait d'Alhagi sur le contenu de lipides chez les lapins 20 avec une athérosclérose expérimentale (M m ; n=6-8) Indice de Groupe Sérum Aorte Coeur Foie contenu sanguin relatif en 0/0 Cholestérol Contrôle 100,0 0,3 100,0 0,2 100.0 0,1 100,0 0,1 général EDA 23,6 0,2 52,6 0,2 76,9 0,1 66,7 0,1 Clofibrate 23,6 0,2 57,9 0,2 92,3 0,1 73,3 0,1 Triglycérides Contrôle 100,0 0,4 100,0 0,1 100,0 0,1 100,0 0,1 EDA 41,0 0,3 71,4 0,1 66,7 0,1 62,5 0,1 Clofibrate 50,0 0,4 78,6 0,1 73,3 0,1 75,0 0,1 Note : exactitude du contrôle (P<0,05) Comme on peut le voir dans le tableau 1, l'extrait d'Alhagi a diminué notablement la quantité de cholestérol général et de triglycérides dans le sérum 25 sanguin et les organes des animaux. L'extrait selon l'invention est plus efficace que le clofibrate, moyen hypolipidémique connu (à une dose de 250mg/kg) Exemple 3. Effet antioxydant L'estimation de l'effet antioxydant de l'extrait d'Alhagi a été réalisée dans les essais in vitro et in vivo. Il a été établi, dans le système in vitro, que l'extrait 10 d'alhagi à une concentration de 10-4g/mI a diminué la formation de MDA (malondiamide) dans l'homogénat du foie de 32,9% par rapport au contrôle (oxydation de peroxyde nette). En même temps, une augmentation de l'activité des enzymes de protection anti-oxydante û catalases et superoxydes dismutases a été observée. En outre, l'extrait, lors d'essais d'activité in vitro, n'a pas un effet 15 inférieur au moyen antioxydant connu (vitamine E) dont l'effet dans ce cas est de 36,8%. L'augmentation de l'action des enzymes est de 19,7 et 19,0 respectivement. En outre, pour l'étude de l'activité antiradicale on a utilisé une solution de 1,1-diphényl-2-picrylhydrazyle, dont la diminution de la densité optique a servi de valeur d'estimation pour évaluer la dégradation des radicaux 20 organiques. La capacité de l'extrait à présenter une activité SOD (superoxydedismutase) a été évaluée par la mesure de l'inhibition de la réaction d'oxydation du luminol par le radical superoxyde/anion généré par le système de la xanthine-xanthine oxydase, inhibition estimée par analyse par chimioluminiscence avec le 25 luminomètre 1251 Wallac de la société LKB. Les résultats de l'étude ont montré que l'extrait d'Alhagi (EDA) en dose de 10 mg/mi entraîne une haute activité antiradicale de 32 650 Microns. L'extrait Alhagi pseudalhagi possède une capacité à déséquilibrer le radical superoxyde, qui peut être liée soit à la présence de la SOD, soit à la présence de composant 30 de faible poids moléculaire possédant une activité SOD-similaire. L'inhibiteur spécifique de la SOD û le diéthyl-dithiocarbamate (DDTC) a été utilisé pour identifier la présence de la SOD dans l'extrait. Le DDTC n'a pas eu un impact tangible sur la réaction de déséquilibre du radical superoxyde ce qui prouve la présence des composants de faible poids moléculaire dans l'extrait, possédant 35 une activité SOD-similaire de 200 000 U/ml (à comparer : 1,0 mg de la SOD hautement purifié à l'activité de 400 000 U/ml). L'EDA possède donc une forte activité par rapport aux 02-radicaux. De plus, l'activité antiradicale de la substance -8- -9- contenue dans 1 ml d'extrait est équivalente à l'activité contenue dans 0,5 mg de SOD. L'effet antioxydant de l'EDA dans les essais in vivo a été estimée par des expériences sur des lapins mâles d'un poids de 2,5 3,0 kg testés dans des conditions d'un infarctus expérimental du myocarde obtenu via le bandage de l'artère coronaire basse gauche. Le contenu en produits de peroxydation des lipides - diéniques conjugués (CD) et dialdéhyde malonique (DM) a été déterminé selon les méthodes standards décrites. L'EDA a été introduit oralement 3 jours avant l'opération et 3 jours après à une dose de 50mg/kg. Parallèlement, on a utilisé comme préparation de comparaison un antioxydant connu, l'ionol (introduit aussi oralement à une dose de 120mg/kg). Les expériences réalisées ont montrées que l'extrait d'Alhagi a provoqué une diminution incontestable statistiquement parlant, du contenu CD et DM dans la zone ischémique du myocarde de 50,4 % et 54,0 % respectivement. Dans la zone éloignée de la détérioration ischémique, la concentration de DM a diminuée de 38,2 %, le contenu de CD s'est normalisé (tableau 2). -10- Tableau 2. Influence de l'extrait d'Alhagi sur le contenu de CD et DM dans le tissu cardiaque (en M/ml) et dans le sérum sanguin (en M/ml) des animaux dans les conditions expérimentales d'infarctus du myocarde (M m ; n-6) Conditions de CD DM l'expérience Zone Zone Sérum Zone Zone Sérum Infarctus éloignée sanguin Infarctus éloignée sanguin du du myocarde myocarde Animaux 0,77 0,04 0,23 0,02 2,46 0,24 2,88 0,28 intacts Infarctus du 1,59 0,08 0,91 0,06 0,36 0,04 7,95 0,93 5,6 0,45 5,63 0,60 myocarde <0,1 <0,02 <0,001 <0,001 (contrôle) P1 Infarctus du 0,79 0,00 0,72 0,03 0,18 0,01 5,16 0,54 3,99 0,43 3,93 0,32 myocarde 3<0,001 <0,02 <0,001 <0,02 <0,02 <0,02 + EDA P2 Infarctus du 0,95 0,05 0,81 0,20 0,01 5,52 0,48 4,120,39 4,06 0,36 myocarde <0,001 < 0,2 <0,001 <0,02 <0,02 <0,02 + ionol P2 Note : P1 ù exactitude de la différence des indices par rapport à ceux des animaux intacts, P2 ù entre les groupes de contrôle et d'essai. L'introduction de l'ionol dans des conditions analogues a induit une diminution du niveau de CD et MD dans la zone ischémique de 40,2-30,5 % et dans la zone éloignée de la détérioration ischémique de 10,9-24,4 %. Des modifications analogues ont également été observées dans le sérum sanguin. Ainsi, l'extrait d'Alhagi possède un effet notable antioxydant supérieur à l'effet de l'ionol.20 -11- Exemple 4. Effet d'économie d'énergie de l'extrait d'Alhagi. L'induction par l'extrait d'alhagi d'un effet d'économie d'énergie, d'un effet anti-hypoxique ainsi que d'un effet d'amélioration des processus de microcirculation et d'hydratation des tissus a été prouvé chez les animaux non nageurs (rats - mâles) d'un poids de 230-270 g et chez des rats d'un poids de 230-270 g qui nageaient dans de l'eau à une température de 26-27 °C tous les deux jours pendant 30 minutes (Ostrovskaya P.U. et coauteurs, 1981). De l'eau a été utilisée à titre de contrôle ou un échantillon d'extrait d'Alhagi (EDA - extrait d'Alhagi). Au bout de 2 mois les animaux ont été décapités (sous anesthésie légère à l'éther). Le coeur et le myocarde ont été extraits, des parties distinctes ont été fixées dans une solution à 1% d'oxyde d'osmium de Caulfield pour une étude électromicroscopique. La partie restante des organes a été congelée dans de l'azote liquide afin de déterminer la teneur en glycogène, lactate, pyruvate et adénine-nucléotide selon des méthodes connues. La quantité de lactate excédentaire a été calculée selon Huckbee W.C., la charge énergétique du système selon Atkinson D.E. La quantité de glucose et le lactate a été déterminée dans le sérum sanguin selon des méthodes standards. Les photomicrographies électroniques ont été obtenues sur le microscope 3M-200. Il a été constaté qu'au bout de 2 mois, chez les rats non nageurs du groupe de rats qui avaient reçu la dose de 10 mg/kg d'extrait d'alhagi au cours de toute l'expérience, que la teneur en glycogène et pyruvate dans le muscle du squelette, le myocarde et même dans la peau (tableau 3) avait augmenté. La diminution de la teneur en acide lactique est plus prononcée sous l'effet de l'extrait d'alhagi. La diminution de la teneur en acide lactique et l'augmentation du niveau d'acide pyruvique contribuent à une augmentation de 3-5 millivolts du potentiel oxydoréduction dans les organes et tissus examinés. Par ailleurs, les valeurs des quantités de lactate excédentaire ont pris des valeurs négatives. Les modifications observées attestent que l'extrait étudié permet une nette prédominance de la phase aérobie d'oxydation des glucides dans les organes et tissus et en même temps l'augmentation de l'utilisation de l'acide lactique. En outre, au cours des 2 mois, la durée de nage jusqu'à la limite (les animaux ont nagé avec une charge de 6% du poids du corps) chez les rats ayant -12- reçu un extrait d'Alhagi à une dose de 10mg/kg durant toute l'expérience, a notablement augmenté. Cette augmentation a été de plus de 1,5 fois. Cet accroissement de la capacité de travail, comme cela est visible sur les tableaux 3 et 4, est lié à la propriété de la préparation à augmenter la résistance à l'anoxémie et à accroître les ressources fonctionnelles des organes et tissus.
Ainsi, chez les animaux nageurs l'effet de l'extrait d'Alhagi était plus prononcé que chez les animaux témoins. Les mouvements des échanges adénine nucléotide et glucidique sont plus importants dans le contenu des composants étudiés. Dans le sérum sanguin la valeur de la proportion glucose/lactate était plus grande mais celle de la proportion lactate/AV (acide valproïque) est bien plus basse que dans le contrôle. L'extrait d'Alhagi a permis d'augmenter la teneur en glycogène, a priori grâce à une gluconéogenèse plus prononcée dans les organes et les tissus. Cela est prouvé non seulement par une augmentation notable de la teneur en glucose mais aussi par une utilisation élevée de l'acide lactique (tableaux 3 et 4).
Lors de l'étude morphologique du coeur et de la structure musculaire on a noté un nombre bien plus important de capillaires fonctionnant autour de chaque myocite (en moyenne dans l'expérience 8-12 contre 4-6 normalement). Le cytoplasme des endothéliocytes dans la grande majorité de ces capillaires a produit un effet d'ébullition visible par l'abondance des vésicules pinocytotiques, ce qui témoigne du renforcement brusque de l'échange dans le lit capillaire. Ainsi, sous l'effet de l'extrait d'Alhagi, il se produit une série de mouvements biologiques positifs dans l'organisme an favorisant un déroulement plus avantageux des processus métaboliques visant le maintien de l'homéostasie de la production d'énergie dans les conditions de manque d'oxygène.
Tableau 3 nfluence de l'extrait d'Alhagi sur certains indices de l'échange glucidique chez les rats intacts de Structure musculaire Myocarde Epiderme Sérum s contrôle essai (EDA) contrôle essai (EDA) contrôle essai (EDA) contrôle (eau) (eau) (eau) (eau) mg% 348 15 396 20 268 21 305 12 287 7,53 366 20,8' ------ .mol pour 1g de 0,238 0,014 0,319 0,0182 0,178 0,012 0,299 0,022 0,33 0,014 0,38 0,020 0,071 0,007 nol pour 1g de 7,5 0,35 8,45 0,43 6,11 0,57 8,37 0,64' 6,1 0,27 5,26 0,32 1,39 0,14 édentaire _ ÿ _ -189 _ 17 nol _ _ _ _ _ _ 6,12 0,42 - Exactitude entre les groupes de contrôle et d'essai. -13- -14- rableau 4. Influence de l'extrait d'Alhagi sur certains indices de l'échange glucidique chez les rats avec une ~ ue (M m ; n=6-8) ions de l'expérience Structure musculaire Myocarde Sérum sanguin contrôle (eau) essai (EDA) contrôle (eau) essai (EDA) contrôle (eau) essai (EDa ène, mg% 376 48 435 18 313 17 376 29 ------ te, mol pour 1g de 0,257 0,02 0,371 0,01 0,287 0,015 0,322 0,03 0,193 0,013 0,246 0,01 , mol pour 1g de tissu 78,21 0,30 6,09 0,69' 7,76 0,40 6,77 0,56 1,86 0,20' 1,66 0,21 excédentaire +0,11 -5,75 -2,08 -2,20 -1,12 -3,14 e, mol 7,37 0,28 9,02 0,48 - Exactitude entre les groupes de contrôle et les groupes d'essai des animaux. 2949060 -15- Exemple 5. Effet anti-inflammatoire de l'extrait d'alhagi. L'estimation de l'effet anti-inflammatoire de l'extrait d'Alhagi a été réalisée sur les rats mâles d'un poids de 150-180g. L'estimation de son activité d'inhibition de l'effet d'un phlogogène a été réalisée sur des modèles d'inflammation aiguë et mesurée selon la capacité à inhiber le gonflement des pattes (estimation oncométrique) provoqué par l'introduction sous l'aponévrose plantaire de 0,2m1 de la solution de formaline 1 % ou de 0,1 ml de dextrine 6 %. Les résultats ont été pris en compte au maximum du développement des modifications correspondantes dans le contrôle. Les extraits d'Alhagi ont été introduits chez les animaux oralement à une dose de 10mg/kg la veille de l'expérience, 2 heures avant l'expérience et au bout de 30 minutes après l'inoculation des agents phlogogènes. De l'hydrocortisone à une dose de 10mg/kg a été administrée à une partie des animaux, à titre de comparaison. Tableau 5. Influence de l'extrait d'Alhagi sur les gonflements des pattes des rats induits par la formaline ou la dextrine (M m ; n=6-8) Conditions de Accroissement du Inhibition du 0/0 l'expérience gonflement de la patte des gonflement, rats par rapport au début, °/0 Au bout de 3 heures après l'introduction de formaline Contrôle 0,44 0,024 - EDA 0,16 0,040* 63,6 Hydrocortisone 0,29 0,027* 34,1 Au bout de 2 heures après l'introduction de formaline Contrôle 0,64 0,040 - EDA 0,22 0,037 65,6 Hydrocortisone 0,46 0,022* 28,2 Note : exactitude par rapport au contrôle (P<0,05). 2949060 -16- Comme on peut le voir dans le tableau 5, l'extrait d'alhagi possède un effet anti-inflammatoire important et supérieur à l'effet correspondant de l'hydrocortisone.
Exemple 6. Effet de cicatrisation de l'extrait d'Alhagi. L'estimation de l'effet cicatrisant de l'extrait d'Alhagi a été réalisée sur les rats mâles d'un poids de 180-200g. Une brûlure a été faite sur l'épiderme du dos, préalablement épilé, chauffé jusqu'à 2002C par une lame de cuivre installée à la pointe d'un fer à souder électrique. Après l'application du trauma la blessure a été traitée avec une concentration de 5% d'extrait d'alhagi dans de l'huile de tournesol, sans utiliser de bandage. L'état de la surface blessée a été estimé en dynamique tous les 7 jours. De l'huile d'argousier de pharmacie a été appliquée comme préparation de comparaison.
Tableau 6. Influence de l'extrait d'Alhagi sur les délais de cicatrisation des brûlures chez les rats (M m ; n=6-8) Conditions de Surface de la brûlure, cm2 Délais de l'expérience cicatrisa- tion complète en jours Au bout Au bout de Au bout Au bout Au bout de 7 14 jours de 21 de 28 de 35 jours jours jours jours Contrôle (huile 15,4 0,34 12,2 0,55 9,0 0,43 5,1 0,37 3,3 0,27 67,2 1,44 de tournesol) EDA 14,2 0,39 9,4 0,44 4,4 0,38 2,1 0,36 0,7 0,20 43,7 1,86 Huile 15,2 0,42 11,4 0,48 6,8 0,40 3,8 0,24 1,8 0,12 50,6 2,40 d'argousier Note : exactitude au contrôle correspondant (P<0,05). Comme on peut le voir dans le tableau 6, l'effet de l'extrait d'Alhagi sur la cicatrisation des brûlures de la peau dépasse l'effet de l'huile d'argousier.
Exemple 7. Biosynthèse du collagène dans la peau. L'influence de l'extrait sur la synthèse de collagène a été estimée à l'aide d'une analyse histologique. Dans ce but on a étudié des échantillons de biopsie de 2949060 -17- l'épiderme avant et 14 jours après l'application quotidienne de l'extrait sur les surfaces de l'épiderme. Pour l'étude, le composé qui a été utilisé comprend environ 0,2 à 5,0 % d'extrait d'Alhagi et, au minimum, une des substances auxiliaires acceptables choisies dans le groupe comprenant de l'eau, de l'hydroxyéthyl-urée, de l'huile d'olive, du cétéaryl-éthylhexanoate, de l'isopropylmyristate, de la glycérine, du propylène glycol, du polyacrylate de sodium, de l'isopropylisostéarate, une substance odorante de parfumerie, du carbamide, de l'alcool benzylique, du 2-méthyl-4-isothiazolone-3-one, ou leur mélange. Les échantillons ont été fixés durant 48 heures dans de la formaline neutre 10%. Ensuite les échantillons ont été déshydrogénés dans de l'alcool, éclaircis dans de l'acide et inclus dans de la paraffine à 602C. Puis ils ont été remplis de paraffine et des coupes d'une épaisseur de 6-8 m ont été réalisées avec un microtome. Les coupes obtenues ont été colorées au collagène selon la méthode modifiée de Mallory. La méthode est basée sur la propriété du bleu de toluidine à colorer les fibres de collagène et sur la propriété de la fuchsine acide à colorer les fibres élastiques. Pour cela les coupes ont été colorées dans une solution de 0,5 0/0 de fuchsine acide pendant 2-3 minutes, lavées dans de l'eau distillée, puis disposées pendant 2-5 minutes dans de l'acide phosphoré û tungstique, après quoi elle ont été colorées pendant 1-2 minutes dans une solution colorante combinée contenant un colorant bleu de toluidine, puis elles ont été déshydratées dans de l'alcool à 96%. La coloration a été visualisée au microscope : les fibres de collagène ont pris une couleur bleue foncée, les noyaux des cellules, érythrocytes et fibres élastiques û une couleur rouge, mais le tissu musculaire a pris une couleur orange. Les résultats de l'étude des échantillons de la biopsie avant et au bout de 14 jours après l'application quotidienne de l'extrait sur la surface de l'épiderme sont présentés dans les figures 1 et 3. Ces figures montrent l'augmentation de la synthèse de collagène par rapport au contrôle (figures 2 et 4), ce qui témoigne de la capacité des extraits selon l'invention à stimuler la formation de collagène permettant le rétablissement de la tension et l'élasticité de l'épiderme.
Exemple 8. Effet géroprotecteur de l'EDA L'estimation de l'effet géroprotecteur est faite sur des rats mâles âgés de 8 mois et irradiés afin de provoquer la sénescence précoce (conformément aux 2949060 -18- Méthodes précliniques des médicaments (références méthodiques) . L'irradiation a été effectuée à l'appareil Theratron avec la capacité de 112 Gy/min, la source Co60 en dose totale étant égale à 2 GBq (l'aire de la surface irradiée) 65, et pour un temps d'irradiation de 3 minutes. Les animaux irradiés ont été répartis en deux groupes ù d'essai et témoin. Le groupe d'essai a reçu de l'EDA à une dose de 10 mg/kg, le groupe témoin de l'eau distillée, et les animaux intacts (non irradiés) eux aussi de l'eau distillée. On a effectué une administration intragastrique du spécimen (EDA) et de l'eau distillée tous les deux jours, l'examen de contrôle et le pesage ont été effectués 1 fois par semaine. On a alors apprécié l'état général, la vue de l'épiderme et du pelage, l'activité cinétique, l'accroissement de la masse du corps et la présence de plaies. Les études de la vitesse de l'accroissement pondéral ont montré, (Figure 5) que vers la 34ème semaine le poids des animaux irradiés recevant l'EDA et des rats intacts devient pratiquement identique, ce qui témoigne de l'influence positive de l'EDA sur la capacité vitale des animaux irradiés. Vers la 50ème semaine la différence entre les poids du groupe témoin et du groupe recevant l'EDA est de 20%. Impact de l'EDA sur les réflexes acquis moteurs et alimentaires L'impact de l'EDA sur les réflexes acquis a été étudié selon la méthodologie motrice et alimentaire dans les conditions du labyrinthe Small chez les mêmes rats irradiés, 28 semaines après l'irradiation, au cours desquelles on a administré tous les deux jours le spécimen EDA (10 mg/kg) ou de l'eau distillée respectivement. Le conditionnement des rats a été estimé par le temps de parcours (en secondes) mis pour réaliser le trajet de l'entrée au labyrinthe à la section avec l'aliment et la vitesse du conditionnement des rats (en jours) selon la méthode courante. Les résultats de l'expérience sont présentés dans le tableau 7. Les données présentées montrent que l'EDA influence positivement la vitesse de la formation des réflexes acquis moteurs et alimentaires et la réaction d'orientation des rats même après le rayonnement. 2949060 -19- Tableau 7 Impact de l'EDA sur les réflexes acquis moteurs et alimentaires, et sur la capacité d'orientation des rats après l'irradiation Conditions de Période de latence du réflexe, sec. Temps de la l'expérience Avant le Après le formation du conditionnement conditionnement réflexe (jours) Spécimen (EDA) 193,1 4,69 32 (irradiation) 20,5 0,6 Contrôle (eau 214,6 4,72 37 distillée) 23,1 0,5 (irradiation) Intacts (animaux 174,0 4,68 37 non irradiés) 20,2 0,7 Impact de l'EDA sur l'aptitude physique. L'estimation de l'impact de l'EDA sur l'aptitude physique des rats a été effectuée 36 semaines après l'irradiation. A cet effet, on a défini la durée de la nage (en minutes) des rats d'après la méthode connue.
Tableau 8 Impact de l'EDA sur l'aptitude physique (la nage) des rats après l'irradiation Temps moyen de la nage (min) Irradiation +EDA 4,76 0,21 Irradiation +contrôle 3,74 0,15 (l'eau distillée) Intacts 3,92 0,19 Comme on le voit dans le tableau 8, les animaux irradiés recevant l'EDA possèdent une aptitude physique améliorée en comparaison avec celle des animaux contrôles (de 42,5 %) et en comparaison avec celle des rats intacts (non irradiés) (de 36,8 %). Le tableau 9 montre le rapport des animaux morts et survivants dans les groupes en fonction du jour de l'expérience. Il a été établi que chez les animaux irradiés du groupe témoin ne recevant pas l'EDA dans 119-125 jours, on a observé le déclin du pelage et la décroissance de 2949060 -20- l'activité cinétique. Les animaux du groupe témoin ont commencé à mourir au 166ème jour après l'irradiation, le niveau de mortalité de 20 % étant atteint vers le 206ème jour, la mortalité étant de 50 % au bout de 327 jours. Au contraire, au cours de toute la période d'observations - 344 jours - aucune mortalité n'a été observée dans le groupe de rats recevant l'EDA, l'état des animaux a été satisfaisant, l'état du pelage et l'activité cinétique n'étaient pas différents de l'état des animaux normaux intacts. De plus, dans cet intervalle de temps dans le groupe des animaux intacts (non irradiés) une mortalité de 7 % est observée, l'état des rats survivants étant satisfaisant.
Tableau 9 Nombre d'animaux survivants par rapport au total des animaux dans le groupe Groupe Nombre morts / survivants d'animaux Jours après la date d'irradiation 166 176 206 274 278 290 327 Intacts -/15 -/15 -/15 -/15 -/15 1/15 Témoin 1/15 2/15 3/15* 4/15 5/15 6/15 8/15** (irradiation + eau distillée) D'essai -/15 -/15 -/15 -/15 -/15 -/15 -/15 (irradiation + EDA) Nombre d'animaux dans chaque groupe - 15 individus. * nombre d'animaux morts - 20 %. ** nombre d'animaux morts - 50 %.
Les données de la durée conventionnelle moyenne de la vie des animaux sont présentées dans le tableau 10. 2949060 -21- Tableau 10 Durée conventionnelle moyenne de la vie des animaux prenant l'EDA après l'irradiation Groupe Durée conventionnelle moyenne de la vie après l'irradiation (jours) A la mortalité de A la mortalité de Vers la fin de 20% 50% l'expérience Intacts 206,0 323,3 340,4 Témoin 201,3 292,1 299,0 EDA 206,0 327 344,0 Le tableau 10 montre que la durée conventionnelle moyenne de la vie des animaux irradiés ne recevant pas le spécimen (contrôle) est inférieure de 30 % par rapport aux animaux recevant l'EDA. Il s'est avéré, de plus, que la durée de vie des animaux irradiés recevant l'EDA est de 15 % supérieure à celle des animaux intacts non irradiés. Au 344ème jour de l'expérience les animaux survivants ont été décapités et on a défini dans leurs cerveaux une série de paramètres biochimiques. Comme il est montré dans le tableau 11, dans le groupe des rats irradiés recevant VEDA on a observé une diminution de l'accumulation dans le tissu du cerveau d'un des produits finaux de la peroxydation des lipides (oxydation suroxygénée des lipoïdes) - le dialdéhyde malonique (DAM) - de 22,2 % par comparaison avec le groupe témoin et de 10,4 % par comparaison avec les animaux intacts. Ceci peut être expliqué par l'augmentation de l'activité enzymatique de la superoxyde-dismutase (SOD) et de la catalase (de 18,2 et 10,2 % respectivement en ce qui concerne le contrôle ce qui dépasse même le niveau d'activité chez les animaux intacts (18,0 et 9,4 %)). 2949060 -22- Tableau 11 Impact de l'EDA sur la teneur en dialdéhyde malonique et l'état du système antioxydant des cerveaux des rats, ayant subi l'irradiation radioactive Groupe DAM SOD Catalase des animaux nM/mg U/min/mg mM/ min/g Intacts 0,577 0,056 0,563 0,039 21,28 1,156 Témoin 0,656 0,036 0,569 0,065 20,91 1 ,314 (irradiation + eau distillée) D'essai 0,517 0.025 0,686 0,058 23,29 0,092 (irradiation+ EDA) Ainsi donc, les résultats obtenus ont montré que l'administration de l'EDA à une dose de 10 mg/kg contribue à l'induction du système endogène antioxydant dans les cellules du cerveau des rats, ayant subi l'irradiation radioactive. Il a aussi été mis en évidence que chez les animaux irradiés recevant l'EDA, le niveau du glycogène (tab. 12) est considérablement plus haut que pour les animaux témoins (31,4 %) et même surpasse les mêmes paramètres chez les rats intacts (de 10,6 %). Les changements du rapport de l'acide lactique (AL) et de l'acide pyruvique (AP) témoignent de l'amélioration du processus de peroxydation des lipides (l'oxydation aérobie des cellules du cerveau), c'est pourquoi le potentiel de l'oxydoréduction du système AL/AP (POR AL/AP) a tendance à augmenter par rapport au groupe témoin (irradiation + eau distillée) (tableau 12). 2949060 -23- Tableau 12 Impact de l'EDA sur certains paramètres de l'échange glucidique dans le cerveau des rats, ayant subi l'irradiation radioactive Groupe Glycogène Rapport acide lactique/acide des animaux pyruvique mg % Animaux 1318,69 79,49 -252,6 intacts Témoin 1110,36 38,30 -262,1 (irradiation + eau distillée) Irradiation + 1458,77 79,57 -253,2 Extrait de la plante d'Alhagi pseudalhagi On peut conclure que l'administration continue de l'EDA contribue à l'allongement et à la prolongation de la durée de vie, augmente les aptitudes cérébrale et physique, et améliore les paramètres principaux de l'échange glucidique et bloque les procédés de peroxydation des lipides (oxydation suroxygénée des lipoïdes) dans les cellules du cerveau des rats, ayant subi l'irradiation radioactive en vue du vieillissement artificiel. Ainsi, l'extrait d'Alhagi est un moyen métabolique très actif qui peut être utilisé dans différents domaines de la médecine et en cosmétologie, y compris pour ralentir les changements dus à l'âge dans les organes et les tissus.
Claims (17)
- Revendications1. Extrait de la plante d'Alhagi pseudalhagi, comprenant des proanthocyanidines, des isoprénoïdes, des flavonoïdes et des glucides.
- 2. Extrait de la plante selon la revendication 1, comprenant 16,03 % en poids de proanthocyanidines, 36,71 % en poids d'isoprénoïdes, 8,0 % en poids de flavonoïdes, et des glucides.
- 3. Procédé d'obtention de l'extrait de la plante d'Alhagi pseudalhagi selon la revendication 1 ou 2, par extraction en utilisant toutes les parties de la plante complète et des solvants qui sont choisis dans le groupe comprenant l'éthanol, le méthanol, le n-butanol, l'isopropanol, la glycérine, le propylène glycol, le butylène glycol, l'acétone et l'éthylacétate.
- 4. Procédé d'obtention selon la revendication 3, dans lequel l'extraction est réalisée avec des solvants aqueux d'alcool ou d'acétone, et dans lequel la teneur en eau dans la solution aqueuse ne doit pas être de plus de 50 % vol.
- 5. Procédé d'obtention selon la revendication 3 ou 4, dans lequel l'extraction est réalisée avec des solvants aqueux de méthanol ou d'éthanol contenant 50-90 % vol. d'alcool et 50-10 % vol. d'eau.
- 6. Procédé d'obtention selon la revendication 5 dans lequel les solvants aqueux de méthanol ou d'éthanol contiennent 50 % vol. d'éthanol ou de méthanol et 50 % vol. d'eau.
- 7. Procédé d'obtention selon la revendication 3, dans lequel l'extraction est réalisée avec des solvants aqueux de glycérine ou de propylène glycol ou de butylène glycol contenant 40-60 % vol. de glycérine ou de propylène glycol ou de butylène glycol et 60-40 % vol. d'eau.
- 8. Procédé d'obtention selon la revendication 3, dans lequel l'extraction est réalisée avec de l'éthylacétate.
- 9. Extrait de la plante d'Alhagi pseudalhagi selon la revendication 1 ou 2, pour son utilisation pour diminuer le taux de cholestérol général et de triglycérides dans le sérum sanguin chez les animaux et l'homme.
- 10. Extrait de la plante d'Alhagi pseudalhagi selon la revendication 1 ou 2, pour son utilisation pour diminuer la quantité des produits de peroxydation des 2949060 -25- lipides, pour améliorer les propriétés anti-oxydantes et la microcirculation chez l'homme et les animaux.
- 11. Extrait de la plante d'Alhagi pseudalhagi selon la revendication 1 ou 2, pour son utilisation pour améliorer les processus métaboliques dans les organes et les tissus de l'homme et des animaux.
- 12. Extrait de la plante d'Alhagi pseudalhagi selon la revendication 1 ou 2, pour son utilisation pour améliorer l'état des épidermes, stimuler la formation de collagène, la cicatrisation et la diminution de l'inflammation des tissus chez l'homme et chez les animaux.
- 13. Extrait de la plante Alhagi pseudalhagi selon la revendication 1 ou 2, pour son utilisation pour favoriser le prolongement de la vie.
- 14. Composition pharmaceutique contenant un extrait de la plante d'Alhagi pseudalhagi selon la revendication 1 ou 2.
- 15. Composition cosmétique contenant un extrait de la plante d'Alhagi pseudalhagi selon la revendication 1 ou 2, en combinaison avec un véhicule acceptable en cosmétique ou leur mélange.
- 16. Composition selon la revendication 15, dans laquelle la quantité d'extrait dans la composition est comprise entre 0,2 à 5,0 % en poids.
- 17. Composition selon la revendication 15, dans laquelle le véhicule selon l'invention est choisi dans le groupe comprenant de l'hydroxyéthyl-urée, de l'huile d'olive, du cétéaryl-éthylhexanoate, de l'isopropylmyristate, de la glycérine, du propylène glycol, du polyacrylate de sodium, de l'isopropylisostéarate, une substance odorante de parfumerie, du carbamide, de l'alcool benzylique et du 2-méthyl-4-isothiazolone-3-one.
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