FR3049864A1

FR3049864A1 - Extrait vegetal issu d'une plante du genre aerva, composition le contenant et utilisation dudit extrait vegetal

Info

Publication number: FR3049864A1
Application number: FR1653022A
Authority: FR
Inventors: Alexis Lavaud; Antoine Bily; Marc Roller; Simona Birtic
Original assignee: Naturex SA
Current assignee: Givaudan France Naturals SAS
Priority date: 2016-04-06
Filing date: 2016-04-06
Publication date: 2017-10-13
Also published as: WO2017174988A1; EP3439679A1; US20190083560A1; KR20180127466A; CA3020043A1; JP2019513763A

Abstract

L'invention concerne un extrait végétal issu de la partie aérienne d'une plante du genre Aerva. Cet extrait végétal est avantageusement issu de la variété Aerva javanica (Burm.f.) Juss. ex Schult, au moyen d'un procédé d'extraction comprenant une étape de mise en contact de ladite partie aérienne avec au moins un solvant d'extraction physiologiquement acceptable. Un tel extrait végétal est intéressant notamment comme composant d'une composition du genre cosmétique, nutraceutique, pharmaceutique ou alimentaire.

Description

Domaine technique auquel se rapporte l'invention

La présente invention concerne, de manière générale, le domaine des extraits de plantes. Elle concerne plus particulièrement les extraits végétaux issus de plantes du genre Aerva, les compositions contenant de tels extraits, les procédés pour l’obtention de tels extraits, et leurs utilisations.

Arrière-plan technologique

Les extraits végétaux, et les préparations dérivées obtenues à partir de plantes, sont à présent largement commercialisés.

Ainsi, il existe un intérêt majeur à identifier de nouveaux extraits végétaux qui sont susceptibles de présenter une application industrielle, notamment dans les domaines cosmétiques, nutraceutiques, pharmaceutiques ou alimentaires.

Premièrement, il est intéressant de disposer d’extraits végétaux ayant une indication anti-inflammatoire, et plus précisément anti-inflammation chronique. L’inflammation est un phénomène normal de défense suite à une agression de l’organisme qui connaît une phase d’initiation, d’amplification et de résolution. La réaction inflammatoire dépasse parfois ses objectifs pouvant être responsable d’effets délétères comme ceux observés lors d’inflammations chroniques.

On distingue de nombreuses causes de l’inflammation telles que les agents infectieux, les substances étrangères inertes, les agents physiques, les lésions cyto-tissulaires post-traumatiques, etc.

Il est possible de distinguer deux types d’inflammation, les inflammations aiguës et chroniques. Malgré des similitudes d’action dans la phase de reconnaissance et des mécanismes d’action impliqués dans le déroulement de la phase de mobilisation du système immunitaire, ces deux types d’inflammations sont différents dans leur finalité à résoudre ou non l’inflammation. L’inflammation aiguë est une réponse naturelle à différentes causes : traumatismes, agents physiques, substances irritatives endogènes ou exogènes, infections.

Elle évolue en 3 phases : une phase vasculaire ou phase d’initiation, une phase cellulaire ou phase d’amplification, et une phase de résolution.

La première phase de l’inflammation commence par une réaction de « reconnaissance » faite par des cellules issues de la différenciation des cellules souches hématopoïétique (CSH) : lymphocytes, monocytes et macrophages ou par des protéines circulantes tel que les anticorps, les protéines du complément (présentes dans le sérum et faisant partie de l'immunité innée), les facteurs de Hageman impliqués dans la coagulation du sang.

La phase de reconnaissance est précédée d’une multitude de réaction en chaîne faisant intervenir un ensemble de cellules et de médiateurs variables en fonction de l’intensité et de la localisation de l’inflammation.

La dernière phase correspond à l’apoptose des polynucléaires, ce qui permet l’arrêt de l’inflammation ; on parle de résolution de l’inflammation. Le système immunitaire intervient peu durant l’inflammation aiguë.

Ainsi, dans ce cas-là, la phase de résolution est marquée par un retour à l’homéostasie, une bonne cicatrisation et une restauration totale des fonctions tissulaires.

Si la phase de résolution ne survient pas, la réponse inflammatoire peut persister. Elle conduit alors à la formation de cicatrices, de fibroses ou encore à une modification tissulaire en raison de sa chronicité.

Pour l’inflammation chronique, les premières étapes de la réponse inflammatoire sont similaires à celles décrites pour l’inflammation aiguë.

Mais à la différence de l’inflammation aigüe, l’inflammation chronique est due à une persistance inflammatoire localisée qui se perpétue par la présence, ou non, de tout agent pathogène dans l’organisme.

Cette persistance de l’inflammation est responsable de nombreuses maladies inflammatoires chroniques, souvent qualifiées d’auto-immunes telles que lupus érythémateux disséminé, polyarthrite rhumatoïde, maladie de Gougerot-Sjôgren, maladie de Crohn. L’inflammation chronique favorise donc la dégénérescence des cellules et des tissus comme les articulations (arthrose), les parois des vaisseaux (artériosclérose), le pancréas (diabète). Elle entraine, à la longue, une baisse des défenses immunitaires et fait le lit des maladies à composante inflammatoire (maladies cardiovasculaires, arthrites, asthme, Alzheimer, syndrome de l’intestin irritable, cancers, maladies auto-immunes, etc.). Elle augmente les taux de radicaux libres et donc l’oxydation du corps. Ses effets sont donc insidieux mais plus profonds qu’on ne le pense. En particulier, l’inflammation chronique accélère notre vieillissement. L'inflammation chronique est un facteur de risque majeur de plusieurs autres maladies, dont les maladies du cœur, le cancer et le diabète de type II. L’ensemble de l’organisme est donc sujet à cet état inflammatoire latent mais présent. L’inflammation chronique se différencie par trois choses : peu de symptômes apparents, action globale au niveau de l’organisme et action latente et progressive durant dans le temps.

Le vieillissement lui-même favorise l’inflammation. On retrouve plus de marqueurs biologiques de l’inflammation chez les sujets âgés. On ne sait pas encore en attribuer la cause mais se caractérise par un ralentissement général des fonctions antioxydantes, hormonales, détoxifiantes, l’altération et le moins bon fonctionnement des mitochondries libérant de plus en plus de radicaux libres, l’accumulation de toxines ou polluants dans le corps, etc. Récemment il a été démontré que la résolution de l’épisode inflammatoire n’est pas un mécanisme passif qui proviendrait de la seule disparition des médiateurs pro-inflammatoires.

Il mobilise les actions concertées des cyclooxygénases (COX), des lipoxygénases (LOX) ou des cytochromes P450 entre différents types cellulaires. Il permet la synthèse des lipides bioactifs, lesquels sont issus des acides gras polyinsaturés (AGPl) comme l’acide arachidonique (ARA), l’acide éicosapentaénoïque (EPA) ou l’acide docosahexaénoïque (DMA). Ces nouveaux médiateurs portent le nom de lipoxines, résolvines, marésines ou protectines.

Leurs voies de synthèse sont largement décrites dans la littérature scientifique et sont présentées succinctement ci-dessous : a) Voies de synthèse des médiateurs bioactifs dépendant de l’Acide Arachidonique (ARA) L’ARA est un acide gras de la famille des ω 6, non essentiel, incorporé dans les phospholipides membranaires la membrane des cellules. Sa libération par la phospholipase A2 dont l'activité, sous l'influence des glucocorticoïdes, va permettre la formation de dérivés qui intervient dans le processus de l’inflammation.

En effet, au cours d’une inflammation, les enzymes 12- et 15- LOX vont permettre la production de produits intermédiaires que sont respectivement les 12- (S)-HETE et 15-(S)-HETE. La 5-LOX a une double fonction dans la voie de dégradation de TARA. En effet la 5-LOX soit dégrade directement ARA en 5-(S)-HETE métabolisé ensuite par la LTA4 hydrolase en leukotriène B4 (LTB4), soit elle transforme 15-(S)-HETE en lipoxine A4 ou B4 (LXA4 et LXB4). La LXA4 et LXB4 sont les premiers médiateurs à avoir été décrits faisant partie de la famille des médiateurs spécialisés de la résolution (ou SPM pour Specialized Pro-resolving lipid Mediators). C’est à partir de TARA que va être également synthétisé, sous l’action des COX, la prostaglandine E2 (PGE2) ou le thromboxane B2 (TXB2). Sous l’action de la 5-LOX, la transformation de TARA produit aussi un intermédiaire (le 5-(S)- HETE), qui est transformé par la LTA4 hydrolase en leukotriène B4 (LTB4). L’inhibition des voies de métabolisation de TARA afin de diminuer certains effets indésirables, chronicité inflammatoire et non résolution, des PG et des LTB4 semble être une direction pharmacologique efficace afin de mieux répondre à une inflammation ; c’est le cas de l’aspirine qui inhibe COX. b) Voies de synthèse des médiateurs bioactifs dépendant de l’Acide Docosahexaénoïque (DMA)

Le DMA est un acide gras polyinsaturé, dit essentiel, de type ω 3 soit issu de la dégradation de l'acide a-linolénique (ALA), soit apporté directement par l’alimentation. A partir du DMA et de l’action de la 12-LOX, va être synthétisé le 14-HDoHE, qui va donner naissance à des produits tels que la marésine (7-Mar1). Toujours à partir du DMA, l’action de la 15-LOX va induire la production d’un intermédiaire (le 17-HDoHE), précurseur de la neuro protectine DI (PDI) et des résolvines de type D (RvDI et RvD2). En présence d’aspirine, des épimères des résolvines de type D peuvent être également obtenus : il s’agit des aspirin trigerred resolvins (AT-RvDs). c) Voies de synthèse des médiateurs bioactifs dépendant de l’Acide éicosapentaénoïque (EPA)

De même que le DMA, ΓΕΡΑ est un acide gras polyinsaturé de type ω 3 provenant de la dégradation d’ALA et mais aussi présent dans l’alimentation. A partir de ΓΕΡΑ, et en présence des COX, un intermédiaire est synthétisé : il s’agit de 18-HEPE, qui transformé par les LOX va permettre la production des résolvines E1 et E2 (RvE1 et RvE2).

Le mécanisme d’action de ces molécules bioactives est précisé ci- dessous.

Les lipoxines A4 ou B4 (ou leurs épimères dépendant de l’aspirine), la résolvine D1, la marésine 1, les résolvines E1 et E2 et la neuroprotectine D1 prises séparément présentent des activités autacoïdes car elles jouent le rôle de médicaments naturellement synthétisés par notre organisme au cours d’une réponse inflammatoire pour permettre sa résolution. Elles présentent alors des activités favorisant la résolution d’un épisode inflammatoire en diminuant l’infiltration de PMN, en diminuant la synthèse de cytokines inflammatoires comme le TNF-a et la mobilisation du facteur de transcription NF-KB. RvE1 et RvE2 présentent aussi des capacités d’induction de la réépithélialisation du stratum corneum endommagé. RvD1 présentent de plus des capacités anti-nociceptives grâce à la mobilisation de TRPA1, TRPV3 et TRPV4. L’issue finale d’une inflammation aigue (résolution ou chronicité) est influencée par plusieurs facteurs tels que l’intensité et la nature de la blessure, sa localisation mais aussi par une potentielle réponse excessive de l’hôte. Le passage de l’inflammation à l’homéostasie (résolution complète) est un programme fortement régulé au niveau tissulaire. Les prostaglandines (PGE2 et PGD2) et leukotriene B4 sont particulièrement impliquées dans la phase d’initiation et d’amplification de l’inflammation aigue. En effet les PGE2 et PGD2 vont favoriser la transformation de LTB4 en lipoxin A4, entraînant la production de resolvins D et E et de protectins. D’un autre côté, PGE2, PGD2 et LTB4 peuvent aussi favoriser le processus inflammatoire induisant une réponse non adaptée, par exemple excessive pouvant devenir chronique ; une fibrose peut apparaître due à une destruction substantielle du tissu conjonctif dont son remplacement entraînera sa perte de fonctionnalité.

En tout état de cause, la mesure des molécules de la résolution représente un modèle de choix dans la validation de molécules ayant un effet positif sur l’inflammation et plus particulièrement sur la réparation.

Deuxièmement, il est également intéressant de disposer de nouveaux extraits végétaux ayant une indication comme activateur des récepteurs activés par les proliférateurs de peroxysomes (PPARs).

Les peroxysomes sont des petits organites proches des mitochondries contenant une série d'enzymes propres au métabolisme de l'eau oxygéné (catalase, urate-oxydase, D- aminoacide-oxydase) et des enzymes de la β-oxydation des acides gras.

Les récepteurs activés par les proliférateurs de peroxysomes (dits encore « PPARs » pour « Peroxysome Proliferator-Activated Receptors ») sont membres de la superfamille des récepteurs nucléaires qui régulent notamment la synthèse des lipides, du glucose et des acides aminés au sein de l’organisme.

Plus récemment, les PPARs, présents au niveau de la peau et d’autres organes tels que le foie, les reins, le cœur, les muscles, le cerveau et le tissu adipeux par exemple, ont démontré un rôle important de régulation de fonctions cellulaires telles que la prolifération et différentiation cellulaire, la réponse immunitaire et l’apoptose.

Ces récepteurs peuvent être activés par les proliférateurs de peroxysome ; ils peuvent être également activés par des acides gras naturels. Ils stimulent ainsi l’expression de gènes codant pour des enzymes impliquées dans la β-oxydation peroxisomale et mitochondriale. Ce rôle de régulation entraîne des effets pléiotropiques au sein de l’organisme et d’importance au niveau de diverses pathologies, faisant ainsi de ces marqueurs une cible privilégiée dans la découverte de nouvelles thérapies.

Différentes molécules de synthèse existent à ce jour et peuvent agir sur certains récepteurs PPAR-a, -β/δ, -y.

Cependant, des effets secondaires restent à déplorer avec par exemple un accroissement du risque d’insuffisance cardiaque et une augmentation de l’adipogenèse pour les médicaments du type thiazolidinediones.

Des alternatives naturelles basées sur des métabolites secondaires autres que les thiazolidinediones doivent donc être découvertes.

Par ailleurs, il a été décrit dans le document WO 95/35108 que des thiazolidinediones, plus particulièrement le ciglitazone, présentent une activité dans le traitement du psoriasis en inhibant la prolifération des kératinocytes. Egalement, il a été décrit dans le document WO 96/33724 que des composés sélectifs des PPARy, tels qu'une prostaglandine-J2 ou -D2, sont des actifs potentiels pour le traitement de l'obésité et du diabète.

Troisièmement, il est encore intéressant de disposer de nouveaux extraits végétaux ayant une indication comme activateur des sirtuines.

En effet, des études scientifiques récentes ont lié la nutrition, en particulier la restriction calorique, avec un vieillissement en bonne santé. Il se pourrait même que l’augmentation de la durée de vie soit améliorée par une restriction calorique dans les études animales. L’enzyme responsable dans ce processus est la Sirtuine 1 (SIRT1 ). SIRT1 est membre des sirtuines SIRT1-7, une famille de désacétylases hautement conservées liée au NAD+ qui agissent comme des capteurs cellulaires pour détecter la disponibilité de l'énergie et des processus métaboliques. SIRT1 est exprimé dans une large gamme de tissus et d'organes et a été détecté dans les tissus du foie, le cœur du pancréas, les muscles, le cerveau, la peau et le tissu adipeux. SIRT1 est activé par de forts niveaux NAD +, une affection causée par le statut de faible énergie cellulaire, par exemple provoquée par la restriction calorique ou l'exercice physique. L'activation de SIRT1 conduit à la désacétylation des protéines cibles qui sont importants pour l'apoptose, le cycle cellulaire, les rythmes circadiens, la fonction mitochondriale, et le métabolisme actif, y compris la gestion du glucose, le métabolisme des lipides et de l'homéostasie énergétique, ainsi que des effets positifs sur la protection des cellules. Plusieurs modèles de souris ont été utilisés afin d'étudier la fonction métabolique de SIRT1. Il a pu être démontré que la surexpression de SIRT1 entraine une diminution de l'adiposité, le cholestérol sérique, et de l'insuline, tout en affichant une résistance accrue à l'intolérance au glucose et la résistance à l'insuline induite par le syndrome métabolique et l’obésité.

Par ailleurs, les protéines SIRT1 interviennent également dans de nombreux processus biologiques, notamment dans la transcription, la réparation de l'ADN, les processus d'apoptose et de sénescence cellulaire. Ce sont des régulateurs clés de la survie cellulaire. Dans les fibroblastes vieillis, l'expression endogène des SIRT1 décroît progressivement. Les cellules âgées produisent moins de sirtuine que les cellules jeunes. Des essais ont indiqué que la stimulation de l'expression du gène sirtuine dans des cellules cutanées humaines permet de ralentir leur vieillissement. Le maintien et l’activation de SIRT1 est donc clé pour combattre les signes cutanés du vieillissement et pour maintenir la fonction barrière de la peau. En effet, une étude récente indique le rôle prépondérant de SIRT1 pour le maintien de l’intégrité de la fonction barrière, jouant ainsi un rôle prépondérant à la fois dans le maintien de l’hydratation cutanée ainsi que le rôle protecteur vis-à-vis des agressions externes. L’activation de SIRT1 entraîne principalement des effets bénéfiques pour maintenir ou améliorer l’homéostasie de l’organisme, le niveau de stress oxydant, l'insulino-résistance et / ou le métabolisme des lipides, la balance énergétique, la puissance physique, la masse musculaire, la sénescence cellulaire et ainsi ralentir le processus de vieillissement ainsi que la prévention liée à des maladies chroniques.

Objet de l’invention

Le demandeur a mis en évidence que, de façon tout à fait surprenante, un extrait végétal issu de la partie aérienne d’une plante du genre Aerva présente une activité biologique, en particulier chez l’homme.

Les inventeurs de la présente invention ont ainsi tout d’abord mis en évidence qu’un extrait de la partie aérienne d’une plante du genre Aerva constitue un agent préventif et/ou curatif de l’inflammation, avantageusement un agent préventif et/ou curatif de l’inflammation chronique, et avantageusement encore de l’inflammation chronique liée à des désordres cutanés.

Il a été également montré par les inventeurs qu’un extrait selon l’invention est un agoniste des récepteurs activés par les proliférateurs de peroxysomes (PPARs), avantageusement suite à une stimulation inflammatoire.

Enfin, il a été montré par les inventeurs qu’un extrait selon l’invention est un activateur des sirtuines, et en particulier de SIRT1, avantageusement suite à une stimulation inflammatoire. D’autres caractéristiques non limitatives et avantageuses de l’extrait conforme à l’invention, prises individuellement ou selon toutes les combinaisons techniquement possibles, sont les suivantes : - la plante du genre Aerva est choisie dans la variété Aerva javanica (Burm.f.) Juss. ex Schult. ; - ledit extrait végétal est issu d’un procédé d’extraction comprenant une étape de mise en contact de ladite partie aérienne avec au moins un solvant d’extraction physiologiquement acceptable, avantageusement suivie d’une étape d’élimination dudit solvant ; de préférence, le solvant d’extraction est choisi parmi les solvants polaires (l’eau, l’eau subcritique, le méthanol, l’acétate d’éthyle, l’acétone, l’éthanol), les solvants eutectiques, le CO2 supercritique, ou leurs mélanges ; le solvant d’extraction consiste avantageusement en un solvant hydroalcoolique comprenant un ratio eau/éthanol de 10/90 % v/v à 90/10 % v/v, et préférablement de 30/70 % v/v à 70/30% v/v ; ledit procédé d’extraction comprend avantageusement, suite à l’étape de mise en contact, une étape de décoloration et/ou une étape de désodorisation ; - la partie aérienne de la plante du genre Aerva est choisie parmi les feuilles, les tiges, les graines, les fleurs ou les fruits ; - ledit extrait végétal se présente sous forme liquide ou sous forme d’une poudre.

La présente invention concerne également l’extrait végétal selon l’invention, comme médicament.

De préférence, l’extrait végétal est destinée à être utilisé en tant que : - agent préventif et/ou curatif de l’inflammation, avantageusement agent préventif et/ou curatif de l’inflammation chronique, avantageusement encore de l’inflammation chronique liée à des désordres cutanés, et/ou - agent activateur des récepteurs activés par les proliférateurs de peroxysomes (PPARs), avantageusement suite à une stimulation inflammatoire, et/ou - agent pour le traitement des désordres cutanés, notamment ceux liés à une inflammation chronique et/ou - agent activateur des sirtuines, plus particulièrement de SIRT1, avantageusement suite à une stimulation inflammatoire.

De préférence, les désordres cutanés sont choisis parmi le psoriasis, l'eczéma, le lichen plan, les lésions de la peau associées à un lupus, les dermatites (telles que les dermatites atopique, sébhorréïque ou solaire), les kératoses (telles que la kératose sébhorréïque, sénile, actinique, photo-induite ou folliculaire), l'acné vulgaire, les kéloïdes, les nevi, les verrues, les ichtyoses et les cancers cutanés.

De préférence, l’agent activateur des récepteurs activés par les proliférateurs de peroxysomes (PPARs) est utilisé en tant que : - agent pour le traitement des désordres et pathologies cutanées, tel que le psoriasis, la dermatite atopique, et/ou. - agent pour le contrôle du stress oxydant au niveau neuronal, agissant dans le cadre des traumatismes cérébraux, et/ou - agent pour favoriser le phénomène de cicatrisation, et/ou - agent dans la fonction barrière de la peau, en améliorant la cohésion cellulaire, et/ou - agent pour la gestion du poids corporel et les désordres associés. L’agent activateur des sirtuines est avantageusement utilisé en tant que : - agent pour amélioration de la fonction barrière de la peau, et donc de l’hydratation de la peau, et/ou - actif anti-âge, et/ou - agent pour le traitement de syndrome métabolique et maladies associées, et/ou - agent pour le traitement des maladies dégénératives et les désordres associés.

La présente invention concerne également une composition, avantageusement du genre cosmétique, nutraceutique, pharmaceutique ou alimentaire, comprenant : - un extrait végétal selon l’invention, et au moins un excipient physiologiquement acceptable, avantageusement un excipient dermatologiquement acceptable.

Dans ce cas, la composition comprend avantageusement de 0,001% à 20% en poids sec, de préférence de 0,01% à 10% % en poids sec, de l’extrait végétal par rapport au poids total de ladite composition.

La présente invention porte également sur l’utilisation non-thérapeutique dudit extrait végétal, en tant que : - agent activateur des récepteurs activés par les proliférateurs de peroxysomes (PPARs), et/ou - agent activateur des sirtuines, plus particulièrement de SIRT1, et/ou - agent pour améliorer la fonction barrière de la peau, en particulier suite à une stimulation inflammatoire. L’invention concerne également un procédé pour la fabrication d’un extrait végétal selon l’invention, comprenant une étape de mise en contact de ladite partie aérienne de plante du genre Aerva avec au moins un solvant d’extraction physiologiquement acceptable, avantageusement suivie d’une étape d’élimination dudit solvant. D’autres caractéristiques non limitatives et avantageuses de l’extrait conforme à l’invention, prises individuellement ou selon toutes les combinaisons techniquement possibles, sont les suivantes : - ladite plante du genre Aerva consiste en une plante de la variété Aerva javanica (Burm.f.) Juss. ex Schult. (Synonyme : Aerva tomentosa Forsk., Aerva persica (Burm. f.) Merrill) ; - le solvant d’extraction est choisi parmi les solvants polaires (l’eau, l’eau subcritique, le méthanol, l’acétate d’éthyle, l’acétone, l’éthanol), les solvants eutectiques, le CO2 supercritique ; - le solvant d’extraction consiste en un solvant hydro-alcoolique comprenant un ratio eau/éthanol de 10/90 % v/v à 90/10 % v/v, et préférablement de 30/70 % v/v à 70/30% v/v ; - ledit procédé d’extraction comprend, suite à l’étape de mise en contact, une étape de décoloration et/ou une étape de désodorisation ; - la partie aérienne de la plante du genre Aerva est choisie parmi les feuilles, les tiges, les graines, les fleurs ou les fruits ; - la partie aérienne soumise à l’étape de mise en contact est préalablement soumise à une étape de préparation comprenant une étape de broyage, avantageusement selon une granulométrie de lOOpm à 50 mm, préférentiellement selon une granulométrie moyenne de 0,5 à 5 mm ; - l’étape de mise en contact est réalisée dans des conditions dynamiques ou statiques, préférablement à température ambiante, à reflux ou à une température comprise entre 45 et 55'Ό ; - ledit extrait végétal est séché sur un support (par exemple du type maltodextrine, amidon ou appartenant à des polysaccharides), ou formulé sur un support liquide (par exemple du type glycol tel que la glycérine, le propylène glycol, le butylène glycol, le pentylène glycol, le propanediol ou bien à l’aide d’un solvant eutectique ainsi que sur support huileux en utilisant un tensioactif).

Selon un mode de réalisation préféré, le procédé pour la fabrication de l’extrait végétal selon l’invention comprend : a) une étape de préparation de la partie aérienne de la plante du genre Aerva, comprenant une étape de broyage et avantageusement une étape de séchage, b) une étape de mise en contact de ladite partie aérienne avec le solvant d’extraction, avantageusement dynamique ou statique, pendant 1 à 8 heures. préférablement à température ambiante, à reflux ou à une température allant de 45 à55°C, c) une étape de filtration du mélange pour obtenir un filtrat d’intérêt, avantageusement avant de soumettre de nouveau ladite partie aérienne à une nouvelle étape de mise en contact suivie d’une étape de filtration, d) optionnellement, une étape de décoloration et/ou désodorisation dudit filtrat d’intérêt, e) une étape de formulation dudit extrait végétal, par formulation sur un support solide ou par formulation sur un support liquide.

Description détaillée d’un exemple de réalisation

La description qui va suivre fera bien comprendre en quoi consiste l’invention et comment elle peut être réalisée.

Extrait végétal L’invention concerne donc un extrait végétal issu de la partie aérienne d’une plante du genre Aerva.

Par « extrait végétal >>, on entend en particulier un produit issu d’une extraction solide/liquide, par laquelle des composés phytochimiques contenus dans une partie de plante (corps solide) sont solubilisés par un solvant.

Les plantes du genre Aerva appartiennent à la famille des Amaranthaceae.

Ce genre Aerva se rencontre en particulier dans les zones tropicales, principalement sur le continent africain (notamment à Madagascar) mais aussi au sud-ouest et au sud de l’Asie.

Par « genre Aerva >>, on englobe notamment les variétés suivantes : Aerva artemisioides, Aerva congesta, Aerva coriacea Schinz, Aerva humbertii Cavaco, Aerva javanica (Burman f.) A. L. Juss. ex Schultes, Aerva lanata (L.) A. L. Juss. ex Schultes, Aerva leucura Moq., Aerva madagassica Suess., Aerva microphylla Moq., Aerva revoluta Balf.f., Aerva sericea Moq. - island puzzle, Aerva sanguinolenta (L.) Blume, Aerva transvaalensis Gand., Aerva triangularifolia Cavaco.

De préférence, l’invention concerne l’extrait végétal issu de la variété Aerva javanica (Burm.f.) Juss. ex Schult. (Synonyme : Aerva tomentosa Forsk.,

Aerva persica (Burm. f.) Merrill).

Cette variété se présente sous la forme d’une plante herbacée, à port érigé (dont la hauteur peut atteindre 1,6 mètre). Elle est considérée comme vivace suffrutescence avec des feuilles alternes, linéaires à suborbiculaires. Ces fleurs sont unisexuées, aux tépales oblongs à obovaux, groupées en épis cylindriques terminaux et comosés (long : 10 cm). Elle pousse dans les friches, broussailles, rocailles ou lisières de forêts d’Afrique tropicale et subtropicale, dans l’Océan indien ainsi qu’en Asie tropicale et subtropicale jusqu’à 1500 mètre d’altitude.

Procédé d’extraction L’extrait végétal selon l’invention est avantageusement obtenu par la mise en oeuvre d’un procédé comprenant une étape de mise en contact de la partie aérienne de plante du genre Aerva avec au moins un solvant d’extraction physiologiquement acceptable, avantageusement suivie d’une étape d’élimination dudit solvant.

En l’espèce, selon l’invention, ce procédé comprend avantageusement les étapes successives suivantes : a) une étape de préparation de la partie aérienne de la plante du genre

Aerva, b) une étape de mise en contact de ladite partie aérienne avec le solvant d’extraction, c) une étape de filtration du mélange pour obtenir un filtrat d’intérêt, avantageusement avant de soumettre de nouveau ladite partie aérienne à une nouvelle étape de mise en contact suivie d’une étape de filtration, d) optionnellement, une étape de décoloration et/ou désodorisation dudit filtrat d’intérêt, e) une étape de formulation dudit extrait végétal, sur un support solide ou sur un support liquide.

Lors de ce procédé, une étape de concentration peut être mise en oeuvre, dans un but de diminuer les volumes à traiter et pour obtenir une solution concentrée.

Etape de préparation a) L’extrait végétal est préparé à partir de la partie aérienne d’une plante du genre Aerva.

Comme précisé précédemment, la plante du genre Aerva consiste avantageusement en une plante de la variété Aerva javanica (Burm.f.) Juss. ex Schult.

Par « partie aérienne >>, il est englobé les feuilles, les tiges, les graines, les fleurs, les fruits. Ces parties aériennes peuvent être prises individuellement, ou en combinaison.

La partie aérienne est de préférence séchée et broyée, avant une mise en contact avec le solvant d’extraction. Pour autant, l’utilisation de la plante fraîche est également envisageable.

Le broyage est ajusté de sorte à obtenir un broyât présentant une granulométrie de 100 pm à 50 mm, avec une granulométrie moyenne de 0,5 à 5 mm.

Le séchage est quant à lui ajusté de façon à éviter une détérioration de la matière végétale lors de son stockage ; préférentiellement le pourcentage d’eau résiduel est inférieur à 10%.

Etape de mise en contact b)

La partie aérienne (éventuellement broyée et séchée) est mise en contact avec le solvant d’extraction.

Ce solvant d’extraction est avantageusement choisi parmi : - les solvants polaires, à savoir par exemple l’eau, l’eau subcritique, le méthanol, l’acétate d’éthyle, l’acétone, l’éthanol, - les solvants eutectiques, et - le CO2 supercritique.

Lesdits solvants d’extraction cités ci-dessus sont englobés sous la dénomination de solvants organiques, ayant des applications et utilisations industrielles.

Le solvant d’extraction peut encore est constitué d’un mélange d’au moins deux de ces solvants.

De préférence, le solvant d’extraction consiste en un solvant alcoolique ou en un solvant hydro-alcoolique comprenant un mélange d’eau et d’au moins un alcool.

De préférence encore, le solvant hydro-alcoolique est un mélange d’eau et d’éthanol, dont le ratio eau/éthanol est de préférence de 10/90 % v/v à 90/10 % v/v (volume/volume), et préférablement de 30/70 % v/v à 70/30% v/v. Plus particulièrement, le ratio eau/éthanol utilisé est avantageusement de l’ordre de 50/50 % v/v.

Par « solvant eutectique >>, on englobe les solvants eutectiques profonds (DES) qui comprennent un mélange d'un sel organique (ammonium ou phosphonium), ou sans la présence de leur contre-ion, et d'un donneur de liaison hydrogène.

Le CO2 (dioxyde de carbone) supercritique est un fluide soumit à des conditions de température et de pression telles que la température appliquée est supérieure à une température critique (Te), par exemple allant de 35°C à 80°C, et la pression appliquée est supérieure à une pression critique (Pc), par exemple supérieure à 7,4.10®Pa. L’étape de mise en contact de ladite partie aérienne avec le solvant d’extraction s’appuie sur une technique d’extraction solide-liquide, à savoir avantageusement une étape de macération.

Cette mise en contact peut être dynamique (sous agitation) ou statique.

La mise en contact plante/solvant s’effectue avantageusement sur une période de 1 à 8 heures, de préférence pendant 2 heures.

Cette mise en contact peut s’effectuer à température ambiante, à reflux ou à une température allant de 45 à 55°C.

Par « température ambiante >>, on entend une extraction réalisée à une température allant de 15°C à 35°C, préférablement de l’ordre de 20 à 30°C.

Typiquement, le ratio plante/solvant (poids de plante en gramme / volume de solvant en mL) est situé dans une gamme allant de 1 pour 5 à 1 pour 20, et préférentiellement autour de 1 pour 10 (c’est-à-dire 100g de parties aériennes pour 1L de solvant).

Etape de filtration c)

Le produit d’extraction, obtenu à l’issue de l’étape b), est filtré afin d’obtenir un mou d’extraction dépourvu des fibres végétales et des insolubles.

Cette filtration est généralement opérée par filtration successives, typiquement avec des filtres dont la porosité est décroissante (par exemple comprise entre 1000 pm et 5 pm) afin de s’assurer de l’élimination des résidus de fibres végétales. A l’issue de cette étape de filtration c), il est obtenu un rétentat et un filtrat ; le filtrat forme un extrait végétal « brut >> de l’invention.

Une seconde étape de mise en contact b) peut être mise en oeuvre sur le rétentat afin d’épuiser la matière végétale de ses composés phytochimiques. Les étapes b) et c) sont alors de nouveau mises en oeuvre, dans les mêmes conditions que celles décrites ci-dessus.

Les deux passes d’extraction sont alors jointes afin de poursuivre le processus de fabrication de l’extrait de l’invention, jusqu’à obtenir l’extrait végétal « brut >>.

Etape de décoloration et/ou désodorisation d) L’extrait végétal « brut >> peut être décoloré et/ou désodorisé, afin de minimiser l’impact dans son application finale. On obtient ainsi un extrait végétal décoloré et/ou désodorisé.

Afin de décolorer et/ou désodoriser cet extrait, celui-ci est avantageusement mis en contact d’une matière active choisie par exemple parmi la terre décolorante, le charbon actif ou bien des argiles telles que la bentonite.

Plus particulièrement, il est avantageusement utilisé un ratio allant de 1% à 20% poids/poids (et préférentiellement 5% à 10%) de poids de matière active par rapport au poids sec de l’extrait. Les pourcentages en poids sec sont exprimés sur la base du poids de l’extrait ne comprenant pas, ou à l’état de trace, de solvant d’extraction.

La mise en contact est maintenue avantageusement pendant une durée allant de 15 min à 2h, plus particulièrement pendant 1 h.

Cette mise en contact s’effectue à température ambiante ou à 50°C.

Ce mélange est ensuite avantageusement filtré afin d’éliminer la matière décolorante/désodorisante.

Cette étape de décoloration et/ou désodorisation peut également être réalisée par le biais de résines échangeuses d’ions ou de résines adsorbantes.

Etape de formulation de l’extrait végétal e) L’étape de formulation consiste avantageusement à combiner l’extrait végétal brut (le cas échéant concentré et/ou décoloré et/ou désodorisé) avec un support (excipient) physiologiquement acceptable.

Ce support est avantageusement un composé d’origine naturelle, et présent dans la nature.

Cette étape de formulation est avantageusement choisie parmi, d’une part, un séchage sur support solide et, d’autre part, une formulation sur un support liquide. D’une part, le séchage permet une concentration de l’extrait végétal.

Ce séchage peut être réalisé à l’aide d’une installation de séchage adaptée (un atomiseur, un four sous vide ou un sécheur à tambour, par exemple) en présence d’un support solide.

Le support solide consiste avantageusement en un polysaccharide, par exemple la maltodextrine, l’amidon ou un polysaccharide naturel du type gomme d’acacia. L’extrait végétal, en formulation solide, se présente alors avantageusement sous la forme d’une poudre. D’autre part, le support liquide, de viscosité diverse, peut être un solubilisant, un émulsifiant, un surfactant ou un émollient, afin d’améliorer la formulation de l’extrait de l’invention en vue de son application dans les domaines souhaités.

Par exemple, ce support liquide consiste en un composé dérivé du glycol (tel que la glycérine, le propylène glycol, le butylène glycol, le pentylène glycol, le propanediol) ou un support huileux en utilisant un tensioactif.

Par « support liquide >>, on englobe encore : - les polyols ; - l’eau avec ou sans conservateurs ; - l’éthanol ainsi que tout composé de type alkyl-alcool tel que les alcools gras ; - les solvants eutectiques contenant un acide organique (tel que l’acide citrique, l’acide malique, l’acide ascorbique, l’acide lactique, l’acide glycolique) et/ou un sucre (tel que le saccharose, le fructose, l’innositol) et/ou un acide aminé (tel que la glycine, la proline, l’arginine, la bétaine, un dérivé de choline) ; - les alkyl-glucosides, alkyl-polyglucosides ; - le monoglycéride et ses dérivés.

Les polyols sont également appelés glycols et correspondent à des composés organiques comprenant au moins deux fonctions alcool (-OH groupe), tel que des diols avec des substitutions variables comprenant, sans en être limité, le 1,2-propanediol, l’éthylène glycol, le diéthylène glycol, le propylène glycol, le dipropylène glycol, le butylène glycol, le pentylène glycol ; les composés organiques englobent également les triols, tels que le glycérol ou le caprylyl glycol.

Les monoglycérides comprennent, sans en être limité, le glycérol monolaurate, glycérol monocaprate, glycérol monocaprylate, glycérol monooléate, glycérol monomyristate, glycérol monopalmitate et le glycérol monostéarate.

Les alkyl-glucosides et alkyl-polyglucosides comprennent, sans en être limité, le décyl glucoside, arachidyl glucoside, butyl glucoside, caprylyl/capryl glucoside, caprylyl glucoside, cetearyl glucoside, coco-glucoside, éthyl glucoside, isostéaryl glucoside, heptyl glucoside, lauryl glucoside, myristyl glucoside, hexadécyl glucoside, octadécyl glucoside, octyldodécyl glucoside or undécyl glucoside. L’extrait végétal, en formulation liquide, se présente alors avantageusement sous la forme d’un liquide.

Extrait végétal comme médicament L’invention concerne également l’extrait végétal selon l’invention pour son utilisation comme médicament.

Il est en particulier démontré dans les exemples que cet extrait végétal est adapté à être utilisé en tant que : - agent préventif et/ou curatif de l’inflammation, avantageusement agent préventif et/ou curatif de l’inflammation chronique, avantageusement encore agent préventif et/ou curatif de l’inflammation chronique liée à des désordres cutanés et/ou - agent activateur des récepteurs activés par les proliférateurs de peroxysomes (PPARs), avantageusement suite à une stimulation inflammatoire, et/ou - agent pour le traitement des désordres cutanés, notamment ceux liés à une inflammation chronique et/ou - agent activateur des sirtuines, plus particulièrement de SIRT1, avantageusement suite à une stimulation inflammatoire.

Agent préventif et/ou curatif de rinflammation

Tel que démontré dans les exemples, l’extrait végétal selon l’invention est adapté au traitement de l’inflammation, et plus particulièrement de rinflammation chronique et tous les désordres associés. L’extrait végétal selon l’invention peut constituer ainsi un antiinflammatoire, c’est-à-dire un médicament destiné à combattre une inflammation, notamment pour traiter une réaction inflammatoire et les maladies qui en résultent. L’extrait végétal selon l’invention constitue avantageusement un agent pour le traitement de l’inflammation chronique, et des maladies inflammatoires chroniques.

De préférence encore, l’extrait végétal selon l’invention constitue un agent pour le traitement de l’inflammation chronique liée à des désordres cutanés, à savoir par exemple la dermatite atopique, la dermatite séborrhéique, l’acné, le psoriasis, la couperose, l’érythrose, la télangiectasie ou rosacée, ou les pellicules.

Par « traitement >>, on englobe les traitements : - préventifs, destinés à prévenir l'apparition d'une maladie, et - curatif, pour la guérison d’une maladie. A ce sujet, l’extrait végétal selon l’invention constitue un activateur des systèmes enzymatiques nécessaires à la synthèse des molécules de la résolution.

En particulier, l’extrait végétal selon l’invention comporte avantageusement une activité promotrice à l’égard des systèmes enzymatiques de la famille des lipoxygénases (LOX), avantageusement 5-LOX et/ou 12-LOX et/ou 15-LOX, clés dans la synthèse de médiateurs lipidiques conduisant aux molécules de la résolution. L’extrait végétal constitue encore un agent apte à stimuler la production de précurseurs des molécules de la résolution, à savoir l’une au moins des molécules suivantes : - isses de l’ARA : LTB4, 5-HETE, 12-HETE, 15-HETE ; - issues du DMA: 14-HDoHE, 17-HdoHE, RvD1, RvD2, 7-Mar1, PD1, PDx; - issue de ΓΕΡΑ : 18-HEPE. L’extrait végétal constitue également un agent apte à stimuler la production de médiateurs finaux de la résolution, à savoir l’un au moins des médiateurs suivants : RVD1, RVD2, 7-Mar1 et PD1.

Agent activateur des PPARs

Tel que démontré encore dans les exemples, l’extrait végétal selon l’invention peut encore être utilisé comme agent activateur (agoniste) des récepteurs activés par les proliférateurs de peroxysomes (PPARs), avantageusement suite à une stimulation inflammatoire. L’extrait végétal selon l’invention constitue ainsi un principe actif ayant une capacité d’activation des voies relatives aux PPARs au sein de l’organisme, et ainsi d’amélioration et de traitements des désordres associés à ces voies métaboliques.

Pour mémoire, les récepteurs activés par les proliférateurs de peroxysomes (dits encore « PPARs >> pour « Peroxisome Proliferator-Activated Receptors >>) sont membres de la superfamille des récepteurs nucléaires qui régulent notamment la synthèse des lipides, du glucose et des acides aminés au sein de l’organisme.

Les exemples montrent en particulier que cet extrait végétal selon l’invention est un agoniste de l’un au moins des PPARs, choisi avantageusement parmi PPAR-a, -β/δ, -y.

En particulier, l’extrait végétal selon l’invention est adapté à potentialiser l’expression des ARNm des PPARbeta et PPARalpha, en particulier suite à une stimulation inflammatoire.

Un tel extrait végétal a ainsi une indication à l’égard des pathologies liées aux voies relatives aux PPARs, notamment en tant que : - agent pour le traitement des désordres et pathologies cutanées, tel que le psoriasis, la dermatite atopique, et/ou - agent pour le contrôle du stress oxydant au niveau neuronal, agissant dans le cadre des traumatismes cérébraux, et/ou - agent pour favoriser le phénomène de cicatrisation, et/ou - agent dans la fonction barrière de la peau, en améliorant la cohésion cellulaire, et/ou - agent pour la gestion du poids corporel et les désordres associés.

Plus généralement, un tel extrait peut encore être adapté pour traiter les maladies neurodégénaratives, la douleur, le cancer, le système immunitaire, les désordres cutanés et le traitement des pathologies liées à une surproduction du sébum ; il est également destiné à être utilisé pour la protection vis-à-vis du stress oxydant.

Les PPARs sont donc impliqués dans de nombreux processus biologiques. L’extrait végétal selon l’invention présente ainsi un intérêt pharmacologique dans le traitement des désordres métaboliques impliquant les PPARs et de leurs conséquences à long terme, à savoir : a) le syndrome métabolique

Les activateurs des PPARa ont prouvés qu'ils pouvaient réguler l'obésité chez les rongeurs par augmentation de l'oxydation hépatique des acides gras ainsi que par diminution des niveaux de triglycérides circulants, responsables de l'hypertrophie et de l'hyperplasie des cellules adipeuses. Quant aux ligands des PPARy, ils sont impliqués dans la régulation de l'expression de la leptine dans le tissu adipeux. La leptine est une protéine dont le principal effet est de réduire l’appétit. b) la réponse immunitaire

Le PPARy a été reconnu comme jouant un rôle fondamental dans la réponse immunitaire par sa capacité à inhiber l'expression de cytokines et de diriger la différenciation des cellules immunitaires vers des phénotypes antiinflammatoires. Des résultats d'essais cliniques récents suggèrent que les agonistes naturels des PPARy présents dans les aliments peuvent être bénéfiques pour la santé humaine. c) la cicatrisation/fonction barrière

Le phénomène de cicatrisation est un processus divisé en trois phases : la phase inflammatoire, la phase de migration des kératinocytes ainsi que la phase de ré-épithélialisation (fermeture de la plaie). Le PPARβ/δ est impliqué dans la migration et l'adhésion des kératinocytes. Un équilibre délicat existe entre les premiers signaux pro-inflammatoires déclenchés par le PPARβ/δ, et les voies de régulation négative aux étapes ultérieures de la cicatrisation des plaies. On obtient donc un réglage fin du processus de cicatrisation, évitant la formation de cicatrice chéloïde par exemple ainsi que toute cicatrice anormale. Ce dernier point passe également par la voie PPARy. L’action sur les PPARs a donc un effet bénéfique au niveau de la fonction barrière en agissant sur l’adhésion et la cohésion cellulaire. d) Analgésique

Les agonistes synthétiques des PPARa agissent comme des analgésiques à large spectre qui agissent de façon dose-dépendante. Il a été rapporté que l'administration supraspinale de ligands du PPARa comme l’acide perfluorooctanoïque, réduisait l'œdème périphérique et/ou l'hyperalgésie inflammatoire. D'autre part, l'administration intrathécale de ligands du PPARy comme la rosiglitazone réduisait les signes cliniques relatifs à des douleurs neuropathiques. Ceci démontre que ces médicaments, ligands des PPARs, pourraient être utilisés comme agents analgésiques. e) Désordres et pathologies cutanés L’activation des voies PPARa et y active la différentiation cellulaire, régule l’apoptose et inhibe la prolifération cellulaire agissant ainsi positivement dans le cadre de pathologies cutanées tel que le psoriasis, la dermatite atopique d’origine allergique ou non. En effet, il a été décrit dans le brevet EP1041977 que les activateurs de PPARs peuvent agir sur les désordres cutanés liés à une anomalie de la différenciation des cellules épidermiques. On peut donc citer, à titre d'exemple, le psoriasis, l'eczéma, les dermatites, l'acné vulgaire, les kératoses, dont l'ichtyose, et les cancers cutanés. Cette anomalie de la différenciation des cellules épidermiques est généralement accompagnée d'une hyperprolifération des cellules épidermiques.

Par ailleurs, il a été décrit dans le brevet FR2004/003069 que les activateurs de PPARs sont capables d’inhiber la production de sébum en régulant la taille des glandes sébacées. L'excès de sébum peut servir de support au développement anarchique de la flore bactérienne et causer des comédons et/ou des lésions acnéiques, ou encore au niveau du cuir chevelu à une desquamation anormale liée à la présence de la levure Malassezia, responsable de la production de pellicules. Les désordres liés à la fonction sébacée peuvent également conduire à des désordres dermatologiques, notamment les dermites péri-orales, les pathologies liées à l'hyperplasie des glandes sébacées telles que l'hyperplasie héréditaire des glandes sébacées, la surproduction de sébum liée à des désordres hormonaux tels l'hyperandrogénie d'origine endocrinienne.

Agent pour le traitement des désordres cutanés

Tel que démontré encore dans les exemples, l’extrait végétal selon l’invention peut être utilisé comme un agent pour le traitement des désordres cutanés, notamment ceux liés à une inflammation chronique.

Les désordres cutanés en question englobent notamment le psoriasis, l'eczéma, le lichen plan, les lésions de la peau associées à un lupus, les dermatites (telles que les dermatites atopique, sébhorréïque ou solaire), les kératoses (telles que la kératose sébhorréïque, sénile, actinique, photo-induite ou folliculaire), l'acné vulgaire, les kéloïdes, les nevi, les verrues, les ichtyoses et les cancers cutanés. A cet effet, l’extrait selon l’invention est apte à induire une expression des ARNm de protéines de structure ou de kératinisation de la peau, à savoir par exemple LAMC2, FN1, ITGA2, IVL, KRT19, GBA, HAS2.

En outre, il est montré que l’extrait selon l’invention génère un effet synergique sur l’expression des ARNm FN1, LAMC2, IVL et ITGA2, suite à une stimulation inflammatoire.

Agent activateur des sirtuines

Tel que démontré encore dans les exemples, l’extrait végétal selon l’invention est destiné à être utilisé comme un agent activateur des sirtuines, plus particulièrement de SIRT1, avantageusement suite à une stimulation inflammatoire. L’extrait végétal selon l’invention constitue ainsi un principe actif ayant la capacité d’activation des voies SIRT1 au sein de l’organisme, et donc plus généralement la capacité d’améliorer des désordres associés à cette voie métabolique. L’extrait végétal selon l’invention constitue ainsi un principe actif pour des applications en tant qu’agent pour amélioration de la fonction barrière de la peau, et donc de l’hydratation de la peau, antioxydant, réparation de l’ADN et anti-âge. L’extrait végétal selon l’invention constitue également un principe actif pour la prévention et le traitement des maladies dégénératives liées au vieillissement, la sénescence des cellules, les effets néfastes du stress oxydant, la perte d’intégrité de la fonction barrière et l’amélioration des pathologies liées à cela tel que la dermatite atopique. L’invention concerne ainsi un nouvelle agent activateur de SIRT1 pour améliorer et/ou maintenir une composition corporelle saine, pour améliorer et/ou maintenir le glucose ou la gestion de l'insuline, le maintien du bon-vieillissement, pour améliorer et/ou maintenir un taux de lipide sain ou le métabolisme des graisses, pour prévenir et/ou traiter le surpoids, pour améliorer et/ou maintenir une énergie homéostasique saine, pour protéger les cellules, pour réparer l'ADN et/ou pour le maintien de la puissance physique et/ou de la masse musculaire au cours du vieillissement. A cet égard, la composition selon l'invention est destinée à ralentir le processus de vieillissement et à prévenir les maladies chroniques liées à l'âge. L’invention concerne ainsi un nouvel agent activateur de SIRT1 pour réduire le risque de développer une obésité, ce qui réduit le risque de développer un diabète de type II, ce qui réduit le risque de développer des niveaux de lipides sanguins élevés ou ce qui réduit le risque de développer une athérosclérose et/ou des maladies cardio-vasculaires.

Extrait végétal comme agent actif non-thérapeutique L’invention concerne également l’extrait végétal selon l’invention comme principe actif non-thérapeutique, cosmétique ou dermatologique.

Cette utilisation non-thérapeutique englobe le traitement de la surproduction de sébum.

Cette utilisation non-thérapeutique englobe encore l'utilisation de l’extrait en tant qu'agent calmant, en tant qu'agent antipelliculaire ou en tant qu’agent antiâge. L’extrait végétal selon l’invention peut encore être utilisé dans des applications non-thérapeutiques, par exemple cosmétique, pour une indication en tant que : - agent activateur (agoniste) des récepteurs activés par les proliférateurs de peroxysomes (PPARs), et/ou - agent activateur des sirtuines, plus particulièrement de SIRT1, et/ou - agent pour améliorer la fonction barrière de la peau, en particulier suite à une stimulation inflammatoire.

Composition selon l’invention L’invention concerne encore une composition, avantageusement une composition cosmétique, nutraceutique, pharmaceutique ou alimentaire. comprenant l’extrait décrit précédemment.

Une telle composition est destinée en particulier à une utilisation chez l’homme.

Par « composition cosmétique >>, on entend notamment une préparation destinée à être appliquée sur la peau, les cheveux, les dents ou les muqueuses buccales en vue de les nettoyer, de les protéger, de les maintenir en bon état.

Par « composition nutraceutique >>, on entend notamment l’extrait végétal, rendu disponible sous forme médicinale et habituellement non associée à des aliments, et ayant un effet physiologique bénéfique ou protecteur contre les maladies chroniques.

La composition selon l’invention contient ainsi l’extrait végétal selon l’invention, avantageusement en tant que principe actif.

Cette composition comprend avantageusement de 0,001% à 20% en poids de l’extrait végétal par rapport au poids total de ladite composition finale (selon si l’extrait est séché ou formulé sur support liquide), et plus particulièrement de 0,01% à 10%.

Cette composition selon l’invention peut contenir au moins un autre principe actif, en combinaison avec l’extrait végétal selon l’invention.

La composition selon l'invention comprend encore un excipient physiologiquement acceptable, adaptée notamment en fonction de la galénique recherchée et de la voie d’administration souhaitée (entérale, parentérale ou topique).

Cet excipient physiologiquement acceptable consiste de préférence en un excipient cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable.

Pour une voie entérale, la composition (plus particulièrement la composition nutraceutique, alimentaire et pharmaceutique), peut se présenter sous forme de comprimés, de gélules, de dragées, de sirops, de suspensions, de solutions, de poudres, de granulés, d'émulsions, de microsphères ou nanosphères ou vésicules lipidiques ou polymériques permettant une libération contrôlée.

Pour une voie parentérale, la composition peut se présenter sous forme de solutions ou suspensions, pour perfusion ou pour injection.

Les composés utilisés selon l'invention, en voie entérale ou parentérale, sont généralement administrées à une dose journalière d'environ 0,001 mg/kg à 1000 mg/kg en poids corporel en 1 à 3 prises, plus particulièrement de 0,01 mg/kg à 100 mg/kg en poids corporel en 1 à 3 prises.

De préférence, la composition (plus particulièrement cosmétique et pharmaceutique) est conditionnée sous une forme convenant à une application par voie topique.

Pour une telle voie topique, la composition selon l'invention est plus particulièrement destinée au traitement de la peau et des muqueuses.

Elle peut se présenter sous forme d'onguents, de crèmes, de laits, de pommades, de poudres, de tampons imbibés, de solutions, de gels, de sprays, de lotions ou de suspensions. Elle peut également se présenter sous forme de microsphères ou nanosphères ou vésicules lipidiques ou polymériques ou de patches polymériques et d'hydrogels permettant une libération contrôlée. Cette composition par voie topique peut se présenter soit sous forme anhydre, soit sous forme aqueuse.

Encore de manière générale, la composition peut être, sans être limitatif, sous la forme d’une poudre, une émulsion, une microémulsion, une nanoémulsion, une suspension, une solution, une lotion, une crème, un gel crème, un gel aqueux ou éthanolique, un sérum, un aérosol, une dispersion de vésicules lipidiques.

Par « émulsion >>, il est entendu en particulier une émulsion du type eau dans huile, huile dans eau ou encore une double émulsion (huile dans eau dans huile ou eau dans huile dans eau).

La composition cosmétique ou pharmaceutique selon l’invention peut contenir un solvant choisi en fonction de l’application finale et l’administration souhaitée. Par exemple, ce solvant est choisi parmi l’eau, l’éthanol, la glycérine, le propylène glycol.

La composition peut également contenir au moins un additif classiquement utilisé dans le domaine cosmétique, pharmaceutique, nutraceutique ou alimentaire choisi parmi un émollient ou humectant, un agent gélifiant, un surfactant, un antiagglomérant, une huile, un actif, un colorant, un pigment, un parfum, un arôme, un écran solaire.

De manière générale, la composition peut en outre contenir des additifs inertes ou même actifs ou des combinaisons de ces additifs, à savoir par exemple l’un au moins des additifs suivants : - un ou plusieurs émollients, mouillants ou hydratants, tels que la glycérine ou autres glycols ; ces additifs peuvent être présents dans la composition de l’ordre de 0,1% à 40%, préférablement de 1% à 10%, par rapport au poids total de la composition ; - un ou plusieurs agents gélifiants ou texturants, choisi, sans être exhaustif, par exemple parmi des dérivés cellulosiques, des gommes d’origine naturelle (guar, acacia, caroube, alginate, carraghénane, pectine, tragacanthe) ou d’origine biotechnologique (xanthane), des argiles (laponite, bentonite, montmorillonite, kaolin), copolymères acrylates tels que des acrylates/C 10-30 alkyl acrylate ; ces additifs peuvent être présent dans la composition dans des proportions de l’ordre de 0,1% à 15% par rapport au poids total de la composition ; - un ou plusieurs surfactants, de polarité et ionicité diverses, présents dans des proportions de l’ordre de 0,1% à 10%, préférablement de 0,5% à 8% par rapport au poids total de la composition ; - une ou plusieurs substances grasses couramment appelées huiles, volatiles ou non, de base pétrochimique, silicone ou végétale telles que, sans en être limité, une huile végétale (huile de jojoba, huile de tournesol, huile de sésame, huile de thé, huile de tsubaki, huile d’argan, huile de canneberge, beurre de karité, beurre de mangue), isododécane, octyldodécanol, squalane, diméthicone, préférablement dans des proportions de l’ordre de 0,1% à 30%, plus particulièrement de 0,5% à 15% par rapport au poids total de la composition ; - un ou plusieurs actifs d’origine naturelle ou synthétique ayant une activité biologique, tels que par exemple, sans en être limité, des vitamines, de l’acide hyaluronique, des dépigmentants ou des extraits de plantes, pouvant être utilisés dans des proportions de l’ordre de 0,001% à 10% et plus particulièrement de 0,1% à 5% par rapport au poids total de la composition ; - un ou plusieurs colorants d’origine naturelle, animale ou synthétique dans des proportions de l’ordre de 0,01% à 10% par rapport au poids total de la composition ; - un ou plusieurs agents antiagglomérants ou agents de compactage tels que le stéarate de magnésium, la silice, la maltodextrine ou la cellulose et ses dérivés, dans des proportions de l’ordre de 0,1% à 20% par rapport au poids total de la composition ; - les parfums, les antioxydants, les conservateurs ou agents d’amélioration de la saveur par exemple.

Exemples

Exemple 1 : Procédé d’obtention d’un extrait végétal d’Aerva

Un extrait végétal d’Aerva a été obtenu par la mise en œuvre du procédé suivant : a) une matière première végétale d’Aerva javanica (Burm.f.) Juss. ex Schult. est broyée selon une granulométrie de 100pm à 50 mm, préférentiellement selon une granulométrie moyenne de 1 mm ; b) la matière première est mise en contact avec de l’éthanol 50%; une extraction dynamique est réalisée pendant 2h à 50^ ; c) une filtration est réalisée avant de soumettre de nouveau la matière végétale en contact avec le solvant d’extraction ; d) une étape de décoloration/désodorisation est réalisée au besoin avec l’ajout de 10% charbon actif par rapport à l’extrait sec présent. La mise en contact est de 30 min à 1h. e) après filtration et concentration, l’extrait est séché sur un support solide du type maltodextrine ou formulé sur un support liquide tel que la glycérine.

Exemple 2 : Stimulation des médiateurs lipidiques de la résolution sur un modèle cellulaire

Matériel et Méthode L’action de l’extrait selon l’Exemple 1 a été évaluée sur la synthèse de 7 lipides positionnés aux intersections stratégiques du métabolisme des AGPl (acides gras polyinsaturés : acide arachidonique (ARA), acide éicosapentaénoïque (EPA), acide docosahéxaénoïque (DMA)), ARA (5-HETE, 12-HETE, 15-HETE), DMA (14-HDoHE, 17-HDoHE), EPA (18-HEPE).

Ainsi l'évaluation de ces 7 lipides a permis de savoir si les chemins enzymatiques impliqués dans la synthèse des médiateurs de la résolution, jouant un rôle crucial dans le cadre d’inflammation chronique, ont été mobilisés ou non par l’extrait selon l’Exemple 1. Les métabolites finaux issus des AGPl ont ainsi été évalués dans le même modèle cellulaire.

Pour l’ensemble des expériences menées, seules les doses non cytotoxiques ont été évaluées.

Après essai de 0,0064 à 500 pg/mL, les doses non cytotoxiques de 11, 33, 100 et 200 pg/mL ont été conservées pour la suite des travaux. L’essai sur la cytotoxicité a été réalisé sur des kératinocytes de l’épiderme humains normaux (NHEK, Promocell) et celui sur la synthèse des molécules de la résolution a été réalisé sur une co-culture de cellules dendritiques (DC) et de NHEK.

Pour la mise en œuvre du test de cytotoxicité, les NHEK ont été cultivés en présence des actifs à des doses allant de 0,0064 à 500 pg/mL pendant 24 heures dans du milieu de culture à la densité de 250 cellules/cm^ en boite 96 puits. Durant les 6 dernières heures, de l’Alamar Blue (Invitrogen: DALI 025) a été introduit dans le milieu. Ce réactif contient de la résazurine, un indicateur non fluorescent qui est réduit en résorufine, un indicateur fluorescent par les cellules métaboliquement actives. Le niveau de fluorescence produit est donc proportionnel au nombre de cellules vivantes. L’excitation est faite à 530 nm et la lecture à 590 nm. A l’issue de cette expérience, une concentration non cytotoxique par actif a été sélectionnée pour être évaluée sur la synthèse des médiateurs lipidiques.

Pour la réalisation du test de mise en évidence de l’activation des voies de la résolution, les monocytes humains primaires sont ensemencés et différenciés à l’aide de GM-CSF (10 ng/ml) et d’IL-4 (lOng/ml) ; en parallèle des cellules de culture primaire de kératinocyte (NHEK) sont préparées. Après une semaine de culture, les NHEK sont déposées dans des inserts et mis en culture sans contact avec les cellules devenues dendritiques (DC). Le système de coculture DC/NHEK a été pré-incubé en présence de l’actif à la concentration de 200 pg/mL pendant 4 heures. La réponse inflammatoire a ensuite été déclenchée par l’association de phorbol myristate (PMA - 0,05 pM) et du calcium ionophore (A23187 - 1 pM), en présence d'un mélange d'acide éicosapentaénoïque (EPA - 1 pg/mL) et d'acide docosahexaénoïque (DHA - 1 pg/mL) (ratio 1/1). L’ajout de ΓΕΡΑ et de DHA est nécessaire pour abaisser le seuil de sensibilité et ainsi permettre de mesurer les molécules de la résolution. Les surnageants ont été récupérés au bout de 2h et 4h pour être analysés en spectrométrie de masse et pour quantifier les molécules issues de l’acide arachidonique (5-HETE, 12-HETE, 15-HETE), du DHA (14-HDoHE, 17-HDoHE), de l’EPA (18-HEPE).

Des triplicats expérimentaux ont été effectués par condition expérimentale.

Afin de doser les médiateurs lipidiques, les surnageants ont été décongelés sur glace et les composés lipidiques ont été concentrés par extraction en phase solide (SPE), repris dans du méthanol avant analyse. La méthode analytique utilisée consiste à séparer les différents analytes par chromatographie liquide haute pression en fonction de leur temps de rétention et de les quantifier par spectrométrie de masse. Les analyses ont été effectuées sur une chaîne LC 1290 Infinity (Agilent Technologies) couplée à un spectromètre de masse 6460 Triple Quad LC/MS (Agilent Technologies) équipé d’une source d’ionisation en electrospray (Jet stream technology) opérant en mode négatif. Les séparations chromatographiques ont été réalisées sur une colonne ZorBAX SB-C18.

Les dosages de chaque marqueur ont été ensuite transformés par calcul pour obtenir le pourcentage d’activation par rapport au témoin stimulé avec AGPl de la plaque en utilisant le calcul suivant : % d’activation = 100 x (valeur de l’actif - valeur du témoin AGPI)/valeur du témoin AGPl Résultats sur l’évaluation des biomarqueurs par spectrométrie de masse A la fin du temps de stimulation inflammatoire, les surnageants ont été récupérés pour être analysés en spectrométrie de masse et pour quantifier les molécules issues : - de l’acide arachidonique : LTB4, 5-HETE, 12-HETE, 15-HETE ; -du DHA : 14-HDoHE, 17-HdoHE, RvDI, RvD2, 7-Mar1, PDI, PDx;

-de l’EPA : 18-HEPE

Ces résultats sont récapitulés sur les tableaux 1 et 2 ci-dessous.

Tableau 1 : Dosage des médiateurs lipidiques des voies de la résolution après stimulation (2h et 4h) par l’extrait d’Aerva à 200pg/mL

Tableau 2 : Dosage des molécules de la résolution après stimulation par l’extrait à’Aerva à 200pg/mL

Nous observons que la stimulation PMA/A23187, en présence des AGPl, active bien les systèmes enzymatiques nécessaires à la synthèse des molécules de la résolution.

En effet nous observons l’augmentation des 5-HETE, 12-HETE, 15-HETE indicateurs des activités enzymatiques 5-lipoxygénase, 12-lipoxygénase, 15-lipoxygénase respectivement.

Enfin, nous observons également la sécrétion de 14-HDOHE, 17-HDOHE et de 18-HEPE, précurseurs des molécules de la résolution. Ces résultats sont conformes avec ce qui est attendu.

Une augmentation de la sécrétion des intermédiaires de synthèse impliqués dans la résolution de l’inflammation est observée sous l’effet de l’extrait selon l’Exemple 1. Cette augmentation est significative pour tous les intermédiaires, le pourcentage d’activation ayant tendance à augmenter (sauf pour le 15-HETE) au cours du temps de stimulation.

Sur les médiateurs finaux de la résolution, nous avons observé une tendance à l’augmentation de la sécrétion de RVD1 et RVD2. Nous observons également une augmentation significative de la sécrétion de 2 autres métabolites : 7(s)Maresine et PD1.

Ces éléments sont donc en faveur d’un rôle pro-résolutif dudit extrait d’Aerva.

Exemple 3 : Activation des voies et récepteurs de la résolution sur un modèle de peau reconstruite

Des modules d’épiderme humain reconstruit (RHE) ont été utilisés dans les manipulations et des triplicats expérimentaux (trois puits) ont été effectués.

Les modules ont été fournis par Skinethic au stade de 12 jours de développement et présente une surface kératinisée en contact avec l’air, puis une surface de cellules non kératinisées en profondeur en contact avec le milieu de culture.

Ils ont été maintenus en culture 4 jours supplémentaires avant d’être stimulés en appliquant l’actif en topique et dans le milieu de culture.

La stimulation en topique a été permise grâce à la dilution de l’actif dans le milieu de culture et à l’application de cette solution à la surface du module RHE pendant 24 heures. A l’issue de ces 24 heures, le milieu en contact avec les cellules kératinisées a été aspiré délicatement pour permettre à nouveau une culture air-liquide. Le milieu de croissance et de stimulation est un milieu directement fourni par le constructeur, spécifique au maintien des RHE.

Afin de tester la viabilité des RHE vis-à-vis de l’extrait selon l’Exemple 1, les RHE ont été incubés en présence de l’actif appliqué en topique et dans le milieu de culture pendant 24 heures comme précédemment décrit.

Au bout de ces 24 heures la stimulation appliquée en topique a été retirée pour permettre une culture air-liquide pendant 24, 48 ou 72 heures en présence d’Alamar blue, avec une lecture de la fluorescence à chacun de ces temps. A la suite de cet essai, la concentration test de 500 pg/mL a été sélectionnée pour la suite de l’étude.

Les modules RHE ont été incubés en présence de l’actif aux deux doses sélectionnées lors du test de viabilité. L’actif a été appliqué pendant 24 heures en topique et dans le milieu de culture cellulaire comme précédemment décrit. Au bout de ces 24 heures la stimulation appliquée en topique a été retirée pour permettre une culture air-liquide pendant 24 heures supplémentaires.

Une stimulation inflammatoire (Mix CTK), correspondant à un cocktail d’OSM, de TNF-a et d’IL-17 à 10 ng/mL chacun (choisis selon la publication de Boniface K et al. J. Immunol. 2007, 178 :4615) a été ensuite ajoutée ou non pendant les 24 heures de culture air-liquide dans le milieu en dessous des RHE. Le solvant de l'actif a été introduit dans les puits contrôles. A l’issue de l’étape de stimulation, les cellules ont été séparées de leur support à l’aide de dispase, pour être ensuite récupérées et lysées à l’aide d’un precellys en présence de qiazol. Après une extraction phénol/chloroforme et passage sur colonne de nettoyage, les ARN ont été repris dans de l’eau milliQ avant d’être dosés sur nanodrop et congelés pour utilisation ultérieure. La reverse transcription a ensuite était effectuée à l’aide du kit Maxima First stand cDNA synthesis (ThermoFisher), puis les étapes spécifiques de préparation pour la puce (96x96) selon le protocole de Fluidigm version PN100-1201B1 ont été entreprises.

Le taux d’expression des ARNm a été normalisé avec les gènes de référence suivant : YWHAZ, GAPDH, HPRT1 et ACTB.

Les résultats sont exprimés en nombre de fois d’induction vis à vis du témoin DMSO à 10'^ M en utilisant la méthode de Livak appelé communément DDCt (Delta Delta de Ct). Les Ct correspondent aux nombres de cycles nécessaires pour générer un signal fluorescent au-dessus du seuil (« threshold ») prédéfini. Pour chaque gène, les valeurs sont exprimées par rapport au témoin qui égal à 1.

Sous stimulation inflammatoire, l’expression des gènes suivants a été suivie (tableau 3) :

Tableau 3

En présence du cocktail inflammatoire, nous avons pu montrer que l’extrait d’Aerva induit une augmentation de l’expression du gène de la LTA4 hydrolase (LTA4H p=0,04028), enzyme impliquée dans la synthèse de LTB4.

Ces résultats sont en parfaite cohérence avec les expériences menées sur le modèle DC/NHEK où nous avions observé que l’actif en conditions inflammatoires augmentait celle de LTB4.

Par ailleurs, nous avons noté une tendance à l’augmentation des ARNm de la eLOX-3, enzyme potentiellement impliquée dans la synthèse des molécules de la résolution en raison de son activité 5-Lipoxygénase. De même l’expression de la 15LOX1 est très légèrement accrue. Ces résultats sont également cohérents avec ceux obtenus sur le modèle DC/NHEK où nous avions observé une augmentation de 15-HETE et de 5-HETE indicateurs respectifs des activités 15-Lipoxygénase et 5-Lipoxygénase. L’activité enzymatique 15-LOX est en particulier nécessaire à la synthèse de la protectine DI confortant ainsi la synthèse observée dans l’Exemple 2 de PDI sous l’effet de l’extrait d’Aerva.

Compte tenu des résultats obtenus sur le modèle kératinocyte-cellules dendritiques, ces inductions permettent la mise en place d’une boucle de contrôle positive de l’inflammation grâce à l’induction des précurseurs des molécules de la résolution, qui dépendent de ces enzymes. Ces résultats sont tout à fait en lien avec la capacité de l’extrait d’Aerva pour agir au niveau du contrôle et de la résolution d’une inflammation chronique.

Par ailleurs, les gènes liés aux récepteurs de la résolution ont été suivis après stimulation du RHE par l’extrait d’Aerva (tableau 4).

Tableau 4 L’expression des récepteurs directement reliés à la résolution a été activée par l’extrait d’Aerva comme le récepteur à la résolvine E1 CMKRL1 et GPR32, le récepteur à la résolvine D1 et FPR2, le récepteur à la lipoxine A4.

Après stimulation inflammatoire, un suivi identique a été réalisé (tableau 5):

Tableau 5

En présence de la stimulation inflammatoire représentée par le mix de cytokines, nous avons pu mesurer que l’extrait d’Aerva potentialise l’expression des ARNm des récepteurs décrits au paragraphe précédent, avec notamment l’induction significative de FPR2 (p=0,01238), le récepteur à la lipoxine A4, de CMKRL1 (p=0,07858) le récepteur de la résolvine E1 et de GPR32 (p=0,05332) le récepteur de la résolvine D1.

Exemple 4 : Activation des voies de protection cutanée sur un modèle de peau reconstruite

Comme décrit dans l’exemple 3, l’extrait d’Aerva a été mis en contact à la concentration de 500 pg/mL dans un modèle de peau reconstruite.

Après 24h d’incubation, les gènes suivants ont été stimulés (tableau 6) :

Tableau 6 L’extrait d’Aerva induit les mécanismes de protection de la peau puisque nous avons pu mesurer une augmentation significative des ARNm de l’ILIB (p=0,00504), de l’ILIA (p=0,00685), de l’IL17A (p=0,01932) et IL12A (p=0,01941) directement impliquées dans la mobilisation des systèmes de défense cutanée ainsi qu’une induction des ARNm reliés à des peptides antimicrobiens (RNASE7 (p=0,01374)).

Exemple 5 : Activation des voies de contrôle de l’inflammation sur un modèle de peau reconstruite

Comme décrit dans l’exemple 3, l’extrait d’Aerva a été mis en contact à la concentration de 500 pg/mL dans un modèle de peau reconstruite en présence d’une stimulation pro-inflammatoire.

Après 24h d’incubation, les gènes suivants ont été stimulés (tableau 7) :

Tableau 7

Nous avons pu constater que l’extrait d’Aerva extrait possède une tendance à reverser l’effet de la stimulation inflammatoire de façon plus forte qu’il n’arrive à induire sa potentialisation. Ainsi il présente des effets intéressants de contrôle de la réaction inflammatoire sans la paralyser totalement, permettant alors l’expression d’activités importantes comme les activités de défense (DEFB4 p=0,1470). Ces résultats sont totalement en adéquation avec une action de contrôle d’un état inflammatoire chronique, qui se veut persistant et latent.

Exemple 6 : Activation des voies de contrôle du métabolisme général et des défenses vis-à-vis du stress oxydant - Activation des PPARs

Après 24h d’incubation, les gènes suivants ont été stimulés (tableau 8) :

Tableau 8 L’extrait d’Aerva induit une augmentation de l’expression des ARNm des facteurs de transcription PPARbeta (p=0,00006), PPARalpha (p=0,02723) et PPARgamma (p=0,12356) impliqués dans des contrôles physiologiques larges comme le métabolisme des acides gras, le contrôle de l’inflammation ou les phénomènes de cicatrisation par exemple. L’activation de ces voies indiquent clairement que l’extrait d’Aerva joue un rôle de contrôle aussi bien au niveau d’un phénomène inflammatoire chronique mais également pour stimuler une réponse de l’organisme vis-à-vis du stress oxydant.

Les PPARs jouent un rôle dans l’homéostasie générale de l’organisme et sont des cibles thérapeutiques dans différents domaines avec une action dans les désordres cutanés, et notamment les pathologies de l’ordre de l’inflammation chronique (dermatite atopique, psoriasis par exemple), ainsi que la cicatrisation, la gestion du poids corporel, les maladies neuro-dégénératives ou le cancer (Sertznig et al., 2008 ; Yessoufou et al, 2010).

Après stimulation inflammatoire, les mêmes gènes ont été suivis (tableau 9).

Tableau 9

En présence de la stimulation inflammatoire, nous avons pu montrer que l’extrait d’Aerva potentialise l’expression des ARNm des PPARbeta (p=0,01845) et alpha (p=0,04015).

Exemple 7 : Activation des voies de la cohésion cellulaire derme-épiderme, jouant un rôle dans la fonction barrière

Après 24h d’incubation, les gènes suivants ont été stimulés (tableau 10) :

Tableau 10

Nous avons pu mettre en évidence que l’extrait d’Aerva induit l’expression des ARNm de protéines de structure ou de kératinisation de la peau comme la laminine LAMC2 (p=0,01523) constituant la membrane basale, la fibronectine FN1 (p=0,01569) permettant la jonction entre l’épiderme et le derme, l’intégrine ITGA2 (p=0,04782) participant à le liaison des cellules à la matrice extracellulaire, l’involuchne IVL (p=0,06220) impliquée dans la protection et la couche cornée, la cytokératine KRT19 (p=0,22774) ainsi qu’une surexpression significative des ARNm de GBA (p=0,00075) impliqué dans la fonction barrière de la peau. Nous avons montré également que les ARNm de l’enzyme impliquée dans la synthèse d’acide hyaluronique HAS2 (p=0,11201) étaient induits.

Ces modifications indiquent un effet de l’actif sur le remodelage de la matrice cutanée et l’amélioration de la fonction barrière, prépondérant dans les désordres cutanés induisant une perte de l’hydratation cutanée. En effet, une perte de la fonction barrière entraînera une augmentation de la perte insensible eau.

Après stimulation inflammatoire, les gènes suivants ont été suivis (tableau 11):

Tableau 11

Après stimulation inflammatoire, l’extrait 6’Aerva induit une synergie d’effet sur l’expression des ARNm de FN1, LAMC2, IVL, ITGA2 en les augmentant par rapport à la stimulation inflammatoire seule. L’expression des ARNm du facteur de croissance épithéliale EGF ainsi que de COL1A1 était inhibée en présence de la stimulation inflammatoire. L’ajout de l’extrait d’Aerva vient réguler cette diminution en restaurant partiellement l’expression à son niveau basal.

Exemple 8 : Activation des voies de la protection au stress oxydant et au vieillissement cutané

Comme décrit dans l’exemple 3, l’extrait d’Aerva a été mis en contact à la concentration de 500 μ9/ηιί dans un modèle de peau reconstruite.

Après 24h d’incubation, les gènes suivants ont été stimulés (tableau 12) :

Tableau 12 L’extrait d’Aerva a induit une surexpression significative de Thème oxygénase HMOX1 (p=0,00417), de HBEGF (p=0,01701) et SIRT1 (p=0,02794) tous impliqués dans la protection de la peau via une augmentation des défenses anti-oxydantes de la peau ainsi qu’une limitation de la sénescence cellulaire.

Après stimulation inflammatoire, les gènes suivants ont été suivis (tableau 13) :

Tableau 13

Après stimulation inflammatoire, nous observons que l’actif a eu un effet synergique significatif sur l’augmentation de l’expression de SIRT1 (p=0,04739) et une tendance à augmenter HMOX1 et SFN.

Claims

REVENDICATIONS

1. Extrait végétal issu de la partie aérienne d’une plante du genre Aerva, de préférence choisie dans la variété Aerva javanica (Burm.f.) Juss. ex Schult.
2. Extrait végétal selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit extrait végétal est issu d’un procédé d’extraction comprenant une étape de mise en contact de ladite partie aérienne avec au moins un solvant d’extraction physiologiquement acceptable, avantageusement suivie d’une étape d’élimination dudit solvant.
3. Extrait végétal selon la revendication 2, caractérisé en ce que le solvant d’extraction est choisi parmi les solvants polaires, les solvants eutectiques, le CO2 supercritique ou leurs mélanges.
4. Extrait végétal selon l’une quelconque des revendications 2 ou 3, caractérisé en ce que ledit procédé d’extraction comprend, suite à l’étape de mise en contact, une étape de décoloration et/ou une étape de désodorisation.
5. Extrait végétal selon l’une quelconque des revendications 1 à 4, destiné à être utilisé comme médicament.
6. Extrait végétal selon la revendication 5, destinée à être utilisé en tant que : - agent préventif et/ou curatif de l’inflammation, avantageusement agent préventif et/ou curatif de l’inflammation chronique, avantageusement encore agent préventif et/ou curatif de l’inflammation chronique liée à des désordres cutanés et/ou - agent activateur des récepteurs activés par les proliférateurs de peroxysomes (PPARs), avantageusement suite à une stimulation inflammatoire, et/ou - agent pour le traitement des désordres cutanés, notamment ceux liés à une inflammation chronique et/ou - agent activateur des sirtuines, plus particulièrement de SIRT1, avantageusement suite à une stimulation inflammatoire.
7. Extrait végétal selon la revendication 6, caractérisé en ce que l’agent activateur des récepteurs activés par les proliférateurs de peroxysomes (PPARs) est utilisé en tant que : - agent pour le traitement des désordres et pathologies cutanées, tel que le psoriasis, la dermatite atopique, et/ou - agent pour le contrôle du stress oxydant au niveau neuronal, agissant dans le cadre des traumatismes cérébraux, et/ou - agent pour favoriser le phénomène de cicatrisation, et/ou - agent dans la fonction barrière de la peau, en améliorant la cohésion cellulaire, et/ou - agent pour la gestion du poids corporel et les désordres associés.
8. Extrait végétal selon la revendication 6, caractérisé en ce que l’agent activateur des sirtuines est utilisé en tant que : - agent pour amélioration de la fonction barrière de la peau, et donc de l’hydratation de la peau, et/ou - actif anti-âge, et/ou - agent pour le traitement de syndrome métabolique et maladies associées, et/ou - agent pour le traitement des maladies dégénératives et les désordres associés.
9. Composition, avantageusement du genre cosmétique, nutraceutique, pharmaceutique ou alimentaire, comprenant : - un extrait végétal selon l’une quelconque des revendications 1 à 8, et au moins un excipient physiologiquement acceptable, avantageusement un excipient dermatologiquement acceptable.
10. Utilisation non-thérapeutique de l’extrait végétal selon l’une quelconque des revendications 1 à 4, en tant que : - agent activateur des récepteurs activés par les proliférateurs de peroxysomes (PPARs), et/ou - agent activateur des sirtuines, plus particulièrement de SIRT1, et/ou - agent pour améliorer la fonction barrière de la peau, en particulier suite à une stimulation inflammatoire.
11. Procédé pour la fabrication d’un extrait végétal selon l’une quelconque des revendications 1 à 8, comprenant une étape de mise en contact de ladite partie aérienne de plante du genre Aerva avec au moins un solvant d’extraction physiologiquement acceptable, avantageusement suivie d’une étape d’élimination dudit solvant.
12. Procédé pour la fabrication d’un extrait végétal, selon la revendication 11, caractérisé en ce qu’il comprend : a) une étape de préparation de la partie aérienne de la plante du genre Aerva, comprenant une étape de broyage et avantageusement une étape de séchage, b) une étape de mise en contact de ladite partie aérienne avec le solvant d’extraction, avantageusement dynamique ou statique, pendant 1 à 8 heures, préférablement à température ambiante, à reflux ou à une température allant de 45 à55°C, c) une étape de filtration du mélange pour obtenir un filtrat d’intérêt, avantageusement avant de soumettre de nouveau ladite partie aérienne à une nouvelle étape de mise en contact suivie d’une étape de filtration, d) optionnellement, une étape de décoloration et/ou désodorisation dudit filtrat d’intérêt, e) une étape de formulation dudit extrait végétal, sur un support solide ou par formulation sur un support liquide.