CN107260657B - 一种缓释型连翘苷滴眼液及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种缓释型连翘苷滴眼液及其制备方法，其特征是以连翘苷为药效原料，以聚卡波菲和玻璃酸钠作为粘膜粘附性聚合物释药系统，配以眼局部可以接受的药剂学上所说的制剂辅料所制备成的缓释型制剂，连翘苷与聚卡波菲的用量按其重量比表示为：连翘苷∶聚卡波菲：玻璃酸钠=1∶0.5～2∶0.5~5。所涉及的剂型为滴眼液。按本发明方法制备的缓释型连翘苷滴眼液局部外用，具有抗炎、抗氧化、抗菌、抗癌以及神经保护作用，不仅可用于治疗各种眼部炎症，也可用于白内障等眼科手术的术后恢复，应用广泛，该发明具有良好的眼内穿透性，眼内生物利用度较高。

Description

一种缓释型连翘苷滴眼液及其制备方法

技术领域

本发明属于药物领域，更具体涉及一种缓释型连翘苷滴眼液及其制备方法。

背景技术

连翘苷(Forsythin)系从木犀科植物连翘Forsythiasuspense(Thunb.)Vahl.的干燥叶中提取精制而得，属于双木脂素类化合物的葡萄糖苷，是连翘药材的主要有效成分之一，也是国家药典所规定的连翘药材的质量控制指标性成分。其药理活性主要表现为抗氧化活性、抗菌活性、抗炎活性、抗病毒活性、抗肿瘤活性以及解热镇痛活性等。

白内障是世界上首要致盲眼病，其病因尚未明确，有研究表明，氧自由基损伤是老年性白内障发生的首位危险因素。如自由基产生过多或清除过少，导致自由基聚集而产生晶体细胞、蛋白质和脂质过氧化，随之晶体发生浑浊。连翘苷具有很强的抗氧化作用，可以强有力地清除自由基，可以抑制低密度脂蛋白的氧化作用，对高密度脂蛋白的氧化也具有非常强的抑制作用。因此，本发明可用于老年性白内障的防治。

研究表明，连翘苷具有明显的抗炎、解热和内毒素中和作用，有研究发现连翘苷对金黄色葡萄球菌等多科致病菌又较强的抑制作用，还具有抑制磷酸二酯酶及较强的抗真菌、抗病毒作用。可广泛应用于急性结膜炎、角膜炎以及过敏性结膜炎以及其他细菌性或病毒性的眼部疾病。

炎症反应是机体收到外界物、化学、生物等有害刺激造成的机体损伤反应，葡萄膜炎是一种累及葡萄膜、视网膜、视网膜血管及玻璃体的常见眼部炎症疾病，多发生于青壮年及少年儿童，在致盲眼病中有重要地位。葡萄膜炎的发病机制十分复杂，主要认为G阴性细菌感染是其发病的始动因素。内毒素(lipopolysaccharide,LPS)是G阴性细胞多糖细胞壁的主要成分，是细菌感染引起的急性炎症反应的主要元凶，LPS通过血液循环进入机体，与LPS结合蛋白LBP结合，形成二元复合物，而后LPS在CD14的帮助下与细胞膜上Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)识别并结合，通过MyD88依赖途径活化NF-κB，促进IL-6、TNF-α、MCP-1等细胞因子的释放，从而启动机体的炎症反应。有研究表明，连翘苷可以剂量依赖性的抑制LPS引起的RAW264.7细胞IL-1、IL-6、TNF-α、NO、PGE2的释放，同时LPS在转录水平上抑制iNOS和COX-2的表达，从而发挥抑炎效果。

对于眼部疾病而言，局部用药较之全身用药具有诸多好处。结膜下和玻璃体内注射用药可以在眼组织内达到有效的药物浓度，但眼内注射给药毕竟是一种创伤性的给药方法，多次重复注射给药会大大增加感染性眼内炎的发生率。眼科局部用药的最佳方式是滴眼液，但由于连翘苷难溶于水，在水中的溶解度为0.1mg/ml，难以达到其有效浓度，限制了其在临床上尤其是眼科临床上的广泛应用。在当代眼科医疗中，涉及中度到重度的眼内炎症，特别如葡萄膜炎等眼科疾病亟需。

发明内容

本发明的目的在于提供一种缓释型连翘苷滴眼液，用其主药连翘苷制作成适当剂型，既方便临床使用，又能够保留连翘苷的药效。

进一步地，有必要提供一种制备上述缓释型连翘苷滴眼液的制备方法。

一种缓释型连翘苷滴眼液，它是以连翘苷为药效原料，以聚卡波菲和玻璃酸钠作为粘膜粘附性聚合物释药系统，配以眼局部可以接受的药剂学上所说的制剂辅料所制备成的缓释型制剂，每100重量份药剂连翘苷的含量为1-5重量份，连翘苷与聚卡波菲的用量按其重量比表示为：连翘苷∶聚卡波菲：玻璃酸钠＝1∶0.5～2∶0.5～5。

其中，所述缓释型连翘苷滴眼液包括连翘苷1-5重量份，聚卡波菲0.25-2重量份，玻璃酸钠3-10重量份，渗透压调节剂0.8-0.9重量份，pH调节剂0.1-0.3重量份，抑菌剂0.01-0.03重量份，增稠剂0.1-0.3重量份，助溶剂0.1-2重量份，注射用水余量，所述缓释型连翘苷滴眼液总重量为100重量份。

其中，连翘苷与聚卡波菲的用量按其重量比表示为：连翘苷∶聚卡波菲：玻璃酸钠＝1∶(0.5～2)∶(0.5～5)。

其中，所述抑菌剂为硫柳汞、季铵盐类、杜米芬、冼必泰、三氯叔丁醇、尼泊金类、三梨酸中的一种抑菌剂或两种以上；抑菌剂的用量以与连翘苷的重量比表示为，连翘苷:抑菌剂＝1：(0.003-0.02)。

其中，所述增稠剂为羟丙甲纤维素、甲基纤维素、玻璃酸钠、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮中的中的一种或两种以上；增稠剂的用量以与连翘苷的重量比表示为，连翘苷:增稠剂＝1：(0.02-0.3)。

其中，所述pH调节剂为氢氧化钠、盐酸、枸橼酸钠、枸掾酸、硼酸、硼砂中的任何一种或所述品种的任意组合。

其中，所述助溶剂为聚山梨酯-80或/和氢化蓖麻油。

其中，所述渗透压调节剂为氯化钠和/或甘露醇。

一种制备如上所述的缓释型连翘苷滴眼液的方法，

步骤1)、全量玻璃酸钠溶胀2小时，加入聚卡波菲搅拌溶解，再溶解连翘苷全量；

步骤2)、将增稠剂用注射用水使其分散放冷，另用注射用水溶解pH调节剂、渗透压调节剂、抑菌剂，搅匀过滤，合并上述两部分混合液；

步骤3)、在步骤2)所得的混合液中再加入已溶解好的连翘苷，加注射用水至全量，过滤，分装，即得，所得的滴眼液pH值为5.5～7.5，滴眼液的渗透压摩尔浓度为250～350mOsmol/kg。

本发明缓释型连翘苷滴眼液，是以连翘苷为药效原料，以聚卡波菲和玻璃酸钠作为粘膜粘附性聚合物释药系统，配以眼局部可以接受的药剂学上所说的制剂辅料所制备成的缓释型制剂，每100重量份药剂连翘苷的含量为0.01～1.0重量份，连翘苷与聚卡波菲的用量按其重量比表示为：连翘苷∶聚卡波菲：玻璃酸钠＝1∶0.5～2∶0.5～5。

制备本发明缓释型连翘苷滴眼液的辅料包括渗透压调节剂、pH调节剂、抑菌剂、增稠剂、助溶剂。它们的品种选择和用量分别叙述如下。

原料组分还包括抑菌剂。所述抑菌剂为硫柳汞、季铵盐类、杜米芬、冼必泰、三氯叔丁醇、尼泊金类、三梨酸中任何一种或所述品种的任意组合。

原料组分还包括增稠剂。所述增稠剂为羟丙甲纤维素、甲基纤维素、玻璃酸钠、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素、卡波姆、硫酸软骨素中的任何一种或所述品种的任意组合。可采用不同聚合度，最终使滴眼液达到合适黏度。

使用pH调节剂调节成品药剂的pH值为5.5～7.5；所述pH调节剂为氢氧化钠、盐酸、枸橼酸钠、枸掾酸、硼酸、硼砂中的任何一种或所述品种的任意组合。

使用渗透压调节剂调节滴眼液的渗透压摩尔浓度为250～350mOsmol/kg。所述渗透压调节剂为氯化钠、甘露醇的一种或两品种的任意组合。

使用助溶剂促进连翘苷溶解，所述助溶剂为聚山梨酯-80、氢化蓖麻油的一种或两品种的任意组合。

以聚卡波菲和玻璃酸钠作为粘膜粘附性聚合物释药系统，可以将水和活性分子连翘苷包埋在其中，形成稳定的水性凝胶状滴眼液，解决连翘苷在单纯水溶液中溶解性和稳定性差的问题。

按本发明技术方案，配制连翘苷滴眼液可选用的辅料不限于上表所列品种，还可以有多种选择，例如抑菌剂，可以使用药剂学上所称的任何抑菌剂，其用量按药剂学上常规剂量。如，①0.002％～0.005％硫柳汞；②季铵盐类(包括苯扎氯铵、苯扎溴铵)、杜米芬、冼必泰等，有效浓度为0.002％～0.01％；③醇类，常用0.3～0.6％三氯叔丁醇；④尼泊金类，常用0.03～0.06％羟苯乙酯；⑤酸类，如0.01～0.08％三梨酸。以上各物质浓度均为容积-重量百分比，即每百毫升含有克数。

因此，添加聚卡波菲和玻璃酸钠作为粘膜粘附性聚合物释药系统，将连翘苷制备成一种缓释型滴眼液具有一定科学性。

本发明使用聚卡波菲和玻璃酸钠作为粘膜粘附性聚合物释药系统，可以将水和活性分子连翘苷包埋在其中，形成稳定的水性凝胶状滴眼液，解决连翘苷在单纯水溶液中溶解性和稳定性差的问题。按本发明方法制备的连翘苷滴眼液局部外用具有良好的眼内穿透性，眼内生物利用度较高，不良反应发生率低，提高了临床用药安全性，而且原料易得，制备工艺简单可行，产率高、成本低，可以实现工业化大规模生产，具有显著的经济效益。

具体实施方式

以下通过实施例以及实验例对本发明作进一步说明。

本发明涉及的连翘苷，已从木犀科植物连翘Forsythia suspense(Thunb.)Vahl.的干燥叶中提取，提取工艺如下：100kg原料，用800L甲醇回流提取3次，每次1小时，提取液合并，过滤；滤液减压浓缩至膏状(d＝1.2-1.3)，向浓膏加入150L热水，搅拌均匀，70℃以上保温过滤，滤液静置48小时以上，析出沉淀；收集析出的沉淀，加水50L，搅拌均匀，过滤，反复水洗沉淀三次；沉淀铺于不锈钢盘中，于80℃真空干燥8小时，得KD-1粗品。合并粗品，称重，1kg粗品加入30L甲醇，按此比例加入甲醇，并加热至沸腾，保持30min；向甲醇溶液中加入1％的活性炭(W/V)，搅拌30min，过滤；滤液静置24小时，抽滤，收集沉淀，铺于不锈钢盘中；于80℃真空干燥8小时，粉碎，80目过筛，即得。因此本发明的原料来源可靠、性质稳定。

实施例1-3

按表1所示配方备料，

步骤1)、全量玻璃酸钠溶胀2小时，加入聚卡波菲搅拌溶解，再溶解连翘苷全量；

步骤2)、将增稠剂用注射用水使其分散放冷，另用注射用水溶解pH调节剂、渗透压调节剂、抑菌剂，搅匀过滤，合并上述两部分混合液；

步骤3)、在步骤2)所得的混合液中再加入已溶解好的连翘苷，加注射用水至全量，过滤，分装，即得，所得的滴眼液pH值为5.5～7.5，滴眼液的渗透压摩尔浓度为250～350mOsmol/kg。

表1制备缓释型连翘苷滴眼液原料组分和用量

实验例2连翘苷缓释型滴眼液的药代动力学试验

对比例1：连翘苷普通滴眼液(制备方法与实施例2一致，不添加聚卡波菲和玻璃酸钠)

采用按本发明实施例2方法制备的连翘苷缓释型滴眼液和对比例做眼部应用的药代动力学试验，将2者进行比较。

以健康新西兰兔(雌雄各半)为实验动物，分别给予0.1％连翘苷缓释型滴眼液和0.1％连翘苷普通滴眼液，对新西兰兔单次滴眼给药后分别于给药后0.083h、0.5h、1h、2h、4h、12h、24h处死相应时间点动物，取泪液、房水、角膜、结摸。用滤纸吸取泪液，精密称量，两次称量的差值即为取得泪液的量。吸取泪液的滤纸条40℃氮气流下吹干，放入-10℃以下冷冻保存；房水不用处理直接放入-10℃以下冷冻保存；取下的角膜和结膜立即用滤纸吸干表面液体后精密称量，加体积为组织重量的5倍的二氯甲烷，用样品处理系统对组织充分研磨。泪液、房水、结膜组织匀浆液、角膜组织匀浆液经提取后采用LC-MS/MS检测组织中连翘苷的浓度，泪液、房水、角膜、结膜中的药物浓度见附表2，采用DAS软件对药物浓度进行主要药代动力学参数统计，见附表3。实验结果表明，与连翘苷普通滴眼液比较，缓释滴眼液在泪液、房水、角膜、结膜中的平均滞留时间(MRT)均较普通滴眼液长(P＜0.05)；缓释滴眼液在房水中的暴露量(AUC)较普通滴眼液高(P＜0.05)，达峰时间(Tmax)和消除半衰期(T_1/2)均较普通滴眼液长(P＜0.05)；缓释滴眼液在角膜中的消除半衰期(T_1/2)均较普通滴眼液长(P＜0.05)；缓释滴眼液在泪液和结膜中的达峰浓度(Cmax)较普通滴眼液高(P＜0.05)；由此说明，连翘苷缓释滴眼液制剂达到缓释的目的。

表2连翘苷缓释滴眼液和普通滴眼液单次滴眼给药后眼部泪液、房水、主要眼部

组织各时间点的分布浓度(Mean±SD，n＝8)

注：ND为Not determinted，表示检测浓度低于定量下限。

表2连翘苷缓释滴眼液和普通滴眼液单次滴眼给药后眼部泪液、房水、主要眼部组织各时间点的分布浓度(Mean±SD，n＝8)

注：ND为Not determinted，表示检测浓度低于定量下限。缓释滴眼液与对应泪液、房水或组织的参数进行比较，P*＜0.05有显著差异。

实验例2连翘苷眼用缓释制剂对豚鼠变应性结膜炎的治疗作用

对比例2：地塞米松滴眼液(0.1％)

采用本发明实施例1-3方法制备的缓释型连翘苷滴眼液和对比例进行药效试验。

健康豚鼠(雌雄各半)30只(北京维通利华试验动物技术有限公司提供)，随机选取6只动物作为空白组，其余动物进行致敏。致敏方法：腹腔注射浓度为10mg/ml的白蛋白溶液0.5ml/只，隔天注射一次，连续3次。末次致敏后11天进行激发，激发方法：用微量加样器吸取10mg/ml的白蛋白溶液滴入豚鼠结膜囊内，20μL/眼，激发时进行眼部症状观察和评分，评分标准见表1、2，根据激发后眼科评分结果，将动物分为模型组、实施例1-3组、对比例组，每组6只(12只眼)，分组后进行给药，给药容积20μL，空白组和模型组给予等容积的生理盐水，各实施例每天给药1次，对比例地塞米松滴眼液每日给药4次，间隔2小时，连续给药7天。实验过程中第1、3、5、7天先进行激发，然后再进行给药，激发、给药的方法以及激发、给药后观察的内容如前所述。每只动物评分为(充血+水肿+分泌物)评分总值。

表3眼部刺激症状分值评分标准

表4症状反应

试验结果：连翘苷眼用缓释制剂对豚鼠变应性结膜炎的炎症反应有一定的改善作用，可以减弱结膜水肿和分泌物，可有效改善瘙痒症状，本缓释剂型有很好的缓释作用，每日给药1次即可达到效果。实施例所得的连翘苷缓释制剂即有明显的改善作用。

表5不同浓度的连翘苷眼用缓释制剂对卵清蛋白所致豚鼠变异性结膜炎评分结果表

与空白组比，#表示p<＝0.05,##表示p<＝0.01；与模型组相比，*表示p<＝0.05,**表示p<＝0.01。

实验例3不同浓度的缓释型连翘苷滴眼液眼部刺激性测试

采用本发明实施例1-3方法制备的滴眼液进行眼部刺激性试验。

对比例2：地塞米松滴眼液(0.1％)

健康新西兰兔(雌雄各半)24只(青岛康大生物科技有限公司提供)，实验前24h检查动物双眼，选取眼部正常，无炎症、无缺陷、无陈旧性的角膜损伤动物进行试验。采用同体左右测自身对比法，左眼给予药物，阴性组左眼给予0.9％氯化钠注射液，右眼为阴性对照。每眼100μL，每日1次，连续给药7天。每天给药前及第7天末次给药后1、2、4、24、48和72小时均对兔双眼进行荧光素钠染色，观察眼角膜、虹膜和结膜刺激反应情况，每个观察时间点的评分均值为动物左眼的角膜、虹膜、结膜的总积分除以6例动物数所得。按眼刺激分值标准表进行评分，见表5、6。

表5眼刺激反应评分

眼刺激反应	分值
		角膜：
无混浊	0
		散在或弥漫性混浊，虹膜清晰可见	1
半透明区易分辨，虹膜模糊不清	2
		出现灰白色半透明区，虹膜细节不清，瞳孔大小勉强可见	3
角膜不透明，虹膜无法辨认	4
		虹膜：
正常	0
		皱褶明显加深，充血、肿胀、角膜周围有轻度充血，瞳孔对	1
出血/肉眼可见坏死/对光无反应(或其中一种)	2
		结膜：
充血(指睑结膜和球结膜)
		血管正常	0
血管充血呈鲜红色	1
		血管充血呈深红色，血管不易分辨	2
弥漫性充血呈紫红色	3
		水肿
无水肿	0
		轻微水肿(含眼睑)	1
明显水肿伴部分眼睑外翻	2
		水肿至眼睑近半闭合	3
水肿至眼睑超过半闭合	4
		分泌物
无分泌物	0
		少量分泌物	1
分泌物使眼睑和睫毛潮湿或粘着	2
		分泌物使整个眼区潮湿或粘着	3
最大总积分	16

表6眼刺激性评价标准

结论：眼刺激试验结果表明，实施例1-3连续用药7天未见明显刺激性反应，停药后未见明显异常改变。根据眼刺激性评价标准，实施例1眼刺激性综合平均分值最高为0.33(D7)，实施例2眼刺激性综合平均分值最高为0.50(D7)，实施例3眼刺激性综合平均分值最高为0.33(D7)，对比例2眼刺激性综合平均分值最高为7(D7)。表明连翘苷眼膏连续用药没有明显刺激性。

以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (7)

1.一种缓释型连翘苷滴眼液，其特征在于，它是以连翘苷为药效原料，以聚卡波菲和玻璃酸钠作为粘膜粘附性聚合物释药系统，配以眼局部可以接受的药剂学上所说的制剂辅料所制备成的缓释型制剂；

所述缓释型连翘苷滴眼液包括连翘苷1-5重量份，聚卡波菲0.25-2重量份，玻璃酸钠3-10重量份，渗透压调节剂0.8-0.9重量份，pH调节剂0.1-0.3重量份，抑菌剂0.01-0.03重量份，增稠剂0.1-0.3重量份，助溶剂0.1-2重量份，注射用水余量，所述缓释型连翘苷滴眼液总重量为100重量份；

连翘苷与聚卡波菲的用量按其重量比表示为：连翘苷∶聚卡波菲：玻璃酸钠＝1∶0.5～2∶0.5～5。

2.根据权利要求1所述的缓释型连翘苷滴眼液，其特征在于，所述抑菌剂为硫柳汞、季铵盐类、杜米芬、冼必泰、三氯叔丁醇、尼泊金类、三梨酸中的一种抑菌剂或两种以上；抑菌剂的用量以与连翘苷的重量比表示为，连翘苷:抑菌剂＝1：(0.003-0.02)。

3.根据权利要求1所述的缓释型连翘苷滴眼液，其特征在于，所述增稠剂为羟丙甲纤维素、甲基纤维素、玻璃酸钠、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮中的中的一种或两种以上；增稠剂的用量以与连翘苷的重量比表示为，连翘苷:增稠剂＝1：(0.02-0.3)。

4.根据权利要求1所述的缓释型连翘苷滴眼液，其特征在于，所述pH调节剂为氢氧化钠、盐酸、枸橼酸钠、枸掾酸、硼酸、硼砂中的任何一种或所述品种的任意组合。

5.根据权利要求1所述的缓释型连翘苷滴眼液，其特征在于，所述助溶剂为聚山梨酯-80或/和氢化蓖麻油。

6.根据权利要求1所述的缓释型连翘苷滴眼液，其特征在于，所述渗透压调节剂为氯化钠和/或甘露醇。

7.一种制备如权利要求1-6任一项所述的缓释型连翘苷滴眼液的方法，其特征在于：

步骤1)、全量玻璃酸钠溶胀2小时，加入聚卡波菲搅拌溶解，再溶解连翘苷全量；

步骤2)、将增稠剂用注射用水使其分散放冷，另用注射用水溶解pH调节剂、渗透压调节剂、抑菌剂，搅匀过滤，合并上述两部分混合液；

步骤3)、在步骤2)所得的混合液中再加入已溶解好的连翘苷，加注射用水至全量，过滤，分装，即得，所得的滴眼液pH值为5.5～7.5，滴眼液的渗透压摩尔浓度为250～350mOsmol/kg。