CN114487148A - 一种基因毒杂质的检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种氯化乙酰胆碱中基因毒杂质的检测方法，顶空气相色谱（HSGC）方法检测了氯化乙酰甲胆碱中乙醛和环氧丙烷的含量，从而实现对氯化乙酰胆碱中该基因毒杂质的有效控制，以减少患者用药副作用的发生，保证用药安全性。

Description

一种基因毒杂质的检测方法
技术领域
本发明属于生物医药领域，涉及一种痕量基因毒杂质的检测方法，具体涉及的是乙醛和环氧丙烷的检测方法。
背景技术
氯化乙酰甲胆碱又名醋甲胆碱，是一种白色极易吸湿的晶体，带有淡的死鱼气味，其分子式为C8H18ClNO2。可激动M胆碱受体，对心血管系统的选择性较强，对胃肠道及膀胱平滑肌的作用较弱，它也可收缩支气管平滑肌，使支气管分泌增加。在体内受胆碱酯酶的灭活较慢，故作用较持久，主要用于房性心动过速，也可用于外周血管痉挛性疾病，如雷诺病及血栓闭塞性脉管炎等，其结构式如下式所示：
Figure RE-719799DEST_PATH_IMAGE001
。
目前，再进行氯化乙酰甲胆碱的合成过程中，通常会用到乙醛和环氧丙烷，乙醛中含有醛基，环氧丙烷中含有环氧基，均为基因毒性警示结构，为潜在的基因毒性杂质，根据《遗传毒性杂质指导原则》，应对此杂质进行充分的质量研究，由于其终产物氯化乙酰胆碱有残留的可能，需要严格控制其限度根据《遗传毒性杂质限度指导原则》相关规定，其采用毒理学担忧阈值评价大部分药物的TTC值为遗传毒性杂质摄入量1.5μg/day，本品最大日剂量为0.1g，杂质限度＝1.5μg/0.1g＝15ppm。针对如何检测氯化乙酰甲胆碱中痕量的乙醛和环氧丙烷的有效方法，还无相关报道。
发明内容
本发明提供了一种检测乙醛和环氧丙烷的方法，该方法主要用于检测含有氯化乙酰甲胆碱的产品，例如氯化乙酰甲胆碱原料药或者以其他制剂形式存在的氯化乙酰甲胆碱产品。
本发明是采用顶空气相色谱（HSGC）方法检测氯化乙酰胆碱中乙醛和环氧丙烷的含量。
乙醛和环氧丙烷在酸性和碱性条件下均不稳定，且氯化乙酰胆碱在水中显弱酸性，为了中和氯化乙酰胆碱的弱酸性，又不至于使体系过酸或过碱，本发明特别选用磷酸氢二钠溶液作为稀释剂，使得不管是对照品溶液还是供试品溶液始终保持弱碱性状态，保证目标杂质稳定检出。
本发明所述的磷酸二氢钠溶液的pH为8.20 – 8.40，在某些实施例中，所用的磷酸二氢钠溶液的pH为8.25 - 8.35，优选8.30。
进一步的本发明所述的磷酸二氢钠溶液的浓度为10 mmol/L -30mmol/L，优选20mmol/L。
进一步的本发明所述的顶空气相色谱（HSGC）方法的色谱条件为：进样口温度145-155℃，优选150℃、检测器温度250℃、分流比20：1 、柱流速1.2-1.8 ，优选1.5ml/min、色谱柱的起始温度为35-45℃。在某些实施例中本发明所述的色谱条件为进样口温度150℃、检测器温度250℃、分流比20：1 、柱流速1.5ml/min、色谱柱的起始温度为40℃。
进一步的，本发明色谱柱采用程序升温，升温程序为35-45℃起始保持3min，以12-16℃/min速率升至52-54℃，以25-35℃/min速率升至220-260℃，保持3-5min。在某些实施例中，升温程序40℃起始保持3min，以15℃/min速率升至50℃，以30℃/min速率升至240℃，保持3min。
进一步的，本发明所述的检测方法包括，将含有氯化乙酰甲胆碱产品的样品用pH为8.3的磷酸氢二钠溶液稀释，配置成供试品，采用顶空气相色谱方法检测供试品中乙醛和环氧丙烷的含量，色谱柱条件为进样口温度145-150℃，检测器温度250℃、分流比20：1 、柱流速1.5ml/min、色谱柱的起始温度为40℃，色谱柱的程序升温条件为：40℃起始保持3min，以15℃/min速率升至50℃，以30℃/min速率升至240℃，保持3min；
或者，
本发明所述的检测方法包括，将含有氯化乙酰甲胆碱产品的样品用pH为8.3磷酸氢二钠溶液稀释，配置成供试品，采用顶空气相色谱方法检测供试品中乙醛和环氧丙烷的含量，色谱柱条件为进样口温度150℃，检测器温度250℃、分流比20：1 、柱流速1.5ml/min、色谱柱的起始温度为35-40℃，色谱柱的程序升温条件为：40℃起始保持3min，以15℃/min速率升至50℃，以30℃/min速率升至240℃，保持3min；
或者，
本发明所述的检测方法包括，将含有氯化乙酰甲胆碱产品的样品用pH为8.2-8.4磷酸氢二钠溶液稀释，配置成供试品，采用顶空气相色谱方法检测供试品中乙醛和环氧丙烷的含量，色谱柱条件为进样口温度150℃，检测器温度250℃、分流比20：1 、柱流速1.5ml/min、色谱柱的起始温度为35-40℃，色谱柱的程序升温条件为：40℃起始保持3min，以15℃/min速率升至50℃，以30℃/min速率升至240℃，保持3min。
本发明开创了独特的顶空气相色谱（HSGC）方法检测氯化乙酰胆碱原料药中乙醛和环氧丙烷的方法。此方法通过选用pH 8.20-8.40 磷酸氢二钠20mmol/L的缓冲盐溶液作为溶剂配制氯化乙酰胆碱供试品溶液和对照品溶液，克服了乙醛和环氧丙烷在氯化乙酰胆碱水溶液中快速降解的问题，且检测方法的检测限达到了乙醛0.08μg/ml和环氧丙烷0.10μg/ml，分别相当于供试品的0.80ppm和1.00ppm。
附图说明
图1 对比例2气质顶空进样对照品样品检测谱图；
图2 实施例1顶空气相色谱方法对照品样品检测谱图；
图3 实施例2空白图谱；
图4 实施例2对照品图谱；
图5 实施例2-3.3准确度供试品图谱；
图6 实施例2-3.5溶液稳定性加标供试品图谱；
图7 实施例2-3.2检测限图谱；
图8 实施例2-3.2定量限图谱。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好的理解本发明的技术方案，下面进一步披露一些非限制实施例对本发明作进一步的详细说明。
本发明所使用的试剂均可以从市场购得或者可以通过本发明所描述的方法制得。
对比例1 气质联用（GC-MS-MS）直接进样法
1. 检测条件及其参数
Figure DEST_PATH_IMAGE004
2.对照品溶液配置方法及步骤：
稀释剂：乙腈-水（90：10）
对照品溶液配制：
分别精密称取SM3-B（乙醛）、SM1-F（环氧丙烷）对照品15mg分别置于提前加有少量稀释剂得10ml容量瓶中，加稀释剂溶解，并定容摇匀，即得SM3-B、SM1-F杂质对照品储备液浓度均为1.5mg/ml。分别从中精密量取1 ml置于同一20ml量瓶中，加稀释剂溶解，并定容摇匀，得混合对照品母液A（浓度约为75μg/ml）。
精密移取混合对照品母液A 5 ml置于50ml容量瓶中，加稀释剂定容摇匀，即得7500ng/ml混合对照品溶液B。
精密移取混合对照品溶液B 2ml置于10 ml容量瓶中，加稀释剂定容摇匀，即得约1500 ng/ml的对照品溶液。平行配制两份，得对照品溶液Ⅰ和对照品溶液Ⅱ。
供试品溶液配制：
精密称取氯化乙酰胆碱原料药供试品1000 mg置于10 ml量瓶中，加稀释剂溶解，并定容摇匀，即得供试品溶液。
3.检测具体操作方法及步骤
将稀释剂、对照品溶液、供试品溶液分别放入进样小瓶中进样，稀释剂进样1针，对照品溶液Ⅰ进样5针，对照品溶液Ⅱ进样1针，供试品溶液各进样1针。
表1. 气质联用（GC-MS-MS）直接进样法峰面积稳定性考察结果
Figure DEST_PATH_IMAGE006
结论：气质直接进样法由于供试品中氯化乙酰胆碱中季胺结构带电能力很强，干扰了杂质离子化，进样供试品后，后续进样峰面积会持续受到供试品带电离子的影响，最终导致气质直接进样方法下，在系统进样完氯化乙酰胆碱供试品后各杂质峰面积响应不稳定，持续检测下变化尤为明显。
对比例2气质联用仪（GC-MS-MS）顶空进样法
1. 检测条件极其参数
Figure DEST_PATH_IMAGE008
2.对照品溶液配置方法及步骤：
对照品溶液：精密称取SM3-B（乙醛）6.77mg、SM1-F（环氧丙烷）对照品2.86mg分别置于10ml容量瓶中（瓶中提前加入少量乙腈），加乙腈定容摇匀，分别从中精密量取SM1-F 2ml、SM3-B 1 ml置于同一100ml量瓶中，加乙腈定容摇匀，分别从中精密量取2.5 ml置于同一10ml量瓶中，加乙腈定容摇匀，得对照品溶液（含SM3-B浓度约为1.7μg/ml, SM1-F浓度约为0.7μg/ml）。
3.检测具体操作方法及步骤
取5ml对照品溶液放入20 ml顶空瓶中，进样1针。
结论：气质顶空进样方法下乙醛受二氧化碳峰影响严重且自身响应值偏低约1.7ug/ml浓度下，S/N为8.8，不符合灵敏度要求。
实施例1 顶空气相色谱（HSGC）方法
1. 检测条件极其参数
Figure DEST_PATH_IMAGE010
2.对照品溶液配置方法及步骤：
稀释剂配置：取磷酸1ml加100ml水稀释，摇匀得稀磷酸溶液。称量无水磷酸氢二钠2.84g加1000ml水溶解，用稀磷酸调节pH至8.30(±0.05) 即得约20mmol/L磷酸氢二钠溶液，作为稀释剂。
供试品溶液：精密称取氯化乙酰胆碱供试品100 mg置于20 ml顶空瓶中，加稀释剂1ml溶解，摇匀。
对照品溶液：精密称取SM3-B（乙醛）、SM1-F（环氧丙烷）对照品各约15mg分别置于50ml容量瓶中（瓶中提前加入少量水），加水定容摇匀，即得乙醛和环氧丙烷杂质对照品储备液浓度约为300μg /ml。分别从中精密量取1 ml置于同一20ml量瓶中，加稀释剂定容摇匀，得混合对照品母液A（浓度约为15μg/ml）。
精密移取混合对照品母液A 2ml置于20ml容量瓶中，加稀释剂定容摇匀，即得1.5μg /ml混合对照品溶液。平行配制两份，得对照品溶液Ⅰ和对照品溶液Ⅱ。
3.检测具体操作方法及步骤
将稀释剂、对照品溶液、供试品溶液分别放入进样小瓶中进样，稀释剂进样1针，对照品溶液Ⅰ进样5针，对照品溶液Ⅱ进样1针，供试品溶液各进样1针。
结论：由图2可知，顶空气相色谱（HSGC）的方法提高检测杂质的灵敏度同时满足了对目标杂质的稳定检出，该方法在提高了灵敏度的同时，消除了供试品干扰的情况发生。
对比例3稀释剂的选择
1.溶液的配制
稀释剂1（水）时对照品溶液配制：精密称取SM3-B（乙醛）、SM1-F（环氧丙烷）对照品各约15mg分别置于50ml容量瓶中（瓶中提前加入少量稀释剂），加稀释剂定容摇匀，即得乙醛和环氧丙烷杂质对照品储备液浓度约为300μg /ml。分别从中精密量取1 ml置于同一20ml量瓶中，加稀释剂定容摇匀，得混合对照品母液A（浓度约为15μg/ml）。
稀释剂2（pH8.3磷酸氢二钠缓冲盐溶液）时对照品溶液配制：精密称取SM3-B（乙醛）、SM1-F（环氧丙烷）对照品各约15mg分别置于50ml容量瓶中（瓶中提前加入少量水），加水定容摇匀，即得乙醛和环氧丙烷杂质对照品储备液浓度约为300μg /ml。分别从中精密量取1 ml置于同一20ml量瓶中，加稀释剂定容摇匀，得混合对照品母液A（浓度约为15μg/ml）。（备注：第一步稀释用水溶，之后均用稀释剂）
精密移取混合对照品母液A 2ml置于20ml容量瓶中，加稀释剂定容摇匀，即得1.5μg /ml混合对照品溶液。平行配制两份，得对照品溶液Ⅰ和对照品溶液Ⅱ
稀释剂（水）时混合溶液配制：
精密称取乙腈约25mg置于100mL量瓶中，加稀释剂定容摇匀，得乙腈专属性储备液。
精密称取乙醇、乙酸乙酯、乙酸约25mg分别置于10mL量瓶中，加稀释剂定容摇匀，得乙醇、乙酸乙酯、乙酸专属性储备液。
精密称取1-氯-2-丙醇、氯丙酮、1,3-二氯丙醇、二氯丙烷、2-氯-1-羟基丙烷、乙醛、环氧丙烷各约15mg分别置于50mL量瓶中，加稀释剂定容摇匀，得1-氯-2-丙醇、氯丙酮、1,3-二氯丙醇、二氯丙烷、2-氯-1-羟基丙烷、乙醛、环氧丙烷专属性储备液。
分别精密量取1-氯-2-丙醇、氯丙酮、1,3-二氯丙醇、二氯丙烷、2-氯-1-羟基丙烷专属性储备液1mL，乙醛、环氧丙烷对照品储备液1mL均置于同一10mL量瓶中,再从中精密量取1mL置于同一10mL量瓶中，并加入乙醇、乙酸乙酯、乙酸专属性储备液各2 mL，加稀释剂定容摇匀，精密移取1mL置于20 mL顶空瓶中（顶空瓶中提前加入100mg氯化乙酰胆碱），摇匀，即得混合溶液。
稀释剂（pH8.3磷酸氢二钠缓冲盐溶液）时混合溶液配制：除稀释剂改为pH8.3磷酸氢二钠缓冲盐溶液外其余均同稀释剂为超纯水的配制方法。
2. 操作方法
将稀释剂、对照品溶液、混合溶液分别放入进样小瓶中进样，稀释剂进样1针，对照品溶液Ⅰ进样5针，对照品溶液Ⅱ进样1针，混合溶液各进样1针。
结果如下：
Figure DEST_PATH_IMAGE012
结论：混合溶液中包括氯化乙酰胆碱和列入质量标准的残留溶剂(乙醇、乙酸乙酯、乙腈)及其他基因毒杂质(1-氯-2-丙醇、氯丙酮、1,3-二氯丙醇、二氯丙烷、2-氯-1-羟基丙烷)，考察乙醛和环氧丙烷在残留溶剂及其他基因毒杂质存在的情况下其检测结果是否被干扰。在考察时长相差不大情况下，实验结果证明在稀释剂为水时环氧丙烷峰面积快速减少，而改为pH8.3磷酸氢二钠缓冲盐溶液后峰面积基本不变。
实施例2 对顶空气相色谱（HSGC）方法的验证
一、实验材料
1、试剂类：
Figure DEST_PATH_IMAGE014
2、仪器设备类：
气相色谱仪（安捷伦7890B+7697A）、电子天平、玻璃量瓶、超纯水仪（密理博）、pH计（梅特勒-托利多）、色谱柱（Agilent DB-WAX 30 m×320 μm×0.5μm）
二、实验方法和数据
1、溶液配制和检测
a、稀释剂
取磷酸1ml加100ml水稀释，摇匀得稀磷酸溶液。
称量无水磷酸氢二钠2.84g加1000ml水溶解，用稀磷酸调节pH至8.30(±0.05) 即得约20mmol/L磷酸氢二钠溶液，作为稀释剂。
b、供试品溶液
精密称取氯化乙酰胆碱原料药供试品100 mg置于20 ml顶空瓶中，加稀释剂1ml溶解，摇匀。
c、对照品溶液
精密称取乙醛和环氧丙烷对照品各约15mg分别置于50ml容量瓶中（瓶中提前加入少量水），加水定容摇匀，即得乙醛和环氧丙烷杂质对照品储备液浓度约为300μg /ml。分别从中精密量取1 ml置于同一20ml量瓶中，加稀释剂定容摇匀，得混合对照品母液A（浓度约为15μg/ml）。
精密移取混合对照品母液A 2ml置于20ml容量瓶中，加稀释剂定容摇匀，即得1.5μg /ml混合对照品溶液。平行配制两份，得对照品溶液Ⅰ和对照品溶液Ⅱ。
d、系统适用性标准
对照品溶液Ⅰ连续进样5针，主峰峰面积的RSD应不大于10.0%；对照品溶液Ⅱ进样1针，与对照品溶液Ⅰ相比，RD不得大于10.0%。计算公式如下：
Figure DEST_PATH_IMAGE016
式中：
A为对照品溶液Ⅰ中杂质的平均峰面积与其浓度的比值；
B为对照品溶液Ⅱ中杂质的峰面积与其浓度的比值。
e、检验过程
Ø 稀释剂进样1针；
Ø 对照品溶液Ⅰ进样5针；
Ø 对照品溶液Ⅱ进样1针；
Ø 供试品溶液各进样1针；
Ø 对照品溶液Ⅰ进样1针。
f、计算公式：
Figure DEST_PATH_IMAGE018
式中：
As为供试品溶液中乙醛、环氧丙烷的峰面积；
Ar为对照品溶液Ⅰ中乙醛、环氧丙烷的平均峰面积；
Mr为对照品溶液I中对应杂质称样量，mg；
P为对应杂质对照品的含量，%；
Ms为供试品称样量，mg；
Dr为对照品溶液的稀释倍数；
Ds为供试品溶液的稀释倍数；
106折算为ppm。
2、实验参数
Figure DEST_PATH_IMAGE020
三、实验验证结果
3.1 系统性试验结果
以一个序列的系统适用性结果为例，取对照品溶液Ⅰ连续进样5针，对照品溶液Ⅱ进样1针，所得各杂质的峰面积及对照品溶液Ⅱ与Ⅰ相比得到的RD结果见表1。
表1. 系统适用性结果
Figure DEST_PATH_IMAGE022
结果显示：对照品溶液Ⅰ连续进样5针，乙醛、环氧丙烷峰面积的RSD分别为0.70%和1.72%，均小于10.0%；对照品溶液Ⅱ进样1针，与对照品溶液Ⅰ相比，RD值分别为0.07%和0.62%，均小于10.0%，各杂质回标RSD均不大于10.0%，符合系统适用性的要求。
3.2检测限和定量限
（1）灵敏度贮备液的配制
取1c项下混合对照品母液A溶液作为灵敏度储备液。
（2）定量限和检测限溶液的配制
精密量取灵敏度储备液0.5 ml置于25ml量瓶中，加稀释剂定容摇匀即得定量限溶液。精密量取定量限溶液3 ml置于10ml量瓶中，加稀释剂定容摇匀即得检测限溶液。
表2-1 检测限和定量限测定结果-精密度
Figure DEST_PATH_IMAGE024
表2-2 检测限和定量限测定结果-杂质检出量
Figure DEST_PATH_IMAGE026
结果显示：乙醛、环氧丙烷的定量限浓度分别为0.27μg/ml和0.33μg/ml，约相当于供试品的2.67ppm和3.33ppm，信噪比均大于10，连续进样6针，峰面积的RSD分别为3.91%和3.21%，均不大于15%；检测限浓度分别为0.08μg/ml和0.10μg/ml，约相当于供试品的0.80ppm和1.00ppm，信噪比均大于3。
3.3准确度
准确度是通过回收率来考察，研究采用50%、100%、150%限度浓度样品确认。每个浓度平行制备3份。具体制备方法和结果见表3-1~3-4。
表3-1 准确度测试溶液制备
Figure RE-RE-DEST_PATH_IMAGE014
表3-2准确度测试溶液制备
Figure RE-849408DEST_PATH_IMAGE015
。
表3-3 准确度测试结果-乙醛
Figure RE-RE-DEST_PATH_IMAGE016
表3-4 准确度测试结果-环氧丙烷
Figure RE-941123DEST_PATH_IMAGE017
结果显示：乙醛的9份样品回收率均在90.27%~102.39%；RSD值为3.43%，小于10%；环氧丙烷的9份样品回收率均在79.25%~87.91%；RSD值为3.03%，小于10%，说明该方法准确度良好，符合方法验证的要求。
3.4精密度
按照表5项下的要求制备2份100%对照品溶液、1份供试品溶液-6份R2-100%溶液进行环氧丙烷和乙醛测定。结果见表4-1~4-2：
表4-1 精密度测试结果-乙醛
Figure DEST_PATH_IMAGE036
表4-2 精密度测试结果-环氧丙烷
Figure DEST_PATH_IMAGE038
结果显示：重复性试验中乙醛的回收率平均值（n=6）为94.06%， RSD（n=6）为2.15%；环氧丙烷的回收率平均值（n=6）为82.88%， RSD（n=6）为2.50%，符合方法学验证要求，说明该方法重复性良好。
中间精密度试验中加标供试品溶液中乙醛的回收率平均值（n=6）为96.05%， RSD（n=6）为1.24%；环氧丙烷的回收率平均值（n=6）为86.50%， RSD（n=6）为1.75%，乙醛与环氧丙烷方法精密度检测结果的12份回收率结果RSD分别为1.99%和3.03%，符合方法学验证要求，说明该方法精密度良好。
3.5溶液稳定性
按照4项下制备100%对照品溶液（对照品溶液）和R2-100%(加标供试品)溶液，分别置于室温条件下，对照品溶液于0h、9h、17h、25h进行气相色谱检测，加标供试品溶液于0h、5h、13h、21h进行气相色谱检测；同时将对照品溶液和加标供试品溶液置于低温（2-8℃）条件下，对照品溶液于0h、8h、26h、35h、50.5h进行气相色谱检测，加标供试品溶液于0h、4.5h、22h、31h、46.5h进行气相色谱检测，根据不同时间测得的结果与初次结果进行相对变化值绝对值的对比，来考察对照品溶液和供试品溶液的稳定性，结果见表5-1~5-4：
表5-1室温对照品溶液及加标供试品溶液稳定性测定结果（乙醛）
Figure DEST_PATH_IMAGE040
表5-2低温对照品溶液及加标供试品溶液稳定性测定结果（乙醛）
Figure DEST_PATH_IMAGE042
表5-3室温对照品溶液及加标供试品溶液稳定性测定结果（环氧丙烷）
Figure DEST_PATH_IMAGE044
表5-4低温对照品溶液及加标供试品溶液稳定性测定结果（环氧丙烷）
Figure DEST_PATH_IMAGE046
结果显示：对照品溶液乙醛在室温17h，低温50.5h内各点相对变化值绝对值均不大于20%，稳定性良好，环氧丙烷在室温25h，低温50.5h内各点相对变化值绝对值均不大于20%，稳定性良好。
加标供试品溶液中乙醛在室温21h，低温46.5h内各点相对变化值绝对值均不大于20%，稳定性良好。环氧丙烷在室温13h，低温46.5h内各点相对变化值绝对值均不大于20%，稳定性良好。符合方法验证的要求。
对照品溶液乙醛在室温17h至25h时迅速降解完。环氧丙烷加标供试品溶液在室温5h相对变化值绝对值为11.18%，13h相对变化值绝对值为16.29%， 21h时超出了20%限度，值为23.74%。低温情况下乙醛和环氧丙烷对照品溶液和加标供试品溶液分别在50.5h和46.5h内相对变化值绝对值均未大于20%，且降解幅度明显低于室温放置，因此建议乙醛和环氧丙烷对照品溶液和加标供试品溶液配制完成应尽快使用，如需长时间保存需置于低温环境下。
3.6耐用性
分别按照4项下制备对照品溶液两份，供试品溶液一份和加标供试品溶液两份，分别于正常色谱条件及调整初始柱温±5℃、稀释剂pH±0.1、进样口温度±5℃检测，每项参数条件进行2个平行样品的检测，分别计算各条件下加标供试品溶液中杂质回收率，并计算变化条件与原条件测定结果的RSD值，具体耐用性参数方案见下表6-1；结果见表6-2：
表6-1 耐用性参数调整（色谱条件考察）
Figure DEST_PATH_IMAGE048
表6-2耐用性回收率测定结果
Figure DEST_PATH_IMAGE050
结果显示：调整色谱参数与正常条件测得的供试品溶液中乙醛含量结果的RSD分别为2.88%、1.93%、4.68%，供试品溶液中环氧丙烷含量结果的RSD分别为3.25%、0.78%、5.64%均符合方法学验证标准要求，说明该方法耐用性良好。

Claims (8)

1.一种基因毒杂质的检测方法，该方法采用顶空气相色谱（HSGC）法对氯化乙酰甲胆碱中的乙醛和环氧丙烷的含量进行检测，以磷酸二氢钠溶液为稀释剂。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于顶空气相色谱（HSGC）法的色谱条件为进样口温度145-155℃，检测器温度250℃、分流比20：1 ，柱流速1.2-1.8 ml/min，色谱柱的起始温度为35-45℃。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的磷酸二氢钠溶液的pH值为8.20 –8.40，优选pH为8.25 - 8.35。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的磷酸二氢钠溶液的浓度为10 mmol/L-30mmol/L，优选20mmol/L。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的氯化乙酰甲胆碱为氯化乙酰甲胆碱原料药或者以制剂形式存在的氯化乙酰甲胆碱产品。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的方法中，色谱柱采用程序升温，升温程序为35-45℃起始保持3min，以12-16℃/min速率升至52-54℃，以25-35℃/min速率升至220-260℃，保持3-5min。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的方法包括，将含有氯化乙酰甲胆碱产品的样品用pH为8.3的磷酸氢二钠溶液稀释，配置成供试品，采用顶空气相色谱方法检测供试品中乙醛和环氧丙烷的含量，色谱柱条件为进样口温度145-150℃，检测器温度250℃、分流比20：1 、柱流速1.5ml/min、色谱柱的起始温度为40℃，色谱柱的程序升温条件为：40℃起始保持3min，以15℃/min速率升至50℃，以30℃/min速率升至240℃，保持3min；或者
包括，将含有氯化乙酰甲胆碱产品的样品用pH为8.3磷酸氢二钠溶液稀释，配置成供试品，采用顶空气相色谱方法检测供试品中乙醛和环氧丙烷的含量，色谱柱条件为进样口温度150℃，检测器温度250℃、分流比20：1 、柱流速1.5ml/min、色谱柱的起始温度为35-40℃，色谱柱的程序升温条件为：40℃起始保持3min，以15℃/min速率升至50℃，以30℃/min速率升至240℃，保持3min；或者
包括，将含有氯化乙酰甲胆碱产品的样品用pH为8.2-8.4磷酸氢二钠溶液稀释，配置成供试品，采用顶空气相色谱方法检测供试品中乙醛和环氧丙烷的含量，色谱柱条件为进样口温度150℃，检测器温度250℃、分流比20：1 、柱流速1.5ml/min、色谱柱的起始温度为35-40℃，色谱柱的程序升温条件为：40℃起始保持3min，以15℃/min速率升至50℃，以30℃/min速率升至240℃，保持3min。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的方法所能检测的乙醛的检测限为0.08μg/ml，环氧丙烷的检测限位0.10μg/ml。
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