WO2021022876A1 - 测定水合氯醛或其制剂中卤代酸含量的方法 - Google Patents

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WO2021022876A1
WO2021022876A1 PCT/CN2020/093148 CN2020093148W WO2021022876A1 WO 2021022876 A1 WO2021022876 A1 WO 2021022876A1 CN 2020093148 W CN2020093148 W CN 2020093148W WO 2021022876 A1 WO2021022876 A1 WO 2021022876A1
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云琦
袁子惠
吴小青
陶亮
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特丰制药有限公司
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    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86

Definitions

  • the present invention provides a method for determining the content of halogenated acid in chloral hydrate or its preparation by gas chromatography, which comprises the following steps:
  • Step 2 Precisely weigh the halogenated acid reference substance, dissolve it in water to obtain the reference substance dilution, and perform the pretreatment operation as described in the first step on the reference substance dilution to obtain the reference substance solution ;as well as
  • Step 2 Precisely weigh the halogenated acid reference substance, dissolve it in water to obtain the reference substance dilution, and perform the pretreatment operation as described in the first step on the reference substance dilution to obtain the reference substance solution ;as well as
  • the alkali in the pretreatment operation (1) is an inorganic alkali, preferably sodium hydroxide, potassium hydroxide, and more preferably sodium hydroxide aqueous solution or potassium hydroxide aqueous solution.
  • the acid in the pretreatment operation (2) is an inorganic acid, preferably sulfuric acid or hydrochloric acid, and more preferably sulfuric acid.
  • no other treatment is performed between the pretreatment operations (1) and (2), for example, an organic solvent (such as n-hexane) is added for extraction.
  • an organic solvent such as n-hexane
  • Detector temperature 248-252°C, preferably 250°C;
  • Inlet temperature 210°C
  • Chloral hydrate concentrate (74.48%, w/w) (batch number: 20170322), Xinjiang Tefeng Pharmaceutical Co., Ltd.;
  • the compulsory degradation test is to prepare the degradation sample solution under acid, alkali, oxidation and high temperature conditions. According to the above chromatographic conditions, use the gas chromatograph 7890B to determine the impurity separation and detection capabilities of the method.
  • ECD detector temperature 250°C
  • composition of the chloral hydrate concentrate weigh out all the auxiliary materials except chloral hydrate, stir to dissolve, and get it.

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Abstract

一种药品中杂质含量的检测方法，通过气相色谱法测定水合氯醛或其制剂中卤代酸的含量。该方法包括以下步骤：第一步：将待测样品水合氯醛或其制剂任选地用水溶解或稀释，然后进行样品预处理；第二步：精密称取卤代酸对照品，将其在水中溶解，得到对照品稀释液，并对对照品稀释液实施第一步中的预处理操作，得到对照品溶液；以及第三步：通过气相色谱法分别检测对照品溶液和供试品溶液，并计算卤代酸含量。

Description

测定水合氯醛或其制剂中卤代酸含量的方法 发明领域
本申请涉及药品中杂质含量的检测方法，具体涉及通过气相色谱法测定水合氯醛或其制剂中卤代酸含量的方法。
发明背景
2017年10月27日，世界卫生组织国际癌症研究机构公布了初步整理的致癌物清单，三氯乙酸和二氯乙酸均在2B类致癌物清单中。
然而，在现有的水合氯醛原料药及制剂质量标准(包括《中国药典》、《美国药典》、《欧洲药典》、《日本药典》等的标准)中，均未收载水合氯醛制剂中卤代酸含量的测定方法。
发明概述
本发明提供通过气相色谱法测定水合氯醛或其制剂中卤代酸含量的方法，其包括以下步骤：
第一步：将待测样品水合氯醛或其制剂任选地用水溶解或稀释，然后进行样品预处理，所述预处理包括以下操作：
(1)向样品中加入碱，并使水合氯醛与碱充分反应；
(2)向操作(1)中所得的反应液中加入酸；
(3)加入与水不混溶的有机溶剂进行萃取，得到有机相；
(4)使有机相中的卤代酸进行酯化衍生化反应；
(5)任选地向操作(4)中的反应液中加入无机盐溶液进行萃取，将有机相作为供试品溶液；
第二步：精密称取卤代酸对照品，将其在水中溶解，得到对照品稀释液，并对所述对照品稀释液实施如第一步中所述的预处理操作，得到对照品溶液；以及
第三步：通过气相色谱法分别检测对照品溶液和供试品溶液，并计算卤代酸含量。
在本发明的方法中，通过对水合氯醛或其制剂进行适当的预处理获得供试品溶液后再进行气相色谱法检测，最大限度地避免了干扰检测结果的因素。本发明的方法便于操作、灵敏度高、准确度高、专属性强，满足定量检测方法学的各项要求。
附图简要说明
图1：针对三氯乙酸检测方法进行专属性验证中所获得的图谱。
图2：对酸降解溶液进行三氯乙酸检测所获得的图谱。
图3：对碱降解溶液进行三氯乙酸检测所获得的图谱。
图4：对高温降解溶液进行三氯乙酸检测所获得的图谱。
图5：三氯乙酸检测方法中的标准曲线图。
图6：针对二氯乙酸检测方法进行专属性验证中所获得的图谱。
图7：二氯乙酸检测方法中的标准曲线图。
图8：对比例中获得的图谱。
发明详述
在本申请的气相色谱法检测中，实际检测的物质是卤代酸进行酯化衍生后所得的产 物(例如三氯乙酸甲酯和二氯乙酸甲酯)。但为了方便起见，仍将实际检测的物质称作卤代酸(例如三氯乙酸和二氯乙酸)。
在一些实施方案中，本发明提供通过气相色谱法测定水合氯醛或其制剂中卤代酸含量的方法，其包括以下步骤：
第一步：将待测样品水合氯醛或其制剂任选地用水溶解或稀释，然后进行样品预处理，所述预处理包括以下操作：
(1)向样品中加入碱，并使水合氯醛与碱充分反应；
(2)向操作(1)中所得的反应液中加入酸；
(3)加入与水不混溶的有机溶剂进行萃取，得到有机相；
(4)使有机相中的卤代酸进行酯化衍生化反应；
(5)任选地向操作(4)中的反应液中加入无机盐溶液进行萃取，将有机相作为供试品溶液；
第二步：精密称取卤代酸对照品，将其在水中溶解，得到对照品稀释液，并对所述对照品稀释液实施如第一步中所述的预处理操作，得到对照品溶液；以及
第三步：通过气相色谱法分别检测对照品溶液和供试品溶液，并计算卤代酸含量。
本发明的方法中的各个步骤可以任意顺序进行，例如可以先实施第二步，然后再实施第一步。
在优选的实施方案中，所述卤代酸为氯代酸，优选为三氯乙酸或二氯乙酸。
在优选的实施方案中，预处理操作(1)中的碱为无机碱，优选为氢氧化钠、氢氧化钾，更优选为氢氧化钠水溶液或氢氧化钾水溶液。
在优选的实施方案中，预处理操作(2)中的酸为无机酸，优选为硫酸或盐酸，更优选为硫酸。
在优选的实施方案中，在预处理操作(1)和(2)之间中未进行其它处理，例如加入有机溶剂(如正己烷)进行萃取的操作。
在优选的实施方案中，在预处理操作(3)之前，向操作(2)所得的溶液中加入氯化钠溶液，优选饱和氯化钠溶液。
在优选的实施方案中，预处理操作(3)中的有机溶剂为含有2-10个碳原子的醚，优选为甲基叔丁基醚。
在优选的实施方案中，预处理操作(4)中的酯化衍生化反应为甲酯化衍生化反应，其优选使用硫酸甲醇溶液作为衍生化试剂。
在优选的实施方案中，在预处理操作(5)中，可分多次加入不同的无机盐溶液。例如可先加入氯化钠溶液进行萃取，保留有机相，向其再加入碳酸氢钠溶液进行萃取，并将所得有机相作为供试品溶液。
在优选的实施方案中，在所述气相色谱法中使用6％氰丙基苯基-94％甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管柱。
在优选的实施方案中，所述气相色谱法使用ECD检测器。
在优选的实施方案中，所述气相色谱法为程序升温色谱法。
在优选的实施方案中，所述气相色谱法的条件如下：
进样口温度：208-212℃，优选为210℃；
起始柱温：198-202℃，优选为200℃；
检测器温度：248-252℃，优选为250℃；并且
载气为氮气。
如本领域技术人员可以理解，在根据本申请的方法获得的色谱图中，卤代酸色谱峰的保留时间可因气相色谱仪的型号和/或色谱柱的型号和批次的不同而变化。
在优选的实施方案中，通过以下公式计算卤代酸含量：
Figure PCTCN2020093148-appb-000001
其中：
A X表示供试品溶液中卤代酸的峰面积；
c R表示对照品溶液中的卤代酸浓度，μg/ml；
V表示待测样品的稀释体积，ml；
A R表示对照品溶液中卤代酸的峰面积；
W表示待测样品中水合氯醛的量，g。
实施例
以下结合实施例进一步描述本发明，但提供这些实施例并非意在限制本发明的范围。
实施例1三氯乙酸及二氯乙酸的检测方法
1.1仪器与试剂
仪器：气相色谱仪，GC-2014，日本岛津公司；7890B，美国安捷伦公司；电子分析天平，CPA225D，赛多利斯科学仪器有限公司等。
试剂：对照品二氯乙酸，含量98.4％，购自Dr.Ehrenstorfer GmbH，对照品三氯乙酸，含量≥99.0％，购自东京化成工业株式会社，甲基叔丁基醚、甲醇为色谱纯，其余试剂(浓硫酸(密度为1.84g/mL)、无水硫酸钠、氯化钠、氢氧化钠、碳酸氢钠等)为分析纯，水为自制超纯水。
10％硫酸甲醇溶液：在搅拌下向45ml甲醇中缓慢加入5ml硫酸，放置至室温即得。
水合氯醛浓缩液(74.48％，w/w)(批号：20181022)，购自新疆特丰药业股份有限公司1.2色谱条件
色谱柱：以6％氰丙基苯基-94％甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管柱(30m×0.53mm×3μm)；
升温程序：起始温度为200℃，维持2min，以1℃/min升温至210℃，维持3min；
进样口温度：210℃；
ECD检测器温度：250℃；
柱流速：1.0ml/min；
分流比：50∶1；
进样量：1μl；
载气：氮气(纯度＞99.999％)。
1.3溶液制备
(1)待测样品稀释液的制备
取待测样品水合氯醛浓缩液，精密称定(1.01320g)，置于10ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度(10mL，此为待测样品的稀释体积)，摇匀，精密量取1ml作为待测样品稀释液。
(2)供试品溶液的制备
将待测样品稀释液(1ml)置于10ml具塞离心管中，加入1mol/L氢氧化钠溶液1ml，充分混匀。待反应完全结束(即溶液呈无色澄清透明状态或有透明溶液分层现象，约10min)后，加入3mol/L硫酸溶液1ml，摇匀，静置1分钟，加入饱和氯化钠溶液1ml，摇匀，静置3分钟，精密加入甲基叔丁基醚5ml进行初次萃取，静置分层。精密量取甲基叔丁基醚4ml，置于20ml顶空瓶中，加入10％硫酸甲醇溶液4ml，密封，置于60℃烘箱中衍生1.5小时。将顶空瓶取出，放冷，开盖，加入饱和氯化钠溶液5ml，振摇1分钟，静置3分钟，用滴管将下层水和所有固体弃去，加入饱和碳酸氢钠溶液1ml，摇 匀，静置1分钟，取醚层，经铺有无水硫酸钠的滤器过滤，取滤液作为供试品溶液。
(3)对照品溶液的制备
精密称取三氯乙酸、二氯乙酸对照品，分别为95.13mg、99.99mg，用水溶解并定量稀释制成每1ml中含三氯乙酸9.513μg、二氯乙酸9.839μg的溶液，作为对照品稀释液。
精密量取对照品稀释液1ml，按照供试品溶液的制备方法对对照品稀释液进行处理，得对照品溶液。
1.4测定法
精密量取对照品溶液和供试品溶液各1μl，分别注入气相色谱仪，并记录色谱图。
1.5计算
Figure PCTCN2020093148-appb-000002
Figure PCTCN2020093148-appb-000003
实施例2三氯乙酸检测方法验证
概述
对三氯乙酸的检测方法进行了验证，验证结果如表1中所概括。
表1三氯乙酸检测方法验证总结
Figure PCTCN2020093148-appb-000004
具体描述
2.1仪器与试剂
2.1.1仪器设备
表2仪器设备
序号 仪器名称 型号 生产商
1 气相色谱仪 GC-2014 日本岛津公司
2 气相色谱仪 7890B 美国安捷伦公司
3 电子天平 CPA225D 赛多利斯科学仪器有限公司
4 电子天平 BSA224S 赛多利斯科学仪器有限公司
5 电热恒温水浴锅 DZKW-S-4 北京市光明医疗仪器有限公司
6 电热鼓风干燥箱 GZX-9246MBE 上海博迅实业有限公司医疗设备
2.1.2试剂
三氯乙酸对照品(批号：YBMXD-TJ)，含量为99.0％，东京化成工业株式会社；
水合氯醛浓缩液(74.48％，w/w)(批号：20170322)，新疆特丰药业股份有限公司；
甲基叔丁基醚、甲醇为色谱纯，其余试剂(如氯化钠、无水硫酸钠、碳酸氢钠、浓硫酸(密度为1.84g/mL)、氢氧化钠和盐酸)均为分析纯，水为纯化水。
2.2色谱条件
色谱柱：6％氰丙基苯基-94％甲基聚硅氧烷为固定相(DB-624UI)；
升温程序：起始温度为200℃，维持2min，以1℃/min升温至210℃，维持3min；
进样口温度：210℃；
ECD检测器温度：250℃；
柱流速：1.0ml/min；
分流比：50∶1；
进样量：1μl；
载气：氮气(纯度＞99.999％)。
2.3溶液制备
2.3.1待测样品稀释液的制备
取待测样品水合氯醛浓缩液约1g，精密称定，置于10ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度(10mL，此为待测样品的稀释体积)，摇匀，精密量取1ml作为待测样品稀释液。
2.3.2供试品溶液的制备
将待测样品稀释液(1ml)置于10ml具塞离心管中，加入1mol/L氢氧化钠溶液1ml，摇匀，静置10分钟，加入3mol/L硫酸溶液1ml，摇匀，静置1分钟，加入饱和氯化钠溶液1ml，摇匀，静置3分钟，精密加入甲基叔丁基醚5ml进行初次萃取，静置分层。精密量取甲基叔丁基醚层4ml，置于20ml顶空瓶中，加入10％硫酸甲醇溶液4ml，密封，置于60℃烘箱(即上述电热鼓风干燥箱)中衍生1.5小时。将顶空瓶取出，放冷，开盖，加入饱和氯化钠溶液5ml，振摇1分钟，静置3分钟，用滴管将下层水和所有固体弃去，加饱和碳酸氢钠溶液1ml，摇匀，静置1分钟，取醚层，经铺有无水硫酸钠的滤器过滤，取滤液作为供试品溶液。
2.3.3对照品储备液的制备
取三氯乙酸对照品约100mg，精密称定，置于100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，得对照品储备液。
2.3.4对照品溶液的制备
精密量取对照品储备液1ml，置于100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品稀释液。精密量取对照品稀释液1ml，按照供试品溶液的制备方法对对照品稀释液进行处理，得对照品溶液。
2.3.5空白溶液的制备
精密量取甲醇1ml，对其进行与对待测样品稀释液所述相同的处理，得到空白溶液。
2.3.6辅料溶液的制备
依照水合氯醛浓缩液组成，称取除水合氯醛外的所有辅料，搅拌溶解，即得。
2.3.7阴性溶液的制备
取辅料溶液，依照供试品溶液的制备方法，制得阴性溶液。
2.4系统适用性
取对照品溶液，依上述色谱条件，使用气相色谱仪7890B测定6次，结果见表3。
表3系统适用性试验结果
序号 保留时间(min) 峰面积 理论塔板数 对称因子
1 9.663 8920 60472 0.98
2 9.663 8941 59366 0.98
3 9.669 9016 57381 1.01
4 9.661 9022 61534 0.98
5 9.659 8924 60420 1.00
6 9.666 9151 58381 1.00
平均值 9.664 8996 59592 0.99
RSD(％) 0.04 0.98 / /
注：/表示无相关信息。
结果表明，6次测试的峰面积RSD＜5.0％，保留时间RSD＜1.0％，理论塔板数＞20000，对称因子小于1.5，表明系统适用性良好。
2.5专属性
2.5.1溶剂、辅料干扰试验
取空白溶液、对照品溶液、阴性溶液和供试品溶液，依上述色谱条件，使用气相色谱仪7890B测定，结果见图1。
由图1可见，溶剂、辅料不干扰检测。
2.5.2强制降解试验
强制降解试验是在酸、碱、氧化及高温条件下，制备降解样品溶液，依上述色谱条件，使用气相色谱仪7890B测定，考察方法的杂质分离和检测能力。
2.5.2.1酸降解试验
取水合氯醛浓缩液约1g，精密称定，置于10ml量瓶中，加入1mol/L的盐酸溶液2ml，具塞，90℃水浴2h，放冷，加入1mol/L氢氧化钠溶液2ml，加水稀释至刻度，摇匀。精密量取1ml酸降解样品，按照供试品溶液的制备方法对其进行处理，得酸降解溶液，依上述色谱条件，使用气相色谱仪7890B测定，结果见图2。
结果表明，酸降解条件下，主峰与相邻杂质峰分离良好。
2.5.2.2碱降解试验
取水合氯醛浓缩液约1g，精密称定，置于10ml量瓶中，加入0.5mol/L氢氧化钠溶液1ml，密闭5min，然后立即加入0.5mol/L盐酸溶液1ml，加水稀释至刻度，摇匀。精密量取1ml碱降解样品，按照供试品溶液的制备方法对其进行处理，得碱降解溶液，依上述色谱条件，使用气相色谱仪7890B测定，结果见图3。
结果表明，在碱降解条件下，主峰与相邻杂质峰分离良好。
2.5.2.3高温降解试验
取水合氯醛浓缩液约1g，精密称定，置于10ml量瓶中，具塞，置于90℃水浴中，避光加热5h，放冷，加水稀释至刻度，摇匀。精密量取1ml高温降解样品，按照供试品溶液的制备方法对其进行处理，得高温降解溶液，依上述色谱条件，使用气相色谱仪 7890B测定，结果见图4。
结果表明，在高温条件下，主峰与相邻杂质峰的分离良好。
2.5.3专属性试验结论
专属性试验结果表明，溶剂与辅料不干扰三氯乙酸测定，酸、碱和高温强降解样品中色谱峰分离度良好，不干扰测定。因此，方法专属性良好。
2.6检测限和定量限
取对照品稀释液，用水稀释制备不同浓度的检测限及定量限测定用溶液，精密量取检测限及定量限测定用溶液1ml，按照供试品溶液的制备方法对检测限及定量限测定用溶液进行处理，得对照品溶液。依上述色谱条件，使用气相色谱仪GC-2014测定，以S/N≥3为检测限，以S/N≥10为定量限。结果见表4。
表4检测限和定量限检测结果
Figure PCTCN2020093148-appb-000005
注：/表示无相关信息。
结果表明，三氯乙酸检测限浓度为0.011μg/ml；定量限浓度为0.218μg/ml，6次定量限浓度下测试的主峰峰面积RSD＜5.0％。
2.7线性和范围
取三氯乙酸对照品储备液，用纯化水定量稀释制成浓度分别为1.038、10.38、20.76、41.51、62.27μg/ml的溶液，作为系列标准曲线用溶液，分别依本申请方法测定，测定结果见表5。以浓度为横坐标(x)，峰面积为纵坐标(y)，进行线性回归分析，得到图5。
表5测定结果
序号 浓度(μg/ml) 峰面积
1 1.038 1780
2 10.38 18600
3 20.76 38423
4 41.51 76933
5 62.27 119802
结果表明，三氯乙酸线性回归方程为y＝1922.5x-1164.9，r＝0.9997，大于0.999，表明三氯乙酸在1.038μg/ml～62.27μg/ml线性良好。
2.8精密度
重复性：取水合氯醛浓缩液，制备6份供试品溶液，进行测定。
中间精密度：同一样品，不同人员用不同仪器设备，于不同日期依法测定。
测定结果见表6。
表6精密度试验结果
Figure PCTCN2020093148-appb-000006
Figure PCTCN2020093148-appb-000007
结果表明，6份样品三氯乙酸测定含量的RSD分别为2.24％和1.05％，不同人员设备12份样品含量RSD为1.87％，表明方法精密度符合要求。
2.9准确度
取对照品稀释液25ml，置于50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得低浓度回收率用对照品溶液；将对照品稀释液作为中浓度回收率用对照品溶液；取对照品储备液10ml，置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，取2ml，置于50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得高浓度回收率用对照品溶液。
精密量取待测样品稀释液0.5ml(其中三氯乙酸的含量已根据本申请的方法另行测定)，置于10ml具塞离心管中，加入低、中、高浓度回收率用对照品溶液0.5ml，按照供试品溶液制备方法，制得三个不同浓度的回收率溶液，依法测定，计算回收率。以上操作重复3次，结果见表7。
表7准确度试验结果
Figure PCTCN2020093148-appb-000008
结果表明，各浓度单一回收率和平均回收率为90.27％～98.63％，回收率的RSD＜5.0％，表明方法准确度良好。
2.10溶液稳定性
取供试品溶液，室温放置，分别于0、2、4、6、8、12h取样，依法测定。结果见表8。
表8供试品溶液稳定性考察结果
Figure PCTCN2020093148-appb-000009
Figure PCTCN2020093148-appb-000010
结果表明，各时间点测试结果与0h的结果相比，含量无显著变化，RSD＜5.0％，表明供试品溶液室温放置12h稳定。
2.11耐用性
取供试品溶液，于不同进样口温度、柱温及检测器温度(见表9)测定三氯乙酸含量，结果见表10。
表9色谱条件变动的参数
色谱条件 原条件 考察条件
进样口温度(℃) 210 208和212
起始柱温(℃) 200 198和202
检测器温度(℃) 250 248和252
表10耐用性试验结果
Figure PCTCN2020093148-appb-000011
注：*仅起始柱温不同，后续升温程序相同。
结果表明，在所考察的进样口温度、柱温及检测器温度条件下，测得的含量无显著变化，耐用性符合要求。
实施例3二氯乙酸检测方法验证
概述
对二氯乙酸的检测方法进行了验证，验证结果如表11中所概括。
表11二氯乙酸检测方法验证总结
Figure PCTCN2020093148-appb-000012
具体描述
3.1仪器与试剂
3.1.1仪器设备
表12仪器设备
序号 仪器名称 型号 生产商
1 气相色谱仪 7890B 美国安捷伦公司
2 电子天平 CPA225D 赛多利斯科学仪器有限公司
3 电子天平 BSA224S 赛多利斯科学仪器有限公司
4 电热鼓风干燥箱 GZX-9246MBE 上海博迅实业有限公司医疗设备
3.1.2试剂
水合氯醛浓缩液(74.48％，w/w)(批号：20181101、2181102)，南京特丰药业股份有限公司；
二氯乙酸对照品(批号：G149179)，含量为98.4％，Dr.Ehrenstorfer GmbH；
甲基叔丁基醚、甲醇为色谱纯，其余试剂(如氯化钠、无水硫酸钠、碳酸氢钠、浓硫酸(密度为1.84g/mL)、氢氧化钠)均为分析纯，水为纯化水。
3.2色谱条件
色谱柱：6％氰丙基苯基-94％甲基聚硅氧烷为固定相(DB-624)；
升温程序：起始温度为200℃，维持2min，以1℃/min升温至210℃，维持3min；
进样口温度：210℃；
ECD检测器温度：250℃；
柱流速：1.0ml/min；
分流比：50∶1；
进样量：1μl；
载气：氮气(纯度＞99.999％)。
3.3溶液制备
3.3.1待测样品稀释液的制备
取待测样品水合氯醛浓缩液约1g，精密称定，置于10ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度(10mL，此为待测样品的稀释体积)，摇匀，精密量取1ml作为待测样品稀释液。
3.3.2供试品溶液的制备
将待测样品稀释液(1ml)置于10ml具塞离心管中，加入1mol/L氢氧化钠溶液1ml，摇匀，静置10分钟，加入3mol/L硫酸溶液1ml，摇匀，静置1分钟，加入饱和氯化钠溶液1ml，摇匀，静置3分钟，精密加入甲基叔丁基醚5ml(此为初次萃取时使用的有机溶剂的体积)进行初次萃取，静置分层。精密量取甲基叔丁基醚层4ml，置于20ml顶空瓶中，加入10％硫酸甲醇溶液4ml，密封，置于60℃烘箱(即上述电热鼓风干燥箱)中衍生1.5小时。将顶空瓶取出，放冷，开盖，加入饱和氯化钠溶液5ml，振摇1分钟，静置3分钟，用滴管将下层水和所有固体弃去，加饱和碳酸氢钠溶液1ml，摇匀，静置1分钟，取醚层，经铺有无水硫酸钠的滤器过滤，取滤液作为供试品溶液。
3.3.3对照品储备液的制备
取二氯乙酸对照品约100mg，精密称定，置于100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，得对照品储备液。
3.3.4对照品溶液的制备
精密量取对照品储备液1ml，置于100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品稀释液。精密量取对照品稀释液1ml，按照供试品溶液的制备方法对对照品稀释 液进行处理，得对照品溶液。
3.3.5空白溶液的制备
精密量取甲醇1ml，对其进行与对待测样品稀释液所述相同的处理，得到空白溶液。
3.3.6辅料溶液的制备
依照水合氯醛浓缩液组成，称取除水合氯醛外的所有辅料，搅拌溶解，即得。
3.3.7阴性溶液
取辅料溶液，依照供试品溶液的制备方法，制得阴性溶液。
3.4系统适用性
取对照品溶液，依上述色谱条件，使用气相色谱仪7890B测定6次，结果见表13。
表13系统适用性试验结果
序号 保留时间(min) 峰面积 理论塔板数 对称因子
1 6.720 5458.3 64030 0.97
2 6.718 5394.0 66670 0.97
3 6.717 5255.1 67553 0.97
4 6.719 5469.6 64876 0.96
5 6.719 5463.2 64908 0.97
6 6.720 5500.4 64045 0.97
平均值 6.719 5423.4 65347 0.97
RSD(％) 0.02 1.65 2.21 0.42
结果表明，6次测试的峰面积RSD＜5.0％，保留时间RSD＜1.0％，理论塔板数＞20000，对称因子小于1.5，表明系统适用性良好。
3.5专属性
3.5.1溶剂、辅料干扰试验
取空白溶液、对照品溶液、阴性溶液和供试品溶液，依上述色谱条件，使用气相色谱仪7890B测定，结果见图6。
由图6可见，溶剂、辅料不干扰检测。
3.6检测限与定量限
取对照品稀释液，用水稀释制备不同浓度的检测限及定量限测定用溶液，精密量取检测限及定量限测定用溶液1ml，按照供试品溶液的制备方法对检测限及定量限测定用溶液进行处理，得对照品溶液。依上述色谱条件，使用气相色谱仪7890B测定，以S/N≥3为检测限，S/N≥10为定量限。结果见表14。
表14检测限和定量限检测结果
Figure PCTCN2020093148-appb-000013
注：/表示无相关信息。
结果表明，二氯乙酸检测限为0.050μg/ml；定量限为0.202μg/ml，6次定量限浓度下测试的主峰峰面积RSD＜6.0％。
3.7线性和范围
取二氯乙酸对照品储备液，用纯化水定量稀释制成浓度分别为0.2022、0.5055、1.011、5.055、10.11、20.22μg/ml的溶液，作为系列标准曲线用溶液，分别依本申请方法测定，测定结果见表15。以浓度为横坐标(x)，峰面积为纵坐标(y)，进行线性回归分析，得到图7。
表15测定结果
序号 浓度(μg/ml) 峰面积
1 0.2022 311.7
2 0.5055 496.9
3 1.011 929.5
4 5.055 3866.8
5 10.11 7459.4
6 20.22 15314.2
结果表明，二氯乙酸线性回归方程为y＝746.88x+111.52，r＝0.999，表明二氯乙酸在0.2022～20.22μg/m线性良好。
3.8重复性
取水合氯醛浓缩液，制备6份供试品溶液，进行测定，测定结果见表16。
表16重复性试验结果
Figure PCTCN2020093148-appb-000014
结果表明，6份样品二氯乙酸测定含量的RSD为3.86％，表明方法的重复性符合要求。
3.9准确度
取水合氯醛浓缩液约1g，照待测样品稀释液的制备方法，制得待测样品稀释液(其中三氯乙酸的含量根据本申请的方法测定)。
精密量取待测样品稀释液0.5ml，置于10ml具塞离心管中，加入对照品稀释液0.5ml，按照供试品溶液制备方法，制得回收率溶液，依法测定供，计算回收率。以上操作重复6次，结果见表17。
表17准确度试验结果
Figure PCTCN2020093148-appb-000015
结果表明，单一回收率和平均回收率在104.81％～116.19％，回收率的RSD＜5.0％，表明方法准确度良好。
对比例
1.1仪器和试剂
仪器：气相色谱仪，GC-2014，日本岛津公司；电子分析天平，CPA225D，赛多利斯科学仪器有限公司等。
试剂如实施例1中所描述。
1.2待测样品稀释液的制备
取待测样品水合氯醛浓缩液约1g，精密称定，置于10ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度(10mL，此为待测样品的稀释体积)，摇匀，精密量取1ml作为待测样品稀释液。
1.3供试品溶液的制备
将待测样品稀释液(1ml)置于10ml具塞离心管中，加入纯化水1ml，摇匀，静置10分钟，加入3mol/L硫酸溶液1ml，摇匀，静置1分钟，加入饱和氯化钠溶液1ml，摇匀，静置3分钟，精密加入甲基叔丁基醚5ml进行初次萃取，静置分层。精密量取甲基叔丁基醚层4ml，置于20ml顶空瓶中，加入10％硫酸甲醇溶液4ml，密封，置于60℃烘箱中衍生1.5小时。将顶空瓶取出，放冷，开盖，加入饱和氯化钠溶液5ml，振摇1分钟，静置3分钟，用滴管将下层水和所有固体弃去，加饱和碳酸氢钠溶液1ml，摇匀，静置1分钟，取醚层，经铺有无水硫酸钠的滤器过滤，取滤液作为供试品溶液。
1.4气相色谱法检测
将供试品溶液按照实施例1中的色谱条件，进行气相色谱法分析，色谱图见图8。
由图8可见，二氯乙酸、三氯乙酸色谱峰包含在其它色谱峰内。这表明如果未将待测样品用碱进行预处理，则无法对待测样品中的杂质进行定量检测。
除本文中描述的那些实施方案外，根据前述描述，本发明的多种修改对本领域技术人员而言会是显而易见的。这样的修改也意图落入所附权利要求书的范围内。本申请中所引用的各参考文献(包括所有专利、专利申请、期刊文章、书籍及任何其它公开)均以其整体援引加入本文。

Claims (10)

  1. 通过气相色谱法测定水合氯醛或其制剂中卤代酸含量的方法，其包括以下步骤：
    第一步：将待测样品水合氯醛或其制剂任选地用水溶解或稀释，然后进行样品预处理，所述预处理包括以下操作：
    (1)向样品中加入碱，并使水合氯醛与碱充分反应；
    (2)向操作(1)中所得的反应液中加入酸；
    (3)加入与水不混溶的有机溶剂进行萃取，得到有机相；
    (4)使有机相中的卤代酸进行酯化衍生化反应；
    (5)任选地向操作(4)中的反应液中加入无机盐溶液进行萃取，将有机相作为供试品溶液；
    第二步：精密称取卤代酸对照品，将其在水中溶解，得到对照品稀释液，并对所述对照品稀释液实施如第一步中所述的预处理操作，得到对照品溶液；以及
    第三步：通过气相色谱法分别检测对照品溶液和供试品溶液，并计算卤代酸含量。
  2. 权利要求1的方法，其中所述卤代酸为氯代酸，优选为三氯乙酸或二氯乙酸。
  3. 权利要求1或2的方法，其中预处理操作(1)中的碱为无机碱，优选为氢氧化钠、氢氧化钾，更优选为氢氧化钠水溶液或氢氧化钾水溶液。
  4. 权利要求1-3中任一项的方法，其中预处理操作(2)中的酸为无机酸，优选为硫酸或盐酸，更优选为硫酸。
  5. 权利要求1-4中任一项的方法，其中预处理操作(3)中的有机溶剂为含有2-10个碳原子的醚，优选为甲基叔丁基醚。
  6. 权利要求1-5中任一项的方法，其中预处理操作(4)中的酯化衍生化反应为甲酯化衍生化反应，其优选使用硫酸甲醇溶液作为衍生化试剂。
  7. 权利要求1-6中任一项的方法，其中在所述气相色谱法中使用6％氰丙基苯基-94％甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管柱。
  8. 权利要求1-7中任一项的方法，其中所述气相色谱法使用ECD检测器。
  9. 权利要求1-8中任一项的方法，其中所述气相色谱法为程序升温色谱法。
  10. 权利要求1-9中任一项的方法，其中所述气相色谱法的条件如下：
    进样口温度：208-212℃，优选为210℃；
    起始柱温：198-202℃，优选为200℃；
    检测器温度：248-252℃，优选为250℃；并且
    载气为氮气。
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