CN114480272A - 一种用于脐带间充质干细胞培养的添加剂、培养基及其制备方法 - Google Patents
一种用于脐带间充质干细胞培养的添加剂、培养基及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114480272A CN114480272A CN202210163445.6A CN202210163445A CN114480272A CN 114480272 A CN114480272 A CN 114480272A CN 202210163445 A CN202210163445 A CN 202210163445A CN 114480272 A CN114480272 A CN 114480272A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- mesenchymal stem
- umbilical cord
- cord mesenchymal
- culture medium
- additive
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 66
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 title claims abstract description 64
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 title claims abstract description 41
- 239000000654 additive Substances 0.000 title claims abstract description 36
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 title claims abstract description 33
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 title claims abstract description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 13
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 claims abstract description 42
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 36
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 26
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 claims abstract description 21
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 21
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 claims abstract description 21
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 claims abstract description 21
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 claims abstract description 20
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 claims abstract description 18
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 claims abstract description 18
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 claims abstract description 18
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 claims abstract description 18
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims abstract description 13
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims abstract description 13
- 235000002722 Dioscorea batatas Nutrition 0.000 claims abstract description 10
- 240000001811 Dioscorea oppositifolia Species 0.000 claims abstract description 10
- 235000003416 Dioscorea oppositifolia Nutrition 0.000 claims abstract description 10
- 235000006536 Dioscorea esculenta Nutrition 0.000 claims abstract description 9
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 19
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 claims description 14
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 claims description 12
- HDXIQHTUNGFJIC-UHFFFAOYSA-N (25R)-spirost-5-en-3beta-ol 3-O-<O-alpha-L-rhamnopyranosyl-(1-->2)-beta-D-glucopyranoside> Natural products O1C2(OCC(C)CC2)C(C)C(C2(CCC3C4(C)CC5)C)C1CC2C3CC=C4CC5OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC1OC(C)C(O)C(O)C1O HDXIQHTUNGFJIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- VNONINPVFQTJOC-RXEYMUOJSA-N Collettiside III Natural products O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O2)[C@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1CC=2[C@@](C)([C@@H]3[C@H]([C@H]4[C@@](C)([C@H]5[C@H](C)[C@@]6(O[C@H]5C4)OC[C@H](C)CC6)CC3)CC=2)CC1)[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O1 VNONINPVFQTJOC-RXEYMUOJSA-N 0.000 claims description 8
- VNONINPVFQTJOC-ZGXDEBHDSA-N dioscin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]([C@H]1O)O[C@H]1[C@@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O1)O)O[C@@H]1CC2=CC[C@H]3[C@@H]4C[C@H]5[C@@H]([C@]4(CC[C@@H]3[C@@]2(C)CC1)C)[C@@H]([C@]1(OC[C@H](C)CC1)O5)C)[C@@H]1O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O VNONINPVFQTJOC-ZGXDEBHDSA-N 0.000 claims description 8
- CJNUQCDDINHHHD-APRUHSSNSA-N dioscin Natural products C[C@@H]1CC[C@@]2(OC1)O[C@H]3C[C@H]4[C@@H]5CC=C6C[C@H](CC[C@@H]6[C@H]5CC[C@]4(C)[C@H]3[C@@H]2C)O[C@@H]7O[C@H](CO)[C@@H](O[C@@H]8O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]8O)[C@H](O)[C@H]7O[C@@H]9O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]9O CJNUQCDDINHHHD-APRUHSSNSA-N 0.000 claims description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 8
- VNONINPVFQTJOC-UHFFFAOYSA-N polyphyllin III Natural products O1C2(OCC(C)CC2)C(C)C(C2(CCC3C4(C)CC5)C)C1CC2C3CC=C4CC5OC(C(C1O)OC2C(C(O)C(O)C(C)O2)O)OC(CO)C1OC1OC(C)C(O)C(O)C1O VNONINPVFQTJOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 claims description 7
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 7
- 235000004879 dioscorea Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 5
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 5
- 241000221079 Euphorbia <genus> Species 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 2
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 claims description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 26
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 14
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 abstract description 12
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract description 7
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 abstract description 6
- 230000003321 amplification Effects 0.000 abstract description 4
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 abstract description 4
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 abstract description 2
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 abstract description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 24
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 6
- 244000281702 Dioscorea villosa Species 0.000 description 5
- XFLPOXHBWOHPNX-AVYZPKKWSA-N Euphorbianin Natural products O=C(OC[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@H](O)[C@H](OC3=C(c4cc(O)c(O)cc4)Oc4c(c(O)cc(O)c4)C3=O)O[C@@H](CO)[C@@H]2O)O1)C XFLPOXHBWOHPNX-AVYZPKKWSA-N 0.000 description 5
- XFLPOXHBWOHPNX-ORFYMIAKSA-N [(3s,4s,6s)-6-[(2s,4s,5s)-2-[2-(3,4-dihydroxyphenyl)-5,7-dihydroxy-4-oxochromen-3-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl]methyl acetate Chemical compound OC1[C@@H](O)[C@H](O)C(COC(=O)C)O[C@H]1O[C@@H]1C(O)[C@H](OC=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2C=2C=C(O)C(O)=CC=2)=O)OC(CO)[C@@H]1O XFLPOXHBWOHPNX-ORFYMIAKSA-N 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 3
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 230000002188 osteogenic effect Effects 0.000 description 3
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000434018 Euphorbia pekinensis Species 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000004504 adult stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000032677 cell aging Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 210000003074 dental pulp Anatomy 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 210000003716 mesoderm Anatomy 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000001582 osteoblastic effect Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 229960002901 sodium glycerophosphate Drugs 0.000 description 1
- REULQIKBNNDNDX-UHFFFAOYSA-M sodium;2,3-dihydroxypropyl hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OCC(O)COP(O)([O-])=O REULQIKBNNDNDX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0662—Stem cells
- C12N5/0668—Mesenchymal stem cells from other natural sources
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/32—Amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/38—Vitamins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/90—Serum-free medium, which may still contain naturally-sourced components
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/10—Growth factors
- C12N2501/11—Epidermal growth factor [EGF]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/30—Hormones
- C12N2501/33—Insulin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/998—Proteins not provided for elsewhere
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/999—Small molecules not provided for elsewhere
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种用于脐带间充质干细胞培养的添加剂，包括以下成分：L‑谷氨酰胺、胰岛素、维生素C、山药肽、红大戟素、丙酮酸钠、表皮生长因子。该添加剂中包括山药肽、红大戟素等成分有效提高脐带间充质干细胞的增殖活性，和其他成分一起为脐带间充质干细胞的增殖提供充足的营养，促进脐带间充质干细胞的分裂增殖，进而提高脐带间充干细胞的体外扩增效率，并且细胞保持较好的分化活性。本发明的添加剂不含动物源性成分，安全性更高。本发明还添提供了一种脐带间充质干细胞培养基，由基础培养基和上述添加剂组成，成分明确，成本低。本发明还提供了一种上述培养基的制备方法，制备过程简便，易于操作，有助于实现商业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及干细胞领域，尤其涉及一种用于脐带间充质干细胞培养的添加剂、培养基及其制备方法。
背景技术
间充质干细胞是指一类具有自我更新和多向分化潜能的成体干细胞，主要来源于中胚层组织。后续又从脂肪、胎盘、脐带、牙髓等组织分离得到间充质干细胞。脐血含有丰富的脐带间充质干细胞，脐带间充质干细胞具有多向分化的潜能，在条件控制下可分化为心肌细胞、成骨细胞、脂肪细胞等多种类型的细胞。同时免疫原性比骨髓间充质干细胞低，具有取材方便，无伦理学争议等优点，使其成为多种疾病治疗的细胞来源，具有广阔的临床应用前景。
随着脐带间充质干细胞在医疗领域的应用越来越广泛，对脐带间充质干细胞需求量越来越大，为了满足使用需求，体外培养为获得脐带间充质干细胞提供了保证。培养过程中培养基的质量决定了细胞培养的效率。目前，市场上的脐带间充质干细胞培养基分为含血清和无血清两大类型。含血清培养基中添加动物血清，但是动物血清所带来的异源性污染和已知或未知的病毒、支原体等病原体污染，导致产品的一致性难以控制，为临床研究带来潜在的风险。越来越多的研究者使用无血清培养基体外扩增脐带间充质干细胞。
现有的无血清培养基存在各种问题，如成分复杂、配制困难，或者培养基组份虽相对简单，但细胞增殖效果不够理想，细胞衰老快，细胞多向分化能力下降等问题，导致制备的细胞产品在临床应用方面治疗效果不佳。因此有必要研究一种培养基，不添加血清，同时能够保证细胞的增殖效率。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种用于脐带间充质干细胞培养的添加剂，有效提高脐带间充质干细胞的体外增殖效率。
本发明的目的之二在于提供一种用于脐带间充质干细胞的培养基。
本发明的目的之三在于提供一种用于脐带间充质干细胞培养基的制备方法。
本发明的目的之一采用如下技术方案实现：
一种用于脐带间充质干细胞培养的添加剂，包括以下成分：L-谷氨酰胺、胰岛素、维生素C、山药肽、红大戟素、丙酮酸钠、表皮生长因子。
进一步地，各组分添加浓度为：L-谷氨酰胺5-10ng/mL、维生素C15-20μg/mL、山药肽8-12μg/mL、红大戟素1-5μg/mL、丙酮酸钠22-28μg/mL、表皮生长因子30-40ng/mL。
进一步地，各组分添加浓度为：L-谷氨酰胺8ng/mL、维生素C17μg/mL、山药肽10μg/mL、红大戟素3μg/mL、丙酮酸钠25μg/mL、表皮生长因子35ng/mL。
本发明的目的之二采用如下技术方案实现：
一种用于脐带间充质干细胞培养的培养基，包括基础培养基和添加在基础培养基中的添加剂。
进一步地，所述基础培养基为α-MEM培养基。
本发明的目的之三采用如下技术方案实现：
一种脐带间充质干细胞培养基的制备方法，包括以下过程：取基础培养基加入L-谷氨酰胺、胰岛素、维生素C、山药肽、红大戟素、丙酮酸钠、表皮生长因子，混合搅拌均匀，过滤除菌后保存在4-6℃，备用。
进一步地，采用滤膜过滤除菌，滤膜的孔径为0.22μm。
相比现有技术，本发明的有益效果在于：本发明提供一种用于脐带间充质干细胞培养的添加剂，该添加剂中包括山药肽、红大戟素等成分有效提高脐带间充质干细胞的增殖活性，和L-谷氨酰胺、胰岛素、维生素C、L-谷氨酰胺、胰岛素、维生素C一起为脐带间充质干细胞的增殖提供充足的营养，促进脐带间充质干细胞的分裂增殖，进而提高脐带间充干细胞的体外扩增效率，并且细胞保持较好的分化活性。本发明的添加剂不含动物源性成分，避免了动物源性成分可能带来的风险，安全性更高。
本发明还添提供了一种脐带间充质干细胞培养基，由基础培养基和上述添加组成，成分明确，成本低。本发明还提供了一种上述培养基的制备方法，制备过程简便，易于操作，有助于实现商业化生产。
附图说明
图1为本发明实施例1至实施例3，对比例1至对比例5的培养基用于脐带间充质干细胞培养7d，收获的细胞总数量；
图2为本发明实施例1至实施例3，对比例1至对比例5的培养基用于脐带间充质干细胞培养7d，收获的细胞存活率；
图3为本发明实施例1至实施例3，对比例1至对比例5培养得到脐带间充质干细胞在成骨诱导后碱性磷酸酶活性。
具体实施方式
下面，结合附图以及具体实施方式，对本发明做进一步描述，需要说明的是，在不相冲突的前提下，以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。
实施例1
一种用于脐带间充质干细胞培养的添加剂，由以下成分组成：L-谷氨酰胺、胰岛素、维生素C、山药肽、红大戟素、丙酮酸钠、表皮生长因子。
一种用于脐带间充质干细胞培养的培养基，包括α-MEM培养基和添加在基础培养基中的上述添加剂，各组分添加浓度为：L-谷氨酰胺8ng/mL、维生素C17μg/mL、山药肽10μg/mL、红大戟素3μg/mL、丙酮酸钠25μg/mL、表皮生长因子35ng/mL。
一种脐带间充质干细胞培养基的制备方法，包括以下过程：取基础培养基加入L-谷氨酰胺、胰岛素、维生素C、山药肽、红大戟素、丙酮酸钠、表皮生长因子，混合搅拌均匀，采用孔径为0.22μm滤膜过滤除菌后保存在4℃，备用。
实施例2
一种用于脐带间充质干细胞培养的添加剂，由以下成分组成：L-谷氨酰胺、胰岛素、维生素C、山药肽、红大戟素、丙酮酸钠、表皮生长因子。
一种用于脐带间充质干细胞培养的培养基，包括α-MEM培养基和添加在基础培养基中的上述添加剂，各组分添加浓度为：L-谷氨酰胺5ng/mL、维生素C15μg/mL、山药肽8μg/mL、红大戟素1μg/mL、丙酮酸钠22μg/mL、表皮生长因子30ng/mL。
一种脐带间充质干细胞培养基的制备方法，包括以下过程：取基础培养基加入L-谷氨酰胺、胰岛素、维生素C、山药肽、红大戟素、丙酮酸钠、表皮生长因子，混合搅拌均匀，采用孔径为0.22μm滤膜过滤除菌后保存在6℃，备用。
实施例3
一种用于脐带间充质干细胞培养的添加剂，由以下成分组成：L-谷氨酰胺、胰岛素、维生素C、山药肽、红大戟素、丙酮酸钠、表皮生长因子。
一种用于脐带间充质干细胞培养的培养基，包括α-MEM培养基和添加在基础培养基中的上述添加剂，各组分添加浓度为：L-谷氨酰胺10ng/mL、维生素C 20μg/mL、山药肽12μg/mL、红大戟5μg/mL、丙酮酸钠28μg/mL、表皮生长因子40ng/mL。
一种脐带间充质干细胞培养基的制备方法，包括以下过程：取基础培养基加入L-谷氨酰胺、胰岛素、维生素C、山药肽、红大戟素、丙酮酸钠、表皮生长因子，混合搅拌均匀，采用孔径为0.22μm滤膜过滤除菌后保存在4℃，备用。
对比例1
对比例1提供一种用于脐带间充质干细胞培养的添加剂，和实施例1的区别为：省去山药肽，其余均和实施例1相同。
对比例2
对比例2提供一种用于脐带间充质干细胞培养的添加剂，和实施例1的区别为：省去红大戟素，其余均和实施例1相同。
对比例3
对比例3提供一种用于脐带间充质干细胞培养的添加剂，和实施例1的区别为：省去山药肽，将红大戟素的用量调整为13μg/mL，其余均和实施例1相同。
对比例4
对比例4提供一种用于脐带间充质干细胞培养的添加剂，和实施例1的区别为：省去红大戟素，将山药肽的用量调整为13μg/mL，其余均和实施例1相同。
对比例5
对比例5提供一种用于脐带间充质干细胞培养的添加剂，和实施例1的区别为：省去红大戟素、山药肽，其余均和实施例1相同。
试验例
取在液氮中冻存10天的P3代脐带间充质干细胞，在37℃的水浴中快速复苏，离心去除冻存液，PBS洗涤后分别加入实施例1至3，对比例1至5的培养基重悬，细胞密度为1×104个/mL，接种在12孔板中在37℃，5％CO2的培养箱中培养，每孔2mL，连续培养7天，每两天换液一次，然后采用0.4％台盼蓝染色计算细胞的总数量及活细胞数量，计算每组的细胞存活率，结果如图1和图2所示。
由图1可以看出实施例1至实施例3中细胞的总数量最多，经过7天培养收集的细胞最多。由图2可以看出实施例1至实施例3中细胞的存活率高于对比例1至5。对比例1至对比例5中调整了添加剂的组成，最终得到的培养基在培养脐带间充质干细胞时，获得的细胞总数量有不同程度的下降，细胞存活率不及实施例1。
对比例1中省去了山药肽，对比例2中省去了红大戟素，细胞的总数量远不及实施例1，存活率下降。对比例3中在省去山药肽后增加了红大戟素的用量，对比例4中在省去红大戟素后增加了山药肽的用量，对比例5中同时省去了红大戟素和山药肽，细胞的总数和存活率也不及实施例1，由此可知对比例1至5中的细胞增殖活性不及实施例1，说明山药肽和红大戟素的添加提高了脐带间充质干细胞的增殖活性，用于体外扩增时，可以收获更多有活性的细胞。
将实施例1，对比例1至5中在上述实验收获的脐带间充质干细胞采用成骨诱导培养基重悬，诱导培养培养基的成分为在α-MEM中添加以下成分：10％FBS、地塞米松0.2μM、甘油磷酸钠5mM、维生素C0.12μM，细胞密度为1×104个/mL，接种在6孔板中在37℃，5％CO2的培养箱中，每3天换液一次，连续诱导21天，在pH7.4的Tris-HCl缓冲液中裂解细胞，12000r/min离心5min，收集上清液，采用试剂盒检测碱性磷酸酶的活性，结果如图3所示
由图3可以看出实施例1中的细胞经成骨诱导培养后碱性磷酸酶的活性最好。对比例1至5调整了添加剂的组成，培养得到的脐带间充质干细胞在成骨活性上不及实施例1，说明本发明的培养基培养得到的脐带间充质干细胞保持较好的分化活性。
综上，本发明提供一种用于脐带间充质干细胞培养的添加剂，该添加剂中的山药肽、红大戟素等成分有效提高脐带间充质干细胞的增殖活性，促进脐带间充质干细胞的分裂增殖，进而提高脐带间充干细胞的体外扩增效率，细胞保持较好的分化活性，并且本发明的添加剂不含动物源性成分，避免了动物源性成分可能带来的风险，临床应用安全性更高。
上述实施方式仅为本发明的优选实施方式，不能以此来限定本发明保护的范围，本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。
Claims (7)
1.一种用于脐带间充质干细胞培养的添加剂，其特征在于，包括以下成分：L-谷氨酰胺、胰岛素、维生素C、山药肽、红大戟素、丙酮酸钠、表皮生长因子。
2.根据权利要求1所述用于脐带间充质干细胞培养的添加剂，其特征在于，各组分添加浓度为：L-谷氨酰胺5-10ng/mL、维生素C15-20μg/mL、山药肽8-12μg/mL、红大戟素1-5μg/mL、丙酮酸钠22-28μg/mL、表皮生长因子30-40ng/mL。
3.根据权利要求1所述用于脐带间充质干细胞培养的添加剂，其特征在于，各组分添加浓度为：L-谷氨酰胺8ng/mL、维生素C17μg/mL、山药肽10μg/mL、红大戟素3μg/mL、丙酮酸钠25μg/mL、表皮生长因子35ng/mL。
4.一种用于脐带间充质干细胞培养的培养基，其特征在于，包括基础培养基和添加在基础培养基中的添加剂，所述添加剂的组成如权利要求1至3任一项所述。
5.根据权利要求4所述用于脐带间充质干细胞培养的培养基，其特征在于，所述基础培养基为α-MEM培养基。
6.如权利要求5所述脐带间充质干细胞培养基的制备方法，其特征在于，包括以下过程：取基础培养基加入L-谷氨酰胺、胰岛素、维生素C、山药肽、红大戟素、丙酮酸钠、表皮生长因子，混合搅拌均匀，过滤除菌后保存在4-6℃，备用。
7.根据权利要求5所述脐带间充质干细胞培养基的制备方法，其特征在于，采用滤膜过滤除菌，滤膜的孔径为0.22μm。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210163445.6A CN114480272A (zh) | 2022-02-22 | 2022-02-22 | 一种用于脐带间充质干细胞培养的添加剂、培养基及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210163445.6A CN114480272A (zh) | 2022-02-22 | 2022-02-22 | 一种用于脐带间充质干细胞培养的添加剂、培养基及其制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114480272A true CN114480272A (zh) | 2022-05-13 |
Family
ID=81481440
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210163445.6A Pending CN114480272A (zh) | 2022-02-22 | 2022-02-22 | 一种用于脐带间充质干细胞培养的添加剂、培养基及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114480272A (zh) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103555665A (zh) * | 2013-08-12 | 2014-02-05 | 北京东方华辉生物医药科技有限公司 | 一种用于培养间充质干细胞的无血清培养基 |
| CN107043747A (zh) * | 2017-06-23 | 2017-08-15 | 王晓柯 | 一种人脐带间充质干细胞无血清培养基 |
| CN109370985A (zh) * | 2018-11-12 | 2019-02-22 | 王晓柯 | 一种人脐带间充质干细胞大规模培养无血清培养基 |
| CN109402051A (zh) * | 2018-12-28 | 2019-03-01 | 青岛麦迪赛斯生物科技有限公司 | 一种人脐带间充质干细胞无血清培养基 |
-
2022
- 2022-02-22 CN CN202210163445.6A patent/CN114480272A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103555665A (zh) * | 2013-08-12 | 2014-02-05 | 北京东方华辉生物医药科技有限公司 | 一种用于培养间充质干细胞的无血清培养基 |
| CN107043747A (zh) * | 2017-06-23 | 2017-08-15 | 王晓柯 | 一种人脐带间充质干细胞无血清培养基 |
| CN109370985A (zh) * | 2018-11-12 | 2019-02-22 | 王晓柯 | 一种人脐带间充质干细胞大规模培养无血清培养基 |
| CN109402051A (zh) * | 2018-12-28 | 2019-03-01 | 青岛麦迪赛斯生物科技有限公司 | 一种人脐带间充质干细胞无血清培养基 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 《癌变•畸变•突变》: "何首乌、虎杖、大黄水提物中游离蒽醌含量的测定及对人正常肝细胞的毒性作用", 《癌变•畸变•突变》, 31 December 2020 (2020-12-31) * |
| 兰洁 等: "何首乌蒽醌类单体成分致HK-2细胞毒性研究", 《中国药物警戒》, 31 December 2023 (2023-12-31) * |
| 胡瑜: "红大戟醋法炮制减毒存效机制研究", 《中国优秀硕士学位论文全文库•医药卫生科技》, 1 April 2023 (2023-04-01) * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20110217385A1 (en) | Method for extracting mesenchymal stem cell from human or animal embryo and for extracting the secretion product thereof | |
| CN112080463B (zh) | 一种促进骨髓间充质干细胞成骨分化的方法 | |
| CN113564111B (zh) | 一种低氧培养脐带来源间充质干细胞的方法 | |
| CN107653225A (zh) | 一种用于扩增人间充质干细胞的培养基及其扩增方法 | |
| CN111621476B (zh) | 一种用于间充质干细胞的无血清培养基及其制备方法 | |
| CN104726406A (zh) | 一种诱导牙髓间充质干细胞分化为神经细胞的方法 | |
| CN108220230B (zh) | 一种人脂肪干细胞的分离与培养方法 | |
| CN113736729B (zh) | 组合物及含有其的干细胞无血清培养基及干细胞培养方法 | |
| CN110564675A (zh) | 一种毛囊干细胞的分离提取方法 | |
| CN103087977A (zh) | 一种体外高效扩增动物细胞的培养液及其用途 | |
| CN111235101B (zh) | 一种人脐带间充质干细胞培养基及人脐带间充质干细胞的培养方法 | |
| CN114540298A (zh) | 一种干细胞无血清培养基及其制备方法 | |
| CN113151165B (zh) | 一种人脐带间充质干细胞扩增用培养基及培养方法 | |
| CN111826348A (zh) | 一种人诱导性多能干细胞来源的间充质干细胞体外高效制备方法和应用 | |
| CN110699317A (zh) | 一种人脐带间充质干细胞无血清培养基及其制备方法与应用 | |
| CN111662866B (zh) | 一种人羊膜间充质干细胞培养基 | |
| CN111484973B (zh) | 一种脂肪干细胞的纯化方法 | |
| WO2003050273A1 (fr) | Milieu de culture pour des cellules humaines et methode de culture | |
| CN112553154A (zh) | 一种用于维持脂肪间充质干细胞功能的改良增殖培养基 | |
| CN112680408A (zh) | 一种诱导人间充质干细胞成软骨分化培养基及其制备方法 | |
| CN107384862B (zh) | MSCs来源的雪旺细胞的制备方法及试剂盒 | |
| CN114480272A (zh) | 一种用于脐带间充质干细胞培养的添加剂、培养基及其制备方法 | |
| CN113201491B (zh) | 一种促进干细胞体外增殖和分化的培养方法 | |
| CN113980897A (zh) | 一种牙髓干细胞培养基及培养方法 | |
| CN114763524A (zh) | 一种细胞的传代培养方法与应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| TA01 | Transfer of patent application right | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20230927 Address after: Building 804, Building 10, Biopharmaceutical Innovation Industrial Park, No. 14 Jinhui Road, Jinsha Community, Kengzi Street, Pingshan District, Shenzhen City, Guangdong Province, 518000 Applicant after: Shenzhen Wanjirui Biopharmaceutical Technology Co.,Ltd. Address before: 450000 College of life sciences, Henan Agricultural University, No. 15, Longzihu University Park, Zhengdong New Area, Zhengzhou City, Henan Province Applicant before: Zhang Guofeng |