CN114478812A - 一种毛木耳多糖的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种毛木耳多糖的提取方法，包括以下步骤：步骤1、粉碎；步骤2、超声波处理；步骤3、酶解：调节毛木耳粉末混液的pH，然后加入复合酶进行酶解处理，得到酶解后的混液；步骤4、灭酶：将酶解后的混液进行灭酶处理，得到灭酶混合物；步骤5、乙醇处理：向灭酶混合物中加入无水乙醇，放入冰箱中，静置过夜，乙醇处理混合液；步骤6、第一次离心；步骤7、第二次离心；步骤8、冷冻干燥；步骤9、计算提取率。使用本发明的方法提取毛木耳多糖，提取率为11％‑15％。本发明使用纤维素酶和木瓜蛋白酶的酶解，进行木耳多糖的提取具有反应条件温和，提取率高，杂质易除，工艺简单的特点，并有利于对制得的多糖更进一步的加工。
Description
技术领域
本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及一种毛木耳多糖的提取方法。
背景技术
毛木耳(Auricularia polytricha)，也名黄背木耳、大木耳或粗木耳，为担子菌纲，木耳目，木耳科，木耳属中的毛木耳种。广泛分布于我国的河南、陕西、浙江、福建、四川、云南、广西、海南等地区。毛木耳性平味甘，归胃、大肠经，具有滋阴壮阳、清肺益气、补血活血、止血止痛和提高免疫力等功效，用于气虚血亏，四肢搐榻，肺虚咳嗽，咯血，吐血，蚓血，崩漏，高血压病和便秘等。
研究表明毛木耳多糖(Auricularia polytricha polysaccharide,APP)为毛木耳中的主要活性成分。具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化、抗凝血、抗菌、抗辐射、抗突变、降血糖、保肝和增强免疫等多种生物活性。毛木耳多糖具有多种保健功能，可以美白肌肤，抗电磁辐射，抗放射线作用较好，预防雀斑的形成，能对抗由环磷酰胺引起的白细胞降低，是美容美白抗辐射的不二之选。
随着科学技术的快速发展，人们生活水平在不断提高，对食品、保健品、化妆品的要求也越来越高，毛木耳多糖的添加，使得各类产品受到广大消费者的青睐。然而目前国内对毛木耳多糖的提取工艺，多是以酸浸法和碱浸法处理，容易使部分多糖发生水解，破坏多糖的成分和活性结构，减少多糖的提取率，不适用于大规模的提取应用。
发明内容
针对现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种新的毛木耳多糖的提取方法，通过改进工艺克服现有提取工艺的缺陷，以适合高效率、大规模的提取应用。
本发明为实现上述目的，提供如下的技术方案：
一种毛木耳多糖的提取方法，包括以下步骤：
步骤1、粉碎：将毛木耳产品干燥处理后，用高速粉碎机粉碎，得到毛木耳粉末；
步骤2、超声波处理：取毛木耳粉末与水混合，超声波处理，得到毛木耳粉末混液；
步骤3、酶解：调节毛木耳粉末混液的pH，然后加入复合酶进行酶解处理，得到酶解后的混液；
步骤4、灭酶：将酶解后的混液进行灭酶处理，得到灭酶混合物；
步骤5、乙醇处理：向灭酶混合物中加入无水乙醇，放入冰箱中，静置过夜，乙醇处理混合液；
步骤6、第一次离心：将乙醇处理混合液离心处理，得到第一沉淀和第一上清液；
步骤7、第二次离心：将第一上清液再次离心后，得到第二沉淀和第二上清液，将第一沉淀和第二沉淀合并，即为毛木耳粗多糖；
步骤8、冷冻干燥：用冷冻干燥机将得到的毛木耳粗多糖冻干，得到毛木耳多糖的粉末；
步骤9、计算提取率：利用硫酸-苯酚法测量木耳多糖的粉末中毛木耳多糖的含量，根据提取公式计算出毛木耳多糖的提取率。
优选地，所述步骤1中的干燥处理是在70℃下处理至少5h。
优选地，所述步骤1中，毛木耳粉末的粒径为100目。
优选地，所述步骤2中，毛木耳粉末与水的料液比为1:40。
优选地，所述步骤2中，超声波处理的条件为：超声功率为100-300W，超声温度为30-60℃，超声时间为10-60min。
优选地，所述步骤3中，酶解处理的条件为：pH调至5.5-6.0，温度40-50℃，时间1h。
优选地，所述步骤3中，复合酶为重量比为1:1的纤维素酶和木瓜蛋白酶，复合酶与底物的重量比为1:50。
优选地，所述步骤4中，灭酶处理的条件为：在沸水中加热15min。
优选地，所述步骤5中，无水乙醇的体积为灭酶混合物的三倍，冰箱的温度为4℃。
优选地，所述步骤6中，离心的转速为5000r/min，离心时间为15min。
优选地，所述步骤7中，再次离心的转速为5000r/min，离心时间为15min。
优选地，所述步骤9中，硫酸-苯酚法具体为：吸取0.1g/mL的多糖样液1.0mL，加入质量分数为6％的苯酚水溶液1.0mL、浓硫酸5.0mL，震荡混匀，沸水浴中加热15min后迅速冷却，利用紫外分光光度计在490nm处测吸光值，每个样品平行测定3次，根据葡萄糖的标准曲线计算出多糖的浓度，代入公式计算多糖的提取率。
优选地，所述步骤9中，提取公式为：
本发明的有益效果为：
1、本发明通过改进毛木耳多糖的提取工艺，采用酶解的方法，突破了现有以酸浸法和碱浸法处理时容易使部分多糖发生水解、破坏多糖的成分和活性结构，降低了多糖的提取率的问题；采用本发明复合酶解的方法，工艺紧凑，提取过程中多糖不发生水解，不会破坏多糖的成分和活性结构，提高了多糖的提取率，并且加工批量大、适合于规模化生产。
2、使用本发明的方法提取毛木耳多糖，提取率为11％-15％。使用纤维素酶和木瓜蛋白酶进行木耳多糖的提取具有反应条件温和，具备提取率高，杂质易除，工艺步骤简单的特点，并且有利于制得的毛木耳多糖进行更进一步的提纯和加工。
附图说明
下面结合附图及实施例对本发明作进一步说明，但附图中的实施例不构成对本发明的任何限制，对于本领域的普通技术人员，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据以下附图获得其它的附图。
图1为实施例1中超声波功率和超声波时间对木耳多糖提取率影响的等高线示意图；
图2为实施例1中超声波功率和超声波时间对木耳多糖提取率影响的响应面示意图；
图3为实施例2中超声波功率和超声波温度对木耳多糖提取率影响的等高线示意图；
图4为实施例2中超声波功率和超声波温度对木耳多糖提取率影响的响应面示意图；
图5为实施例3中超声波时间和超声波温度对木耳多糖提取率影响的等高线示意图；
图6为实施例3中超声波时间和超声波温度对木耳多糖提取率影响的响应面示意图。
具体实施方式
为了更清楚的说明本发明，对本发明的技术特征、目的和有益效果有更加清楚的理解，现对本发明的技术方案进行以下详细说明，但不能理解为对本发明的可实施范围的限定。
实施例中所用试剂如无特殊说明均可从市场常规购得。
下面结合以下实施例对本发明作进一步详细描述。
实施例1
一种毛木耳多糖的提取方法，实施步骤如下：
(1)粉碎：对毛木耳产品干燥5h(70℃)，用高速粉碎机对木耳进行粉碎，得到毛木耳粉末，粒径为100目。
(2)超声波处理：取毛木耳粉末溶解在水中(料液比为1:40)，进行超声波处理，其中处理条件为超声功率为100W，超声温度为30℃，超声时间为40min。
(3)酶解：将上一步得到的混合物的pH调至5.5，然后加入复合酶在50℃下进行酶解1h，其中复合酶为纤维素酶和木瓜蛋白酶，复合酶与底物的量为1:50(w/w)。
(4)灭酶：将上一步得到的混合物在沸水中加热15min灭酶，得到灭酶混合物。
(5)乙醇处理：将上一步的灭酶混合物加入约3倍体积的无水乙醇，放入温度为4℃的冰箱，静置过夜。
(6)第一次离心：将上一步得到的混合物离心15min(5000r/min)，得到第一沉淀和上清液。
(7)第二次离心：将上一步得到的上清液再次离心15min(5000r/min)后，将得到的沉淀与第一沉淀合并即为毛木耳粗多糖。
(8)冷冻干燥：用冷冻干燥机将得到的毛木耳粗多糖冻干，得到毛木耳多糖的粉末。
(9)提取率：利用硫酸-苯酚法测量多糖的含量为28.7μg/mL，根据提取公式计算出毛木耳多糖的提取率为：(28.7×100×40×10-6)×100％＝11.5％。
实施例2
一种毛木耳多糖的提取方法，实施步骤如下：
(1)粉碎：对毛木耳产品干燥5h(70℃)，用高速粉碎机对木耳进行粉碎，得到毛木耳粉末，粒径为100目。
(2)超声波处理：取毛木耳粉末溶解在水中(料液比为1:40)，进行超声波处理，其中处理条件为超声功率为150W，超声温度为40℃，超声时间为50min。
(3)酶解：将上一步得到的混合物的pH调至5.5，然后加入复合酶在50℃下进行酶解1h。其中复合酶为纤维素酶和木瓜蛋白酶，酶与底物的量为1:50(w/w)。
(4)灭酶：将上一步得到的混合物在沸水中加热15min灭酶，得到灭酶混合物。
(5)乙醇处理：将上一步的混合物加入约3倍体积的无水乙醇，放入温度为4℃的冰箱，静置过夜。
(6)第一次离心：将上一步得到的混合物离心15min(5000r/min)，得到沉淀和上清液，沉淀即为粗多糖。
(7)第二次离心：将上一步得到的上清液多次离心15min(5000r/min)后，将得到的沉淀物合并即为木耳粗多糖。
(8)冷冻干燥：用冷冻干燥机将得到的毛木耳粗多糖冻干，得到毛木耳多糖的粉末。
(9)提取率：利用硫酸-苯酚法测量多糖的含量为33.7μg/mL，根据提取公式计算出毛木耳多糖的提取率为：(33.7×100×40×10-6)×100％＝13.48％。
实施例3
一种毛木耳多糖的提取方法，实施步骤如下：
(1)粉碎：对毛木耳产品干燥5h(70℃)，用高速粉碎机对木耳进行粉碎，得到毛木耳粉末，粒径为100目。
(2)超声波处理：取毛木耳粉末溶解在水中(料液比为1:40)，进行超声波处理，其中处理条件为超声功率为200W，超声温度为50℃，超声时间为60min。
(3)酶解：将上一步得到的混合物的pH调至5.5，然后加入复合酶在50℃下进行酶解1h。其中复合酶为纤维素酶和木瓜蛋白酶，酶与底物的量为1:50(w/w)。
(4)灭酶：将上一步得到的混合物在沸水中加热15min灭酶，得到灭酶混合物。
(5)乙醇处理：将上一步的混合物加入约3倍体积的无水乙醇，放入温度为4℃的冰箱，静置过夜。
(6)第一次离心：将上一步得到的混合物离心15min(5000r/min)，得到沉淀和上清液，沉淀即为粗多糖。
(7)第二次离心：将上一步得到的上清液多次离心15min(5000r/min)后，将得到的沉淀物合并即为木耳粗多糖。
(8)冷冻干燥：用冷冻干燥机将得到的毛木耳粗多糖冻干，得到毛木耳多糖的粉末。
(9)提取率：利用硫酸-苯酚法测量多糖的含量为31.3μg/mL，根据提取公式计算出毛木耳多糖的提取率为：(31.3×100×40×10-6)×100％＝12.52％。
实施例4
一种毛木耳多糖的提取方法，实施步骤如下：
(1)粉碎：对毛木耳产品干燥5h(70℃)，用高速粉碎机对木耳进行粉碎，得到毛木耳粉末，粒径为100目。
(2)超声波处理：使用Design Expert软件对上述数据进行分析，确定超声功率为155W，超声温度为44℃，超声时间为53min(料液比为1:40)。
(3)-(8)的方法和上述实施例3一致。
(9)提取率：利用硫酸-苯酚法测量多糖的含量为35.7μg/mL，根据提取公式计算出毛木耳多糖的提取率为：(35.7×100×40×10-6)×100％＝14.28％。
发明人将实施例1的方法与常规木耳提取方法(热水法)相比，热水法的提取率不足5％，而且提取温度高，能耗大。此方法提取温度较温和，也不会破坏多糖的结构。
最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细地说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (10)
1.一种毛木耳多糖的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1、粉碎：将毛木耳产品干燥处理后，用高速粉碎机粉碎，得到毛木耳粉末；
步骤2、超声波处理：取毛木耳粉末与水混合，超声波处理，得到毛木耳粉末混液；
步骤3、酶解：调节毛木耳粉末混液的pH，然后加入复合酶进行酶解处理，得到酶解后的混液；
步骤4、灭酶：将酶解后的混液进行灭酶处理，得到灭酶混合物；
步骤5、乙醇处理：向灭酶混合物中加入无水乙醇，放入冰箱中，静置过夜，乙醇处理混合液；
步骤6、第一次离心：将乙醇处理混合液离心处理，得到第一沉淀和第一上清液；
步骤7、第二次离心：将第一上清液再次离心后，得到第二沉淀和第二上清液，将第一沉淀和第二沉淀合并，即为毛木耳粗多糖；
步骤8、冷冻干燥：用冷冻干燥机将得到的毛木耳粗多糖冻干，得到毛木耳多糖的粉末。
2.根据权利要求1所述的毛木耳多糖的提取方法，其特征在于，所述步骤1中的干燥处理是在70℃下处理至少5h；毛木耳粉末的粒径为100目。
3.根据权利要求1所述的毛木耳多糖的提取方法，其特征在于，所述步骤2中，毛木耳粉末与水的料液比为1:40；超声波处理的条件为：超声功率为100-300W，超声温度为30-60℃，超声时间为10-60min。
4.根据权利要求1所述的毛木耳多糖的提取方法，其特征在于，所述步骤3中，酶解处理的条件为：pH调至5.5-6.0，温度40-50℃，时间1h；复合酶为重量比为1:1的纤维素酶和木瓜蛋白酶，复合酶与底物的重量比为1:50。
5.根据权利要求1所述的毛木耳多糖的提取方法，其特征在于，所述步骤4中，灭酶处理的条件为：在沸水中加热15min。
6.根据权利要求1所述的毛木耳多糖的提取方法，其特征在于，所述步骤5中，无水乙醇的体积为灭酶混合物的三倍，冰箱的温度为4℃。
7.根据权利要求1所述的毛木耳多糖的提取方法，其特征在于，所述步骤6中，离心的转速为5000r/min，离心时间为15min。
8.根据权利要求1所述的毛木耳多糖的提取方法，其特征在于，所述步骤7中，再次离心的转速为5000r/min，离心时间为15min。
9.根据权利要求1所述的毛木耳多糖的提取方法，其特征在于，其还包括：
步骤9、计算提取率：利用硫酸-苯酚法测量木耳多糖的粉末中毛木耳多糖的含量，根据提取公式计算出毛木耳多糖的提取率。
10.根据权利要求9所述的毛木耳多糖的提取方法，其特征在于，所述步骤9中，硫酸-苯酚法具体为：吸取0.1g/mL的多糖样液1.0mL，加入质量分数为6％的苯酚水溶液1.0mL、浓硫酸5.0mL，震荡混匀，沸水浴中加热15min后迅速冷却，利用紫外分光光度计在490nm处测吸光值，每个样品平行测定3次，根据葡萄糖的标准曲线计算出多糖的浓度，代入公式计算多糖的提取率。
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Cited By (3)
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|---|---|---|---|---|
| CN115089605A (zh) * | 2022-05-30 | 2022-09-23 | 广州大学 | 一种毛木耳多糖纳米硒复合物的制备方法 |
| CN115501132A (zh) * | 2022-06-28 | 2022-12-23 | 广州大学 | 一种毛木耳多糖-锌复合物的制备方法 |
| CN116041559A (zh) * | 2022-09-28 | 2023-05-02 | 广州大学 | 一种增强抗氧化性的毛木耳多糖-铁复合物及其制备方法 |
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2022
- 2022-01-14 CN CN202210041857.2A patent/CN114478812A/zh active Pending
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 马昱阳等: ""超声波辅助酶法提取毛木耳多糖工艺条件优化"", 《食品研究与开发》 * |
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