CN114478716A

CN114478716A - 一种多肽组合及其在新型冠状病毒抗体检测中的应用

Info

Publication number: CN114478716A
Application number: CN202111629389.2A
Authority: CN
Inventors: 郭学敏; 张先言; 徐佩佩; 雷南凤; 孟小斌; 余志康; 吴和明; 何勇军
Original assignee: Meizhou Peoples Hospital
Current assignee: Meizhou Peoples Hospital
Priority date: 2021-12-28
Filing date: 2021-12-28
Publication date: 2022-05-13
Anticipated expiration: 2041-12-28
Also published as: CN114478716B

Abstract

本发明公开了一种多肽组合及其在新型冠状病毒抗体检测中的应用。所述多肽组合是由氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的多肽，与氨基酸序列如SEQ ID No.5所示的多肽和/或氨基酸序列如SEQ ID No.6所示的多肽组成。本发明还提供了所述多肽组合在制备新型冠状病毒抗体检测产品中的应用。本发明的多肽组合能有效捕捉SARS‑CoV‑2抗体，能降低因全长S蛋白、受体结合区(RBD)或S蛋白亚基的非特异性反应所致的假阳性率，提高SARS‑CoV‑2抗体检测的灵敏度和特异性。

Description

一种多肽组合及其在新型冠状病毒抗体检测中的应用

技术领域

本发明属于病毒抗体检测技术领域。具体地，涉及一种多肽组合及其在新型冠状病毒抗体检测中的应用。更具体地，涉及新型冠状病毒SARS-CoV-2S蛋白抗原优势表位多肽组合及其在SARS-CoV-2抗体检测中的应用。

背景技术

新型冠状病毒(novel Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2,SARS-CoV-2)首次发现于2019年，感染人类后可引起发热、干咳、乏力等非特异性症状，重症患者可进展为急性呼吸窘迫综合征、多器官功能衰竭，甚至死亡。截至2021年10月5日，WHO共报告了超过2.35亿例确诊及480万例死亡病例。

SARS-CoV-2属于β-冠状病毒，其基因组编码四种结构蛋白(刺突蛋白S、包膜蛋白E、膜蛋白M和核衣壳蛋白N)和十六种非结构蛋白(Nsp1-16)。S蛋白分为S1和S2两个亚基。S1的受体结合域(RBD)负责与宿主细胞表面受体ACE2结合，S2则介导病毒与宿主细胞膜融合。此外，RBD包含许多抗体识别优势抗原表位。

SARS-CoV-2检测的金标准是病毒培养，因耗时长、敏感性低、且要求在生物安全3级实验室进行，无法用于大规模筛查。目前临床上检测SARS-CoV-2的方法主要是PCR法，但该法容易发生交叉污染，对技术人员要求高，且受样本质量的影响。而血清学检测操作简单，可作为PCR法的补充手段和流行病学调查。

现有新冠抗体检测试剂盒的靶抗原分别有全长的S蛋白、受体结合区(RBD)或S蛋白亚基等抗原。SARA-CoV-2S蛋白与其他6种类型人致病性冠状病毒的S蛋白序列相似性分别为77.38％(SARS-CoV)、32.79％(MERS-CoV)、28.28％(HCoV-NL63)、30.35％(HCoV-229E)、32.81％(HCoV-OC43)、31.86％(HCoV-HKU1)。利用全长的S蛋白、RBD或S蛋白亚基作为靶抗原可能与既往感染其他类型人致病性冠状病毒存在交叉反应，出现假阳性，影响试剂盒特异性。因此，筛选出SARS-CoV-2S蛋白上高灵敏度和特异性的优势抗原表位并验证，对后续高灵敏度和特异性抗体检测试剂盒的制备具有现实意义。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种SARS-CoV-2S蛋白抗原优势表位多肽组合，能有效捕捉SARS-CoV-2抗体，能降低因全长S蛋白、RBD或S蛋白亚基的非特异性反应所致的假阳性率，提高SARS-CoV-2抗体检测的灵敏度和特异性。

本发明的另一个目的在于提供一种上述多肽组合在制备新型冠状病毒抗体检测产品中的应用。包括检测试剂、检测试剂盒等等。

为达到上述目的，本发明采用下述技术方案：

第一方面，本发明提供了新型冠状病毒S蛋白抗原表位多肽组合，是由氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的多肽，与氨基酸序列如SEQ ID No.5所示的多肽和/或氨基酸序列如SEQ ID No.6所示的多肽组成。

本发明针对SARS-CoV-2抗体检测中可能受其他亚型的冠状病毒影响从而造成检测结果的假阳性问题，通过免疫表位数据库(IEDB)筛选了一系列SARS-CoV-2S蛋白抗原优势表位多肽，并进行了最佳组合的筛选，以期提高SARS-CoV-2抗体检测的灵敏度和特异性。

本发明的多肽可以根据多肽的序列，使用常规技术方法获得。例如，在已知序列的情况下，通过化学合成的方法将氨基酸残基逐个连接而成。或者将多肽的核苷酸编码序列表达产生相应的多肽。

可选的，氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的多肽与氨基酸序列如SEQ ID No.5所示的多肽的质量比为(0.5-2):(0.5-2)。

可选的，氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的多肽与氨基酸序列如SEQ ID No.6所示的多肽的质量比为(0.5-2):(0.5-2)。

可选的，氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的多肽、氨基酸序列如SEQ ID No.5所示的多肽与氨基酸序列如SEQ ID No.6所示的多肽的质量比为(0.5-2):(0.5-2):(0.5-2)。

根据本发明的具体实施方式，氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的多肽、氨基酸序列如SEQ ID No.5所示的多肽与氨基酸序列如SEQ ID No.6所示的多肽的质量比为1:1:1。

第二方面，本发明还提供了上述任一多肽组合在制备新型冠状病毒抗体检测产品中的应用。

进一步的，检测产品可以是用于检测新型冠状病毒抗体的试剂，包括上述任一多肽组合以及检测可接受的助剂。

进一步的，检测产品可以是用于检测新型冠状病毒抗体的试剂盒，包括上述任一多肽组合以及检测可接受的助剂或载体。

检测新型冠状病毒抗体，包括新型冠状病毒感染产生的抗体，疫苗免疫产生的抗体，抗新型冠状病毒单克隆抗体等等。检测方法可以包括斑点印迹法、间接ELISA法、双抗夹心ELISA法、免疫侧向层析法、快速检测试纸条免疫膜层析法等。

本发明的有益效果如下：

本发明提供了SARS-CoV-2S蛋白抗原优势表位多肽组合，这些多肽组合物提高了SARS-CoV-2抗体检测的特异性，对COVID19患者及注射疫苗后血清抗体的检测性能良好。此外，化学合成的多肽具有纯度高，成本低，特异性好的特点，易于在基层推广。

附图说明

下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明。

图1示出实施例2中不同上样量S蛋白、BSA、BSA偶联多肽的斑点印迹化学发光检测结果图。

图2示出实施例3的注射疫苗健康志愿者血清验证中50ng S蛋白、BSA和不同BSA偶联多肽的反应性斑点印迹结果图，以其中9例注射疫苗健康志愿者血清结果图为代表进行描述；A为样本上样示意图；B-J分别为P1-P9注射疫苗健康志愿者血清孵育后化学发光结果图。

图3示出实施例4的注射疫苗健康志愿者血清验证中50ng S蛋白、BSA和不同BSA偶联多肽组合物斑点印迹检测结果图，以其中9例注射疫苗健康志愿者血清结果图为代表进行描述；A为样本上样示意图；B-J分别为P1-P9注射疫苗健康志愿者血清孵育后化学发光结果，且实施例4与实施例3中P1-P9血清样本为相同注射疫苗健康志愿者来源。

图4示出实施例5的未注射疫苗健康志愿者血清验证中50ng S蛋白、BSA和不同BSA偶联多肽的反应性斑点印迹结果图，以其中9例血清结果图为代表进行描述；A为样本上样示意图；B-J分别为N1-N9未注射疫苗健康志愿者血清孵育后化学发光结果图。

图5示出实施例5的未注射疫苗健康志愿者血清验证中50ng S蛋白、BSA和不同BSA偶联多肽组合物斑点印迹检测结果图，以其中9例血清结果图为代表进行描述；A为样本上样示意图；B-J分别为N1-N9未注射疫苗健康志愿者血清孵育后化学发光结果，且图5与图4中N1-N9血清样本来源于相同未注射疫苗健康志愿者。

具体实施方式

为了更清楚地说明本发明，下面结合优选实施例和附图对本发明做进一步的说明。附图中相似的部件以相同的附图标记进行表示。本领域技术人员应当理解，下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本发明的保护范围。

实验过程中使用的材料：

SARS-CoV-2S蛋白购自北京义翘神州科技股份有限公司；BSA-IgG Free为Jackson产品、HRP偶联羊抗兔二抗购自CST公司、HRP偶联羊抗人IgG多抗购自北京博奥森生物技术有限公司；PVDF膜购自Milipore公司；收集20例注射疫苗健康志愿者血清和20例未注射疫苗健康志愿者血清用于BSA偶联多肽验证，本研究通过梅州市人民医院伦理委员会批准(NO.MR-44-21-014309)，且已获得志愿者知情同意。

实施例1多肽筛选及偶联BSA优势表位多肽的制备

本实施例通过免疫表位数据库(IEDB)筛选出6条针对SARS-CoV-2S蛋白的特异性抗原优势表位多肽，其氨基酸序列如序列表SEQ ID No.1-6所示，具体见表1。即209aa-226aa(SEQ ID No.1)、287aa-317aa(SEQ ID No.4)、553aa-570aa(SEQ ID No.2)、601aa-640aa(SEQ ID No.5)、769aa-786aa(SEQ ID No.3)、809aa-826aa(SEQ ID No.6)。

为确定这些多肽的反应原性及检测灵敏度，本发明采用斑点印迹法进行下面的实验，并将这6条多肽分别与BSA载体偶联，作为SARS-CoV-2抗体检测的抗原。不含有半胱氨酸的SARS-CoV-2S优势表位多肽(例如，多肽1，多肽2，多肽3，多肽6)在C端添加了半胱氨酸残基，用于提供巯基与BSA的氨基进行偶联反应。偶联BSA的SARS-CoV-2S优势表位多肽由生工生物工程(上海)股份有限公司制备，HPLC检测纯度为98％。

所述的SARS-CoV-2-S蛋白及抗原优势表位多肽的序列如表1所示：

表1：SARS-CoV2 S蛋白及多肽序列

实施例2BSA偶联多肽适宜上样量摸索

本实施例通过斑点印迹法摸索实施例1制备的BSA偶联多肽适宜上样量。6条多肽分别设置三个浓度梯度(10ng、20ng、50ng)上样，以SARS-CoV-2S蛋白为阳性对照，以BSA为阴性对照，将3个浓度梯度的上述蛋白或多肽以点样的方式固定于PVDF膜上作为抗原，待蛋白与BSA偶联多肽吸附干燥之后，使用10％脱脂奶粉，室温封闭1h；使用抗S蛋白全长兔多抗于4℃孵育过夜；用TBST洗涤3次，每次10min；经HRP偶联羊抗兔二抗室温孵育1h后，同前洗涤3次，经化学发光仪观察样本显色结果。

本实施例中BSA偶联多肽适宜上样量摸索结果如图1所示。以全长S蛋白为阳性对照，BSA为阴性对照，经商品化抗S蛋白全长兔多抗检测BSA偶联多肽适宜上样量为50ng；BSA-多肽1和BSA-多肽4与抗S蛋白全长兔多抗不具有反应性；而BSA-多肽2、BSA-多肽3、BSA-多肽5和BSA-多肽6均具有的反应性，其中BSA-多肽3、BSA-多肽5和BSA-多肽6反应性较强，但仍弱于S蛋白，其原因可能是BSA-多肽只有一个抗体结合表位，而S蛋白上若干个抗体结合表位。由此可知经商品化兔抗S蛋白全长兔多抗筛选出的多肽反应性存在差异，其中BSA-多肽3、BSA-多肽5和BSA-多肽6反应性较强。

实施例3注射疫苗健康志愿者血清验证不同BSA偶联多肽的反应原性

分别吸取50ng上样量SARS-CoV-2S蛋白、BSA以及6条BSA偶联多肽(S蛋白：BSA：BSA-多肽的摩尔比约为1:2:2)，点样至经甲醇活化后PVDF膜上；在蛋白与BSA偶联多肽吸附于PVDF膜及干燥之后，置于10％脱脂奶粉，室温封闭1h；使用10％脱脂奶粉分别将20例注射疫苗健康志愿者血清稀释5倍；封闭结束之后，分别用稀释5倍的疫苗免疫之后健康人血清4℃过夜孵育PVDF膜；过夜孵育之后，将PVDF膜用TBST缓冲液洗涤5次，每次10min；HRP偶联羊抗兔二抗(1:5000)室温孵育1h；再次用TBST洗涤PVDF膜3次后，通过化学发光仪观察样本显色情况。

斑点印迹结果如图2所示，以其中9例注射疫苗健康志愿者血清(P1-P9)结果图为代表进行描述。不同个体血清中产生的抗体与S蛋白的反应强度不同；不同的BSA偶联的多肽与不同的血清反应强度呈现出多样性，注射疫苗后血清与本申请中BSA偶联的多肽2、5、6中的一个或多个显示出较强斑点反应；与实施例2中使用商品化抗S蛋白兔多抗相比，S蛋白和BSA偶联多肽与注射疫苗后血清反应强度存在显著差异，在本实施例中可见BSA-多肽2反应性强，而BSA-多肽3没有见到有反应性，这与实施例2结果相反；在6条多肽中，BSA-多肽2具有更多的反应原性(9/9)，而BSA-多肽6的反应性更强(6/9)；此外，在不同血清样本孵育斑点印迹中，部分样本孵育的S蛋白斑点较强(图2中的B或H)；而部分样本孵育的BSA偶联多肽2、5、6中的一个或多个斑点比S蛋白强(图2中的C、F和I)；剩下一部分样本中S蛋白与BSA偶联多肽2、6中的一个或两个斑点强度相当(图4中的D、E、G和J)。综上，我们最终选定BSA-多肽2、BSA-多肽5和BSA-多肽6作为最佳组合筛选的目标。

实施例4注射疫苗健康志愿者血清验证不同BSA偶联多肽组合物增强效应

根据实施例3观察PVDF膜上临床样本斑点显色情况。BSA偶联多肽2、5、6中的一个或多个在不同临床样本中均有出现，其中BSA偶联多肽2出现的次数多且反应性强。以BSA偶联多肽2作为主要多肽组合成分，将BSA偶联多肽2与BSA偶联多肽5、6两两之间以相等质量混匀，制备BSA-多肽2+5、BSA-多肽2+6多肽组合物。此外，将BSA偶联多肽2、5、6多肽以相等质量混匀，制备BSA-多肽5+6和BSA-多肽2+5+6多肽组合物。

分别吸取50ng上样量SARS-CoV-2S蛋白、BSA、BSA-多肽2、BSA-多肽5、BSA-多肽2+5、BSA-多肽6、BSA-多肽2+6、BSA-多肽5+6和BSA-多肽2+5+6点样至经甲醇活化后PVDF膜上；待样本吸附于PVDF膜及干燥之后，置于10％脱脂奶粉，室温封闭1h；使用10％脱脂奶粉分别将20例注射疫苗健康志愿者血清稀释5倍，本实施例中使用注射疫苗健康志愿者血清与实施例3来源一致且样本号一一对应；封闭结束之后，分别用稀释5倍的疫苗免疫之后健康人血清4℃过夜孵育PVDF膜；过夜孵育之后，将PVDF膜用TBST缓冲液洗涤5次，每次10min；HRP偶联羊抗兔二抗(1:5000)室温孵育1h；再次用TBST洗涤PVDF膜3次后，通过化学发光仪观察样本显色情况。

斑点印记检测结果如图3所示，以P1-P9号等9例注射疫苗健康志愿者血清结果图为代表进行阐述。在图3中，BSA-多肽与血清抗体的结合强度不同，分别为BSA-多肽5(图3中的B)、BSA-多肽2和BSA-多肽5(图3中的C)、BSA-多肽2(图3中的D，F和I)、BSA-多肽2和BSA-多肽6(图3中的E和J)、BSA-多肽6(图3中的G和H)与各自孵育血清有较强结合力；BSA-多肽2出现斑点的样本条带中，相应的BSA-多肽2+5、BSA-多肽2+6、BSA-多肽2+5+6均出现可见斑点，证实BSA-多肽2与多数疫苗免疫之后健康人血清中抗体有较好的结合力(图3中的C-F，H-J)。而BSA-多肽2+5、BSA-多肽2+6、BSA-多肽2+5+6组合后可以提高灵敏性，其中对于BSA-多肽2+5和BSA-多肽2+6组合，BSA-多肽2+5+6组合物具有更高的检出率(9/9)；且在相同血清样本中，BSA-多肽2+5+6组合与S蛋白检出结果相符合；由此可知，BSA-多肽2+5+6是较优的多肽组合物。后续可通过调整BSA-多肽2+5+6中BSA-多肽2、BSA-多肽5和BSA-多肽6的比例，使得BSA-多肽2+5+6在检测血清SARS-CoV-2抗体中更加灵敏。

实施例5未注射疫苗健康志愿者血清验证不同BSA偶联多肽及组合物的特异性

分别吸取50ng上样量SARS-CoV-2S蛋白、BSA以及6条BSA偶联多肽，点样至经甲醇活化后PVDF膜上；待样本与BSA偶联多肽吸附于PVDF膜及干燥之后，置于10％脱脂奶粉，室温封闭1h；使用10％脱脂奶粉将20例未注射疫苗健康志愿者血清稀释5倍；封闭结束之后，分别用稀释5倍的未注射疫苗健康志愿者血清4℃过夜孵育PVDF膜；过夜孵育之后，将PVDF膜用TBST缓冲液洗涤5次，每次10min；HRP偶联羊抗兔二抗(1:5000)室温孵育1h；再次用TBST洗涤PVDF膜3次后，通过化学发光仪观察样本显色情况。

分别吸取SARS-CoV-2S蛋白、BSA、BSA-多肽2、BSA-多肽5、BSA-多肽2+5、BSA-多肽6、BSA-多肽2+6、BSA-多肽5+6和BSA-多肽2+5+6各50ng点样至活化后PVDF膜上；待样本吸附于PVDF膜及干燥之后，后续封闭、孵育一抗和二抗、洗涤的操作步骤同上。一抗孵育未注射疫苗健康志愿者血清与实施例5中上述来源一致且样本号一一对应。

化学发光结果如图4、5所示，以其中9例未注射疫苗健康志愿者血清(N1-N9)结果图为代表图进行描述。由图4、5可知，SARS-CoV-2S蛋白经未注射疫苗健康志愿者血清孵育之后均出现较弱的斑点，提示SARS-CoV-2S蛋白与未注射疫苗健康人血清中的某些物质存在非特异性结合。结合实施例3和4可知，BSA-多肽2、BSA-多肽5和BSA-多肽6及其多肽组合物特异性明显优于全长S蛋白。

显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定，对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动，这里无法对所有的实施方式予以穷举，凡是属于本发明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。

SEQUENCE LISTING

<110> 梅州市人民医院(梅州市医学科学院)

<120> 一种多肽组合及其在新型冠状病毒抗体检测中的应用

<130> JLP21I1677

<160> 7

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu

1 5 10 15

Pro Leu

<210> 2

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp

1 5 10 15

Ile Ala

<210> 3

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln

1 5 10 15

Val Lys

<210> 4

<211> 31

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

Asp Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr

1 5 10 15

Leu Lys Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn

20 25 30

<210> 5

<211> 40

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn

1 5 10 15

Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr

20 25 30

Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser

35 40

<210> 6

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn

1 5 10 15

Lys Val

<210> 7

<211> 1198

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

Val Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser

1 5 10 15

Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val

20 25 30

Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr

35 40 45

Trp Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe

50 55 60

Asp Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr

65 70 75 80

Glu Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp

85 90 95

Ser Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val

100 105 110

Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val

115 120 125

Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val

130 135 140

Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe

145 150 155 160

Leu Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu

165 170 175

Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His

180 185 190

Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu

195 200 205

Glu Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln

210 215 220

Thr Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser

225 230 235 240

Ser Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln

245 250 255

Pro Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp

260 265 270

Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu

275 280 285

Lys Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg

290 295 300

Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu

305 310 315 320

Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr

325 330 335

Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val

340 345 350

Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser

355 360 365

Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser

370 375 380

Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr

385 390 395 400

Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly

405 410 415

Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly

420 425 430

Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro

435 440 445

Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro

450 455 460

Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr

465 470 475 480

Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val

485 490 495

Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro

500 505 510

Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe

515 520 525

Asn Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe

530 535 540

Leu Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala

545 550 555 560

Val Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser

565 570 575

Phe Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln

580 585 590

Val Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala

595 600 605

Ile His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly

610 615 620

Ser Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His

625 630 635 640

Val Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys

645 650 655

Ala Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val

660 665 670

Ala Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn

675 680 685

Ser Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr

690 695 700

Ile Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser

705 710 715 720

Val Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn

725 730 735

Leu Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu

740 745 750

Thr Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala

755 760 765

Gln Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly

770 775 780

Phe Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg

785 790 795 800

Ser Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala

805 810 815

Gly Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg

820 825 830

Asp Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro

835 840 845

Leu Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala

850 855 860

Gly Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln

865 870 875 880

Ile Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val

885 890 895

Thr Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe

900 905 910

Asn Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser

915 920 925

Ala Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu

930 935 940

Asn Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser

945 950 955 960

Val Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val

965 970 975

Gln Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr

980 985 990

Val Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn

995 1000 1005

Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys

1010 1015 1020

Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro

1025 1030 1035

Gln Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val

1040 1045 1050

Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His

1055 1060 1065

Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn

1070 1075 1080

Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln

1085 1090 1095

Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val

1100 1105 1110

Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro

1115 1120 1125

Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn

1130 1135 1140

His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn

1145 1150 1155

Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu

1160 1165 1170

Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu

1175 1180 1185

Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro

1190 1195

Claims

1.一种新型冠状病毒S蛋白抗原表位多肽组合，其特征在于，是由氨基酸序列如SEQ IDNo.2所示的多肽，与氨基酸序列如SEQ ID No.5所示的多肽和/或氨基酸序列如SEQ IDNo.6所示的多肽组成。

2.根据权利要求1所述的多肽组合，其特征在于，氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的多肽与氨基酸序列如SEQ ID No.5所示的多肽的质量比为(0.5-2):(0.5-2)；

氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的多肽与氨基酸序列如SEQ ID No.6所示的多肽的质量比为(0.5-2):(0.5-2)；或，

氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的多肽、氨基酸序列如SEQ ID No.5所示的多肽与氨基酸序列如SEQ ID No.6所示的多肽的质量比为(0.5-2):(0.5-2):(0.5-2)。

3.根据权利要求2所述的多肽组合，其特征在于，氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的多肽、氨基酸序列如SEQ ID No.5所示的多肽与氨基酸序列如SEQ ID No.6所示的多肽的质量比为1:1:1。

4.权利要求1-3任一所述的多肽组合在制备新型冠状病毒抗体检测产品中的应用。

5.检测新型冠状病毒抗体的试剂，其特征在于，包括如权利要求1-3任一所述的多肽组合以及检测可接受的助剂。

6.检测新型冠状病毒抗体的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1-3任一所述的多肽组合以及检测可接受的助剂或载体。