CN113444154A - 一种多肽及其在新型冠状病毒检测、抗体或疫苗筛选中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种多肽，所述的多肽至少包括SARS‑CoV‑2病毒蛋白质S蛋白序列中5个连续氨基酸序列，并且所述的多肽包括SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列。本发明还提供了所述的多肽在2019新型冠状病毒(SARS‑CoV‑2)检测、抗体或疫苗药物筛选中的应用。

Description

一种多肽及其在新型冠状病毒检测、抗体或疫苗筛选中的 应用
技术领域
本发明属于生物医学技术领域，涉及一种多肽及其在2019新型冠状病毒(SARS-CoV-2)检测、抗体或疫苗药物筛选中的应用。
背景技术
2019年12月以来，全球各地发现多起病毒性肺炎病例，诊断结果均为病毒性肺炎。2020年2月11日，世界卫生组织正式将该新型冠状病毒命名为2019新型冠状病毒(SARS-CoV-2)，与SARS病毒相似度达82％。然而该新型病毒仍无有效治疗方法，且感染性强，播散范围广，隐匿时间长，有少数病毒感染病人无发病症状或者症状较轻，如果不及时控制将迅速传染接触的人群，从而可能诱发二次甚至三次传播。另外，如果没有有效的疫苗开发出来，新型肺炎病毒则有可能会伴随人类长期存在。
目前对于SARS-CoV-2临床最主要的检测手段是核酸检测，其灵敏度和特异性都非常高。但是也发现有一些具有临床症状的病人呈核酸阴性，原因可能是RNA不稳定容易在样本处理过程中降解，并且人体免疫系统会清除一部分病毒核酸。另外，核酸检测无法反映出患者对于病毒感染的免疫应答反应及其在病程严重程度和治疗前后的变化情况。最后，核酸检测对于实验条件、仪器和检测人员水平都具有较高的要求，无法满足小型医院和社区对于新型冠状病毒感染疑似病例的筛查和诊断的巨大需求。
SARS-CoV-2病毒蛋白质组由多个蛋白组成，开放阅读框(ORF，open readingframe)Orf1ab蛋白，四个结构蛋白E蛋白(envelope)、M蛋白(membrane)、N蛋白(nucleocapsid)、S蛋白(Spike)、五个辅助蛋白Orf3a、Orf6、Orf7a、Orf8、Orf10。Orf1ab参与病毒RNA复制和转录。E和M蛋白对于冠状病毒的病毒装配很重要，N蛋白是病毒RNA的合成必需蛋白。S蛋白位于病毒颗粒的表面，可通过S蛋白亚基1中的S蛋白RNA结合域(RBD)与宿主细胞受体ACE2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)结合，引发病毒与宿主细胞膜融合，进而感染宿主细胞。SARS-CoV-2与SARS-CoV-1的S蛋白的RBD具有73.6％的同源性，但SARS-CoV-2RBD与ACE2受体结合亲和力更高，从而导致病毒的高传播效率。S蛋白在病毒感染宿主中承担了与宿主细胞结合及膜融合的重要作用，阻断S蛋白与ACE2的相互作用途径，是阻止病毒感染人体的重要手段，因此，S蛋白RBD与ACE2结合的多肽区域可成为宿主中和抗体重要靶标及疫苗设计的关键靶点。
发明内容
本发明的第一方面提供了一种多肽，所述的多肽至少包括SARS-CoV-2病毒蛋白质S蛋白序列中5个连续氨基酸序列，并且所述的多肽包括SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列(FRKSN)。
优选的，所述的SARS-CoV-2病毒蛋白质S蛋白序列为SEQ ID No.2所示。
优选的，所述的多肽包括SARS-CoV-2病毒蛋白质S蛋白序列中5-1273个连续氨基酸序列，更优选的，所述的多肽包括SARS-CoV-2病毒蛋白质S蛋白序列中5-100个连续氨基酸序列，更优选的，所述的多肽包括SARS-CoV-2病毒蛋白质S蛋白序列中5-75个连续氨基酸序列，更优选的，所述的多肽包括SARS-CoV-2病毒蛋白质S蛋白序列中5-15个连续氨基酸序列。
优选的，所述的多肽包括SEQ ID No.3中所示的氨基酸序列(YLYRLFRKSNLKPFE)。
优选的，所述的多肽为化学合成或原核表达得到。
本发明的第二方面提供了多肽在检测2019新型冠状病毒SARS-CoV-2中的应用，所述的多肽包括SARS-CoV-2病毒蛋白质S蛋白序列中5个连续氨基酸序列，并且所述的多肽包括SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列(FRKSN)。
优选的，所述的检测可以是人或动物的体内病毒检测，或者，所述的检测可以是环境(例如水、土壤等)中的病毒检测。
优选的，所述的检测是指病毒的定量或定型检测。
本发明的第三方面提供了多肽在制备检测2019新型冠状病毒SARS-CoV-2产品中的应用。
优选的，所述的产品为生物芯片、ELISA试剂盒、磁珠或纤维素膜，所述的生物芯片优选为多肽芯片。
本发明的第四方面提供了所述的多肽在筛选治疗和/或预防COVID-2019抗体或疫苗中的应用。
优选的，所述的抗体为中和抗体。
优选的，所述的疫苗为病毒载体疫苗、DNA疫苗、亚单位疫苗、全病毒灭活疫苗或减毒疫苗。
本发明的第五方面提供了一种抗体，所述的抗体与SARS-CoV-2病毒蛋白质S蛋白(SEQ ID No.2)的结合表位为SEQ ID No.2第451-465位氨基酸。
优选的，所述的抗体与SARS-CoV-2病毒蛋白质S蛋白(SEQ ID No.2)的结合表位为SEQ ID No.2第456-460位氨基酸。
本发明的第六方面提供了一种疫苗，所述的疫苗包括多肽或包括编码所述多肽的RNA或DNA序列，所述的多肽至少包括SARS-CoV-2病毒蛋白质S蛋白序列中5个连续氨基酸序列，并且所述的多肽包括SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列(FRKSN)。
优选的，所述的多肽包括SARS-CoV-2病毒蛋白质S蛋白序列中5-1273个连续氨基酸序列，更优选的，所述的多肽包括SARS-CoV-2病毒蛋白质S蛋白序列中5-100个连续氨基酸序列，更优选的，所述的多肽包括SARS-CoV-2病毒蛋白质S蛋白序列中5-75个连续氨基酸序列，更优选的，所述的多肽包括SARS-CoV-2病毒蛋白质S蛋白序列中5-15个连续氨基酸序列。
本发明的第七方面提供了一种用于SARS-CoV-2病毒检测的产品，包括载体和分布在载体上多肽，所述的多肽序列至少包括SARS-CoV-2病毒蛋白质S蛋白序列中5个连续氨基酸序列，并且所述的多肽包括SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列，所述的载体为芯片、ELISA酶标板、磁珠或纤维素膜。
优选的，所述的用于SARS-CoV-2病毒检测的产品为多肽芯片，包括基片和分布在基片上多肽，所述的多肽序列至少包括SARS-CoV-2病毒蛋白质S蛋白序列中5个连续氨基酸序列，并且所述的多肽包括SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列(FRKSN)。
优选的，所述的多肽包括SARS-CoV-2病毒蛋白质S蛋白序列中5-1273个连续氨基酸序列，更优选的，所述的多肽包括SARS-CoV-2病毒蛋白质S蛋白序列中5-100个连续氨基酸序列，更优选的，所述的多肽包括SARS-CoV-2病毒蛋白质S蛋白序列中5-75个连续氨基酸序列，更优选的，所述的多肽包括SARS-CoV-2病毒蛋白质S蛋白序列中5-15个连续氨基酸序列。
优选的，所述的多肽包括SEQ ID No.3中所示的氨基酸序列(YLYRLFRKSNLKPFE)。
优选的，所述的基片包括但不限于玻璃、硅片、陶瓷、云母、金属、塑料、高聚物膜等，优选为玻璃、硅片和陶瓷。
优选的，本发明所述的基片为三维D修饰的载玻片。
优选的，本发明所述的基片上还包括阳性对照和/或阴性对照。
本领域技术人员可以理解，本发明所述的多肽芯片可以采用常规的多肽芯片制备方法。在本发明的一个实施方式中，本发明所述的多肽芯片的制备方法包括：合成多肽，取三维D修饰的载玻片作为基片，通过点样仪将所合成多肽和/或阳性对照点制在载玻片表面。
本发明的第八方面还提供了一种2019新型冠状病毒SARS-CoV-2的检测方法，所述的检测方法包括：
将待测样本与本发明所述的用于SARS-CoV-2病毒检测的产品接触，采用荧光、化学发光、表面等离子共振方法检测。
优选的，本发明所述的一种2019新型冠状病毒SARS-CoV-2的检测方法，包括
将多肽芯片表面封闭；将待测样本加入本发明所述的多肽芯片，孵育；洗涤；加入二抗-荧光染料；再次洗涤；用芯片扫描仪进行扫描。
优选的，所述的芯片表面封闭步骤包括：向芯片加入400μl/well 5％牛奶室温封闭0.5-2h。更优选的，所述的牛奶为0.5g脱脂奶粉加入到10ml PBST(磷酸盐吐温缓冲液)。更优选的，封闭时间为1h。
优选的，所述的待测样本为血清，所述的待测样本为4μl待测血清加入至400μl5％牛奶混匀。更优选的，所述的牛奶为0.5g脱脂奶粉加入到10ml PBST(磷酸盐吐温缓冲液)。
优选的，将待测样本加入芯片后室温孵育2h。
优选的，所述的洗涤为0.05％PBST洗涤1-4次，每次5-15min；然后ddH2O清洗1-4次，每次1-5min。更优选的，所述的洗涤为0.05％PBST洗涤3次，每次10min，然后ddH2O清洗3次，每次2min。
优选的，所述的二抗-荧光染料中二抗为IgM、IgG或IgA抗体，更优选的，所述的二抗为goat-anti-hIgG、goat-anti-hIgA或donkey-anti-hIgG。
优选的，所述的二抗-荧光染料中荧光染料为Cy3、染料532或染料647。
优选的，所述的再次洗涤包括0.05％PBST洗涤1-4次，每次1-10min；更优选的，所述的再次洗涤包括0.05％PBST洗涤3次，每次5min。
本发明发明人已经申请的专利CN202010215184.9(申请日：2020-03-24)记载了从NCBI数据中提取SARS-CoV-2所有编码蛋白序列，设计和制备SARS-CoV-2病毒蛋白质组多肽芯片，实现对新型肺炎病毒感染患者血液中所有SARS-CoV-2病毒抗体的全景式扫描，其全部发明内容均可作为本发明的内容。
在上述专利的基础上，发明人继续根据2019新型冠状病毒SARS-CoV-2的S蛋白上的第431-476位氨基酸序列，设计出对应的多肽并通过对SARS-CoV-2病毒患者血清的检测，最终确定了S蛋白RBD结构域的第456-460位氨基酸为抗原表位，可用于SARS-CoV-2病毒抗体或疫苗的筛选和研发。
附图说明
图1：SARS-CoV-2病毒的RBD结构域对应的多肽检测SARS-CoV-2病毒患者血清，其中，横坐标为第1-10个病人血清，每个病人由左至右的7条多肽序列为SEQ ID No.4、SEQ IDNo.5、SEQ ID No.3、SEQ ID No.6、SEQ ID No.7、SEQ ID No.8、SEQ ID No.9。
图2：抗原表位与ACE2结合示意图，其中上方为S-RBD，下方为ACE2，箭头位置为抗原结合表位。
图3：抗SARS-CoV-2潜在中和抗体的抗原结合表位。
具体实施方式
实施例1多肽的合成
表1根据SARS-CoV-2的S蛋白上的第431-476位氨基酸设计的多肽序列
SEQ ID No. S蛋白上多肽区域 多肽序列
4 aa431-445 GCVIAWNSNNLDSKV
5 aa441-455 LDSKVGGNYNYLYRL
3 aa451-465 YLYRLFRKSNLKPFE
6 aa461-475 LKPFERDISTEIYQA
7 aa471-485 EIYQAGSTPCNGVEG
8 aa481-495 NGVEGFNCYFPLQSY
9 aa491-505 PLQSYGFQPTNGVGY
从序列C端到N端，合成步骤如下：
1)称取0.3g树脂放入玻璃反应器中，加入DCM(二氯甲烷)溶胀30分钟；
2)抽掉DCM，加入氨基酸序列中第一个氨基酸0.6g，加入0.6g DIEA(二异丙基乙胺)、DMF(二甲基甲酰胺)、DCM，氮气鼓泡反应60分钟，抽掉反应液，加入DMF、MEOH洗涤三次；
3)反应器中加入氨基酸序列中第二个氨基酸0.6g，加入HBTH(1-羟基-苯并三氯唑四甲基六氟磷酸盐)及DIEA，氮气鼓泡反应30分钟，洗掉液体，茚三酮检测，然后用吡啶和乙酸酐封端。最后洗净，加入适量脱帽液去除Fmoc(9-芴甲氧羰基)保护基，洗净，茚三酮检测；
4)依步骤3)，依次加入表1中的氨基酸；
5)树脂氮气吹干后，反应柱中取下。移至10mL离心管，加入6mL切割液(95％TFA，2％乙二硫醇，2％三异丙基硅烷，1％水)，震荡，滤掉树脂；
6)滤液中加入大量乙醚，析出粗产物，然后离心，清洗后即得粗产物；
7)多肽纯化，高效液相色谱将粗品提纯至90％；
8)多肽冻干，纯化后液体放入冻干机进行浓缩，冻干成白色粉末。
实施例2多肽芯片的制备
选择三维D修饰修饰的载玻片作为多肽芯片的基片；
通过微阵列点样仪将所有实施例1中合成的多肽片段和阳性对照点制在玻片表面。
实施例3多肽芯片检测SARS-CoV-2蛋白抗体的有效性测试
1)封闭：加入400ul/well 5％牛奶(0.5g奶粉+10ml PBST)室温封闭10min；
2)样品准备：取10名SARS-CoV-2病毒感染者血清4ul+400ul 5％milk混匀；
3)加样：将稀释的血清样本加入到实施例2制备得到的芯片，400ul/well，室温孵育30mim；
4)洗涤：0.05％PBST洗涤3次，每次5min；
5)加荧光染料：将Donkey-anti-hIgG-532，加入到反应孔中，室温避光孵育20min；
6)避光洗涤：0.05％PBST洗涤2次，每次5min；然后ddH2O清洗2次，每次2min；
7)芯片检测:芯片晾干后，用芯片扫描仪进行检测。
结果见附图1所示，由结果可知，S蛋白RBD结构域的抗原表位为第456-460位，即FRKSN。通过图2的蛋白结构计算机模拟图可以看出该抗原表位与ACEA2结合位置。同时，也可以如图3所示对中和抗体进行筛选。
本说明书上文中结合具体实施例对本发明进行了阐释，但应理解，这些描述和阐释只是为了更好地理解本发明，而不构成对本发明的任何限定。本领域技术人员在阅读了本申请说明书之后可对本发明的具体实施方式进行必要的改动而不脱离本发明的精神和范围。本发明的保护范围由所附的权利要求书限定，并且涵盖了权利要求的等同变换。
序列表
<110> 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院
<120> 一种多肽及其在新型冠状病毒检测、抗体或疫苗筛选中的应用
<130> 1
<160> 9
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Phe Arg Lys Ser Asn
1 5
<210> 2
<211> 1273
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val
1 5 10 15
Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe
20 25 30
Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu
35 40 45
His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp
50 55 60
Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp
65 70 75 80
Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu
85 90 95
Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser
100 105 110
Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile
115 120 125
Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr
130 135 140
Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr
145 150 155 160
Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu
165 170 175
Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe
180 185 190
Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr
195 200 205
Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu
210 215 220
Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr
225 230 235 240
Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser
245 250 255
Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro
260 265 270
Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala
275 280 285
Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys
290 295 300
Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val
305 310 315 320
Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys
325 330 335
Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala
340 345 350
Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu
355 360 365
Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro
370 375 380
Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe
385 390 395 400
Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly
405 410 415
Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys
420 425 430
Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn
435 440 445
Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe
450 455 460
Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys
465 470 475 480
Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly
485 490 495
Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val
500 505 510
Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys
515 520 525
Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn
530 535 540
Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu
545 550 555 560
Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val
565 570 575
Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe
580 585 590
Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val
595 600 605
Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile
610 615 620
His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser
625 630 635 640
Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His Val
645 650 655
Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala
660 665 670
Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala
675 680 685
Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser
690 695 700
Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile
705 710 715 720
Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val
725 730 735
Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu
740 745 750
Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr
755 760 765
Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln
770 775 780
Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe
785 790 795 800
Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser
805 810 815
Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly
820 825 830
Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp
835 840 845
Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu
850 855 860
Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly
865 870 875 880
Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile
885 890 895
Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr
900 905 910
Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn
915 920 925
Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala
930 935 940
Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn
945 950 955 960
Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val
965 970 975
Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln
980 985 990
Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val
995 1000 1005
Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn Leu
1010 1015 1020
Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys Arg Val
1025 1030 1035 1040
Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro Gln Ser Ala
1045 1050 1055
Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro Ala Gln Glu
1060 1065 1070
Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His Asp Gly Lys Ala His
1075 1080 1085
Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn Gly Thr His Trp Phe Val
1090 1095 1100
Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr
1105 1110 1115 1120
Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr
1125 1130 1135
Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu
1140 1145 1150
Asp Lys Tyr Phe Lys Asn His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp
1155 1160 1165
Ile Ser Gly Ile Asn Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp
1170 1175 1180
Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu
1185 1190 1195 1200
Gln Glu Leu Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile
1205 1210 1215
Trp Leu Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile
1220 1225 1230
Met Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Cys Cys
1235 1240 1245
Ser Cys Gly Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro Val
1250 1255 1260
Leu Lys Gly Val Lys Leu His Tyr Thr
1265 1270
<210> 3
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu
1 5 10 15
<210> 4
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val
1 5 10 15
<210> 5
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu
1 5 10 15
<210> 6
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala
1 5 10 15
<210> 7
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly
1 5 10 15
<210> 8
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr
1 5 10 15
<210> 9
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr
1 5 10 15

Claims (10)

1.一种多肽，所述的多肽至少包括SARS-CoV-2病毒蛋白质S蛋白序列中5个连续氨基酸序列，并且所述的多肽包括SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列。
2.权利要求1所述的一种多肽，所述的多肽包括SARS-CoV-2病毒蛋白质S蛋白序列中5-1273个连续氨基酸序列，更优选的，所述的多肽包括SARS-CoV-2病毒蛋白质S蛋白序列中5-100个连续氨基酸序列，更优选的，所述的多肽包括SARS-CoV-2病毒蛋白质S蛋白序列中5-75个连续氨基酸序列，更优选的，所述的多肽包括SARS-CoV-2病毒蛋白质S蛋白序列中5-15个连续氨基酸序列。
3.权利要求1所述的一种多肽，所述的多肽包括SEQ ID No.3中所示的氨基酸序列。
4.多肽在制备检测2019新型冠状病毒SARS-CoV-2产品中的应用，所述的多肽包括SARS-CoV-2病毒蛋白质S蛋白序列中5个连续氨基酸序列，并且所述的多肽包括SEQ IDNo.1中所示的氨基酸序列。
5.权利要求4所述的应用，所述的产品为生物芯片、ELISA试剂盒、磁珠或纤维素膜。
6.多肽在筛选用于治疗和/或预防COVID-2019的抗体或疫苗中的应用，所述的多肽包括SARS-CoV-2病毒蛋白质S蛋白序列中5个连续氨基酸序列，并且所述的多肽包括SEQ IDNo.1中所示的氨基酸序列。
7.一种抗体，所述的抗体与SARS-CoV-2病毒蛋白质S蛋白SEQ ID No.2的结合表位为SEQ ID No.2第451-465位氨基酸。
8.一种疫苗，所述的疫苗包括多肽或编码所述多肽的RNA或DNA，所述的多肽至少包括SARS-CoV-2病毒蛋白质S蛋白序列中5个连续氨基酸序列，并且所述的多肽包括SEQ IDNo.1中所示的氨基酸序列。
9.一种用于SARS-CoV-2病毒检测的产品，包括载体和分布在载体上多肽，所述的多肽序列至少包括SARS-CoV-2病毒蛋白质S蛋白序列中5个连续氨基酸序列，并且所述的多肽包括SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列，所述的载体为芯片、ELISA酶标板、磁珠或纤维素膜。
10.一种2019新型冠状病毒SARS-CoV-2的检测方法，所述的检测方法包括：
将待测样本与权利要求9所述的产品接触，采用荧光、化学发光、表面等离子共振方法检测。
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