CN114371246B - 一种猴耳环浸膏药效成分的含量测定方法 - Google Patents
一种猴耳环浸膏药效成分的含量测定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114371246B CN114371246B CN202210097101.XA CN202210097101A CN114371246B CN 114371246 B CN114371246 B CN 114371246B CN 202210097101 A CN202210097101 A CN 202210097101A CN 114371246 B CN114371246 B CN 114371246B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- extract
- mobile phase
- gallocatechin
- epigallocatechin
- gallate
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000000284 extract Substances 0.000 title claims abstract description 60
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 244000033373 Pithecellobium clypearia Species 0.000 claims abstract description 40
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 10
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 4
- XMOCLSLCDHWDHP-IUODEOHRSA-N epi-Gallocatechin Chemical compound C1([C@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@H]2O)=CC(O)=C(O)C(O)=C1 XMOCLSLCDHWDHP-IUODEOHRSA-N 0.000 claims description 81
- WMBWREPUVVBILR-UHFFFAOYSA-N GCG Natural products C=1C(O)=C(O)C(O)=CC=1C1OC2=CC(O)=CC(O)=C2CC1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 WMBWREPUVVBILR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 55
- XMOCLSLCDHWDHP-UHFFFAOYSA-N L-Epigallocatechin Natural products OC1CC2=C(O)C=C(O)C=C2OC1C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 XMOCLSLCDHWDHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 54
- DZYNKLUGCOSVKS-UHFFFAOYSA-N epigallocatechin Natural products OC1Cc2cc(O)cc(O)c2OC1c3cc(O)c(O)c(O)c3 DZYNKLUGCOSVKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 54
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- PFTAWBLQPZVEMU-ZFWWWQNUSA-N (+)-epicatechin Natural products C1([C@@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@@H]2O)=CC=C(O)C(O)=C1 PFTAWBLQPZVEMU-ZFWWWQNUSA-N 0.000 claims description 30
- PFTAWBLQPZVEMU-UKRRQHHQSA-N (-)-epicatechin Chemical compound C1([C@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@H]2O)=CC=C(O)C(O)=C1 PFTAWBLQPZVEMU-UKRRQHHQSA-N 0.000 claims description 30
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 235000012734 epicatechin Nutrition 0.000 claims description 30
- LPTRNLNOHUVQMS-UHFFFAOYSA-N epicatechin Natural products Cc1cc(O)cc2OC(C(O)Cc12)c1ccc(O)c(O)c1 LPTRNLNOHUVQMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- WMBWREPUVVBILR-WIYYLYMNSA-N (-)-Epigallocatechin-3-o-gallate Chemical compound O([C@@H]1CC2=C(O)C=C(C=C2O[C@@H]1C=1C=C(O)C(O)=C(O)C=1)O)C(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 WMBWREPUVVBILR-WIYYLYMNSA-N 0.000 claims description 29
- ADRVNXBAWSRFAJ-UHFFFAOYSA-N catechin Natural products OC1Cc2cc(O)cc(O)c2OC1c3ccc(O)c(O)c3 ADRVNXBAWSRFAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 29
- 235000005487 catechin Nutrition 0.000 claims description 29
- 229940030275 epigallocatechin gallate Drugs 0.000 claims description 29
- PFTAWBLQPZVEMU-DZGCQCFKSA-N (+)-catechin Chemical compound C1([C@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@@H]2O)=CC=C(O)C(O)=C1 PFTAWBLQPZVEMU-DZGCQCFKSA-N 0.000 claims description 28
- 229950001002 cianidanol Drugs 0.000 claims description 28
- XMOCLSLCDHWDHP-SWLSCSKDSA-N (+)-Epigallocatechin Natural products C1([C@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@@H]2O)=CC(O)=C(O)C(O)=C1 XMOCLSLCDHWDHP-SWLSCSKDSA-N 0.000 claims description 27
- OVSQVDMCBVZWGM-SJWGPRHPSA-N Hyperin Natural products O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C(C=2C=C(O)C(O)=CC=2)OC2=CC(O)=CC(O)=C2C1=O OVSQVDMCBVZWGM-SJWGPRHPSA-N 0.000 claims description 27
- FVQOMEDMFUMIMO-UHFFFAOYSA-N Hyperosid Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2OC1C1=CC=C(O)C(O)=C1 FVQOMEDMFUMIMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- OVSQVDMCBVZWGM-DTGCRPNFSA-N quercetin 3-O-beta-D-galactopyranoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C(C=2C=C(O)C(O)=CC=2)OC2=CC(O)=CC(O)=C2C1=O OVSQVDMCBVZWGM-DTGCRPNFSA-N 0.000 claims description 27
- BBFYUPYFXSSMNV-UHFFFAOYSA-N quercetin-7-o-galactoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC(O)=C2C(=O)C(O)=C(C=3C=C(O)C(O)=CC=3)OC2=C1 BBFYUPYFXSSMNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- WMBWREPUVVBILR-GHTZIAJQSA-N (+)-gallocatechin gallate Chemical compound O([C@H]1CC2=C(O)C=C(C=C2O[C@@H]1C=1C=C(O)C(O)=C(O)C=1)O)C(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 WMBWREPUVVBILR-GHTZIAJQSA-N 0.000 claims description 26
- LVJJFMLUMNSUFN-UHFFFAOYSA-N gallocatechin gallate Natural products C1=C(O)C=C2OC(C=3C=C(O)C(O)=CC=3)C(O)CC2=C1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 LVJJFMLUMNSUFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 21
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 claims description 16
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims description 14
- 241000596422 Pithecellobium Species 0.000 claims description 10
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 7
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 6
- 239000012088 reference solution Substances 0.000 claims description 6
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 6
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 3
- NQYPTLKGQJDGTI-FCVRJVSHSA-N hyperoside Natural products OC[C@H]1O[C@@H](OC2=C(Oc3cc(O)cc(O)c3[C@H]2O)c4ccc(O)c(O)c4)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O NQYPTLKGQJDGTI-FCVRJVSHSA-N 0.000 claims description 3
- 238000010268 HPLC based assay Methods 0.000 claims description 2
- BTXNYTINYBABQR-UHFFFAOYSA-N hypericin Chemical compound C12=C(O)C=C(O)C(C(C=3C(O)=CC(C)=C4C=33)=O)=C2C3=C2C3=C4C(C)=CC(O)=C3C(=O)C3=C(O)C=C(O)C1=C32 BTXNYTINYBABQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229940005608 hypericin Drugs 0.000 claims 1
- PHOKTTKFQUYZPI-UHFFFAOYSA-N hypericin Natural products Cc1cc(O)c2c3C(=O)C(=Cc4c(O)c5c(O)cc(O)c6c7C(=O)C(=Cc8c(C)c1c2c(c78)c(c34)c56)O)O PHOKTTKFQUYZPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- SSKVDVBQSWQEGJ-UHFFFAOYSA-N pseudohypericin Natural products C12=C(O)C=C(O)C(C(C=3C(O)=CC(O)=C4C=33)=O)=C2C3=C2C3=C4C(C)=CC(O)=C3C(=O)C3=C(O)C=C(O)C1=C32 SSKVDVBQSWQEGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 abstract description 7
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 abstract description 7
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 abstract description 4
- 239000000945 filler Substances 0.000 abstract description 3
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 238000013441 quality evaluation Methods 0.000 abstract description 3
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 abstract description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 25
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 24
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 18
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 16
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 13
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 10
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 7
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Chemical group OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 5
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical group COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 1,4-bis(2-ethylhexyl) sulfosuccinate Chemical compound CCCCC(CC)COC(=O)CC(S(O)(=O)=O)C(=O)OCC(CC)CCCC HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N Quercetin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2O)=O)C=1OC=2C1=CC=C(O)C(O)=C1 REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- LNTHITQWFMADLM-UHFFFAOYSA-N gallic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 LNTHITQWFMADLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004885 tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000001195 ultra high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 2
- 235000011468 Albizia julibrissin Nutrition 0.000 description 1
- 208000004429 Bacillary Dysentery Diseases 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 241000220485 Fabaceae Species 0.000 description 1
- 208000005577 Gastroenteritis Diseases 0.000 description 1
- 206010017915 Gastroenteritis shigella Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 206010067125 Liver injury Diseases 0.000 description 1
- 240000005852 Mimosa quadrivalvis Species 0.000 description 1
- IKMDFBPHZNJCSN-UHFFFAOYSA-N Myricetin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2O)=O)C=1OC=2C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 IKMDFBPHZNJCSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N Quercetagetin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C(O)=C(O)C=C2O1 ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 1
- HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N Rhynchosin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=CC(O)=C(O)C=C2O1 HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- 206010046306 Upper respiratory tract infection Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 208000012873 acute gastroenteritis Diseases 0.000 description 1
- 231100000439 acute liver injury Toxicity 0.000 description 1
- 206010001093 acute tonsillitis Diseases 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 229940090047 auto-injector Drugs 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 150000001765 catechin Chemical class 0.000 description 1
- 208000026106 cerebrovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000003255 drug test Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 1
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 1
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 229940074391 gallic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000004515 gallic acid Nutrition 0.000 description 1
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N kaempferol Natural products OC1=C(C(=O)c2cc(O)cc(O)c2O1)c3ccc(O)cc3 MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- PCOBUQBNVYZTBU-UHFFFAOYSA-N myricetin Natural products OC1=C(O)C(O)=CC(C=2OC3=CC(O)=C(O)C(O)=C3C(=O)C=2)=C1 PCOBUQBNVYZTBU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000007743 myricetin Nutrition 0.000 description 1
- 229940116852 myricetin Drugs 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 description 1
- 235000005875 quercetin Nutrition 0.000 description 1
- 229960001285 quercetin Drugs 0.000 description 1
- 239000013074 reference sample Substances 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 201000005113 shigellosis Diseases 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
- G01N30/74—Optical detectors
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开猴耳环浸膏中药效成分的含量测定方法，所述猴耳环制剂中7个化学成分的含量测定方法为：色谱柱为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的耐酸柱，柱温为常温；采用紫外检测器，检测波长为208nm。流动相为梯度洗脱。本发明采用高效液相色谱法，建立猴耳环浸膏中药效成分的含量测定方法，为猴耳环浸膏的质量控制及评价研究提供实验依据；所述测定方法准确，灵敏度高，重复性好，结果可靠，为猴耳环制剂的安全有效和质量可控提供依据。
Description
技术领域
本发明涉及药物分析技术领域，特别涉及一种猴耳环浸膏中7个化学成分的含量测定方法。
背景技术
猴耳环浸膏由豆科含羞草亚科猴耳环属植物猴耳环[Archidendron clypearia(Jack)I.C.Nielsen]的干燥叶制成。由猴耳环浸膏进而制成得猴耳环消炎片的功能主治为清热解毒、凉血消肿，止泻，用于上呼吸道感染，急性咽喉炎，急性扁桃体炎，急性肠胃炎，亦可用于细菌性痢疾。猴耳环消炎片临床使用已有多年，现阶段在《中国药典》中仅对猴耳环浸膏的没食子酸(不低于5.0％)、槲皮苷(不低于0.20％)含量进行控制，无法全面反映猴耳环浸膏的质量情况。国内外研究表明猴耳环浸膏中的儿茶素类成分是其抗肿瘤、抑菌的重要药效成分。据文献查阅可知，没食子儿茶素、表没食子儿茶素、儿茶素、表儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯、没食子儿茶素没食子酸酯、金丝桃苷均有较强的药理作用活性。其中，儿茶素类成分(没食子儿茶素、表没食子儿茶素、儿茶素、表儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯、没食子儿茶素没食子酸酯)是茶多酚类物质的主要药理活性成分，可抗癌、预防心脑血管疾病及保肝护肝、抗菌、抗病毒等。金丝桃苷可抗氧化应激和细胞凋亡、抗急性肝损伤、抗肿瘤、抗炎、抗癌，抗抑郁，抗高血糖等。
目前未见文献报道对猴耳环浸膏中这7个药效成分进行定量检测的方法。
发明内容
本发明的目的就是为了解决猴耳环药物中没有针对前述药物有效成分含量测定方法的缺点，提供一次性以没食子儿茶素、表没食子儿茶素、儿茶素、表儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯、没食子儿茶素没食子酸酯、金丝桃苷为测定指标，猴耳环浸膏中7个药效成分的含量测定方法，为猴耳环浸膏的质量控制及评价研究提供实验依据；为猴耳环浸膏的深度开发利用和相关制剂的安全有效和质量可控提供依据。
本发明公开了一种猴耳环浸膏中7个化学成分的含量测定方法，包括如下步骤：
(1)配制猴耳环浸膏供试品溶液，配制没食子儿茶素、表没食子儿茶素、儿茶素、表儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯、没食子儿茶素没食子酸酯、金丝桃苷混合对照品溶液；精密吸取5μL混合对照品溶液，注入高效液相色谱仪，得到混合对照品HPLC图谱；
(2)色谱条件为：
色谱柱为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的耐酸柱；柱温为常温；
采用紫外检测器，检测波长为208nm；
流动相流速为0.8～1.2mL·min-1，流动相A为乙腈，流动相B为pH为1.0～3.0的磷酸或甲酸水溶液，流动相A与流动相B采用梯度洗脱，梯度洗脱的要求如下，其中流动相A与流动相B之间的比例为体积比：0-10min时，流动相A由5％变成10％，流动相B由95变成90％；10-35min时，流动相A由10％变成20％，流动相B由90％变成80％；
(3)HPLC法测定：分别吸取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，测得峰面积值并计算含量，即可。
据此，我们收集不同药材采收产地、采收时间制成的浸膏，测定猴耳环浸膏中7个化学成分的含量。为猴耳环浸膏的质量控制及评价研究提供实验依据。
所述步骤(1)供试品溶液的配制方法为精密称取猴耳环浸膏0.20g，置25mL量瓶中，加75％甲醇至刻度，摇匀，滤过，收集续滤液，即得。
HPLC色谱条件优选具体为：
(1)色谱柱为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的耐酸柱，150mm×4.6mm，3.5μm；柱温为25℃；
(2)流动相为梯度洗脱(乙腈和含磷酸2％的水溶液)：0→10min，乙腈由5％升至10％，含磷酸0.2％的水溶液由95％降至90％；10→35min，乙腈由10％升至20％，含磷酸0.2％的水溶液由90％降至80％；流速1.0mL/min；
(3)采用紫外检测器，检测波长为208nm。
色谱仪可采用：Thermo SCIENTIFIC液相色谱仪(二元泵、自动进样器、柱温控制模块、UV检测器均为DIONEX Ultimate 3000)，SHIMADZU超快速高效液相色谱仪(二元泵LC-20AD-XR，自动进样器SIL-20AD-XR，柱温控制模块CTO-20A)，AB SCIEX高分辨串联质谱(Triple TOF 5600+)；甲酸为UHPLC/MS级，磷酸为HPLC级，乙腈为HPLC级，水为超纯水机制备水；进样体积为5μL
所述步骤(2)的混合对照品溶液的配制方法优选为为精密称取没食子儿茶素、表没食子儿茶素、儿茶素、表儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯、没食子儿茶素没食子酸酯、金丝桃苷对照品适量，加75％甲醇制成每1ml含没食子儿茶素25μg、表没食子儿茶素25μg、儿茶素10μg、表儿茶素10μg、表没食子儿茶素没食子酸酯5μg、没食子儿茶素没食子酸酯10μg、金丝桃苷10μg、的混合对照品溶液。
本发明相比现有技术具有如下优点：
(1)供试品制备方法简单，操作简便，重现性好，采用长度为150mm，粒径为3.5μm的高效色谱柱，缩短了分析时间，提高分析效率的同时节约了成本；
(2)猴耳环消炎片临床使用已有多年，本研究确证猴耳环浸膏的7个类黄酮成分，并进行含量测定，较全面反映猴耳环浸膏中的化学信息；
(3)该方法通过一次进样分析7个药效成分，提高分析效率的同时节约了成本。
附图说明
图1没食子儿茶素的紫外可见吸收光谱；
图2表没食子儿茶素的紫外可见吸收光谱图3儿茶素的紫外可见吸收光谱；
图4表儿茶素的紫外可见吸收光谱；
图5表没食子儿茶素没食子酸酯的紫外可见吸收光谱；
图6没食子儿茶素没食子酸酯的紫外可见吸收光谱；
图7金丝桃苷的紫外可见吸收光谱；
图8猴耳环浸膏与混合对照品溶液的叠加图；
图9混合对照品与75％甲醇溶剂的叠加图；
图10精密度试验的叠加图；
图11没食子儿茶素的线性回归图；
图12表没食子儿茶素的线性回归图；
图13儿茶素的线性回归图；
图14表儿茶素的线性回归图；
图15表没食子儿茶素没食子酸酯的线性回归图；
图16没食子儿茶素没食子酸酯的线性回归图；
图17金丝桃苷的线性回归图；
图18重复性试验的叠加图；
图19猴耳环浸膏溶液的稳定性试验的叠加图；
图20混合对照品溶液的稳定性试验的叠加图；
图21不同产地猴耳环浸膏中7个药效成分含量测定的叠加图；
图22猴耳环浸膏(08200302批)的药效成分含量数据雷达图；
图23猴耳环浸膏(08200303批)的药效成分含量数据雷达图；
图24猴耳环浸膏(08200304批)的药效成分含量数据雷达图；
图25猴耳环浸膏(08200305批)的药效成分含量数据雷达图；
图26猴耳环浸膏(08200404批)的药效成分含量数据雷达图；
图27猴耳环浸膏(08200405批)的药效成分含量数据雷达图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
实施例一
1、实验材料
1.1仪器
Thermo SCIENTIFIC液相色谱仪(二元泵、自动进样器、柱温控制模块、UV检测器均为DIONEX Ultimate 3000)；SHIMADZU超快速高效液相色谱仪(二元泵LC-20AD-XR，自动进样器SIL-20AD-XR，柱温控制模块CTO-20A)；AB SCIEX高分辨串联质谱(Triple TOF 5600+)；Millipore超纯水机；Eppendorf微量移液器；Sartorius电子天平(十万分之一，BP211D)。
1.2样品、试药
磷酸(P1508038，HPLC级85-90％，)；甲酸(0001408600，UHPLC/MS，Sigma)；乙腈、甲醇(HPLC级，Fisher Scientific)。
表没食子儿茶素(MUST-21042810，98.71％)、没食子儿茶素(MUST-21041804，98.57％)、表没食子儿茶素没食子酸酯(MUST-20090214，99.49％)、没食子儿茶素没食子酸酯(MUST-21042511，99.95％)、儿茶素(DST210225，98.37％)购自成都德思特生物科技有限公司；金丝桃苷(11521-201809，94.9％)购自中国食品药品检定研究院；表儿茶素(E107318-20mg，98.37％)购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司。
猴耳环浸膏(表1)为本申请人收集。
表1猴耳环浸膏供试品信息
2、含量测定方法构建
2.1检测波长的选择
由附图图1-图7可知7个化合物的最大吸收波长。故选择208nm没食子儿茶素、表没食子儿茶素、儿茶素、表儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯、没食子儿茶素没食子酸酯、金丝桃苷的检测波长进行含量测定。
2.2方法与结果
2.2.1混合对照品溶液的制备
分别精密称取对照品适量，加75％甲醇制成每毫升含金丝桃苷10μg、表没食子儿茶素25μg、没食子儿茶素25μg、儿茶素10μg、表儿茶素10μg、表没食子儿茶素没食子酸酯10μg、没食子儿茶素没食子酸酯10μg的混合对照品溶液。
2.2.2供试品溶液的制备
摇匀后，精密称取浸膏0.20g，置25mL量瓶中，用75％甲醇溶解，定容至刻度，摇匀，0.45μm滤膜过滤，收集续滤液即得。
2.2.3液相色谱条件
C18色谱柱(150mm×4.6mm，3.5μm；柱温和流速分别为25℃和1.0mL/min；梯度洗脱(乙腈和含磷酸2％的水溶液)：0→10min，乙腈由5％升至10％，含磷酸0.2％的水溶液由95％降至90％；10→35min，乙腈由10％升至20％，含磷酸0.2％的水溶液由90％降至80％。检测波长为208nm。
2.3含量测定方法学验证
2.3.1专属性实验
取猴耳环浸膏，按上述方法进行制样分析，另取75％甲醇溶液作为空白溶剂，结果表明没食子儿茶素、表没食子儿茶素、儿茶素、表儿茶素表没食子儿茶素没食子酸酯、没食子儿茶素没食子酸酯和金丝桃苷均不受溶剂等因素干扰，具有良好的专属性(见图8、9所示)。
2.3.2精密度试验
取混合对照品溶液，按上述“2.2.3液相色谱条件”连续进样6次分析，分别记录没食子儿茶素、表没食子儿茶素、儿茶素、表儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯、没食子儿茶素没食子酸酯和金丝桃苷的峰面积，计算其含量相对标准偏差(relative standarddeviation，RSD)在0.20～1.67％之间，结果如表2～8、图10所示，表明本方法精密度良好，符合中国药典2020版分析方法验证指导相关规定。
表2没食子儿茶素精密度试验结果
表3表没食子儿茶素精密度试验结果
表4儿茶素精密度试验结果
表5表儿茶素精密度试验结果
表6表没食子儿茶素没食子酸酯精密度试验结果
表7没食子儿茶素没食子酸酯精密度试验结果
表8金丝桃苷精密度试验结果
2.3.3线性关系及范围
取混合对照品溶液，用75％甲醇逐级稀释成系列浓度的混合对照品溶液按上述色谱条件进样测定，以对照品溶液的进样质量为横坐标，峰面积为纵坐标，结果如表9，图11～17所示，结果表明待测化合物在各自浓度范围内的线性关系良好。
表9 7个待测成分的线性及范围
| 待测物 | 线性方程 | R2 | 范围(mg/mL) |
| 没食子儿茶素 | y＝110.73x+0.0143 | 1.0000 | 0.012～0.060 |
| 表没食子儿茶素 | y＝83.451x+0.0096 | 1.0000 | 0.011～0.053 |
| 儿茶素 | y＝154.13x-0.0312 | 0.9999 | 0.021～0.103 |
| 表儿茶素 | y＝91.978x-0.0491 | 1.0000 | 0.023～0.113 |
| 表没食子儿茶素没食子酸酯 | y＝50.026x-0.0014 | 1.0000 | 0.025～0.127 |
| 没食子儿茶素没食子酸酯 | y＝74.664x-0.0062 | 0.9999 | 0.020～0.101 |
| 金丝桃苷 | y＝38.713x-0.0211 | 0.9999 | 0.021～0.107 |
2.3.4重复性试验
取猴耳环浸膏按上述“2.2.2供试品溶液的制备”方法，平行制备6份供试品溶液，按上述“2.2.3液相色谱条件”进行分析，结果表明没食子儿茶素、表没食子儿茶素、儿茶素、表儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯、没食子儿茶素没食子酸酯和金丝桃苷的峰面积，计算其含量RSD在0.06～1.08％之间，结果如表10～16，图18所示，表明本方法重复性良好，符合中国药典2020版分析方法验证指导相关规定。
表10没食子儿茶素重复性试验结果
表11表没食子儿茶素重复性试验结果
表12儿茶素重复性试验结果
表13表儿茶素重复性试验结果
表14表没食子儿茶素没食子酸酯重复性试验结果
表15没食子儿茶素没食子酸酯重复性试验结果
表16金丝桃苷重复性试验结果
2.3.5加样回收率
取猴耳环浸膏0.10g，精密加入没食子儿茶素(3.22mg/g)、表没食子儿茶素(3.54mg/g)、儿茶素(1.56mg/g)、表儿茶素(1.40mg/g)、表没食子儿茶素没食子酸酯(4.06mg/g)、没食子儿茶素没食子酸酯(1.27mg/g)和金丝桃苷(1.38mg/g)按上述“2.2.2供试品溶液的制备”方法制备供试品溶液，平行6份，再按上述“2.2.3液相色谱条件”进样分析，并计算回收率，如表17～23所示。
结果6份供试品中的没食子儿茶素的加样回收率范围为98.85～101.55％，表没食子儿茶素的加样回收率范围为98.78～102.45％，儿茶素加样回收率范围为101.68～102.93％，表儿茶素加样回收率范围为99.10～101.33％，表没食子儿茶素没食子酸酯的加样回收率范围为98.15～101.68％，没食子儿茶素没食子酸酯的加样回收率范围为98.77～100.24％，金丝桃苷的加样回收率范围为98.77～100.24％，且7个化合物的RSD值均小于1.71％，表明该方法回收率良好，符合中国药典2020版分析方法验证指导相关规定。
表17猴耳环浸膏的没食子儿茶素的含量测定加样回收率
表18猴耳环浸膏的表没食子儿茶素的含量测定加样回收率
表19猴耳环浸膏的儿茶素的含量测定加样回收率
表20猴耳环浸膏的表儿茶素的含量测定加样回收率
表21猴耳环浸膏的表没食子儿茶素没食子酸酯的含量测定加样回收率
表22猴耳环浸膏的没食子儿茶素没食子酸酯的含量测定加样回收率
表23猴耳环浸膏的金丝桃苷的含量测定加样回收率
2.3.6稳定性试验
取猴耳环浸膏、混合对照品溶液按上述方法制备，依次在0、2、4、8、24、32、48、72小时，按上述“2.2.3液相色谱条件”进样分析，分别测定没食子儿茶素、表没食子儿茶素、儿茶素、表儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯、杨梅苷、金丝桃苷的峰面积并计算其含量的RSD，结果如表24～30所示，图19、20所示。混合对照品溶液中7个化合物的RSD不低于1.87％。猴耳环浸膏供试品溶液中7个化合物的RSD不低于1.82％，表明该方法在72h的稳定性良好，符合中国药典2020版分析方法验证指导相关规定。
表24没食子儿茶素稳定性试验结果
表25表没食子儿茶素稳定性试验结果
表26儿茶素稳定性试验结果
表27表儿茶素稳定性试验结果
表28表没食子儿茶素没食子酸酯稳定性试验结果
表29没食子儿茶素没食子酸酯稳定性试验结果
表30金丝桃苷稳定性试验结果
2.3.7含量测定
取猴耳环浸膏(表1)，按上述“2.2.2供试品溶液的制备”方法制备，按“2.2.3液相色谱条件”进样分析，使用一点对照法(供试品溶液的浓度在对照品溶液浓度的±10％范围内)计算6批猴耳环浸膏中的没食子儿茶素、表没食子儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯、没食子儿茶素没食子酸酯、儿茶素、表儿茶素和金丝桃苷的含量，并计算两次测量结果的相对平均偏差(relative average deviation，RAD)，中国药典2020版分析方法验证指导相关规定，当含量范围在1～10mg/g时，其RAD应不大于6％。结果如表30～36，图21～27所示。
6批猴耳环浸膏中没食子儿茶素的含量范围为2.432～4.260mg/g，表没食子儿茶素的含量范围为2.077～3.540mg/g，儿茶素的含量范围为0.550～1.168mg/g，表儿茶素的含量范围为0.676～0.913mg/g，表没食子儿茶素没食子酸酯的含量范围为0.110～0.311mg/g，没食子儿茶素没食子酸酯的含量范围为0.449～1.174mg/g，金丝桃苷的含量范围为0.962～1.954mg/g。
表31 6批猴耳环浸膏的没食子儿茶素含量测定结果
表32 6批猴耳环浸膏的表没食子儿茶素含量测定结果
表33 6批猴耳环浸膏的儿茶素含量测定结果
表34 6批猴耳环浸膏的表儿茶素含量测定结果
表35 6批猴耳环浸膏的表没食子儿茶素没食子酸酯含量测定结果
表36 6批猴耳环浸膏的没食子儿茶素没食子酸酯含量测定结果
表37 76批猴耳环浸膏的金丝桃苷含量测定结果
Claims (2)
1.一种猴耳环浸膏药效成分的含量测定的方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)采用75％甲醇配制猴耳环浸膏供试品溶液，并采用75％甲醇配制没食子儿茶素、表没食子儿茶素、儿茶素、表儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯、没食子儿茶素没食子酸酯、金丝桃苷混合对照品溶液；
(2)色谱条件为：色谱柱为C18耐酸性色谱柱，150mm×4.6mm,3.5μm；柱温为常温；采用紫外检测器，检测波长为208nm；流动相流速为0.8～1.2mL·min-1，流动相A为乙腈，流动相B为含磷酸2％的水溶液，流动相A与流动相B采用梯度洗脱，梯度洗脱的要求如下，其中流动相A与流动相B之间的比例为体积比：0-10min时，流动相A由5％变成10％，流动相B由95%变成90％；10-35min时，流动相A由10％变成20％，流动相B由90％变成80％；
(3)HPLC法测定：分别吸取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，测得峰面积值并计算含量，即可。
2.如权利要求1所述的一种猴耳环浸膏药效成分的含量测定的方法，其特征在于：
所述步骤(1)的猴耳环浸膏供试品溶液的配制方法为：精密称取猴耳环浸膏，置25mL量瓶中，加75％甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，制成每1ml含猴耳环浸膏8mg的溶液；
所述步骤(1)的混合对照品溶液的配制方法为：精密称取没食子儿茶素、表没食子儿茶素、儿茶素、表儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯、没食子儿茶素没食子酸酯、金丝桃苷对照品，加75％甲醇制成每1ml含没食子儿茶素20μg、表没食子儿茶素20μg、儿茶素10μg、表儿茶素10μg、表没食子儿茶素没食子酸酯10μg、没食子儿茶素没食子酸酯10μg、金丝桃苷10μg的混合对照品溶液。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210097101.XA CN114371246B (zh) | 2022-01-26 | 2022-01-26 | 一种猴耳环浸膏药效成分的含量测定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210097101.XA CN114371246B (zh) | 2022-01-26 | 2022-01-26 | 一种猴耳环浸膏药效成分的含量测定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114371246A CN114371246A (zh) | 2022-04-19 |
| CN114371246B true CN114371246B (zh) | 2023-11-17 |
Family
ID=81145878
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210097101.XA Active CN114371246B (zh) | 2022-01-26 | 2022-01-26 | 一种猴耳环浸膏药效成分的含量测定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114371246B (zh) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2019077407A1 (en) * | 2017-10-19 | 2019-04-25 | Yale University | INHIBITION OF THE ANDROGENIC RECEPTOR USING MEDICINAL PLANT EXTRACTS AND COMPOSITIONS THEREOF |
-
2022
- 2022-01-26 CN CN202210097101.XA patent/CN114371246B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2019077407A1 (en) * | 2017-10-19 | 2019-04-25 | Yale University | INHIBITION OF THE ANDROGENIC RECEPTOR USING MEDICINAL PLANT EXTRACTS AND COMPOSITIONS THEREOF |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 22种黄酮、酚酸类化合物和9种中药清除AAPH活性考察;戴卉卿 等;中国中药杂志;第35卷(第17期);2296-2302 * |
| UPLC法测定猕猴桃果汁中的酚类物质含量;郑妍 等;果树学报;第35卷(第8期);1006-1015 * |
| 猴耳环研究进展;张志坚 等;中国药业;第19卷(第18期);82-84 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114371246A (zh) | 2022-04-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108279278B (zh) | 一种分离黄酮类成分的方法及其应用 | |
| CN101851261B (zh) | 杠板归药材及其制剂中有效成分的对照品制法及含量测定方法 | |
| CN110554108B (zh) | 一种野马追的质量检测方法 | |
| Chen et al. | Simultaneous determination of eleven bioactive compounds in Saururus chinensis from different harvesting seasons by HPLC-DAD | |
| CN110736799B (zh) | 一种中药小儿解感颗粒的质量检测方法 | |
| Chen et al. | Qualitative and quantitative analysis of active flavonoids in Flos Lonicerae by capillary zone electrophoresis coupled with solid‐phase extraction | |
| Kulić et al. | A detailed view on the proanthocyanidins in Ginkgo extract EGb 761 | |
| CN109142588B (zh) | 一种莲芝消炎胶囊hplc特征图谱及其构建方法和应用 | |
| CN110082456B (zh) | 一种测定中成药中巴马汀和小檗碱的方法 | |
| CN114371246B (zh) | 一种猴耳环浸膏药效成分的含量测定方法 | |
| CN102879516A (zh) | 补阳还五汤的鉴别和含量测定方法 | |
| CN102818862B (zh) | 中药余甘子全时段三波长融合同时测定三种成分含量的方法 | |
| CN109709222B (zh) | 一种感冒灵和复方感冒灵的成分检测方法 | |
| CN104655748B (zh) | 一种灯盏花颗粒指纹图谱及其建立方法与应用 | |
| CN115015428B (zh) | 一种黄酒中多酚类化合物的检测方法 | |
| CN1853674B (zh) | 杏丹注射剂的检测方法 | |
| CN112578066A (zh) | 一种紫菀样品的质量评价方法 | |
| CN115575541A (zh) | 一种银黄二陈合剂中多种活性成分同时测定方法 | |
| HAN et al. | Simultaneous determination of cephaeline and emetine in ipecac and its preparations using RP-HPLC | |
| CN101596229B (zh) | 猴耳环提取物及其制剂的质量控制方法 | |
| CN113636923A (zh) | 一种从草果中提取分离草果素的方法 | |
| CN109856262B (zh) | 一种可同时用于二丁制剂主要成分定性与定量分析的方法 | |
| CN101306126B (zh) | 一种复方南板蓝根片的检测方法 | |
| CN103969356A (zh) | 一种丹参药材的指纹图谱的鉴别方法 | |
| CN102692461B (zh) | 中药红花全时段三波长融合同时测定其中四种成分含量的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |