CN114349707B

CN114349707B - 一种n-取代脲类化合物及其制备方法和应用

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Publication number: CN114349707B
Application number: CN202210063247.2A
Authority: CN
Inventors: 王明华; 王玉成; 杜潇楠; 王菊仙; 张国宁; 朱梅; 牛伟萍; 石玉; 周慧宇; 胡尚玖; 郑承鸿
Original assignee: Institute of Medicinal Biotechnology of CAMS
Current assignee: Institute of Medicinal Biotechnology of CAMS
Priority date: 2022-01-20
Filing date: 2022-01-20
Publication date: 2024-01-09
Anticipated expiration: 2042-01-20
Also published as: CN114349707A

Abstract

本发明提供了一种N‑取代脲类化合物及其制备方法和应用，属于药物制备技术领域。本发明提供了一种N‑取代脲类化合物，该类化合物对革兰阳性菌，尤其是对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin‑resistant Staphylococcus aureus，MRSA)、屎肠球菌和粪肠球菌具有较好的抑制作用。本发明还提供了上述技术方案所述N‑取代脲类化合物的制备方法，本发明的制备方法简单，操作方便、收率高。

Description

一种N-取代脲类化合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及药物制备技术领域，尤其涉及一种N-取代脲类化合物及其制备方法和应用。

背景技术

随着抗生素的广泛使用，细菌耐药性变得日益严重。在临床上，革兰阳性菌感染率仅次于革兰阴性菌。其中，高致病革兰氏阳性细菌，如耐甲氧西林金葡菌(MRSA)、耐万古霉素屎肠球菌和粪肠球菌对公共卫生构成严重威胁，临床上对新型抗生素的需求变得十分迫切。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种N-取代脲类化合物及其制备方法和应用。本发明提供的N-取代脲类化合物对革兰阳性菌具有较好的抑制作用。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种N-取代脲类化合物，具有式I或II所示的结构：

式I和II中：

X₁和X₂独立地为-H、且所述X₁和X₂不同时为-H；

Y为

所述Z₁～Z₄独立地为-H、-CH₃、且所述Z₁～Z₄不同时为-H；

R独立地为H、

优选地，所述的N-取代脲类化合物具有式1～8所示的结构：

本发明还提供了上述技术方案所述的N-取代脲类化合物的制备方法，包括以下步骤：

将胺类化合物、醋酸铜、吡啶、甲基硼酸和有机溶剂混合进行第一取代反应，得到第一取代产物，所述胺类化合物具有式A或A’所示的结构，所述第一取代产物具有式B或B’所示的结构：

将所述第一取代产物、吡啶、三光气和有机溶剂混合进行第二取代反应，得到第二取代产物，所述第二取代产物具有式C或C’所示的结构：

将第一烷基胺、具有式D所示结构的异氰酸酯化合物和有机溶剂混合进行第三取代反应，得到具有式E或F所示结构的N-取代脲类化合物，所述第一烷基胺具有式A’或A”所示的结构；

将所述具有式C所示结构的化合物、第二烷基胺、吡啶和有机化合物进行第四取代反应，得到具有式G或H所示结构的N-取代脲类化合物，所述第二烷基胺具有式A’或A”所示的结构；

将具有式A所示结构的胺类化合物、二氯甲烷和氯乙基异氰酸酯混合进行第五取代反应，得到第五取代产物，所述第五取代产物具有式I’所示的结构；

将所述第五取代产物、有机溶剂和氢化钠混合进行自偶联，得到具有式J所示结构的自偶联产物；

将所述自偶联产物、有机溶剂和三光气混合进行第六取代反应，得到具有式K所示结构的第六取代产物；

将所述第六取代产物、第二烷基胺和有机溶剂混合进行第七取代反应，得到具有式II所示结构的N-取代脲类化合物，所述第二烷基胺具有式A’所示的结构。

优选地，所述胺类化合物与甲基硼酸的当量比为1:2.5。

优选地，所述异氰酸酯化合物与第一烷基胺的当量比为1:1。

优选地，所述具有式C所示结构的化合物与第二烷基胺的当量比为1:2。

优选地，所述第五取代反应中具有式A所示结构的胺类化合物和氯乙基异氰酸酯的当量比为1:2。

优选地，所述第五取代产物和氢化钠的当量比为1:3。

优选地，所述第六取代反应中自偶联产物和三光气的当量比为1:0.33。

本发明还提供了上述技术方案所述的N-取代脲类化合物或上述技术方案所述制备方法制得的N-取代脲类化合物在制备抗革兰阳性菌药物中的应用。

本发明提供了一种N-取代脲类化合物，该类化合物对革兰阳性菌，尤其是对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA)、屎肠球菌和粪肠球菌具有较好的抑制作用。

本发明还提供了上述技术方案所述N-取代脲类化合物的制备方法，本发明的制备方法简单，操作方便、收率高。

附图说明

图1为本发明实施例I-5、I-6和I-8的N-取代脲类化合物的细胞毒性测试图。

具体实施方式

式I和II中：

X₁和X₂独立地为-H、且所述X₁和X₂不同时为-H；

Y为

R独立地为H、

在本发明中，所述N-取代脲类化合物优选具有式1～8所示的结构：

在本发明中，若无特殊说明，使用的原料均为本领域市售商品。

本发明将胺类化合物、醋酸铜、吡啶、甲基硼酸和有机溶剂混合进行第一取代反应，得到第一取代产物，所述胺类化合物具有式A或A’所示的结构，所述第一取代产物具有式B或B’所示的结构；

将所述第一取代产物、吡啶、三光气和有机溶剂混合进行第二取代反应，得到第二取代产物，所述第二取代产物具有式C或C’所示的结构。

在本发明的具体实施例中，所述第一取代反应和第二取代反应的原理如下式所示：

在本发明中，所述第一取代反应的有机溶剂优选为1,4-二氧六环溶液；所述醋酸铜作为催化剂，所述吡啶作为傅酸剂。

在本发明中，所述胺类化合物与甲基硼酸的当量比优选为1:2.5。

在本发明中，所述胺类化合物与醋酸铜的当量比优选为1:2.5。

在本发明中，所述第一取代反应的温度优选为回流的温度，时间优选为4～6h。

在本发明中，所述第一取代反应后优选还包括依次进行过滤、滤液浓缩、硅胶色谱柱分离纯化，得到所述第一取代反应产物。

在本发明中，所述第二取代反应的有机溶剂优选为二氯甲烷。

在本发明中，所述第一取代产物与三光气的当量比优选为1:1.5。

在本发明中，所述第二取代反应的温度优选为回流的温度，时间优选为4～6h。

在本发明中，所述第二取代反应后优选还包括依次进行过滤和滤液浓缩，得到所述第一取代反应产物。

本发明将第一烷基胺、具有式D所示结构的异氰酸酯化合物和有机溶剂混合进行第三取代反应，得到具有式E或F所示结构的N-取代脲类化合物，所述第一烷基胺具有式A’或A”所示的结构。

在本发明中，所述异氰酸酯化合物与第一烷基胺的当量比优选为1:1。

在本发明中，所述第三取代反应的有机溶剂优选为二氯甲烷。

在本发明中，所述第三取代反应的温度优选为回流的温度，时间优选为6h。

在本发明中，所述第三取代反应的原理如下式所示：

在本发明中，所述第三取代反应后优选还包括依次进行过滤和滤饼干燥，得到所述具有式E或F所示结构的N-取代脲类化合物。

本发明将所述具有式C所示结构的化合物、第二烷基胺、吡啶和有机化合物进行第四取代反应，得到具有式G或H所示结构的N-取代脲类化合物，所述第二烷基胺具有式A’或A”所示的结构。

在本发明中，所述吡啶作为催化剂。

在本发明中，所述第四取代反应的有机溶剂优选为四氢呋喃。

在本发明中，所述具有式C所示结构的化合物与第二烷基胺的当量比优选为1:2。

在本发明中，所述第四取代反应的温度优选为回流的温度，时间优选为4～6h。

在本发明中，所述第四取代反应的原理如下式所示：

在本发明中，所述第三取代反应后优选还包括依次进行过滤、滤液浓缩和硅胶色谱柱分离纯化，得到所述具有式G或H所示结构的N-取代脲类化合物。

本发明将具有式A所示结构的胺类化合物、二氯甲烷和氯乙基异氰酸酯混合进行第五取代反应，得到第五取代产物，所述第五取代产物具有式I’所示的结构。

在本发明中，所述第五取代反应的有机溶剂优选为二氯甲烷。

在本发明中，所述第五取代反应中具有式A所示结构的胺类化合物和氯乙基异氰酸酯的当量比优选为1:2。

在本发明中，所述第五取代反应的温度优选为回流的温度，时间优选为4～6h。

在本发明中，所述第五取代反应后优选还包括依次进行过滤和滤饼干燥，得到所述第五取代产物。

本发明将所述第五取代产物、有机溶剂和氢化钠混合进行自偶联，得到具有式J所示结构的自偶联产物。

在本发明中，所述自偶联的有机溶剂优选为DMF。

在本发明中，所述自偶联的温度优选为回流的温度，时间优选为4～6h。

在本发明中，所述第五取代产物和氢化钠的当量比优选为1:3。

本发明将所述自偶联产物、有机溶剂和三光气混合进行第六取代反应，得到具有式K所示结构的第六取代产物。

在本发明中，所述第六取代反应中自偶联产物和三光气的当量比优选为1:0.33。

在本发明中，所述第六取代反应的有机溶剂优选为四氢呋喃。

在本发明中，所述第六取代反应的温度优选为回流的温度，时间优选为6h。

在本发明中，所述第六取代反应后优选还包括滴加饱和氯化铵水溶液淬灭反应后，加入乙醚析出固体，依次进行过滤和滤饼干燥，得到所述具有式K所示结构的第六取代产物。

得到第六取代产物后，本发明将所述第六取代产物、第二烷基胺和有机溶剂混合进行第七取代反应，得到具有式II所示结构的N-取代脲类化合物，所述第二烷基胺具有式A’所示的结构。

在本发明中，所述第六取代产物与第二烷基胺的当量比优选为1:1。

在本发明中，所述第七取代反应的有机溶剂优选为四氢呋喃。

在本发明中，所述第七取代反应的温度优选为室温，时间优选为4～6h。

在本发明中，所述第五取代反应、自偶联、第六取代反应和第七取代反应的原理如下式所示：

在本发明中，所述第六取代反应后优选还包括依次用水、饱和氯化钠水溶液萃取洗净，无水硫酸钠干燥，浓缩后甲醇打浆，得到所述具有式II所示结构的N-取代脲类化合物。

在本发明中，所述抗革兰阳性菌药物中的革兰阳性菌优选包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA)、屎肠球菌和粪肠球菌中的一种或多种。

本发明对所述抗革兰阳性菌药物的剂型优选包括片剂、注射剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、散剂、口服液、缓释制剂、控释制剂或纳米制剂药学上可接受的剂型。

在本发明中，所述抗革兰阳性菌药物优选包含有效剂量的所述N-取代脲类化合物、其立体异构体、可药用盐和药学上可接受的载体、辅料、赋形剂和稀释剂。

本发明对所述抗革兰阳性菌药物的制备方法没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的方式即可。

为了进一步说明本发明，下面结合实例对本发明提供的N-取代脲类化合物及其制备方法和应用进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

1-(4-(1H-咪唑-1-基)苯基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲(I-1)

室温下，向4-(1H-咪唑-1-基)苯胺III-1(0.72g,4.51mmol)的DCM溶液(12mL)中加入4-氯-3-三氟甲基异氰酸苯酯II-1(1.00g,4.51mmol)的DCM溶液(12mL)，同温搅拌6h，有固体析出，过滤后得白色固体I-1(1.51g,88.3％)。熔点：224.0～225.8℃。

HRMS m/z calcd.for C₁₇H₁₂ClF₃N₄O[M+H]⁺381.0730,found 381.0739

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ9.23(s,1H),9.04(s,1H),8.22–8.06(m,2H),7.73–7.51(m,7H),7.09(s,1H).

¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ152.41(C7),139.28(C1’),138.06(C4),135.42(C9),132.01(C1),131.55(C5’),129.64(C10),126.71(q,J＝30.3Hz,C3’),123.30(q,J＝274.72Hz,C8),123.17(C4’),122.41(C6'),121.06(C3,C5),119.58(C2,C6),118.10(C11),116.87(q,J＝5.1Hz,C2’).

实施例2

3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-1-(6-氯苯并噻唑-2-基)-1-甲基脲(I-2)

室温下，将醋酸铜(II)(3.32g,18.28mmol)加入到2-氨基-4-甲基苯并噻唑II-2(1.20g,7.31mmol)的吡啶(2.05mL,2.02g,25.59mmol)和1,4-二氧六环溶液(60mL)中，同温搅拌15min。加入甲基硼酸(1.09g,18.28mmol)，内温110℃回流反应4h。关闭加热，冷却至室温。过滤，滤液在60℃下减压浓缩得黑色粗品。硅胶色谱柱分离纯化[洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯的体积比＝60:1～25:1梯度洗脱]，得到III-2(1.02g,70.3％)。

MS-APCI(m/z):179.3[M+H]⁺；

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ7.91(q,J＝4.8Hz,1H),7.48(d,J＝7.8Hz,1H),7.04(d,J＝7.4Hz,1H),6.91(t,J＝7.6Hz,1H),2.93(d,J＝4.7Hz,3H),2.44(s,3H).

¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ166.33,151.68,129.82,127.23,126.32,120.69,118.43,30.67,18.29.

室温下，向III-2(402mg,2.26mmol)的THF溶液(6mL)中加入4-氯-3-三氟甲基异氰酸苯酯(500mg,2.26mmol)的THF溶液(6mL)，内温55℃搅拌6h，浓缩得到黄色粗品。硅胶色谱柱分离纯化[洗脱剂：正己烷:石油醚体积比＝1:2]，得到白色固体I-2(740mg,78.1％)。熔点：167.4～168.8℃。

HRMS m/z calcd.for C₁₇H₁₄ClF₃N₃OS[M+H]⁺400.0498,found 400.0502

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ10.05(s,1H),8.15(d,J＝2.7Hz,1H),7.93(dd,J＝8.9,2.7Hz,1H),7.71(t,J＝9.1Hz,2H),7.23(d,J＝7.3Hz,1H),7.17(t,J＝7.5Hz,1H),3.79(d,J＝1.8Hz,3H),2.59(s,3H).

¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ160.45,153.22,147.47,138.35,132.36,132.04,129.72,126.87(q,J＝10.1Hz),126.51,125.47,124.34(d,J＝2.02Hz),123.36,122.86(q,J＝273.7Hz),119.50(q,J＝5.7Hz),118.65,34.64,17.75.

实施例3：

1-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-3-(6-氯苯并[d]噻唑-2-基)-1-甲基脲(I-3)

室温下，将醋酸铜(II)(3.49g,19.23mmol)加入到2-氯-5-氨基三氟甲苯II-3(1.50g,7.69mmol)的吡啶(2.17mL,2.13g,26.92mmol)和1,4-二氧六环溶液(70mL)中，同温搅拌15min。加入甲基硼酸(1.15g,19.23mmol)，内温110℃回流反应4h。关闭加热，冷却至室温。过滤，滤液在60℃下减压浓缩得黑色粗品。硅胶色谱柱分离纯化[洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯体积比＝60:1～25:1梯度洗脱]，得到4-氯-N-甲基-3-(三氟甲基)苯胺III-3(1.03g,64.0％)。

MS-APCI(m/z):210.3[M+H]⁺；

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ7.31(d,J＝8.8Hz,1H),6.90(d,J＝2.8Hz,1H),6.73(dd,J＝8.8,2.8Hz,1H),6.33(q,J＝5.0Hz,1H),2.69(d,J＝5.0Hz,3H).

¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ148.96,131.92,127.85–126.69(m),126.63–118.62(m),115.62,115.03(t,J＝2.0Hz),110.02(q,J＝5.5Hz),29.45.

-30℃、氩气保护下，将吡啶(11.35g,11.55mL,143.55mmol)滴加到三光气(12.78g,43.06mmol)的二氯甲烷溶液(150mL)中，控制滴速，使内温在-25±5℃之间。滴毕同温搅拌30min,得到白色浑浊液体。然后滴加III-3(6.00g，28.71mool)的DCM溶液(50mL)，滴毕-30℃搅拌30min后，移至室温搅拌2h。过滤出去固体，滤液浓缩的白色浑浊粗品N-甲基-N-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)氨基甲酰氯IV-3，无需纯化，直接用于下一步反应。

室温下，将IV-3(333.3mg,1.23mmol)和吡啶(146.3mg,1.85mmol)分别加入2-氨基-6-氯苯并噻唑V-3(454.2mg,2.46mmol)的THF溶液(8ml)中，外温55℃反应4h，反应液浓缩得粗品，硅胶色谱柱分离纯化[洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯体积比＝40:1]，得到白色粉末I-3(423.6mg,82.2％)。熔点：206.3～208.1℃。

HRMS m/z calcd.for C₁₆H₁₁C_l2F₃N₃OS[M+H]⁺419.9952,found419.9961；

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ7.99(s,1H),7.91(d,J＝2.5Hz,1H),7.78–7.69(m,2H),7.39(dd,J＝8.5,2.2Hz,2H),3.38(s,3H).

¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ160.26,155.97,149.92,142.80,142.79,142.77,142.76,131.81(q,J＝3.6Hz),131.66,127.93(q,J＝31.5Hz),127.30(q,J＝4.5Hz),126.07,125.18,124.78,123.41(q,J＝274.0Hz),120.68,119.58,118.44(q,J＝3.6Hz),32.71.

实施例4：

1-(苯并[d][1,3]二氧戊环-5-基)-3-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-1,3-二甲基脲

化合物II-4到化合物IV-4的操作步骤同实施例3中化合物II-3到化合物IV-3的操作步骤(完全相同的反应)。

室温下，将醋酸铜(II)(9.94g,54.70mmol)加入到3,4-亚甲二氧基苯胺V-4(3.00g,21.88mmol)的吡啶(6.2mL,6.06g,76.58mmol)和1,4-二氧六环溶液(80mL)中，同温搅拌15min。加入甲基硼酸(3.27g,54.70mmol)，内温110℃回流反应4h。关闭加热，冷却至室温。过滤，滤液在60℃下减压浓缩得黑色粗品。硅胶色谱柱分离纯化[洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯体积比＝60:1～25:1梯度洗脱]，得到1,3-苯并二恶茂-5-胺VI-4(1.03g,64.0％)。

MS-APCI(m/z):152.2[M+H]⁺

室温下，将IV-4(224mg,0.83mmol)和吡啶(98.1mg,1.24mmol)分别加入VI-4(150mg,0.99mmol)的THF溶液(6ml)中，外温55℃反应4h，反应液浓缩得粗品，硅胶色谱柱分离纯化[洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯体积比＝40:1]，得到淡黄色粉末I-4(258.1mg,80.4％)。熔点：102.8～104.6℃。

HRMS m/z calcd.for C₁₇H₁₅ClF₃N₂O₃[M+H]⁺387.0723,found 387.0731；

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ7.46(d,J＝8.6Hz,1H),7.26(dd,J＝8.6,2.6Hz,1H),7.21(d,J＝2.6Hz,1H),6.64(d,J＝8.3Hz,1H),6.46(d,J＝2.2Hz,1H),6.34(dd,J＝8.2,2.2Hz,1H),5.89(s,2H),3.08(d,J＝3.2Hz,6H).

¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ159.18,147.08,142.41(q,J＝1.7Hz),140.25,140.10,130.35(q,J＝3.6Hz),127.75(q,J＝31.6Hz),127.10(q,J＝4.4Hz),124.85,123.45(q,J＝274.0Hz),118.05(q,J＝3.5Hz),115.45,107.90,105.85,102.46,35.24,31.42.

实施例5：

1-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-3-(2,3,4,5-四氟苯基)脲

室温下，向2,3,4,5-四氟苯胺III-5(1.22g,7.39mmol)的DCM溶液(15mL)中加入4-氯-3-三氟甲基异氰酸苯酯II-1(1.64g,7.39mmol)的DCM溶液(15mL)，同温搅拌6h，有固体析出，过滤后得白色固体I-5(2.34g,82.0％)。熔点：217.0～218.8℃。

HRMS m/z calcd.for C₁₄H₇ClF₇N₂O[M+H]⁺387.0135,found 387.0133

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ9.52(s,1H),9.02(s,1H),8.08(d,J＝2.5Hz,1H),7.99(dt,J＝14.1,7.1Hz,1H),7.67–7.56(m,2H).

¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ152.31,138.98,132.64,132.49,127.45,127.15,124.07(q,J＝100.0Hz)123.72,117.34,117.28,103.72,103.47.

实施例6：

1-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-3-(4-(三氟甲氧基)苯基)脲

室温下，向2,3,4,5-四氟苯胺III-5(1.22g,7.39mmol)的DCM溶液(15mL)中加入4-氯-3-三氟甲基异氰酸苯酯II-1(1.64g,7.39mmol)的DCM溶液(15mL)，同温搅拌6h，有固体析出，过滤后得白色固体I-6(2.34g,82.0％)。熔点：194.0～195.8℃。

¹H NMR(500MHz,DMSO)δ9.22(s,1H),9.07(s,1H),8.10(d,J＝2.5Hz,1H),7.71–7.51(m,4H),7.30(d,J＝8.5Hz,2H).

¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ152.86,143.41(q,J＝2.0Hz),139.68,139.00,132.48,127.34(J＝30.3Hz),124.15(q,J＝97.97Hz),122.43(q,J＝102.0Hz),122.19,120.36,119.38,117.36(q,J＝6.1Hz).

实施例7：

1-(3-乙酰基-4-氯苯基)-3-(3-(三氟甲基)苯基)脲

室温下，向2-氯-5-氨基苯乙酮III-7(2.00g,11.79mmol)的DCM溶液(15mL)中加入3-(三氟甲基)异氰酸苯酯II-7(2.21g,11.79mmol)的DCM溶液(15mL)，同温搅拌6h，有固体析出，过滤后得白色固体I-7(3.38g,80.5％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ8.76(s,1H),8.73(s,1H),8.03(d,J＝1.8Hz,1H),8.01(t,J＝2.1Hz,1H),7.62–7.59(m,1H),7.58(d,J＝8.2Hz,1H),7.56–7.53(m,1H),7.50–7.46(m,1H),7.40–7.36(m,1H),2.62(s,3H).

¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ198.78,152.84,139.51(d,J＝3.1Hz)，137.77,137.00,131.02(d,J＝32.2Hz),129.34(d,J＝3.5Hz),129.11,123.76(d,J＝271.8Hz)，122.32,120.98,120.24(d,J＝3.5Hz),118.38,116.77(d,J＝4.2Hz).

实施例8：

2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-2-氧代-N-(4-(三氟甲氧基)苯基)咪唑烷-1-羧酰胺

冰浴下，向2-氯-5-氨基三氟甲苯II-8(9.27g,47.4mmol)的DCM溶液(100mL)中滴加氯乙基异氰酸酯III-8(10.00g，94.8mmol)，滴毕，外温40℃搅拌2.5h。浓缩，加入甲基叔丁基醚溶解后加入正己烷，析出固体，过滤得白色固体IV-8(11.29g，79.40％)

冰浴下，向IV-8(10.96g，36.4mmol)的DMF溶液(80mL)中分批加入NaH(4.37g,109.20mmol)，同温搅拌4h。滴加饱和NH4Cl淬灭反应，加入乙醚搅拌30min析出固体，抽滤得灰色固体V-8(8.86g,92.2％)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ8.23(d,J＝2.6Hz,1H),7.68–7.58(m,2H),7.31(s,1H),3.89(dd,J＝9.7,6.5Hz,2H),3.43(t,J＝8.0Hz,2H)。

将吡啶(2.48g，31.4mmol)加入V-8(4.16g，15.7mmol)的THF溶液(40mL)中，内温升至55℃后，滴加三光气(1.86g，6.28mmol)的THF(20mL)溶液，同温搅拌4.5h。浓缩，乙酸乙酯(40mL)稀释，过滤后，滤液浓缩，得淡黄色固体VI-8(4.86g，94.9％)。

室温下，将VI-8(200mg，0.6mmol)加入对三氟甲氧基苯胺VII-8(88.6mg，0.6mmol)的DCM溶液(5mL)中，同温搅拌4h。依次用水、饱和氯化钠水溶液萃取洗净，无水硫酸钠干燥，浓缩。甲醇打浆，过滤得白色固体I-8(194mg,69.3％)

HRMS m/z calcd.for C₁₈H₁₃ClF₆N₃O₃[M+H]⁺468.0550,found 468.0564

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ7.65–7.62(m,1H),7.60(d,J＝7.9Hz,1H),7.54–7.50(m,2H),7.33–7.28(m,3H),4.50–4.37(m,2H),3.87–3.82(m,2H).

¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ151.62,151.78,142.31(d,J＝4.8Hz),139.29(d,J＝3.5Hz),133.20,130.90(q,J＝3.7Hz),127.67(d,J＝31.6Hz),126.14(d,J＝4.6Hz),124.87,123.25(d,J＝273.7Hz),122.17(d,J＝262.6Hz),121.54,118.02(d,J＝3.5Hz),47.87,43.45

参照CLSI标准，采用MH肉汤微稀释法进行药敏实验，试验菌用MH肉汤或脑心浸液增菌，药液用MH肉汤或脑心浸液二倍稀释成各种所需浓度于96孔板中，每孔100μL。各孔中药液的终浓度分别为：128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.06、0.03μg/mL。依次接种试验菌(接种量为5×10⁵CFU/mL)后，在35℃下恒温培养18h，观察结果如表1所示，说明本发明提供的N-取代脲类化合物对革兰阳性菌具有较好的抑制作用。

表1左氧氟沙星、索拉非尼SFN和实施例的最低抑菌浓度(MICs/ug·mL^-1)

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MTT法测定细胞毒性：

MTT测定法在96孔板中进行，将Hela和HepG2细胞以4000个细胞/孔的密度接种，将细胞在24h的时间跨度内，在37℃和5％CO₂下生长至30～40％汇合。除去培养基，向所述细胞添加100μL培养基/孔，其中含有不同浓度的相应化合物和终浓度为0.1％的DMSO，每种条件一式三份，并在37℃和5％CO₂下温育24h。向细胞添加20μL噻唑蓝溴化四唑(5mg/mL)，并在37℃和5％CO₂下温育4h，直至观察到完全消耗。在除去培养基后，将得到的甲臜溶解在200μL DMSO中。通过TECAN Infinite M200Pro在570nm(562nm)处测量光密度，并减去在630nm(620nm)处的背景。

图1为本发明实施例制备的I-5、I-6和I-8的N-取代脲类化合物的细胞毒性测试曲线(IC50)，图中SFN是一个对照药：索拉非尼，可知，实施例I-5和I-6的体外细胞毒性与索拉非尼的细胞毒性没有明显区别，而其抑菌活性和抗菌谱明显优于索拉非尼。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，并非对本发明作任何形式上的限制。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种N-取代脲类化合物，其特征在于，具有式1、5、6或7所示的结构：

2.权利要求1所述的N-取代脲类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

室温下，向4-(1H-咪唑-1-基)苯胺的DCM溶液中加入4-氯-3-三氟甲基异氰酸苯酯的DCM溶液，同温搅拌6h，有固体析出，过滤后得所述式1所示的结构；

室温下，向2,3,4,5-四氟苯胺的DCM溶液中加入4-氯-3-三氟甲基异氰酸苯酯的DCM溶液，同温搅拌6h，有固体析出，过滤后得所述式5所示的结构；

室温下，向的DCM溶液中加入4-氯-3-三氟甲基异氰酸苯酯的DCM溶液的DCM溶液，同温搅拌6h，有固体析出，过滤后得所述式6所示的结构；

室温下，向2-氯-5-氨基苯乙酮的DCM溶液中加入3-(三氟甲基)异氰酸苯酯的DCM溶液，同温搅拌6h，有固体析出，过滤后得所述式7所示的结构。

3.权利要求1所述的N-取代脲类化合物或权利要求2所述制备方法制得的N-取代脲类化合物在制备抗革兰阳性菌药物中的应用。