CN114324850A - 一种化学发光工作试剂保存液及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种化学发光工作试剂保存液及其制备方法，所述的保存液包括下述原料：聚丙烯酸钠，乙二胺四乙酸二钠二水合物，苯甲基磺酰氟，氯化镁，吐温20，氯化钾，ProClin 950，ProClin 300，牛血清白蛋白或人血清白蛋白，氨基酸，CHAPS，糖类化合物，丙二醇或甘油，防沫剂，胶原蛋白，高分子聚合物，尼铂金甲酯钠和余量pH为6.0‑9.0的磷酸盐或Tris‑HCl缓冲溶液。本发明的有益效果为：本发明所述化学发光工作试剂保存液使用多种氨基酸、蛋白质及糖类物质稳定蛋白质(如抗原、抗体)的空间结构，同时采用高分子聚合物提供空间支持力，保障抗原与抗体之间可接触性，进一步延长试剂使用期限。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种化学发光工作试剂保存液及其制备方法。
背景技术
化学发光是指某些化学反应中发出可见光的现象，其发光机理是：反应体系中的某些物质分子，伴随化学反应过程所产生的光的发射现象。反应体系中的某些物质分子，如反应物，中间体或者荧光物质吸收了反应释放的能量而由基态跃迁至激发态，然后再从激发态返回基态，同时将能量以光辐射的形式释放出来，产生化学发光。化学发光分析方法主要是依据化学发光检测体系中待测浓度与体系的化学发光强度在一定条件下呈线性定量关系的原理，利用仪器对体系化学发光强度进行检测，而确定待测物含量的一种痕量分析方法。其具有灵敏度高、仪器设备简单、操作方便等特点，广泛应用于环境化学，临床分析，药物分析和工业分析等。
根据发光体系也就是发光剂的不同进行分类，可分为：间接化学发光、电化学发光、直接化学发光、光激化学发光。
间接化学发光是用参与催化某一化学发光反应的酶如辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(ALP)来标记抗原或抗体，在与待测标本中相应的抗原(或抗体)发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物，经洗涤后，加入底物(也就是发光剂),酶催化和分解底物发光，由光量子阅读系统接收，光电倍增管将光信号转变为电信号并加以放大，再把它们传送至计算机数据处理系统，计算出测定物的浓度。
直接化学发光是用吖碇酯等直接标记抗体(或抗原),与待测标本中相应的抗原(或抗体)发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-吖碇酯标记抗体复合物，这时只需加入氧化剂过氧化氢和氢氧化钠形成碱性环境，吖碇酯在不需要催化剂的情况下分解、发光。
电化学发光是以电化学发光剂三联砒锭钌标记抗体(或抗原),以三丙胺(TPA)为电子供体,在电场中因电子转移而发生特异性化学发光反应,它包括电化学和化学发光两个过程。
上述几种化学发光都包含磁珠抗包被的R1试剂，和抗体或抗原标记的R2试剂，R1和R2试剂的稳定性是化学发光试剂最重要的指标之一，如果试剂不稳定，很容易降解，则增加试剂储存成本和使用成本。
当前各种化学发光并没有比较成熟的试剂保存液，常规保存液一般为添加了抑菌剂和1％BSA或Tris-HCL缓冲液，保存期较短，也容易影响检测的结果。
发明内容
本申请的主要目的在于提供一种化学发光工作试剂保存液，可增加化学发光工作试剂的保存使用时间，且极大地降低成本。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种化学发光工作试剂保存液，包括下述体积百分比的原料：聚丙烯酸钠0.5％-3％，乙二胺四乙酸二钠二水合物0.15％-1.8％，苯甲基磺酰氟0.01％-0.9％，氯化镁0.15％-0.89％，吐温20 0.1％-1％，氯化钾0.05％-0.48％，ProClin 950 0.1％-0.9％，ProClin 300 0.1％-0.9％，牛血清白蛋白或人血清白蛋白0.5％-5％，氨基酸0.05％-1.4％，CHAPS(3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐)0.1％-1％，糖类化合物0.5％-1.5％，丙二醇或甘油0.03％-0.5％，防沫剂0.03％-0.05％，胶原蛋白5.4％-10.5％，高分子聚合物14.4％-20.5％、尼铂金甲酯钠0.04％-0.1％和余量pH为6.0-9.0的磷酸盐或Tris-HCl缓冲溶液。
磷酸盐可为磷酸氢二钠和磷酸二氢钠的混合溶液。
上述一种化学发光工作试剂保存液，作为一种优选的实施方案，包括下述质量百分比的原料：聚丙烯酸钠0.5％，乙二胺四乙酸二钠二水合物1.8％，苯甲基磺酰氟0.05％，氯化镁0.25％，吐温20 0.1％，氯化钾0.2％，ProClin 950 0.2％，ProClin 300 0.1％，牛血清白蛋白或人血清白蛋白0.55％，氨基酸0.05％，CHAPS(3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐)0.17％，糖类化合物0.5％，丙二醇或甘油0.03％，防沫剂0.03％，胶原蛋白5.4％，高分子聚合物14.4％、尼铂金甲酯钠0.1％和余量pH为6.0-9.0的磷酸盐或Tris-HCl缓冲溶液。
上述一种化学发光工作试剂保存液，作为一种优选的实施方案，包括下述体积百分比的原料：聚丙烯酸钠0.89％，乙二胺四乙酸二钠二水合物0.15％，苯甲基磺酰氟0.11％，氯化镁0.15％，吐温20 1％，氯化钾0.48％，ProClin 950 0.1％，ProClin 3000.9％，牛血清白蛋白或人血清白蛋白5％，氨基酸1.4％，CHAPS(3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐)0.1％，糖类化合物1.5％，丙二醇或甘油0.13％，防沫剂0.05％，胶原蛋白7.5％，高分子聚合物20.5％，尼铂金甲酯钠0.04％和余量pH为6.0-9.0的磷酸盐或Tris-HCl缓冲溶液。
上述一种化学发光工作试剂保存液，作为一种优选的实施方案，包括下述体积百分比的原料：聚丙烯酸钠3％，乙二胺四乙酸二钠二水合物0.4％，苯甲基磺酰氟0.9％，氯化镁0.15％，吐温20 0.1％，氯化钾0.48％，ProClin 950 0.5％，ProClin 300 0.1％，牛血清白蛋白或人血清白蛋白0.5％，氨基酸1.4％，CHAPS(3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐)1％，糖类化合物0.67％，丙二醇或甘油0.5％，防沫剂0.03％，胶原蛋白9.4％，高分子聚合物15％、尼铂金甲酯钠0.08％和余量pH为6.0-9.0的磷酸盐或Tris-HCl缓冲溶液。
优选地，所述氨基酸为精氨酸或脯氨酸；所述糖类化合物为海藻糖，蔗糖和葡萄糖的混合物；所述防沫剂为磷酸三丁酯或邻苯二甲酸二乙酯，所述高分子聚合物为聚乙二醇或聚乙烯吡咯烷酮。
本申请的第二方面，提供一种化学发光工作试剂保存液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将上述各组分加入到磷酸盐或Tris-HCl缓冲溶液中，并混合搅拌至完全溶解；
(2)用氢氧化钠或盐酸调节步骤(1)所得混合液的pH值在7.0-8.0之间，加入缓冲液将混合液调至100份；
(3)过滤步骤(2)所得混合液，罐装得所述化学发光工作试剂保存液。
上述一种化学发光工作试剂保存液的制备方法，作为一种优选的实施方案，步骤(1)中，混合搅拌的速度为20-3000rpm。
上述一种化学发光工作试剂保存液的制备方法，作为一种优选的实施方案，所述过滤为采用0.2-0.8微米的滤膜或惰性材质的过滤填充柱进行过滤。
本发明的有益效果为：本发明所述化学发光工作试剂保存液使用多种氨基酸、蛋白质及糖类物质稳定蛋白质(如抗原、抗体)的空间结构，同时采用高分子聚合物提供空间支持力，保障抗原与抗体之间可接触性，进一步延长试剂使用期限。
附图说明
图1为直接化学平台中tPSA检测试剂盒使用本申请实施例1-4所得保存液配方，在37℃条件下，发光值随时间变化的示意图：其中实施例2发光值最高，实施例1发光值最低。4种保存液可以使试剂的发光强度在37℃条件下存放25天时下降10％，大大提高试剂的稳定性。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本申请方案，下面将结合案例对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本申请保护的范围。
实施例1
一种化学发光工作试剂保存液，包括下述体积百分比的原料：聚丙烯酸钠0.5％，乙二胺四乙酸二钠二水合物1.8％，苯甲基磺酰氟0.05％，氯化镁0.25％，吐温200.1％，氯化钾0.2％，ProClin 950 0.2％，ProClin 300 0.1％，牛血清白蛋白0.55％，氨基酸0.05％，CHAPS 0.17％，糖类化合物0.5％，丙二醇0.03％，防沫剂0.03％，胶原蛋白5.4％，高分子聚合物14.4％、尼铂金甲酯钠0.1％和余量pH为6.0-9.0的磷酸盐；
所述氨基酸为精氨酸；所述糖类化合物为海藻糖，蔗糖和葡萄糖的混合物；所述防沫剂为磷酸三丁酯，所述高分子聚合物为聚乙二醇。
实施例1所述化学发光工作试剂保存液的制备方法，包括以下步骤：
(1)将上述各组分加入到磷酸盐中，在搅拌速度为20rpm的条件下混合搅拌至完全溶解；
(2)用氢氧化钠或盐酸调节步骤(1)所得混合液的pH值在7.0-8.0之间，加入缓冲液将混合液调至100份；
(3)采用0.2微米的滤膜过滤步骤(2)所得混合液，罐装得所述化学发光工作试剂保存液。
实施例2
一种化学发光工作试剂保存液，包括下述体积百分比的原料：聚丙烯酸钠0.89％，乙二胺四乙酸二钠二水合物0.15％，苯甲基磺酰氟0.11％，氯化镁0.15％，吐温20 1％，氯化钾0.48％，ProClin 950 0.1％，ProClin 300 0.9％，牛血清白蛋白5％，氨基酸1.4％，CHAPS 0.1％，糖类化合物1.5％，丙二醇0.13％，防沫剂0.05％，胶原蛋白7.5％，高分子聚合物20.5％，尼铂金甲酯钠0.04％和余量Tris-HCl缓冲溶液；
所述氨基酸为精氨酸；所述糖类化合物为海藻糖，蔗糖和葡萄糖的混合物；所述防沫剂为磷酸三丁酯，所述高分子聚合物为聚乙烯吡咯烷酮。
实施例2所述化学发光工作试剂保存液的制备方法，包括以下步骤：
(1)将上述各组分加入到Tris-HCl缓冲溶液中，在搅拌速度为200rpm的条件下混合搅拌至完全溶解；
(2)用氢氧化钠或盐酸调节步骤(1)所得混合液的pH值在7.0-8.0之间，加入缓冲液将混合液调至100份；
(3)采用0.6微米的滤膜过滤步骤(2)所得混合液，罐装得所述化学发光工作试剂保存液。
实施例3
一种化学发光工作试剂保存液，包括下述体积百分比的原料：聚丙烯酸钠3％，乙二胺四乙酸二钠二水合物0.4％，苯甲基磺酰氟0.9％，氯化镁0.15％，吐温20 0.1％，氯化钾0.48％，ProClin 950 0.5％，ProClin 300 0.1％，人血清白蛋白0.5％，氨基酸1.4％，CHAPS 1％，糖类化合物0.67％，丙二醇0.5％，防沫剂0.03％，胶原蛋白9.4％，高分子聚合物15％、尼铂金甲酯钠0.08％和余量Tris-HCl缓冲溶液；
所述氨基酸为脯氨酸；所述糖类化合物为海藻糖，蔗糖和葡萄糖的混合物；所述防沫剂为磷酸三丁酯，所述高分子聚合物为聚乙烯吡咯烷酮
实施例3所述化学发光工作试剂保存液的制备方法，包括以下步骤：
(1)将上述各组分加入到Tris-HCl缓冲溶液中，在搅拌速度为1000rpm的条件下混合搅拌至完全溶解；
(2)用氢氧化钠或盐酸调节步骤(1)所得混合液的pH值在7.0-8.0之间，加入缓冲液将混合液调至100份；
(3)采用惰性材质的过滤填充柱过滤步骤(2)所得混合液，罐装得所述化学发光工作试剂保存液。
实施例4
一种化学发光工作试剂保存液，包括下述体积百分比的原料：聚丙烯酸钠2％，乙二胺四乙酸二钠二水合物0.15％，苯甲基磺酰氟0.01％，氯化镁0.15％，吐温20 0.5％，氯化钾0.48％，ProClin 950 0.1％，ProClin 300 0.9％，人血清白蛋白5％，氨基酸1.4％，CHAPS 0.1％，糖类化合物1.5％，甘油0.03％，防沫剂0.03％，胶原蛋白6.5％，高分子聚合物20.5％，尼铂金甲酯钠0.04％和余量Tris-HCl缓冲溶液；
所述氨基酸为脯氨酸；所述糖类化合物为海藻糖，蔗糖和葡萄糖的混合物；所述防沫剂为邻苯二甲酸二乙酯，所述高分子聚合物为聚乙烯吡咯烷酮。
实施例4所述化学发光工作试剂保存液的制备方法，包括以下步骤：
(1)将上述各组分加入到Tris-HCl缓冲溶液中，在搅拌速度为3000rpm的条件下混合搅拌至完全溶解；
(2)用氢氧化钠或盐酸调节步骤(1)所得混合液的pH值在7.0-8.0之间，加入缓冲液将混合液调至100份；
(3)采用0.8微米的滤膜过滤步骤(2)所得混合液，罐装得所述化学发光工作试剂保存液。
对比例1
一种化学发光工作试剂保存液，包括下述体积百分比的原料：聚丙烯酸钠0.5％，乙二胺四乙酸二钠二水合物1.8％，苯甲基磺酰氟0.05％，氯化镁0.25％，吐温200.1％，氯化钾0.2％，ProClin 950 0.2％，ProClin 300 0.1％，牛血清白蛋白0.55％，氨基酸0.05％，CHAPS 0.17％，蔗糖0.5％，丙二醇0.03％，防沫剂0.03％，胶原蛋白5.4％，高分子聚合物14.4％、尼铂金甲酯钠0.1％和余量pH为6.0-9.0的磷酸盐；
所述氨基酸为精氨酸；所述防沫剂为磷酸三丁酯，所述高分子聚合物为聚乙二醇。
对比例1所述化学发光试剂保存液的制备方法与实施例1所述化学发光试剂保存液的制备方法相同。
对比例2
一种化学发光工作试剂保存液，包括下述体积百分比的原料：聚丙烯酸钠0.89％，乙二胺四乙酸二钠二水合物0.15％，苯甲基磺酰氟0.11％，氯化镁0.15％，吐温20 1％，氯化钾0.48％，ProClin 950 0.1％，ProClin 300 0.9％，牛血清白蛋白5％，氨基酸1.4％，CHAPS 0.1％，糖类化合物1.5％，丙二醇0.13％，防沫剂0.05％，胶原蛋白7.5％，尼铂金甲酯钠0.04％和余量Tris-HCl缓冲溶液；
所述氨基酸为精氨酸；所述糖类化合物为海藻糖，蔗糖和葡萄糖的混合物；所述防沫剂为磷酸三丁酯。
对比例2所述化学发光试剂保存液的制备方法与实施例2所述化学发光试剂保存液的制备方法相同。
对比例3
一种化学发光工作试剂保存液，包括下述体积百分比的原料：聚丙烯酸钠3％，乙二胺四乙酸二钠二水合物0.4％，苯甲基磺酰氟0.9％，氯化镁0.15％，吐温20 0.1％，氯化钾0.48％，ProClin 950 0.5％，ProClin 300 0.1％，人血清白蛋白0.5％，CHAPS 1％，糖类化合物0.67％，丙二醇0.5％，防沫剂0.03％，胶原蛋白9.4％，高分子聚合物15％、尼铂金甲酯钠0.08％和余量Tris-HCl缓冲溶液；
所述糖类化合物为海藻糖，蔗糖和葡萄糖的混合物；所述防沫剂为磷酸三丁酯，所述高分子聚合物为聚乙烯吡咯烷酮。
对比例3所述化学发光试剂保存液的制备方法与实施例3所述化学发光试剂保存液的制备方法相同。
对比例4
一种化学发光工作试剂保存液，包括下述体积百分比的原料：聚丙烯酸钠2％，乙二胺四乙酸二钠二水合物0.15％，苯甲基磺酰氟0.01％，氯化镁0.15％，吐温20 0.5％，氯化钾0.48％，ProClin 950 0.1％，ProClin 300 0.9％，牛血清白蛋白5％，氨基酸1.4％，CHAPS 0.1％，甘油0.03％，防沫剂0.03％，胶原蛋白6.5％，尼铂金甲酯钠0.04％和余量Tris-HCl缓冲溶液；
所述氨基酸为脯氨酸；所述防沫剂为邻苯二甲酸二乙酯。
对比例4所述化学发光试剂保存液的制备方法与实施例4所述化学发光试剂保存液的制备方法相同。
1.本发明所述化学发光工作试剂保存液的效果研究
以代表性的甲胎蛋白(AFP)检测试剂盒(化学发光法、电化学发光法和酶促化学发光法)、癌抗原125(CA-125)检测试剂盒(化学发光法、电化学发光法和酶促化学发光法)和总前列腺特异性抗原(tPSA)检测试剂盒(化学发光法、电化学发光法和酶促化学发光法)为保护对象，把上述各实施例和对比例所得化学发光工作试剂保存液，按一定比例分别加入到上述的保护对象中(化学发光工作试剂保存液比例在80-100％间，根据不同项目调配)，考察在2-8℃和37℃下的保护情况，分别记录0天，及各天数的信号值变化。
表1本发明所述化学发光工作试剂保存液对甲胎蛋白(AFP)检测试剂盒的保护效果研究
从表1可以看出：本发明所述化学发光工作试剂保存液对甲胎蛋白(AFP)检测试剂盒具有很好的保护作用。其在2-8℃的保护天数可长达1118天，在37℃的保护天数可长达26天。而对比例1至对比例4所述化学发光工作试剂保存液缺少了一些关键组分，其在2-8℃的保护天数最长为598天，在37℃的保护天数最长为13天，远远低于本发明所述化学发光工作试剂保存液对甲胎蛋白(AFP)的保护效果。表2本发明所述化学发光工作试剂保存液对癌抗原125(CA-125)检测试剂盒的保护效果研究
从表2可以看出：本发明所述化学发光工作试剂保存液对癌抗原125(CA-125)检测试剂盒具有很好的保护作用。其在2-8℃的保护天数可长达1170天，在37℃的保护天数可长达27天。而对比例1至对比例4所述化学发光工作试剂保存液缺少了一些关键组分，其在2-8℃的保护天数最长为580天，在37℃的保护天数最长为13天，远远低于本发明所述化学发光工作试剂保存液对癌抗原125(CA-125)检测试剂盒的保护效果。
表3本发明所述化学发光工作试剂保存液对总前列腺特异性抗原(tPSA)检测试剂盒的保护效果研究
从表3可以看出：本发明所述化学发光工作试剂保存液对总前列腺特异性抗原(tPSA)检测试剂盒具有很好的保护作用。其在2-8℃的保护天数可长达1160天，在37℃的保护天数为27天。而对比例1至对比例4所述化学发光工作试剂保存液缺少了一些关键组分，其在2-8℃的保护天数最长为480天，在37℃的保护天数最长为11天，远远低于本发明所述化学发光工作试剂保存液对总前列腺特异性抗原(tPSA)检测试剂盒的保护效果。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。
Claims (8)
1.一种化学发光工作试剂保存液，其特征在于，包括下述体积百分比的原料：聚丙烯酸钠0.5％-3％，乙二胺四乙酸二钠二水合物0.15％-1.8％，苯甲基磺酰氟0.01％-0.9％，氯化镁0.15％-0.89％，吐温20 0.1％-1％，氯化钾0.05％-0.48％，ProClin950 0.1％-0.9％，ProClin 300 0.1％-0.9％，牛血清白蛋白或人血清白蛋白0.5％-5％，氨基酸0.05％-1.4％，CHAPS 0.1％-1％，糖类化合物0.5％-1.5％，丙二醇或甘油0.03％-0.5％，防沫剂0.03％-0.05％，胶原蛋白5.4％-10.5％，高分子聚合物14.4％-20.5％，尼铂金甲酯钠0.04％-0.1％和余量pH为6.0-9.0的磷酸盐或Tris-HCl缓冲溶液。
2.根据权利要求1所述化学发光工作试剂保存液，其特征在于，包括下述体积百分比的原料：聚丙烯酸钠0.5％，乙二胺四乙酸二钠二水合物1.8％，苯甲基磺酰氟0.05％，氯化镁0.25％，吐温20 0.1％，氯化钾0.2％，ProClin 950 0.2％，ProClin300 0.1％，牛血清白蛋白或人血清白蛋白0.55％，氨基酸0.05％，CHAPS 0.17％，糖类化合物0.5％，丙二醇或甘油0.03％，防沫剂0.03％，胶原蛋白5.4％，高分子聚合物14.4％、尼铂金甲酯钠0.1％和余量pH为6.0-9.0的磷酸盐或Tris-HCl缓冲溶液。
3.根据权利要求1所述化学发光工作试剂保存液，其特征在于，包括下述体积百分比的原料：聚丙烯酸钠0.89％，乙二胺四乙酸二钠二水合物0.15％，苯甲基磺酰氟0.11％，氯化镁0.15％，吐温20 1％，氯化钾0.48％，ProClin 950 0.1％，ProClin300 0.9％，牛血清白蛋白或人血清白蛋白5％，氨基酸1.4％，CHAPS 0.1％，糖类化合物1.5％，丙二醇或甘油0.13％，防沫剂0.05％，胶原蛋白7.5％，高分子聚合物20.5％，尼铂金甲酯钠0.04％和余量pH为6.0-9.0的磷酸盐或Tris-HCl缓冲溶液。
4.根据权利要求1所述化学发光工作试剂保存液，其特征在于，包括下述体积百分比的原料：聚丙烯酸钠3％，乙二胺四乙酸二钠二水合物0.4％，苯甲基磺酰氟0.9％，氯化镁0.15％，吐温20 0.1％，氯化钾0.48％，ProClin 950 0.5％，ProClin300 0.1％，牛血清白蛋白或人血清白蛋白0.5％，氨基酸1.4％，CHAPS 1％，糖类化合物0.67％，丙二醇或甘油0.5％，防沫剂0.03％，胶原蛋白9.4％，高分子聚合物15％、尼铂金甲酯钠0.08％和余量pH为6.0-9.0的磷酸盐或Tris-HCl缓冲溶液。
5.根据权利要求1-4任一项所述化学发光工作试剂保存液，其特征在于，所述氨基酸为精氨酸或脯氨酸；所述糖类化合物为海藻糖，蔗糖和葡萄糖的混合物；所述防沫剂为磷酸三丁酯或邻苯二甲酸二乙酯，所述高分子聚合物为聚乙二醇或聚乙烯吡咯烷酮。
6.权利要求1-5任一项所述化学发光工作试剂保存液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将上述各组分加入到磷酸盐或Tris-HCl缓冲溶液中，并混合搅拌至完全溶解；
(2)用氢氧化钠或盐酸调节步骤(1)所得混合液的pH值在7.0-8.0之间，加入缓冲液将混合液调至100份；
(3)过滤步骤(2)所得混合液，罐装得所述化学发光工作试剂保存液。
7.根据权利要求6所述化学发光工作试剂保存液的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，混合搅拌的速度为20-3000rpm。
8.根据权利要求6所述化学发光工作试剂保存液的制备方法，其特征在于，所述过滤为采用0.2-0.8微米的滤膜或惰性材质的过滤填充柱进行过滤。
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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