CN1143110A - 一种毛头鬼伞多糖的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种真菌药物的制备方法，特别涉及一种毛头鬼伞多糖的制备方法，本发明的技术方案是这样实现的：先将菌种进行斜面培养，然后进行一级摇瓶、二级摇瓶培养，再接入种子罐、繁殖罐、发酵罐中通气培养，将发酵液经过滤得菌丝体，将干菌丝体粉热水提取、过滤和浓缩，在浓缩液中加入酒精进行醇析，醇析后的沉淀物经干燥、粉碎后即可获得毛头鬼伞多糖，本法适用于大规模生产毛头鬼伞多糖。
Description
本发明涉及一种真菌药物的制备方法，特别涉及一种毛头鬼伞多糖的制备方法。
1977年日本特许公报(昭52-44638)公开了一种从毛头鬼伞菌丝体中提取抗肿瘤毛头鬼伞多糖(Polysaccharideof Coprinus comatus简称CCP)的制备方法，用蛋白胨和葡萄糖作培养基，但采用静止法培养生产菌丝体，培养时间需要18天，而且多糖的提取采用硫酸铵盐析法，需经透析、脱盐，工艺复杂，不利于大规模生产。
本发明的目的是提供一种培养时间短、提取方法简单、适用于大规模生产的毛头鬼伞多糖制备方法。
本发明的技术方案是这样实现的：先将毛头鬼伞菌种进行斜面培养，然后进行一级摇瓶培养、二级摇瓶培养，再接入种子罐、繁殖罐、发酵罐中通气搅拌培养，将发酵后的发酵液经过滤得菌丝体，菌丝体经干燥、粉碎得干菌丝体粉，将干菌丝体粉热水提取和过滤，再将滤液浓缩，在浓缩液中加入酒精进行醇析，醇析后的沉淀物经干燥、粉碎后即可获得毛头鬼伞多糖。
本发明的培养基：
(1)斜面培养基：
马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，加水至1000ml，PH值6.5。
(2)摇瓶培养基：
葡萄糖0.5％-5％，蛋白胨0.1％-2％，酵母粉0％-2％，K2HPO40.01％-0.5％，KH2PO40.01％-0.5％，MgSO4.7H2O0.01％-0.25％。
(3)发酵培养基：
玉米粉(或大豆饼粉)1％-5％，液体葡萄糖0.5％-5％，白糖0.5％-5％，酵母粉0％-2％，K2HPO40.01％-0.5％，MgSO4.7H2O0.01％-0.25％。
附图是本发明的工艺流程图，
下面结合附图对本发明作详细说明，本发明的生产工艺步骤如下：
(一)一级摇瓶培养：
在500ml三角瓶中装入100ml液体培养基，培养基经高压灭菌，接种斜面菌种，于24-28℃培养，置摇床上振荡培养(转速120-160转/分)，培养时间5-7天。
(二)二级摇瓶培养：
在500ml三角瓶中装入100ml液体培养基，培养基经高压灭菌，接种一级摇瓶培养液，接种量为5％-15％，于24-28℃培养，置摇床上振荡培养(转速120-160转/分)，培养时间2-4天。
(三)种子罐培养：
将摇瓶培养液接入50-100立升种子罐中，培养基采用发酵培养基，罐内装量70％-80％，接种量5％-15％，罐压0.5-0.8Kg/cm2，搅拌器转速120-200转/分，通气培养40-50小时。
(四)繁殖罐培养：
将种子罐培养液移入500立升-1000立升繁殖罐中，培养基采用发酵培养基，罐内装量70％-80％，接种量5％-15％，罐压0.5-0.8Kg/cm2，搅拌器转速120-200转/分，通气培养40-50小时。
(五)发酵罐培养：
将繁殖罐培养液移入发酵罐中，罐内装量70％-80％，接种量5％-15％，罐温24-28℃，罐压0.5-0.8Kg/cm2，搅拌器转速120-200转/分，发酵时间为55-65小时。
(六)毛头鬼伞多糖的提取
将发酵培养物过滤，于40-70℃下干燥，粉碎得菌丝体干粉，菌丝体在95-120℃热水中提取2-3次，提取时间5-15小时，提取液经过滤，除去不溶物，滤液经低温真空浓缩，浓缩液体1份加95％食用乙醇2-5份，在1-4℃下醇析8-24小时，用过滤或离心法得沉淀物，用95％乙醇洗涤沉淀物2-3遍，将沉淀物进行真空干燥，粉碎得毛头鬼伞多糖。
由于本发明在种子罐、繁殖罐和发酵罐中采用通气搅拌培养，所以在发酵罐中发酵培养时间只需55-65小时，效率高、周期短，适用于大规模生产，又由于采用醇析法提取毛头鬼伞多糖，所以不需脱盐，工艺简单，所得多糖成份也较纯。
下面结合实施例对本发明的生产工艺作进一说明，
实施例：
(1)斜面培养：
取用菌株转接到斜面培养基上，于25℃培养5-6天，斜面培养基为马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，加水至1000ml，PH值6.5。
(2)一级摇瓶培养：
在500ml三角瓶中装入100ml液体培养基，培养基经121℃灭菌30分钟，接种斜面菌种2环，于24℃培养，置摇床上振荡培养，摇床转速120转/分，培养5天，摇瓶培养基为葡萄糖3％，蛋白胨0.5％，K2HPO40.03％，KH2PO40.03％，MgSO4.7H2O0.0 3％。
(3)二级摇瓶培养：
在500ml三角瓶中装入100ml液体培养基，培养基经121℃灭菌30分钟，接种一级摇瓶培养液，接种量为10％，于24℃培养，置摇床上振荡培养，摇床转速120转/分，培养3天，摇瓶培养基同上。
(4)种子罐培养：
将摇瓶培养液以压差法接入100立升种子罐中，罐内装量70％，接种量10％，罐压0.6Kg/cm2，搅拌器转速180转/分，通气培养40小时，种子罐培养基为玉米粉1.5％，液体葡萄糖1.5％，蔗糖3％，K2HPO40.01％，MgSO4.7H2O0.05％。
(5)繁殖罐培养：
将种子罐培养液移入1000立升繁殖罐中，罐内装量70％，接种量10％，罐压0.6Kg/cm2，搅拌器转速180转/分，通气培养40小时，繁殖罐培养基同上。
(6)发酵罐培养：
将繁殖罐培养液移入发酵罐中，罐内装量70％，接种量为10％，罐温25℃，罐压0.6Kg/cm2，搅拌器转速180转/分，发酵时间为65小时，发酵罐培养基同上。
(7)毛头鬼伞多糖的提取
将发酵培养物经板框压滤，菌丝体低温干燥，粉碎得菌丝体干粉，菌丝体粉加水10倍，在95℃热水回流提取3次，提取液经过滤，除去不溶物，滤液经低温真空薄膜浓缩，浓缩液体1份加95％食用乙醇3份，在4℃下醇析24小时，将沉淀物进行真空干燥，粉碎得毛头鬼伞多糖。
Claims (2)
1、一种毛头鬼伞多糖的制备方法，其特征是：先将毛头鬼伞菌种进行斜面培养，然后进行一级摇瓶培养、二级摇瓶培养，再接入种子罐、繁殖罐、发酵罐中通气搅拌培养，将发酵后的发酵液经过滤得菌丝体，菌丝体经干燥、粉碎得干菌丝体粉，将干菌丝体粉热水提取和过滤，再将滤液浓缩，在浓缩液中加入酒精进行醇析，醇析后的沉淀物经干燥、粉碎后即可获得毛头鬼伞多糖。
2、根据权利要求1所述的一种毛头鬼伞多糖制备方法，其特征是：将菌种在斜面培养基中培养，然后进行：
a、一级摇瓶培养：
在500ml三角瓶中装入100ml液体培养基，培养基经高压灭菌，接种斜面菌种，于24-28℃培养，置摇床上振荡培养(转速120-160转/分)，培养时间5-7天。
b、二级摇瓶培养：
在500ml三角瓶中装入100ml液体培养基，培养基经高压灭菌，接种一级摇瓶培养液，接种量为5％-15％，于24-28℃培养，置摇床上振荡培养(转速120-160转/分)，培养时间2-4天。
c、种子罐培养：
将摇瓶培养液接入50-100立升种子罐中，培养基采用发酵培养基，罐内装量70％-80％，接种量5％-15％，搅拌器转速120-200转/分，罐压0.5-0.8Kg/cm2，通气培养40-50小时。
d、繁殖罐培养：
将种子罐培养液移入500立升-1000立升繁殖罐中，培养基采用发酵培养基，罐内装量70％-80％，接种量5％-15％，搅拌器转速120-200转/分，罐压0.5-0.8Kg/cm2，通气培养40-50小时。
e、发酵罐培养：
将繁殖罐培养液移入发酵罐中，罐内装量70％-80％，接种量5％-15％，罐温24-28℃，罐压0.5-0.8Kg/cm2，搅拌器转速120-200转/分，发酵时间为55-65小时。
f、毛头鬼伞多糖的提取
将发酵培养物过滤，于40-70℃下干燥，粉碎得菌丝体干粉，菌丝体在95-120℃热水中提取2-3次，提取时间5-15小时，提取液经过滤，除去不溶物，滤液经低温真空浓缩，浓缩液体1份加95％食用乙醇2-5份，在1-4℃下醇析8-24小时，用过滤或离心法得沉淀物，用95％乙醇洗涤沉淀物2-3遍，将沉淀物进行真空干燥，粉碎得毛头鬼伞多糖。
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| CN 95111725 CN1143110A (zh) | 1995-08-17 | 1995-08-17 | 一种毛头鬼伞多糖的制备方法 |
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| CN 95111725 CN1143110A (zh) | 1995-08-17 | 1995-08-17 | 一种毛头鬼伞多糖的制备方法 |
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| CN 95111725 Pending CN1143110A (zh) | 1995-08-17 | 1995-08-17 | 一种毛头鬼伞多糖的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1143110A (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010103519A1 (en) * | 2009-03-10 | 2010-09-16 | Palmed Teva Ltd | Novel coprinus comatus and tremella mesenterica mushroom strains, products and extracts thereof and compositions comprising them |
| CN102220246A (zh) * | 2011-05-18 | 2011-10-19 | 辽宁省农业科学院 | 蓝莓菌根真菌（晶粒鬼伞）及其分离方法和用途 |
| CN102585027A (zh) * | 2012-02-23 | 2012-07-18 | 上海市农业科学院 | 一种毛头鬼伞大分子多糖及其制备方法 |
| CN104739896A (zh) * | 2015-03-06 | 2015-07-01 | 吉林省现代中药工程研究中心有限公司 | 一种具有保肝功能的复合菌物胞内多糖组合物及制备方法 |
-
1995
- 1995-08-17 CN CN 95111725 patent/CN1143110A/zh active Pending
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