CN114288707A - 忍冬花提取物、提取方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种忍冬花提取物、提取方法及其应用，本发明所述忍冬花提取方法，包括以下步骤：将忍冬花和油料作物同时进行超临界二氧化碳萃取，分离后得到粗提物；对所述粗提物进行脱蜡处理；所述油料作物包括油茶籽、菜籽、葵花子和橄榄中的一种或多种。采用油茶籽和忍冬花同时进行超临界二氧化碳流体萃取，有利于忍冬花从分离器中分离，可以简化后续精制处理，同时得到的提取物具有修复细胞损伤、促进成纤维细胞和角质细胞增殖方面的功效。

Description

忍冬花提取物、提取方法及其应用

技术领域

本发明属于植物提取技术领域，具体涉及一种忍冬花提取物、提取方法及其应用。

背景技术

忍冬花(Lonicera japonica Thunb.)是常用的大宗中药材之一，分布广泛，具有良好的凉散风热和杀菌消炎功效。忍冬花所含挥发性油不仅具有浓烈的芳香气味，还有清咽、解热、化痰和平喘等功效，常用于医药、化妆、香料和食品等行业。

忍冬花中油脂含量低，仅为3～5％，且大部分为固体脂质，熔点高，提取后收集存在难度。传统忍冬花挥发油的生产通常采用蒸馏法，利用水蒸气来进行提取，采用无水乙醚进行萃取，进行脱水处理后，蒸发溶剂得到忍冬花精油。整个提取过程出油率低，热敏成分易被分解，且能耗高，耗时长，并且引入了有机溶剂。

超临界二氧化碳萃取分离过程是利用压力和温度对超临界二氧化碳溶解能力的影响进行的，采用超临界二氧化碳流体萃取可以提高提取效率，解决溶剂残留和环境污染的问题。由于忍冬花的油脂中存在较多的高熔点的脂类成分，采用超临界流体进行提取后精制过程中均存在较大的难处，采用精馏塔进行二次蒸馏存在耗能较大的问题，不采用二次蒸馏的提取物中蜡质去除困难，且在去除蜡质的过程中精油损耗大。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种忍冬花提取物、提取方法及其应用，有利于提高忍冬花的提取效率，便于后续的收集和精制。

超临界二氧化碳萃取是在超临界状态下，将超临界二氧化碳与待分离的物质接触进行萃取，然后通过减压和升温的方法使超临界二氧化碳变成普通气体，被萃取物质完全或基本析出，从而达到分离提纯的目的。超临界二氧化碳萃取一个典型工艺流程如图1所示，图1为超临界二氧化碳流体萃取的工艺流程图，其中①为提取器，②为背压压力调节器，③为分离器，④为冷却器，⑤为二氧化碳液化装置，⑥为二氧化碳补充罐，⑦为加压装置，⑧为调节阀排空阀门(用于排空高压泵中的空气，充满液体二氧化碳)，⑨为加热装置，⑩为分离罐出口，

为二氧化碳出口，

为排空管。二氧化碳补充罐循环⑥补给的二氧化碳通过加压装置⑦和加热装置⑨后，成为超临界二氧化碳，进入提取器①对待提取物质进行提取，利用背压压力调节器②调节提取器①的压力，相应提取物和超临界二氧化碳进入分离器③进行分离，得到相应的提取物。

但是，在忍冬花的超临界二氧化碳萃取过程中，忍冬花油脂含量低，且大部分为固体脂质，熔点高，提取后很难从分离器③中进行分离。为解决该问题，申请人创造性的提出了以下提取方法。

本发明提供了一种忍冬花提取方法，包括以下步骤：将忍冬花和油料作物进行超临界二氧化碳萃取，分离后得到粗提物；对所述粗提物进行脱蜡处理；所述油料作物包括油茶籽、菜籽、葵花子和橄榄中的一种或多种。

本发明将含油率较高的油茶籽、菜籽、葵花子和橄榄等油料作物作为忍冬花提取的基材，将所述忍冬花和油料作物同时进行超临界二氧化碳萃取，利用超临界二氧化碳及油料作物提取出忍冬花的脂溶性成分(精油和高熔点蜡质等)，有利于后续提取物的分离收集，也有利于提取物的精制。

在一个实施例中，油料作物为油茶籽，忍冬花和油茶籽的重量比为1:5～1:2，优选为1:5～1:4。

本发明所述忍冬花可以为花蕾，也可以为开放的花。在一个实施例中，忍冬花优选为忍冬花花蕾。

本发明在进行超临界二氧化碳萃取之前还包括：将忍冬花进行液氮处理后与油料作物进行混合破碎；所述液氮处理的时间为30～40min，优选为30～35min。植物精油储存于细胞中，采用液氮对忍冬花进行处理，可以破坏细胞结构，提高精油的提取效率，同时忍冬花整体结构变脆方便后续进行破碎，采用破碎后的忍冬花和油料作物可以提高精油的提取率。

在一个实施例中，将忍冬花进行液氮处理后与油茶籽进行混合破碎，所述液氮处理的时间为30～40min，优选为30～35min。在一个实施例中，将忍冬花进行液氮处理后与油茶籽进行混合破碎，所述液氮处理的时间为30min。

混合破碎至忍冬花和油料作物的粒径为4～7μm，优选为4～6μm。在一个实施例中，混合破碎至忍冬花和油茶籽的粒径为4～7μm。

将忍冬花和油料作物进行超临界二氧化碳萃取，所述超临界二氧化碳萃取的压力为250～350bar，优选为250～350bar，温度为50～70℃，优选为50～70℃，时间为3～6h，优选为3～6h；萃取得到的粗提物和超临界二氧化碳进入分离器中进行分离，所述分离压力为45～55bar，优选为50～55bar，温度为30～35℃，优选为32～35℃；得到粗提物。在一个实施例中，将忍冬花和油茶籽进行超临界二氧化碳萃取，所述超临界二氧化碳萃取的压力为250～350bar，温度为50～70℃，时间为3～6h；萃取得到的粗提物和超临界二氧化碳进入分离器中进行分离，所述分离压力为50bar，温度为35℃。

得到粗提物后，进行脱蜡处理，得到提取物。本发明优选将粗提物进行离心，去除杂质后，进行脱蜡处理。所述脱蜡处理具体为：将所述粗提物于4～6℃静置24～36小时，采用离心、抽滤和板框压滤中的一种或多种方法去除固体油脂。在一个实施例中，粗提物于4℃静置24h，离心去除固体油脂。

本发明还包括将脱蜡处理后的提取物进行脱色处理，所述脱色处理具体为：采用活性炭进行脱色处理；所述活性炭与脱蜡处理后的粗提物的重量比为0.005～0.02:1，优选为0.01～0.02:1，更优选为0.01；所述脱色处理温度为80～90℃，优选为80～85℃，更优选为80℃；时间为1～3h，优选为1～2h，更优选为1h；脱色结束后采用真空抽滤，除去活性炭，得到脱色后的提取物。脱色处理过程中温度影响活性成分及油溶性提取物的稳定性。

本发明采用超临界二氧化碳流体提取忍冬花，采用油料作物和忍冬花共同提取，有利于忍冬花从分离器中分离，降低蜡质含量，有利于后续精制处理，得到的忍冬花提取物含有较多的叶绿素，颜色呈现为墨绿色，因此对提取物进行脱色处理有利于应用于化妆品中。

本发明还提供了一种忍冬花提取物，所述忍冬花提取物由上述技术方案提供的方法制备得到，在此不再赘述。

本发明所述忍冬花提取物具有修复细胞损伤、促进成纤维细胞和角质细胞增殖方面的功效。

本发明还提供了一种由上述技术方案提供的方法制备得到忍冬花提取物在制备化妆品中的应用，所述化妆品的形式包括但不限于化妆水、精华、膏霜、乳液、面膜和凝胶。

本发明提供了一种忍冬花提取物、提取方法及其应用，采用油料作物和忍冬花共同作为待提取物，进行超临界二氧化碳流体提取，不仅可以提取忍冬花精油，而且利于忍冬花提取物后续从分离器中分离。同时本发明提供的方法有利于忍冬花提取物后续的精制处理，减少其蜡质含量，去除其颜色，可以用于化妆品的制备。本发明提供的方法制备得到的提取物在修复细胞损伤、促进成纤维细胞和角质细胞增殖方面的功效。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。

图1为超临界二氧化碳流体萃取的工艺流程图(①为提取器，②为背压压力调节器，③为分离器，④为冷却器，⑤为二氧化碳液化装置，⑥为二氧化碳补充罐，⑦为加压装置，⑧为调节阀排空阀门，⑨为加热装置，⑩为分离罐出口，

为二氧化碳出口，

为排空管)；

图2为忍冬花和油茶籽质量比对粗提物收率的影响；

图3为忍冬花和油茶籽的质量比对细胞损伤修复效果的影响；

图4为提取温度对粗提物收率的影响；

图5为提取压力对粗提物收率的影响；

图6为提取载体对提取物收率的影响；

图7为提取过程中忍冬花和油茶籽油提取物颜色和流动性的变化；

图8为不同样品对细胞存活率的影响；

图9为不同样品对细胞损伤修复效果的影响；

图10为I型胶原蛋白标准曲线；

图11为不同样品对成纤维细胞的I型胶原蛋白表达量的影响；

图12为不同样品对成纤维细胞的I型胶原蛋白含量增长率的影响。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。但本发明不限于以下实施例，基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1：

采用索氏提取法分别测得实验用忍冬花和油茶籽的粗油脂的含量分别为3.5％和36.8％。

采用液氮处理忍冬花花蕾30min，破坏忍冬花花蕾细胞结构，蒸发多余的水分。将油茶籽与液氮处理的忍冬花分别按照重量比1:2、1:3、1:4和1:5进行混合后，采用破碎机进行破碎处理，得到预处理后的忍冬花和油茶籽，其粒径为4～7微米。

将经过预处理的忍冬花和油茶籽放入提取器中进行超临界二氧化碳流体萃取，提取器的压力为350bar，温度为60℃，时间为300min，超临界二氧化碳流体进入分离器后进行分离，分离器的压力为50bar，温度为35℃，得到粗提物，计算收率。

收率计算公式为：

粗提物收率(％)＝粗提物质量/(忍冬花质量*粗油脂含量+油茶籽质量*粗油脂含量)*100％；

将得到的粗提物离心去除杂质后，置于4℃中处理24h，蜡质结晶析出后，离心，转速为10000rpm，温度为4℃，时间为1h，离心结束后分离提取物和蜡质，并称重。

表1忍冬花和油茶籽质量比对粗提物收率的影响

表2忍冬花和油茶籽质量比对提取物和蜡质含量的影响

样品	1:2	1:3	1:4	1:5
					提取物含量(％)	93.74	95.40	97.42	97.94
蜡质含量(％)	6.26	4.60	2.58	2.06

表1为忍冬花和油茶籽质量比对粗提物收率的影响，表2为忍冬花和油茶籽质量比对提取物和蜡质含量的影响，图2为忍冬花和油茶籽质量比对粗提物收率的影响。

实验结果表明，忍冬花和油茶籽的质量比为1:4和1:5时，粗提物收率均较忍冬花和油茶籽的质量比为1:3时高，同时蜡质含量较低，精制简单。

实施例2：

表皮损伤修复测试：

将实施例1制备得到的忍冬花和油茶籽的质量比为1:4和1:5的提取物作为待测样品。

表皮细胞复苏后，接种于96孔板中，每孔培养基为100μL，置于37℃，含有5％CO₂的培养箱中培养24h。除空白对照组外，其他孔中表皮细胞均采用0.05％的十二烷基硫酸钠(SLS)处理7min，弃去旧培养基，分别加入含有浓度为0.01％，0.1％，1％的待测样品的新鲜培养液，于37℃，含有5％CO₂的培养箱中继续培养24h。加入3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)溶液培养4h，弃去MTT溶液，加入二甲基亚砜(DMSO)震荡溶解10min，于490nm测定OD值。计算各样品的细胞活率，细胞活率公式为：

细胞存活率(％)＝样品组OD值/空白组OD值*100％

表3忍冬花和油茶籽的质量比对细胞损伤修复效果的影响

表3为忍冬花和油茶籽的质量比对细胞损伤修复效果的影响，图3为忍冬花和油茶籽的质量比对细胞损伤修复效果的影响。实验结果表明，在抗SLS细胞损伤修复功效时，忍冬花和油茶籽的质量比为1:4的提取物效果比1:5的提取物效果更好。因此，忍冬花和油茶籽的质量比优选为1:4。

实施例3：

提取温度对粗提物提取效率及蜡质含量的影响：

根据实施例1的方法制备得到粗提物、提取物和蜡质，其中忍冬花与油茶籽的重量比为1:4，提取温度分别为50、60和70℃。

表4提取温度对粗提物收率的影响

表5提取温度对提取物和蜡质含量的影响

样品	50℃	60℃	70℃
				提取物含量(％)	96.28	96.42	95.68
蜡质含量(％)	3.72	3.58	4.32

表4为提取温度对粗提物收率的影响，表5为提取温度对提取物和蜡质含量的影响，图4为提取温度对粗提物收率的影响。实验结果表明，超临界二氧化碳流体萃取的提取温度为60℃时粗提物的收率最高，同时蜡质的含量比提取温度为70℃时的蜡质含量低，有利于后续进行蜡质的去除。因此，提取温度优选为60℃。

实施例4：

提取压力对粗提物提取效率及蜡质含量的影响：

根据实施例1的方法制备得到粗提物、提取物和蜡质，其中忍冬花与油茶籽的重量比为1:4，提取压力分别为250、300和350bar。

表6提取压力对粗提物收率的影响

表7提取压力对提取物和蜡质含量的影响

样品	250bar	300bar	350bar
				提取物含量(％)	97.55	96.93	96.42
蜡质含量(％)	2.45	3.07	3.58

表6为提取压力对粗提物收率的影响，表7为提取压力对提取物和蜡质含量的影响，图5为提取压力对粗提物收率的影响。实验结果表明，超临界二氧化碳流体萃取的提取压力为350bar时粗提物的收率最高，同时蜡质含量与提取压力为300bar时蜡质含量相差较小。因此，提取压力优选为350bar。

因此，超临界流体二氧化碳萃取忍冬花和油茶籽油的最优提取效率的条件为：忍冬花和油茶籽的质量比为1:4，粒径为4～7微米，提取压力为350bar，温度为60℃。

实施例5：

活性炭用量对提取物脱色效果的影响：

采用实施例4在350bar提取压力下制备得到提取物进行脱色处理，采用搅拌桨对提取物进行搅拌，搅拌速率为200rpm，设置脱色温度为80℃，当提取物达到80℃后，分别采用质量分数为0.5％、1.0％和2.0％的活性炭加入到提取物中，搅拌均匀，脱色时间为1小时。脱色结束后进行真空抽滤，除去活性炭，得到提取物的过滤物，待恢复室温后采用色差仪分别对脱色处理后的提取物进行色度的测定，色度采用La^*b^*值进行表示，通过色差ΔE^* _ab计算脱色前和脱色后的提取物评估脱色效果。色差ΔE^* _ab计算公式如下：

ΔE^* _ab＝(ΔL²+Δa^*2+Δb^*2)^1/2；

其中：ΔL＝L₀-L_n，Δa^*＝a^* ₀-a^* _n，Δb^*＝b^* ₀-b^* _n。

表8活性炭用量对提取物脱色效果的影响

活性炭处理量	0	0.50％	1.00％	2.00％
					L	23.65	20.45	20.30	20.15
a<sup>*</sup>	1.14	1.35	2.76	0.51
					b<sup>*</sup>	-0.65	0.58	2.31	2.26
ΔE<sup>*</sup><sub>ab</sub>	-	3.43	4.75	4.60

表8为活性炭用量对提取物脱色效果的影响。脱色处理前后的忍冬花提取物的色差ΔE^* _ab的结果表明，1％的活性炭处理提取物后脱色效果明显优于0.5％的活性炭的脱色效果，但与2％的活性炭的处理效果相近，从化妆品应用的角度来看1％的活性炭处理后的颜色已经能满足在化妆品中的使用。因此，脱色的活性炭的使用量优选为1％。

实施例6：

脱色时间对提取物脱色效果的影响：

根据实施例5的方法进行提取物的脱色后处理，其中活性炭用量为1％，脱色时间分别为1、2和3h，进行色度测定，通过色差ΔE^* _ab计算脱色前和脱色后的忍冬花液体提取物评估脱色效果。

表9活性炭脱色时间对提取物脱色效果的影响

活性炭处理时间(h)	0	1	2	3
					L	23.65	20.3	20.5	20.7
a<sup>*</sup>	1.14	2.76	2.51	2.44
					b<sup>*</sup>	-0.65	2.31	2.26	2.6
ΔE<sup>*</sup><sub>ab</sub>	-	4.75	4.50	4.58

表9为活性炭脱色时间对提取物脱色效果的影响。实验结果表明，根据脱色处理前后的提取物的色差ΔE^* _ab的结果可知，采用1％的活性炭的进行处理时，脱色处理1h后，随着时间的延长脱色效果没有明显提高。从化妆品应用的角度来看采用1％的活性炭脱色处理1小时后的颜色已经能满足在化妆品中的使用。因此，脱色的时间优选为1小时。

实施例7：

采用实施例4在350bar提取压力下制备得到提取物；

采用实施例4在350bar提取压力下制备得到提取物，其中油茶籽替换为油茶籽油，忍冬花和油茶籽油的质量比为1:1.5(按照忍冬花和油茶籽的1:4的重量比中忍冬花及油茶籽油的含量来设定)，测定收率。

表10提取载体对提取物收率的影响

表10为提取载体对提取物收率的影响，图6为提取载体对提取物收率的影响，图7为提取过程中忍冬花和油茶籽油提取物颜色和流动性的变化。实验结果表明，忍冬花和油茶籽采用超临界二氧化碳萃取得到的提取物含有较多的叶绿素，颜色呈现为墨绿色。在提取过程中，采用忍冬花和油茶籽混合破碎后进行提取，忍冬花提取物和油茶籽油以比较均匀混合的状态提取出来并在分离罐中进行充分的分离和排出。采用油茶籽油作为夹带剂，如表9和图7所示，图7以油茶籽油作为对照，忍冬花和油茶籽油采用超临界二氧化碳萃取过程中，提取时间为0～180min时，粗提物提取效率较高，提取得到的提取物颜色较淡，流动性好，说明忍冬花的提取效率较低；提取时间为180～300min时，得到的提取物与单独的忍冬花提取时相似，大部分都是深绿色的提取物，提取时间为240～300min时，提取物流动性降低，温度降低后发生凝固，影响后续的脱色及脱蜡，整体对比来看，高熔点油脂分离困难。

实施例8：

细胞毒性测试(MTT测试)：

待测样品为：

对照样-1：根据实施例4在350bar提取压力下制备得到提取物，其中忍冬花含量为零；

对照样-2制备方法：根据实施例4在350bar提取压力下制备得到提取物，其中未进行脱蜡处理；

对照样-3制备方法：根据实施例6在1h脱色时间下制备得到脱色处理后提取物，其中未进行脱蜡处理；

对照样-4制备方法：根据实施例6在1h脱色时间下制备得到脱色处理后提取物，其中油茶籽替换为油茶籽油，忍冬花和油茶籽油的重量比为1:1.5；

处理样：按照实施例6在1h脱色时间下制备得到脱色处理后提取物。

进行表皮细胞毒性测试，具体步骤为：

表皮细胞复苏后，接种于96孔板中，每孔培养基为100μL，置于37℃，含有5％CO₂的培养箱中培养24h。弃去旧培养基，分别加入100μL含有浓度为0.01％，0.1％和1％的待测样品的新鲜培养液培养24h，弃去培养液，加入MTT溶液培养4h。弃去MTT溶液，加入DMSO溶解10min，于490nm测定OD值。

计算各样品的细胞活率：

细胞活率(％)＝样品组OD值/空白组OD值*100％

表11不同样品处理对细胞存活率的影响

表11为不同样品处理对细胞存活率的影响，图8为不同样品对细胞存活率的影响。实验结果表明，油茶籽提取物、忍冬花和油茶籽提取物均没有毒性。随着忍冬花和油茶籽提取物的添加浓度的增加，表皮细胞细胞的存活率增大，显示出促进细胞增殖的功效。未经过脱蜡和脱色处理的忍冬花和油茶籽提取物的效果最好，脱色后对细胞增殖的作用略有降低。

实施例9：

抗SLS损伤修复测试：

采用实施例8的测试样品进行实验。

表皮细胞复苏后，接种于96孔板中，每孔培养基为100μL，置于37℃，含有5％CO₂的培养箱中培养24h。除空白对照组外，其他孔均加入0.05％的SLS处理7min后，弃去旧培养基，分别加入含有浓度为0.01％，0.1％，1％的待测样品的新鲜培养液，于37℃，含有5％CO₂的培养箱继续培养24h。加入MTT溶液培养4h，弃去MTT溶液，加入DMSO震荡溶解10min，于490nm测定OD值。

计算各样品的细胞活率：

细胞活率(％)＝样品组OD值/空白组OD值*100％

表12不同样品处理对细胞损伤修复效果的影响

表12为不同样品处理对细胞损伤修复效果的影响，图9为不同样品对细胞损伤修复效果的影响。实验结果表明，细胞经过SLS损伤后，细胞的存活率下降到65.72％，油茶籽油处理SLS损伤后的细胞的结果表明细胞的损伤修复效果不明显，忍冬花和油茶籽混合提取物处理后，修复效果明显，SLS损伤后的细胞的存活率提升到80％左右。忍冬花和油茶籽混合提取物进行脱色处理后功效略有下降。

实施例10：

促进胶原蛋白表达：

1)细胞接种：将人皮肤成纤维细胞悬液密度调整至0.9×10⁵个/mL后接种于96孔板，每孔细胞悬液为100μL，置于37℃，含有5％CO₂的培养箱中培养24h；

2)待测样品稀释与加样：以完全培养基为稀释液，采用实施例8的测试样品，将测试样品稀释至工作浓度(1％)加入细胞悬液中，每孔稀释样品为100μL，空白对照组加入100μL培养基，置于37℃，含有5％CO₂的培养箱内培养24h；

3)通过ELISA法检测人I型胶原蛋白(COL-I)含量，操作步骤如下：

A)预先计算好所需的酶标条，实验前30min拿出试剂盒，恢复至室温；

B)标准品梯度稀释：用标准品&样品稀释液将标准品倍比稀释为10、5、2.5、1.25、0.63和0ng/mL；

C)小心收集细胞培养上清液到无菌离心管中，4℃离心20min，转速为1000×g，取上清，将1倍稀释作为检测样本；

D)各反应孔中加入100μL标准品工作液及检测样本，各组均设2个重复，于37℃孵箱孵育90min；

E)弃去液体，甩干，各反应孔中加入100μL生物素标记I型胶原α1抗体工作液至反应孔中，于37℃孵箱孵育60min；

F)弃去液体，甩干，各反应孔中加入300μL洗涤液，浸泡1～2min后甩干，重复4次；

G)各反应孔中加入100μLHRP标记链霉亲和素工作液至反应孔中，于37℃孵箱孵育30min；

H)各反应孔中加入300μL洗涤液，间隔30s，甩干洗涤液。重复4次。

I)各反应孔中加入90μL显色剂至反应孔中，于37℃避光显色15min左右。

J)各反应孔中加入50μL终止液，即刻用酶标仪450nm波长下测量OD值

K)根据标准品的己知浓度和所测OD值计算标准曲线回归方程(R²>0.99)，将样品孔的OD值代入计算所测样品的浓度，再乘稀释倍数即得到原样品的实际COL-I浓度。

表13标准I型胶原蛋白吸光值

浓度(ng/ml)	吸光值
		20	1.9998
10	1.0277
		5	0.5711
2.5	0.3528
		1.25	0.2464
0.63	0.1771
		0.31	0.1534
0	0.0711

表14不同样品对成纤维细胞的I型胶原蛋白表达量的影响

表13为标准I型胶原蛋白吸光值，表14为不同样品对成纤维细胞的I型胶原蛋白表达量的影响，图10为I型胶原蛋白标准曲线，图11为不同样品对成纤维细胞的I型胶原蛋白表达量的影响，图12为不同样品对成纤维细胞的I型胶原蛋白含量增长率的影响。

实验结果表明，通过成纤维细胞的I型胶原蛋白表达量的测定结果显示，油茶籽油对I型胶原蛋白表达量有促进作用，I型胶原蛋白表达增加了5.57％。忍冬花和油茶籽未经过脱蜡和脱色处理的提取物对I型胶原蛋白表达量有明显的促进作用，I型胶原蛋白表达增加了12.22％。忍冬花和油茶籽提取物经过脱色后，功效略有下降，I型胶原蛋白表达量的增加率为9.59％。

以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。

Claims (10)

1.一种忍冬花提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

将忍冬花和油料作物进行超临界二氧化碳萃取，分离后得到粗提物；

对所述粗提物进行脱蜡处理；

所述油料作物包括油茶籽、菜籽、葵花子和橄榄中的一种或多种。

2.根据权利要求1所述的忍冬花提取方法，其特征在于，所述超临界二氧化碳萃取的压力为250～350bar，温度为50～70℃，时间为3～6h。

3.根据权利要求1所述的忍冬花提取方法，其特征在于，所述油料作物为油茶籽，所述忍冬花和油茶籽的重量比为1:5～1:2。

4.根据权利要求1所述的忍冬花提取方法，其特征在于，进行超临界二氧化碳萃取之前还包括：

将忍冬花进行液氮处理后与油料作物进行混合破碎；

所述液氮处理的时间为30～40min。

5.根据权利要求4所述的忍冬花提取方法，其特征在于，混合破碎至所述忍冬花和油料作物的粒径为4～7μm。

6.根据权利要求1所述的忍冬花提取方法，其特征在于，所述脱蜡处理具体为：将所述粗提物于4～6℃静置24～36小时，采用离心、抽滤和板框压滤中的一种或多种方法去除固体油脂。

7.根据权利要求1所述的忍冬花提取方法，其特征在于，还包括：对脱蜡处理后的提取物进行脱色处理。

8.根据权利要求7所述的忍冬花提取方法，其特征在于，所述脱色后处理具体为：采用活性炭进行脱色处理；

所述活性炭与脱蜡处理后的提取物的重量比为0.005～0.02:1，所述脱色处理温度为80～90℃，时间为1～3h。

9.一种忍冬花提取物，其特征在于，由权利要求1～8任意一项所述的方法制备得到。

10.权利要求1～8任意一项所述的方法制备得到忍冬花提取物在制备化妆品中的应用。

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