CN114272281A - 一种治疗早期肝硬化的中药复方药物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于治疗早期肝硬化的药物组合物，该药物组合物包括黄芪、当归、红花、鸡血藤和龙胆草，以重量比计，黄芪∶当归∶红花∶鸡血藤∶龙胆草比例为(1～5)∶(1～2)∶(1～2)∶(1～8)∶(1～4)，其制备方法简单，对早期肝硬化大鼠和小鼠，可降低血清转氨酶活性、升高血清白蛋白水平、减轻肝脏胶原沉积程度、改善肝脏损伤和早期肝硬化病理变化，具有预防和治疗早期肝硬化病变的作用。

Description

一种治疗早期肝硬化的中药复方药物

技术领域

本申请属于中药领域，具体涉及治疗早期肝硬化的药物组合物及其制备方法和用途，该药物组合物由黄芪、当归、红花、鸡血藤和龙胆草组成。

背景技术

肝硬化是多数慢性肝病的终末期阶段，肝组织病理组织学上有广泛的肝细胞坏死、残存肝细胞结节性再生、结缔组织增生与纤维间隔形成导致肝小叶结构破坏和假小叶形成，肝脏逐渐变形、变硬而发展为肝硬化。在我国，肝硬化主要由慢性病毒性(乙型、丙型)肝炎、脂肪性肝炎、胆汁淤积性肝炎、中毒性肝炎等演变而来。早期肝硬化由于肝脏代偿功能较强可无明显症状，后期则以明显肝功能损害和门脉高压为主要表现，并有多系统受累，晚期常出现脾功能亢进、上消化道出血、腹水、肝性脑病、继发感染、癌变等并发症。

肝硬化持续发展导致相应器官功能障碍与衰竭，严重危害生命健康，因此，减缓、阻止和逆转早期肝硬化是慢性肝病的重要治疗策略，临床上迫切需要研制安全有效的抗早期肝硬化药物。肝硬化的病因繁多，发病机制错综复杂。显然，对于复杂的病变，仅仅作用于某一单一环节或单个靶点予以治疗效果不够理想。目前，西医采用对症治疗的综合处理方式，易产生肝肾毒性等毒副作用，且没有一种针对性药物或一个方案解决肝硬化等诸多问题。长期临床实践尤其是近年的研究已充分证实，中医药在抗肝硬化治疗方面具有非常突出的优势，具有广阔的应用前景。中药复方由多种成分组成，往往具有多途径、多环节、多层次、多靶点的作用特点，对于肝硬化这种复杂的病理表现，具有整体综合调节的作用。

临床信息的综合分析提示，气虚血瘀是肝硬化的基本病机，湿热内蕴是其主要证候病机；中医的“复方鳖甲软肝片”、“扶正化瘀片”等治疗肝病中成药，或倾向于软坚散结、活血祛瘀、益气养血，轻于清热燥湿、泻肝胆火，其疗效均不甚理想。结合多种不同功效(益气、祛瘀、养血、清热利湿)方剂，更可能有助于早期肝硬化的肝组织病理组织学逆转。

发明内容

本发明的主要目的是提供一种疗效确切、副作用少、天然安全的治疗早期肝硬化的药物，以解决现有技术中的常见的药物易产生肝肾毒性，疗效不佳、缺乏治疗特异性的问题。

为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种用于治疗早期肝硬化的药物组合物，该药物组合物包括黄芪、当归、红花、鸡血藤和龙胆草，以重量比计，黄芪∶当归∶红花∶鸡血藤∶龙胆草比例为(1～5)∶(1～2)∶(1～2)∶(1～8)∶(1～4)。

进一步地，该药物组合物包括黄芪、当归、红花、鸡血藤和龙胆草，以重量比计，黄芪∶当归∶红花∶鸡血藤∶龙胆草比例为(1～5)∶(1～2)∶(1～2)∶(1～8)∶(2～4)。

进一步地，该药物组合物包括黄芪、当归、红花、鸡血藤和龙胆草，以重量比计，黄芪∶当归∶红花∶鸡血藤∶龙胆草比例为约1∶约1∶约1∶约1∶约1。

进一步地，该药物组合物包括黄芪、当归、红花、鸡血藤和龙胆草，当归与黄芪的重量比值为约1，且红花与黄芪的重量比值为约1，且鸡血藤与黄芪的重量比值为约1，且龙胆草与黄芪的重量比值为约1。

进一步地，该药物组合物包括黄芪、当归、红花、鸡血藤和龙胆草，以重量比计，黄芪∶当归∶红花∶鸡血藤∶龙胆草比例为约1∶约2∶约1∶约1∶约2。

进一步地，该药物组合物包括黄芪、当归、红花、鸡血藤和龙胆草，当归与黄芪的重量比值为约2，且红花与黄芪的重量比值为约1，且鸡血藤与黄芪的重量比值为约1，且龙胆草与黄芪的重量比值为约2。

进一步地，该药物组合物包括黄芪、当归、红花、鸡血藤和龙胆草，以重量比计，黄芪∶当归∶红花∶鸡血藤∶龙胆草比例为约5∶约1∶约2∶约8∶约4。

进一步地，该药物组合物包括黄芪、当归、红花、鸡血藤和龙胆草，当归与黄芪的重量比值为约0.2，且红花与黄芪的重量比值为约0.4，且鸡血藤与黄芪的重量比值为约1.6，且龙胆草与黄芪的重量比值为约0.8。

进一步地，该药物组合物进一步包含一种或多种用于治疗早期肝硬化的中药复方制剂。

进一步地，该中药复方制剂为复方鳖甲软肝片或安络化纤丸。

进一步地，该药物组合物为中药组合物。

根据本发明的另一方面，提供了一种药物制剂，包含上述药物组合物和药学上可接受的辅料。

进一步地，该辅料选自以下中的一种或多种：稀释剂、润湿剂、粘合剂、崩解剂、包合剂、矫味剂、缓释剂、助留剂、润滑剂、分散剂、增塑剂、遮光剂和抗氧化剂。

进一步地，该药物制剂为散剂、片剂、滴丸剂、胶囊剂、膜剂、锭剂、颗粒剂或口服液。

根据本发明的另一方面，提供了一种用于制备上述药物组合物的方法，该方法包括如下步骤：

(1)按比例称取适量的黄芪、当归、红花、鸡血藤和龙胆草；

(2)加热回流或超声提取1至3次，每次用水或醇的重量为药材总重量的6至15倍，每次提取1至3小时，得到提取液；

(3)将该提取液过滤后，合并滤液并浓缩成浓缩液；以及

(4)在50～65℃的温度下干燥该浓缩液，得到该药物组合物。

进一步地，该提取为加热回流提取。

进一步地，该提取的次数为2次，第一次用水或醇的重量为药材总重量的8至10倍，第二次用水或醇的重量为药材总重量的6至8倍。

进一步地，该醇为60～95％的乙醇水溶液。

进一步地，该提取的时间为1至1.5小时。

进一步地，在55～60℃的温度下干燥该浓缩液。

根据本发明的另一方面，提供了一种上述药物组合物或上述药物制剂在制备用于预防和/或治疗早期肝硬化的药物中的用途。

进一步地，该早期肝硬化不是肝纤维化。

进一步地，该肝硬化不是脂肪性肝硬化。

进一步地，该肝硬化是胆汁淤积型肝硬化。

进一步地，该肝硬化是胆汁淤积型肝硬化伴门静脉高压症。

进一步地，该肝硬化是由化学致癌剂诱发的肝硬化。

进一步地，该化学致癌剂是具有肝脏化学毒性的化学致癌剂。

进一步地，该化学致癌剂是具有中毒剂和诱癌剂双重作用的化学致癌剂。

进一步地，该化学致癌剂是二乙基亚硝胺。

本发明的有益效果：

本发明的药物组合物，分别采用胆管结扎与二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine，DEN)诱导早期肝硬化模型，并运用“均匀设计”筛选以及反复验证，结果证实，本发明的该药物组合物制备方法简单，对早期肝硬化大鼠和小鼠，可降低血清转氨酶活性、升高血清白蛋白水平、减轻肝脏胶原沉积程度、改善肝脏损伤和早期肝硬化病理变化，具有预防和治疗早期肝硬化病变的作用。

附图说明

为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，还可以根据这些附图获得其他的附图，而并不超出本申请要求保护的范围。

图1是本发明的制备实施例所采用的均匀设计实验方案。

图2是不同比例的药物组合物对胆管结扎大鼠肝组织胶原沉积的影响。

图3是特定比例的药物组合物(黄芪、当归、红花、鸡血藤、龙胆草重量比例为5∶1∶2∶8∶4)对胆管结扎导致早期肝硬化大鼠肝组织胶原沉积的影响。

图4是特定比例的药物组合物(黄芪、当归、红花、鸡血藤、龙胆草重量比例为5∶1∶2∶8∶4)对DEN诱导早期肝硬化模型小鼠肝组织胶原沉积的影响。

图中N-表示正常组；M-表示模型对照组；组1-9表示黄芪、当归、红花、鸡血藤、龙胆草按照表不同配比的药物组合物；L-表示大鼠按3.75g生药/kg剂量，小鼠按5.4g生药/kg剂量；Me-表示大鼠按7.5g生药/kg剂量，小鼠按10.8g生药/kg剂量；H-表示大鼠按15g生药/kg剂量，小鼠按21.6g生药/kg剂量；P-表示阳性对照组，大鼠按0.6g/kg剂量用复方鳖甲软肝片，小鼠按0.86g/kg剂量用复方鳖甲软肝片。

具体实施方式

下面将结合本申请实施例中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。

说明书和所附权利要求中所用的单数形式“一个”，“一种”和“所述”包括复数指示物，除非上下文另有明确规定。

除非另有说明，否则本文中的所有百分比，比率和比例均以重量计。除非有明确的相反表示，否则组分的重量百分比(重量％，还表示为wt％计)是基于其中包含该组分的组合物的总重量(例如，基于组合物的总量)。

在本发明中，术语“包括”与“包含”同义。本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。

正如背景技术部分所描述的，现有的用于治疗早期肝硬化的常见药物易产生肝肾毒性，疗效不佳、缺乏治疗特异性的问题。为了解决上述问题，本发明提供了一种用于治疗早期肝硬化的药物组合物，该药物组合物包括黄芪、当归、红花、鸡血藤和龙胆草，以重量比计，黄芪∶当归∶红花∶鸡血藤∶龙胆草比例为(1～5)∶(1～2)∶(1～2)∶(1～8)∶(1～4)。

在本发明中，比例、当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“1～9”时，所描述的范围应被解释为包括范围“1～8”、“1～7”、“1～6”、“1～5”、“1～4”、“1～3”、“1～2”、“2～3”、“3～4”、“4～5”、“5～6”、“6～7”、“7～8”、“8～9”、“3～5”、“4～6”、“5～7”、“6～8”、“7～9”、“2～5”、“3～6”、“4～7”、“5～8”、“6～9”、“2～6”、“3～7”、“4～8”、“5～9”、“2～7”、“3～8”、“4～9”、“2～8”、“3～9”和“2～9”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。

在一种优选的实施方式中，该药物组合物包括黄芪、当归、红花、鸡血藤和龙胆草，以重量比计，黄芪∶当归∶红花∶鸡血藤∶龙胆草比例为(1～5)∶(1～2)∶(1～2)∶(1～8)∶(2～4)。

在一种优选的实施方式中，该药物组合物包括黄芪、当归、红花、鸡血藤和龙胆草，以重量比计，黄芪∶当归∶红花∶鸡血藤∶龙胆草比例为约1∶约1∶约1∶约1∶约1。

在本发明中，“约”是指一个特定值的±5％范围的值。例如，“约1”包括1的±5％，或从0.95到1.05。

本发明的上述特定比例的中药复方药物对早期肝硬化大鼠和小鼠，可降低血清转氨酶活性、升高血清白蛋白水平、减轻肝脏胶原沉积程度、改善肝脏损伤和早期肝硬化病理变化，具有预防和治疗早期肝硬化病变的作用。

在一种优选的实施方式中，该药物组合物包括黄芪、当归、红花、鸡血藤和龙胆草，当归与黄芪的重量比值为约1，且红花与黄芪的重量比值为约1，且鸡血藤与黄芪的重量比值为约1，且龙胆草与黄芪的重量比值为约1。

在一种优选的实施方式中，该药物组合物包括黄芪、当归、红花、鸡血藤和龙胆草，以重量比计，黄芪∶当归∶红花∶鸡血藤∶龙胆草比例为约1∶约2∶约1∶约1∶约2。

在本发明中，“约”是指一个特定值的±5％范围的值。例如，“约1”包括1的±5％，或从0.95到1.05；“约2”包括2的±5％，或从1.9到2.1。

在一种优选的实施方式中，该药物组合物包括黄芪、当归、红花、鸡血藤和龙胆草，当归与黄芪的重量比值为约2，且红花与黄芪的重量比值为约1，且鸡血藤与黄芪的重量比值为约1，且龙胆草与黄芪的重量比值为约2。

在一种优选的实施方式中，该药物组合物包括黄芪、当归、红花、鸡血藤和龙胆草，以重量比计，黄芪∶当归∶红花∶鸡血藤∶龙胆草比例为约5∶约1∶约2∶约8∶约4。

在本发明中，“约”是指一个特定值的±5％范围的值。例如，“约5”包括5的±5％，即从4.75到5.25；“约1”包括1的±5％，或从0.95到1.05；“约2”包括2的±5％，即从1.9到2.1；“约8”包括8的±5％，即从7.6到8.4；“约4”包括4的±5％，即从3.8到4.2。

本发明的上述特定比例的中药复方药物，经胆管结扎及二乙亚硝胺(DEN)腹腔注射诱导的大鼠/小鼠早期肝硬化模型实验(模型发展过程中介入干预)，并运用“均匀设计”筛选以及反复验证，本剂量配比复方药物与其他剂量配伍对照研究，结果证实，本复方药物可显著降低模型大鼠/小鼠血清ALT、AST活性、降低血清胆红素水平、减轻肝脏炎症及早期肝硬化，明显优于其他配伍比例组方；所述复方药物可用于制备早期肝硬化药物。

在一种优选的实施方式中，该药物组合物包括黄芪、当归、红花、鸡血藤和龙胆草，当归与黄芪的重量比值为约0.2，且红花与黄芪的重量比值为约0.4，且鸡血藤与黄芪的重量比值为约1.6，且龙胆草与黄芪的重量比值为约0.8。

在一种优选的实施方式中，该药物组合物进一步包含一种或多种用于治疗早期肝硬化的中药复方制剂。

在一种优选的实施方式中，该中药复方制剂为复方鳖甲软肝片或安络化纤丸。

其中，复方鳖甲软肝片，软坚散结，化瘀解毒，益气养血。用于早期肝硬化属瘀血阻络、气血亏虚兼热毒未尽证。症见：胁肋隐痛或胁下痞块，面色晦暗.脘腹胀满，纳差便溏，神疲乏力，口干且苦，赤缕红丝等。

其中，安络化纤丸，健脾养肝、凉血活血、软坚散结，用于慢性乙型肝炎、乙肝后早、中期肝硬化，表现为肝脾两虚、瘀热互结证候者，症见：胁肋疼痛、脘腹胀满、神疲乏力、口干咽燥、纳食减少、便溏不爽、小便黄等。

在一种优选的实施方式中，该药物组合物为中药组合物或者中药组合物和其它用于治疗早期肝硬化的药物和/或提取物的组合。

根据本发明的另一方面，提供了一种药物制剂，包含上述药物组合物和药学上可接受的辅料。

在一种优选的实施方式中，本发明的药物制剂含有相对于药物制剂的重量计算总量为0.00001至50wt.％、或0.0001至10wt.％、或0.0001至5wt.％、或0.005至1wt.％、或0.1至20wt.％、或0.5至15wt.％、或1至5wt.％的至少一种药学上可接受的辅料。

在本发明中，术语“药学上可接受”这里指一种物质，如载体或稀释液，不会使化合物的生物活性或性质消失，且相对无毒，如，给予个体某物质，不会引起不想要的生物影响或以有害的方式与任何其含有的组分相互作用。

在本发明中，术语“药学上可接受的辅料”是指在药理学和/或生理学上与受试者和活性成分相容(即，能够引发所需的治疗效果而不会引起任何不希望的局部或全身作用)的载体和/或赋形剂，其是本领域公知的(参见例如Remington′s PharmaceuticalSciences.Edited by Gennaro AR，19th ed.Pennsylvania：Mack Publishing Company，1995)。

在一种优选的实施方式中，该辅料选自以下中的一种或多种：稀释剂、润湿剂、粘合剂、崩解剂、包合剂、矫味剂、缓释剂、助留剂、润滑剂、分散剂、增塑剂、遮光剂和抗氧化剂。

本领域技术人员将知晓如何选择具体的在上述辅料类别范围内的化学物质。例如，稀释剂可选自于以下组中：糖粉、糊精、淀粉、可压性淀粉、乳糖、微晶纤维素、甘露醇、山梨醇、硫酸钙和碳酸钙。润湿剂可选自于以下组中：泊洛沙姆、聚氧乙烯醚、聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪酸酯、聚乙二醇脂肪酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚氧乙烯烷基醚、聚山梨醇酯如聚山梨醇酯80、鲸蜡醇、甘油脂肪酸酯(如三醋精、甘油单硬脂酸酯和类似物)、硬脂酸聚甲醛、十二烷基硫酸钠、山梨醇脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、苯扎氯铵、聚氧乙烯蓖麻油和多库酯钠。粘合剂可选自于以下组中：羟丙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和甲基纤维素。崩解剂可选自于以下组中：羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙盐、以及羧甲基纤维素钠。矫味剂可选自于以下组中：甘露糖、山梨醇、葡萄糖、蔗糖和乳糖。分散剂可选自于以下组中：交联羧甲基纤维素钠、淀粉甘醇钠和预明胶化的玉米淀粉。增塑剂可以是二丁基癸二酸酯和/或各种柠檬酸酯。缓释剂可选自于以下组中：羟丙基甲基纤维素、微晶纤维素、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、低取代的羟丙基纤维素、阿拉伯胶、明胶和紫胶。抗氧化剂可选自于以下组中：亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠和硫代硫酸钠。润滑剂可选自于以下组中：硬脂酸镁、硬脂酸、硬脂酸钙、滑石粉和胶态二氧化硅。这些辅料优选为药物惰性的，或者可以具有协同或增加作用，以增强药物组合物的治疗活性。

在一种优选的实施方式中，该药物制剂为散剂、片剂、滴丸剂、胶囊剂、膜剂、锭剂、颗粒剂或口服液。

根据本发明的另一方面，提供了一种用于制备上述药物组合物的方法，该方法包括如下步骤：

(1)按比例称取适量的黄芪、当归、红花、鸡血藤和龙胆草；

(2)加热回流或超声提取1至3次，每次用水或醇的重量为药材总重量的6至15倍，每次提取1至3小时，得到提取液；

(3)将该提取液过滤后，合并滤液并浓缩成浓缩液；以及

(4)在50～65℃的温度下干燥该浓缩液，得到该药物组合物。

在一种优选的实施方式中，该提取为加热回流提取。

在一种优选的实施方式中，该提取的次数为2次，第一次用水或醇的重量为药材总重量的8至10倍，第二次用水或醇的重量为药材总重量的6至8倍。

在一种优选的实施方式中，该醇为60～95％的乙醇水溶液。

在一种优选的实施方式中，该提取的时间为1至1.5小时。

在一种优选的实施方式中，在55～60℃的温度下干燥该浓缩液。

根据本发明的另一方面，提供了一种上述药物组合物或上述药物制剂在制备用于预防和/或治疗早期肝硬化的药物中的用途。

在本发明中，术语“治疗”也包括“预防”，除非存在与此相反的具体说明。术语“治疗(的)”和“治疗(地)”应该作相应的理解。

在本发明中，术语“治疗”，包括缓和、抑制或改善疾病的症状或状况；抑制并发症的产生；改善或预防潜在代谢综合症；抑制疾病或症状的产生，如控制疾病或情况的发展；减轻疾病或症状；使疾病或症状减退；减轻由疾病或症状引起的并发症，或预防或治疗由疾病或症状引起的征兆。如本文所用，某一药物组合物或某一药物制剂，给药后，可以使某一疾病、症状或情况得到改善，尤指其严重度得到改善，延迟发病，减缓病情进展，或减少病情持续时间。无论固定给药或临时给药、持续给药或断续给药，可以归因于或与给药有关的情况。

在一种优选的实施方式中，该早期肝硬化不是肝纤维化。

在一种优选的实施方式中，该肝硬化不是脂肪性肝硬化。

在一种优选的实施方式中，该肝硬化是胆汁淤积型肝硬化。

在一种优选的实施方式中，该肝硬化是胆汁淤积型肝硬化伴门静脉高压症。

在一种优选的实施方式中，该肝硬化是由化学致癌剂诱发的肝硬化。

在一种优选的实施方式中，该化学致癌剂是具有肝脏化学毒性的化学致癌剂。

在一种优选的实施方式中，该化学致癌剂是具有中毒剂和诱癌剂双重作用的化学致癌剂。

在一种优选的实施方式中，该化学致癌剂是二乙基亚硝胺。

本发明还提供一种上述药物组合物或上述药物制剂，用于预防或治疗受试者中的早期肝硬化。

本发明还提供一种预防或治疗受试者中的早期肝硬化的方法，包括向该受试者施用有效量的上述药物组合物或上述药物制剂。

在本发明中，术语“受试者”是哺乳动物。哺乳动物可以是人、非人灵长类动物、小鼠、大鼠、狗、猫、马或牛，但不限于这些实例。除人以外的哺乳动物可以有利地用作代表早期肝硬化模型的受试者。优选地，所述受试者是人。

本发明所用的药物组合物或制剂的“有效量”可以获得所需要的治疗和/或预防效果。对此用途有效的量将取决于例如药物组合物、给药方式、治疗的疾病的阶段和严重性、个体体重和总体健康状况、以及处方医师的判断。剂量的给予可以每周一次，或两天或每天一次，或甚至每天几次。可以在短期(例如数周至数月)或更长时间段(数月至数年)给予剂量单元。

需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将结合实施例来详细说明本发明。

以下结合具体实施例对本发明作进一步详细描述，这些实施例不能理解为限制本申请所要求保护的范围。

实施例

本发明的制备实施例采用均匀设计实验方案，考察剂量在0-45g之间，按照均匀设计表格安排各因子及水平，进行组方设计，共构建9组药物组合物。

制备实施例一

取中药材黄芪5g、当归10g、红花20g、鸡血藤35g和龙胆草40g，水煎煮2次，从沸腾计时每次1小时，第一次煎煮用水质量为1.1kg(为总药材质量的10倍)，第二次煎煮用水质量为0.88kg(为总药材质量的8倍)，合并两次煎煮液，浓缩为浓缩液，并在60℃的温度下干燥，得到组1的药物组合物。

制备实施例二

取中药材黄芪10g、当归20g、红花40g、鸡血藤25g和龙胆草35g，水煎煮2次，从沸腾计时每次1小时，第一次煎煮用水质量为1.3kg(为总药材质量的10倍)，第二次煎煮用水质量为1.04kg(为总药材质量的8倍)，合并两次煎煮液，浓缩为浓缩液，并在60℃的温度下干燥，得到组2的药物组合物。

制备实施例三

取中药材黄芪15g、当归30g、红花15g、鸡血藤15g和龙胆草30g，水煎煮2次，从沸腾计时每次1小时，第一次煎煮用水质量为1.05kg(为总药材质量的10倍)，第二次煎煮用水质量为0.84kg(为总药材质量的8倍)，合并两次煎煮液，浓缩为浓缩液，并在60℃的温度下干燥，得到组3的药物组合物。

制备实施例四

取中药材黄芪20g、当归40g、红花35g、鸡血藤5g和龙胆草25g，水煎煮2次，从沸腾计时每次1小时，第一次煎煮用水质量为1.25kg(为总药材质量的10倍)，第二次煎煮用水质量为1kg(为总药材质量的8倍)，合并两次煎煮液，浓缩为浓缩液，并在60℃的温度下干燥，得到组4的药物组合物。

制备实施例五

取中药材黄芪25g、当归5g、红花10g、鸡血藤40g和龙胆草20g，水煎煮2次，从沸腾计时每次1小时，第一次煎煮用水质量为1kg(为总药材质量的10倍)，第二次煎煮用水质量为0.8kg(为总药材质量的8倍)，合并两次煎煮液，浓缩为浓缩液，并在60℃的温度下干燥，得到组5的药物组合物。

制备实施例六

取中药材黄芪30g、当归15g、红花30g、鸡血藤30g和龙胆草15g，水煎煮2次，从沸腾计时每次1小时，第一次煎煮用水质量为1.2kg(为总药材质量的10倍)，第二次煎煮用水质量为0.96kg(为总药材质量的8倍)，合并两次煎煮液，浓缩为浓缩液，并在60℃的温度下干燥，得到组6的药物组合物。

制备实施例七

取中药材黄芪35g、当归25g、红花5g、鸡血藤20g和龙胆草10g，水煎煮2次，从沸腾计时每次1小时，第一次煎煮用水质量为0.95kg(为总药材质量的10倍)，第二次煎煮用水质量为0.76kg(为总药材质量的8倍)，合并两次煎煮液，浓缩为浓缩液，并在60℃的温度下干燥，得到组7的药物组合物。

制备实施例八

取中药材黄芪40g、当归35g、红花25g、鸡血藤10g和龙胆草5g，水煎煮2次，从沸腾计时每次1小时，第一次煎煮用水质量为1.15kg(为总药材质量的10倍)，第二次煎煮用水质量为0.92kg(为总药材质量的8倍)，合并两次煎煮液，浓缩为浓缩液，并在60℃的温度下干燥，得到组8的药物组合物。

制备实施例九

取中药材黄芪45g、当归45g、红花45g、鸡血藤45g和龙胆草45g，水煎煮2次，从沸腾计时每次1小时，第一次煎煮用水质量为2.25kg(为总药材质量的10倍)，第二次煎煮用水质量为1.8kg(为总药材质量的8倍)，合并两次煎煮液，浓缩为浓缩液，并在60℃的温度下干燥，得到组9的药物组合物。

药理活性评价

实施例1

运用胆管结扎复制大鼠早期肝硬化模型、采用均匀设计方法获得最佳的防治早期肝硬化的中药配比组合物

1、材料和方法

1.1材料

1.1.1动物：SD雄性大鼠87只，清洁级，体重(170±10)g，由中科院上海实验动物中心提供。

1.1.2主要试剂及药物：黄芪、当归、红花、鸡血藤、龙胆草，购于上海华宇制药有限公司；肝功能(血清ALT、AST)、总胆红数(TBil)，购自南京建成生物工程研究所；羟脯氨酸标准品、分析纯，日本株式会社产品。

方法

1.2.1均匀设计药物筛选实验：87只大鼠随机分正常组(6只)及造模组(81只)。造模组大鼠沿腹正中线切开，暴露胆总管，逆行向肝门部注入硬化剂，远近端结扎胆总管，关腹；假手术仅开腹并游离胆总管后关腹，模型5周。第2周开始，造模组按后述“均匀设计”实验方案分为1-9组，每组8只；模型组9只。分别按均匀设计给药方案，将上述制备实施例1-9的药物组合物浸膏，以生理盐水配置成0.75g生药/ml，大鼠按7.5g生药/kg(10ml/kg)体重灌胃，模型组给予等量饮用水。5周末，大鼠以2％戊巴比妥钠按2ml/kg剂量腹腔注射麻醉，下腔静脉采血，离心分离血清、取肝组织备检。

1.2.2均匀设计实验方案：参照图1，方中黄芪、当归、红花、鸡血藤、龙胆草五味中药作为考察因子，每个因子分别取9个水平(即呈梯度递增的9种不同剂量)，考察剂量在5-45g之间，按照均匀设计表格安排各因子及水平，进行组方设计，共9组。

1.2.4筛选指标：血清ALT、AST、TBil、肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量。

1.2.5统计方法数据均采用SPSS 24.0软件包进行统计分析。组间比较使用q检验，p＜0.05表示有统计学意义。

均匀设计药物筛选实验结果如表1所示。

表1 ALT、AST、TBil、Hyp含量测定

其中，数值表示方式为平均值±标准差。组合1-9与模型组相比较，^***P＜0.001；组合5与组合9相比较，^###P＜0.001。

具体而言，模型组大鼠血清肝功能ALT、AST活性(362.4±52.4IU/L、278.±49.5IU/L)较正常组(34.9±5.1IU/L、35.1±7.2IU/L)明显升高；血清TBil水平(6.32±1.26mg/dl)、肝组织Hyp含量(568.2±98.7μg/g肝组织)较正常组(TBil：0.23±0.04mg/dl；Hyp：169.4±31.5μg/g肝组织)显著升高(均P＜0.01)，病理观察肝组织早期肝硬化程度在S3∽S4之间，提示早期肝硬化模型成功(如图2所示)。综合血清ALT、AST水平、血清TBil水平、肝组织Hyp含量、肝组织胶原沉积，得出药物组合5疗效最佳。黄芪、当归、红花、鸡血藤、龙胆草最佳质量比5∶1∶2∶8∶4。

3结论：

实验结果表明，以黄芪、当归、红花、鸡血藤、龙胆草组成的复方药物(黄芪25g、当归5g、红花10g、鸡血藤40g、龙胆草20g)，对抑制早期肝硬化效应最佳。

实施例2

运用采用实施例1的复合模型与评价指标，证实黄芪、当归、红花、鸡血藤、龙胆草(质量比为5∶1∶2∶8∶4)保护早期肝硬化疗效。

SD雄性大鼠56只，清洁级，由中科院上海实验动物中心提供供给。大鼠随机分为正常组(N)、模型组(M)、低(L)、中(Me)、高剂量(H)本发明组和复方鳖甲软肝片对照组(P)，正常组6只，其余各组每组10只。除假手术外，其余各组大鼠沿腹正中线切开，暴露胆总管，逆行向肝门部注入硬化剂，远近端结扎胆总管，关腹。第2周开始，低、中、高剂量组分别给予本发明的中药组合物5按3.75g、7.5g、15g生药/kg体重浸膏灌胃，对照药组给予复方鳖甲软肝片0.6g/kg体重灌胃(复方鳖甲软肝片成人临床用量，每天6.0g；复方鳖甲软肝片小鼠给药量按照70kg成人公斤体重的7倍计算)，共4周，假手术组组和模型组给予等容量生理盐水。用药结束后测定大鼠血清ALT、AST活性、血清TBil含量以及肝组织Hyp水平，肝组织病理天狼猩红胶原染色。

试验结果表明：本发明的中药组合物中、高剂量组预防用药可降低大鼠血清ALT和AST活性、血清TBil含量，还可降低大鼠肝脏羟脯氨酸含量(表2)。肝组织天狼星红胶原染色结果表明，模型组汇管区可见大量胶原纤维沉积、部分可见假小叶形成；本发明的中药组合物5各剂量组未见假小叶形成，胶原纤维沉积减轻(如图3所示)。

表2 ALT、AST、TBil、Hyp含量测定

注：数值表示方式为平均值±标准差。本发明的中药组合物5与模型组相比较，^*P＜0.05、^***P＜0.001；不同剂量组合5与对照组相比较，^###P＜0.001。

结论：上述实验结果表明本发明的中药组合物对早期肝硬化病变有防治作用。

实施例3

采用二乙基亚硝胺诱导早期肝硬化模型及实施例1的评价指标，证实黄芪、当归、红花、鸡血藤、龙胆草(质量比为5∶1∶2∶8∶4)保护早期肝硬化疗效。

C57BL/6雄性小鼠56只，清洁级，由中科院上海实验动物中心提供供给。小鼠随机分为正常组(N)、模型组(M)、低(L)、中(Me)、高剂量(H)本发明组和复方鳖甲软肝片对照组(P)，正常组6只，其余各组每组10只。除正常组外，其余各组均以0.1mg/ml二乙基亚硝胺腹腔注射，每周3次，连续12周。第3周开始，低、中、高剂量组分别给予本发明的中药组合物5按5.4g、10.8g、21.6g生药/kg体重浸膏灌胃，对照药组给予复方鳖甲软肝片0.86g/kg体重灌胃(复方鳖甲软肝片成人临床用量，每天6.0g；复方鳖甲软肝片小鼠给药量按照70kg成人公斤体重的10倍计算)，共10周，正常组和模型组给予等容量生理盐水。用药结束后测定小鼠血清ALT、AST活性和TBil含量、肝组织Hyp水平，肝组织天狼猩红胶原染色。

试验结果表明：本发明的中药组合物中、高剂量组预防用药可降低小鼠血清ALT和AST活性、肝组织TBil含量，还可降低小鼠肝脏羟脯氨酸含量(表3)。肝组织天狼猩红胶原染色结果表明，模型组汇管区可见大量胶原纤维沉积、部分可见假小叶形成；本发明的中药组合物各剂量组未见假小叶形成，胶原纤维沉积减轻(如图4所示)。

表3 ALT、AST、TBil、Hyp含量测定

注：数值表示方式为平均值±标准差。本发明的中药组合物5与模型组相比较，^*P＜0.05、^***P＜0.001；不同剂量组合5与对照组相比较，^###P＜0.001。

结论：上述实验结果表明本发明的中药组合物对早期肝硬化病变有防治作用。

以上所述的仅是本发明的实施例，方案中公知的具体构造及特性等常识在此未作过多描述。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。本申请要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的具体实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。

以上对本申请实施例进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本申请的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明仅用于帮助理解本申请的方法及其核心思想。同时，本领域技术人员依据本申请的思想，基于本申请的具体实施方式及应用范围上做出的改变或变形之处，都属于本申请保护的范围。综上所述，本说明书内容不应理解为对本申请的限制。

Claims (10)

1.一种用于治疗早期肝硬化的药物组合物，所述药物组合物包括黄芪、当归、红花、鸡血藤和龙胆草，其特征在于，以重量比计，黄芪∶当归∶红花∶鸡血藤∶龙胆草比例为(1～5)∶(1～2)∶(1～2)∶(1～8)∶(1～4)。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，以重量比计，黄芪∶当归∶红花∶鸡血藤∶龙胆草比例为(1～5)∶(1～2)∶(1～2)∶(1～8)∶(2～4)；

优选地，以重量比计，黄芪∶当归∶红花∶鸡血藤∶龙胆草比例为约1∶约1∶约1∶约1∶约1；

优选地，当归与黄芪的重量比值为约1，且红花与黄芪的重量比值为约1，且鸡血藤与黄芪的重量比值为约1，且龙胆草与黄芪的重量比值为约1；

更优选地，以重量比计，黄芪∶当归∶红花∶鸡血藤∶龙胆草比例为约1∶约2∶约1∶约1∶约2；

更优选地，当归与黄芪的重量比值为约2，且红花与黄芪的重量比值为约1，且鸡血藤与黄芪的重量比值为约1，且龙胆草与黄芪的重量比值为约2；

尤其优选地，以重量比计，黄芪∶当归∶红花∶鸡血藤∶龙胆草比例为约5∶约1∶约2∶约8∶约4；

尤其优选地，当归与黄芪的重量比值为约0.2，且红花与黄芪的重量比值为约0.4，且鸡血藤与黄芪的重量比值为约1.6，且龙胆草与黄芪的重量比值为约0.8。

3.根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物进一步包含一种或多种用于治疗早期肝硬化的中药复方制剂；

优选地，所述中药复方制剂为复方鳖甲软肝片或安络化纤丸；

特别优选地，所述药物组合物为中药组合物。

4.一种药物制剂，包含权利要求1至3中任一项所述的药物组合物和药学上可接受的辅料。

5.根据权利要求4所述的药物制剂，其特征在于，所述辅料选自以下中的一种或多种：稀释剂、润湿剂、粘合剂、崩解剂、包合剂、矫味剂、缓释剂、助留剂、润滑剂、分散剂、增塑剂、遮光剂和抗氧化剂。

6.根据权利要求4或5所述的药物制剂，其特征在于，所述药物制剂为散剂、片剂、滴丸剂、胶囊剂、膜剂、锭剂、颗粒剂或口服液。

7.一种用于制备权利要求1至3中任一项所述的药物组合物的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)按比例称取适量的黄芪、当归、红花、鸡血藤和龙胆草；

(2)加热回流或超声提取1至3次，每次用水或醇的重量为药材总重量的6至15倍，每次提取1至3小时，得到提取液；

(3)将所述提取液过滤后，合并滤液并浓缩成浓缩液；以及

(4)在50～65℃的温度下干燥所述浓缩液，得到所述药物组合物。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述提取为加热回流提取；

优选地，所述提取的次数为2次，第一次用水或醇的重量为药材总重量的8至10倍，第二次用水或醇的重量为药材总重量的6至8倍；

更优选地，所述醇为60～95％的乙醇水溶液；

特别优选地，所述提取的时间为1至1.5小时；

最优选地，在55～60℃的温度下干燥所述浓缩液。

9.权利要求1至3中任一项所述的药物组合物或权利要求4至6中任一项所述的药物制剂在制备用于预防和/或治疗早期肝硬化的药物中的用途。

10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述早期肝硬化不是肝纤维化；

优选地，所述肝硬化不是脂肪性肝硬化；

优选地，所述肝硬化是胆汁淤积型肝硬化；

优选地，所述肝硬化是胆汁淤积型肝硬化伴门静脉高压症；

优选地，所述肝硬化是由化学致癌剂诱发的肝硬化；

更优选地，所述化学致癌剂是具有肝脏化学毒性的化学致癌剂；

更优选地，所述化学致癌剂是具有中毒剂和诱癌剂双重作用的化学致癌剂；

特别优选地，所述化学致癌剂是二乙基亚硝胺。

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