CN115887545A - 一种中药组合物及包含该中药组合物的产品、制备方法及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种具有缓解NASH功效的中药组合物及包含该中药组合物的产品、制备方法及其用途。该中药组合物以茵陈、白花蛇舌草、栀子根、桑寄生、丹参、甘草和大黄按1:1:0.5:0.5:1:0.5:0.5的质量比例制得。经实验证明,本发明中药复方能够有效减轻肝脏的肿胀、改善肝脏病理变化、降低血清及肝脏转氨酶、减少肝脏脂质蓄积,抑制肝脏炎症因子转录,并能保护心脏,有效缓解NASH。本发明中药复方功效突出、剂型简单,作用显著,具有良好的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于中药技术领域,具体涉及一种具有缓解NASH功效的中药组合物及包含该中药组合物的产品、制备方法及其用途。
背景技术
非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是一种代谢性肝病,以肝细胞内脂质沉积为特征并排除其他肝损害原因,其疾病谱包括非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、纤维化、肝硬化和肝细胞癌。随着人们生活方式与饮食结构的改变,目前全球NAFLD发病率已达到约25.24%,数据显示接受肝活检的NAFLD患者中约有59%的NALFD已发展为NASH。NASH是NAFLD的一个亚型,为肝脂肪变性与肝损伤和炎症共存,值得注意的是,NASH已成为肝移植的第二大常见适应症,是单纯性脂肪肝向肝硬化发展的必经阶段,也是肝细胞癌的第二大原因。NAFLD被认为是一种多系统疾病,同时,NASH与2型糖尿病,高血压和心血管疾病等肝外疾病也密切相关。
NASH的发病机理复杂,病程漫长,发病机制至今仍不明确。现阶段NASH的干预手段仍然是以饮食控制和体育锻炼为主,但生活方式和饮食习惯的难以改变、运动缺乏坚持性成为了治疗的严重障碍。目前临床有一些药物,如法尼醇X受体激动剂、PPARα/δ激动剂等靶向药物仍处于临床试验当中,其长期疗效及安全性尚有待评估。沙罗格列扎(Saroglitazar)是全球NASH领域第一个治疗药物,但因为其安全性和有效性问题,也仅仅在印度被获批使用(2020年3月)。确切的说目前临床上尚无针对NASH的特效药物。中国NAFLD相关药物的市场规模预计2025年将达到32亿元人民币,2030年达到355亿元。因此市场潜力巨大。
我国中药历史悠久,中医在治疗NASH方面有独特优势,可能与中药复方含有多种有效成分,有多层次、多靶点的治疗特点有关。因此,中医药是改善和逆转NAFLD和预防NASH、肝硬化及终末期肝病的重要干预和治疗手段。中医学没有NAFLD/NASH的明确病名,但根据其临床表现,大多归属于中医“肝癖”“胁痛”“积聚”等病证范畴。早在《内经》中就已经有对脂肪肝的相关描述,如《灵枢·邪气藏府病形》中曰“微急为肥气在胁下,若复杯”。《古今医鉴》中论胁痛“若因暴怒伤触悲哀气结,饮食过度…或痰积流注于血,与血相搏,皆能为痛”,指出情志失调、饮食不节是等本病的重要诱因,与痰湿等病理因素密切相关。饮食不节、过食肥甘导致脾虚健运,或情志失调,肝气郁滞,木克脾土,亦能致脾失健运,进而湿浊内停,此阶段病机以肝郁脾虚为主,是单纯性脂肪肝阶段;湿邪日久,郁而化热,而出现湿热内蕴,此阶段便为从单纯性脂肪肝发展成NASH阶段;痰浊不化,阻滞气机,气滞血瘀,瘀血内停,痰瘀互结于肝脏,发展成为肝硬化甚至终末期肝病。可见NASH阶段病机主要是湿热内蕴,治疗应以清热化湿为主。临床上应用清热化湿方剂如茵陈蒿汤、茵陈五苓散等治疗NASH,均取得良好疗效。
发明内容
基于上述现状,本发明提供了一种中药组合物,该中药组合物能够有效减轻肝脏的肿胀、改善肝脏病理变化、降低血清及肝脏转氨酶、减少肝脏脂质蓄积,抑制肝脏炎症因子转录,并能保护心脏,有效缓解NASH。
为了实现上述发明目的,本发明提供以下技术方案:
本发明提供了一种具有缓解、预防和/或治疗非酒精性脂肪性肝炎功效的中药组合物,所述中药组合物由下述七味药材制成:茵陈、白花蛇舌草、栀子根、桑寄生、丹参、甘草和大黄;
所述茵陈、白花蛇舌草、栀子根、桑寄生、丹参、甘草和大黄的质量比依次为1:1:0.5:0.5:1:0.5:0.5。
优选的,所述茵陈、白花蛇舌草、栀子根、桑寄生、丹参、甘草和大黄的质量比依次为1:1:0.5:0.5:1:0.5:0.5。
制成本发明中药组合物的各原料药是按照质量份作为配比,在生产时可按照相应的比例增大或减少,如大规模生产可以以公斤或以吨为单位,小规模生产也可以以克为单位,重量可以增大或减小,但各组成之间的原料药质量配比比例不变。
进一步的,本发明中药组合物是按照包括下述步骤的方法制备得到的:
(1)将所述茵陈、白花蛇舌草、栀子根、桑寄生、丹参、甘草按比例混合,加水进行煮沸提取,1-2小时后加入符合比例的大黄,再煮沸10-20分钟,过滤除去残渣,得到提取液;
(2)将步骤(1)得到的提取液在45-55℃的温度下通过减压浓缩去除水,再冷冻干燥即得。
上述方法步骤(1)中,所述水的加入量为所述茵陈、白花蛇舌草、栀子根、桑寄生、丹参、甘草药材总质量的10-20倍。
上述方法步骤(2)中,所述冷冻干燥的条件为样品预先在-80℃的温度下预冷冻,然后-20℃的温度下10小时真空冷冻干燥。
本发明还保护上述中药组合物在制备具有缓解、预防和/或治疗非酒精性脂肪性肝炎功效的产品中的应用。
同时,以本发明所提供的中药组合物为活性成分制成的具有缓解、预防和/或治疗非酒精性脂肪性肝炎功效的产品也属于本发明的保护范围。
本发明中所述具有缓解、预防和/或治疗非酒精性脂肪性肝炎体现在下述至少一方面:1)减轻肝脏的肿胀(降低肝脏指数);2)改善肝脏病理变化,减轻脂肪变性;3)减少肝脏脂质蓄积;4)降低血清及肝脏转氨酶;5)抑制肝脏炎症因子表达(如降低IL-6、iNOS的水平)。
所述产品可为药品、保健品或食品。
通过将上述药物组合物,直接制备或者加入药学上可接受的辅料后制备,可制成任何药学上可接受的剂型。以口服制剂为例包括:胶囊剂、片剂、粉剂、颗粒剂、茶剂或口服液。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。
本发明的发明人所在的课题组前期已经发现一种中药复方能够有效的缓解NASH,但在降低转氨酶方面效果不佳。本发明中药复方在其基础上,进行了调整,力求在不改变其缓解NASH的基础上,增加降低转氨酶的疗效。
本发明基于传统中医理念,利用现代药理学研究方法验证,发现该中药组合物能够有效减轻肝脏的肿胀、改善肝脏病理变化、降低血清及肝脏转氨酶、减少肝脏脂质蓄积,抑制肝脏炎症因子转录,有效缓解NASH。
附图说明
图1为各组大鼠实验第1天和第28天的体重(符号代表显著性差异:与对照组相比###p<0.001)。
图2为各组大鼠心肝脾肺肾指数(心肝脾肺肾指数=心肝脾肺肾重量/体重*100%;符号代表显著性差异:与对照组相比#p<0.05,##p<0.01,###p<0.001;与模型组相比*p<0.05,***p<0.001)。
图3为各组大鼠肝脏肉眼观察与心肝脾肺肾组织HE染色结果。
图4为各组大鼠血清及肝脏组织生化指标(符号代表显著性差异:与对照组相比#p<0.05,##p<0.01,###p<0.001;与模型组相比*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001)。
图5为各组大鼠炎症因子的转录水平(符号代表显著性差异:与对照组相比#p<0.05,###p<0.001;与模型组相比*p<0.05,***p<0.001)。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述,但本发明并不限于以下实施例。所述方法如无特别说明均为常规方法。所述原材料如无特别说明均能从公开商业途径获得。
下述实施例中所用的茵陈、白花蛇舌草、栀子根、桑寄生、丹参、甘草和大黄均符合中国药典(2020年版)一部正文各药材项下的有关规定。投料前,通过鉴定,各味药材实物与名称相符,质量符合标准。
实施例1、制备具有缓解、预防和/或治疗非酒精性脂肪性肝炎功效的中药组合物
按1:1:0.5:0.5:1:0.5:0.5的质量比例准备七味药材(茵陈、白花蛇舌草、栀子根、桑寄生、丹参、甘草和大黄),首先将前六味药材混合,以质量计,按1:10的料液比加入提取溶剂-水,煮沸提取1小时,后加入大黄,再煮沸10分钟即可。过滤除去残渣,收集提取液,使用旋转蒸发仪在45-55℃的温度下通过减压浓缩去除水,-80℃预冷冻,然后-20℃的温度下10小时真空冷冻干燥即得。
对比例1、
按1:1:0.5:0.5的质量比例准备四味药材(茵陈、白花蛇舌草、栀子根、桑寄生、),首先将四味药材混合,以质量计,按1:10的料液比加入提取溶剂-水,煮沸提取40min,过滤除去残渣,收集提取液,使用旋转蒸发仪在45-55℃的温度下通过减压浓缩去除水,再-80℃预冷冻,然后-20℃的温度下10小时真空冷冻干燥即得。
实施例2、中药组合物的药效学研究
1.试验目的:
研究本中药组合物对非酒精性脂肪性肝炎的改善作用。
2.试验材料
2.1试验样品:
实施例1制备的中药组合物。动物实验所用样品:将实施例1的中药组合物用纯水复配成5g/mL生药浓度的溶液并用0.22μm微孔膜过滤。
对比例1制备的中药组合物。动物实验所用样品:将对比例1的中药组合物用纯水复配成3g/mL生药浓度的溶液并用0.22μm微孔膜过滤。
2.2试验动物
雄性SD大鼠(190±10g)。
3 实验方法
3.1 动物造模与给药
7周龄雄性SD大鼠,饲养于SPF级动物房内(温度21±2℃,明暗周期12小时),自由进行饮食饮水,所有动物实验操作比照NIH颁布实验动物福利及试用指导原则进行。本次实验采用蛋氨酸与胆碱缺乏饲料(Methionine and choline deficient diet,MCD饲料)喂养建立非酒精性脂肪性肝炎大鼠模型,MCD饲料是国际公认的NASH模型建立方法之一,能复制与人类NASH接近的肝脏病理状态。将大鼠随机分为6组,即对照组、模型组、阳性药物组、低剂量组、高剂量组、原方组(对比例1)。其中对照组以MCS饲料(MCD饲料的对照饲料,含蛋氨酸与胆碱)喂养,模型组、阳性药物组、低高剂量组、高剂量组、原方组以MCD饲料喂养;阳性药物组在造模同时给予120mg/kg/d的多烯磷脂酰胆碱胶囊(PPC,易善复),低高剂量组、高剂量组在造模同时分别给予1.67g/kg/d、5g/kg/d剂量(生药浓度)的上述复方灌胃,原方组给予3g/kg/d剂量(生药浓度)的对比例复方灌胃对照组与模型组给予等量的纯水灌胃,持续4周。4周后,测量动物体重后腹腔注射10%水合氯醛(剂量3mL/kg)麻醉动物,采集肝脏称重,并按照相关方法制备肝组织样品保存待测。
3.2病理学观察(HE染色)
取大鼠相同位置心、肝、脾、肺、肾组织小块,PBS冲洗后置于4%多聚甲醛中固定12h,脱水过夜,常规石蜡包埋。切片5μm,脱蜡,苏木素复染5min,盐酸酒精分化,PBS冲洗返蓝,伊红复染3min,常规脱水至二甲苯;中性树胶封片,镜检。显微镜下观察。
3.3血清及肝脏组织生化指标检测
收集大鼠腹主动脉血,4℃、2000rpm离心10min,取上清,检测血清中甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-c),谷丙转氨酶(ALT)以及谷草转氨酶(AST)水平。
取适量肝组织,按1:9比例加入生理盐水并进行组织匀浆,4℃、3500rpm离心10min,取上清,检测肝组织ALT和AST浓度。
3.4实时定量聚合酶链反应(PCR)检测肝脏炎症因子水平
RNA提取试剂盒提取总RNA,试剂盒进行反转录,定量PCR分析。
3.5统计学分析
使用SPSS for Windows 19.0统计数据,数据以平均值±标准偏差(SD)表示,组间差异以one-way ANOVA分析,检验水平p<0.05被认为具有统计学意义。使用GraphPad Prism6.0绘图。
4实验结果
4.1大鼠体重及器官指数结果
我们记录了大鼠在实验中的体重变化,如图1所示,实验第1天,各组大鼠体重无显著差异(p>0.05)。实验结束后(第28天),模型组大鼠体重显著低于对照组(p<0.001),但是阳性对照药和本发明的中药组合物并不能逆转体重的降低。这主要是因为MCD饲料口感差,大鼠食欲明显下降,无法通过药物干预大鼠的进食量。
图2所示,模型组心脏指数显著低于对照组(p<0.01),低剂量组和高剂量组大鼠心脏指数显著高于模型组(p<0.05)。模型组肝脏指数显著高于对照组(p<0.001),低剂量组和高剂量组大鼠肝脏指数均低于模型组(p<0.05,p<0.05)。各组大鼠的脾脏指数、肺脏指数和肾脏指数均没有显著差异。结果表明,本中药组合物可以降低NASH大鼠的肝脏指数,并能提高心脏指数,具有保护肝脏和心脏的效果。
4.2大鼠心肝脾肺肾情况
如图3所示,从肝组织形态来看,对照组大鼠肝脏呈暗红色,包膜正常,边缘清晰,触感有弹性。模型组大鼠肝脏肿胀,颜色偏黄,包膜紧张,边缘钝,触感柔软。低剂量组和高剂量组在肝脏大小,颜色和触觉方面优于模型组。HE染色结果显示,对照组大鼠肝组织细胞边界明显,细胞核蓝染位于细胞中心,肝索结构清晰,无明显病变。在模型组的肝脏组织中,存在大量脂肪空泡,甚至相邻的细胞融合成一块,细胞边界不清楚,细胞核被挤到一侧,肝索结构不清楚。与模型组相比,低剂量组和高剂量组大鼠肝组织脂肪空泡减少,肝索结构有一定程度的恢复。心脏组织、脾脏组织、肺脏组织以及肾脏组织均没有显著变化。结果显示本中药组合物能有效改善NASH大鼠肝组织病理变化,减轻脂肪变性,且对其他器官无毒性。
4.3大鼠生化指标影响
我们首先检测了血清的血脂水平,如图4所示,模型组血清总胆固醇(TC)、总甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白(LDL-c)的水平较对照组相比显著降低(p<0.001,p<0.05,p<0.001),低剂量组和高剂量组大鼠血清TC水平较模型组显著升高(p<0.05,p<0.001),且呈剂量依赖效果。但是TG和LDL-c水平虽有升高的趋势,但与模型组相比,差异不显著。
模型组大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)水平较对照组相比显著升高(p<0.01),但是谷草转氨酶(AST)升高不显著。模型组大鼠肝脏组织ALT和AST水平都显著高于对照组(p<0.001,p<0.001)。低剂量组和高剂量组能显著降低ALT和AST水平,且呈剂量依赖效果。原方组不能降低血清转氨酶水平,但是可以轻微降低肝脏组织的转氨酶水平。
结果表明,本中药组合物能有效降低NASH大鼠转氨酶水平,且对肝脏有保护作用,优于原方组。
4.4大鼠肝组织炎症因子水平
如图5所示,与对照组相比,模型组大鼠肝组织IL-6和iNOS基因水平显著升高(p<0.05,p<0.001),低剂量组和高量组大鼠肝组织IL-6和iNOS水平较模型组明显降低。结果显示本中药组合物能有效降低NASH大鼠肝组织IL-6和iNOS水平。
4.5药效总结
上述实验证明,本发明中药复方能够有效减轻肝脏的肿胀、改善肝脏病理变化、降低血清及肝脏转氨酶、减少肝脏脂质蓄积,抑制肝脏炎症因子转录,并能保护心脏,有效缓解NASH。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种具有缓解、预防和/或治疗非酒精性脂肪性肝炎功效的中药组合物,所述中药组合物由下述七味药材制成:茵陈、白花蛇舌草、栀子根、桑寄生、丹参、甘草和大黄;
所述茵陈、白花蛇舌草、栀子根、桑寄生、丹参、甘草和大黄的质量比依次为1:1:0.5:0.5:1:0.5:0.5。
2.根据权利要求1所述的中药组合物,其特征在于:所述茵陈、白花蛇舌草、栀子根、桑寄生、丹参、甘草和大黄的质量比依次为1:1:0.5:0.5:1:0.5:0.5。
3.权利要求1或2所述中药组合物的制备方法,包括下述步骤:
(1)将所述茵陈、白花蛇舌草、栀子根、桑寄生、丹参、甘草按比例混合,加水进行煮沸提取,1-2小时后加入符合比例的大黄,再煮沸10-20分钟,过滤除去残渣,得到提取液;
(2)将步骤(1)得到的提取液在进行减压浓缩去除水,再冷冻干燥即得。
4.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于:所述步骤(1)中,所述水的加入量为所述茵陈、白花蛇舌草、栀子根、桑寄生、丹参、甘草药材总质量的10-20倍。
5.根据权利要求3或4所述的制备方法,其特征在于:所述步骤(2)中,所述减压浓缩在45-55℃的温度下进行,所述冷冻干燥的条件为样品预先在-80℃的温度下预冷冻,然后-20℃的温度下10小时真空冷冻干燥。
6.权利要求1或2所述的中药组合物或权利要求3-5中任一项所述方法制备得到的中药组合物在制备具有缓解、预防和/或治疗非酒精性脂肪性肝炎功效的产品中的应用。
7.一种具有缓解、预防和/或治疗非酒精性脂肪性肝炎功效的产品,其活性成分包括权利要求1或2所述的中药组合物或权利要求3-5中任一项所述方法制备得到的中药组合物。
8.权利要求6所述的应用或权利要求7所述的产品,其特征在于:所述具有缓解、预防和/或治疗非酒精性脂肪性肝炎体现在下述至少一方面:1)减轻肝脏的肿胀;2)改善肝脏病理变化,减轻脂肪变性;3)减少肝脏脂质蓄积;4)降低血清及肝脏转氨酶;5)抑制肝脏炎症因子表达。
9.权利要求6所述的应用或权利要求7所述的产品,其特征在于:所述产品包括药品、保健品或食品。
10.权利要求6所述的应用或权利要求7所述的产品,其特征在于:所述产品为药品,所述药品的剂型为口服制剂,包括胶囊剂、片剂、粉剂、颗粒剂、茶剂或口服液。
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颜晶晓;: "复方甘草酸苷联合清肝利胆胶囊治疗非酒精性脂肪性肝炎30例", 中西医结合肝病杂志, vol. 19, no. 02, pages 117 * |
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