CN114271376A - 一种河蟹肠道微生物多样性调控饲料及其制备和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种河蟹肠道微生物多样性调控饲料及其制备和应用，所述饲料包括乳酸菌为屎肠球菌(Enterococcus faecium)和贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)混合物，两种菌的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。本发明的饲料能够明显提高河蟹肠道微生物的多样性，且对河蟹生长具有促进作用。
Description
技术领域
本发明属于功能性饲料技术领域，特别涉及一种河蟹肠道微生物多样性调控饲料及其制备和应用。
背景技术
中华绒螯蟹(Eriochier sinensis，河蟹)作为我国重要的淡水养殖经济品种，其养殖模式仍以土塘养殖为主。尽管随着种质与养殖技术不断提升，河蟹养殖效益逐步提高，但是养殖过程仍然存在各种病原微生物的侵袭与困扰，如螺原体引起的河蟹抖抖病、急性或亚急性病原细菌感染对健康状况的影响甚至导致急性死亡等。研究表明，动物肠道内微生物群落结构对动物的营养状况、免疫力和健康程度以及生长速度等有重要影响。
Alpha多样性是指一个特定区域或生态系统内的多样性，是反映丰富度和均匀度的综合指标。使用Shannon等群落多样性(Community diversity)指数可以直观反映系统内特定群体的多样性。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种河蟹肠道微生物多样性调控饲料及其制备和应用，本发明的乳酸菌能够明显提高肠道微生物多样性，且对河蟹生长具有促进作用。
本发明的一种乳酸菌，所述乳酸菌为菌株混合物，包含：屎肠球菌(Enterococcusfaecium)EF1903，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示和贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)BV1801，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
优选地，所述乳酸菌中屎肠球菌(Enterococcus faecium)EF1903和贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)BV1801的比例(数量比)为2-4:1。
进一步优选地，所述乳酸菌中屎肠球菌(Enterococcus faecium)EF1903和贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)BV1801的比例(数量比)为3:1。
本发明的一种河蟹肠道微生物多样性调控饲料，所述调控饲料组分包括：所述乳酸菌和基础饲料。
优选地，所述河蟹肠道微生物多样性调控饲料中乳酸菌含量为8.4×109～1.68×1010cfu/kg。
优选地，所述河蟹肠道微生物多样性调控饲料中乳酸菌含量为1.68×1010cfu/kg。
优选地，所述基础饲料组分及质量百分比，包括：鱼粉40％、豆粕20％、麦麸10％、小麦粉22％、鱼油3％、维生素1.5％、矿物质1％、磷酸钙0.5％、卵磷脂0.5％、胆固醇0.5％、粘合剂1％。
本发明的一种河蟹肠道微生物多样性调控饲料的制备方法，包括：
基础饲料制备：将基础饲料的原料逐级混合，加适量水再搅拌均匀，采用饲料制粒机挤压成型，粒径1.5mm，烘干。
基础饲料制成后，将乳酸菌菌液均匀喷洒在基础饲料表面，并烘干。
所述烘干温度为60℃。
本发明的一种所述河蟹肠道微生物多样性调控饲料的应用。
将所述的河蟹肠道微生物多样性调控饲料饲喂河蟹，饲喂次数为2次/天。
有益效果
本发明的含乳酸菌的河蟹饲料能够明显提升肠道微生物多样性，且对河蟹生长具有促进作用。因此，使用本发明的含乳酸菌的河蟹饲料将有助于改善河蟹的健康状况与品质，进一步提升养殖效益。
附图说明
图1为河蟹肠道微生物多样性；其中1(rs1)是添加8.4×109cfu/kg乳酸菌的饲料投喂组；2(rs2)是添加1.68×1010cfu/kg乳酸菌的饲料投喂组；4(control)是基础饲料投喂组。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例1
将屎肠球菌(SEQ ID NO.1)和贝莱斯芽孢杆菌(SEQ ID NO.2)分别于37℃发酵培养20h并计数，然后将计数后的菌液混合成乳酸菌。此乳酸菌混合物以乳酸菌——屎肠球菌为主，且屎肠球菌与贝莱斯芽孢杆菌的混合比例(数量比)为3：1。最后，将乳酸菌菌液进行2倍梯度稀释备用。
所用河蟹基础饲料的配方如表1所示。按配方组成将原料逐级混合，加适量水再搅拌均匀，采用饲料制粒机挤压成型，粒径1.5mm，60℃烘干，再将乳酸菌菌液(8.4×109或1.68×1010cfu/kg)均匀喷洒在基础饲料表面，并60℃烘干。
表1河蟹基础饲料配方
所述维生素组分中每500g包括：
豆粕粉145.5g，氯化胆碱123g，VA 3g、VD3 3g、VE 20g、VK3 1g、VB1 10g、VB2 10g、VB315g、VB5 10g、VB6 9g、VB11 0.5g、肌醇95g、L-AP 55g；
所述矿物质组分中每500g包括：
沸石粉382g、MgSO4.H2O 90g、COCl2.6H2O 8g、ZnSO4.7H2O 5.5g、FeSO4.7H2O 5g、KI3.4g、CuSO4.5H2O 3.5g、MnSO4.4H2O 1.4g、Na2SeO3 1.2g。
实施例2
1材料
健康河蟹购自上海崇明某养殖场，投喂饲料为乳酸菌含量分别为8.4×109和1.68×1010cfu/kg的河蟹肠道微生物多样性调控饲料(见实施例1)。
2方法
健康河蟹在实验室暂养2周，稳定后分组、称重。共分为3组(2个处理组，1个基础饲料对照组)，每组34只蟹，持续充氧，按摄食量投喂，每天投喂2次。及时清理剩余饵料、粪便，根据清洁度适量换水。
3结果
3.1饲料添加乳酸菌对中华绒螯蟹肠道微生物多样性的影响
如图1所示，乳酸菌优选添加量的处理组(rs2)河蟹肠道微生物多样性明显高于基础饲料对照组和低浓度处理组，而且其丰富度在各平行组之间变化较小，饲料投喂效果的重复性较好。与之形成鲜明对比的是投喂基础饲料的对照组，不仅其肠道微生物多样性水平普遍较低，而且平行组之间差异较大，显现出较大的组间差异性。
3.2饲料添加乳酸菌对中华绒螯蟹生长的影响
如表1所示，与对照组相比，饲料添加不同浓度乳酸菌均对河蟹生长起促进作用。
表1饲料添加乳酸菌对河蟹增重的影响
SEQUENCE LISTING
<110> 中国水产科学研究院东海水产研究所
2, 1
<120> 一种河蟹肠道微生物多样性调控饲料及其制备和应用
<130> 1
<160> 2
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 1434
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
agcggctggc tcaaaaaggt tacctcaccg acttcgggtg ttacaaactc tcgtggtgtg 60
acgggcggtg tgtacaaggc ccgggaacgt attcaccgcg gcgtgctgat ccgcgattac 120
tagcgattcc ggcttcatgc aggcgagttg cagcctgcaa tccgaactga gagaagcttt 180
aagagattag cttagcctcg cgacttcgca actcgttgta cttcccattg tagcacgtgt 240
gtagcccagg tcataagggg catgatgatt tgacgtcatc cccaccttcc tccggtttgt 300
caccggcagt cttgctagag tgcccaactg aatgatggca actaacaata agggttgcgc 360
tcgttgcggg acttaaccca acatctcacg acacgagctg acgacaacca tgcaccacct 420
gtcactttgc ccccgaaggg gaagctctat ctctagagtg gtcaaaggat gtcaagacct 480
ggtaaggttc ttcgcgttgc ttcgaattaa accacatgct ccaccgcttg tgcgggcccc 540
cgtcaattcc tttgagtttc aaccttgcgg tcgtactccc caggcggagt gcttaatgcg 600
ttagctgcag cactgaaggg cggaaaccct ccaacactta gcactcatcg tttacggcgt 660
ggactaccag ggtatctaat cctgtttgct ccccacgctt tcgagcctca gcgtcagtta 720
cagaccagag agccgccttc gccactggtg ttcctccata tatctacgca tttcaccgct 780
acacatggaa ttccactctc ctcttctgca ctcaagtctc ccagtttcca atgaccctcc 840
ccggttgagc cgggggcttt cacatcagac ttaagaaacc gcctgcgctc gctttacgcc 900
caataaatcc ggacaacgct tgccacctac gtattaccgc ggctgctggc acgtagttag 960
ccgtggcttt ctggttagat accgtcaagg gatgaacagt tactctcatc cttgttcttc 1020
tctaacaaca gagttttacg atccgaaaac cttcttcact cacgcggcgt tgctcggtca 1080
gactttcgtc cattgccgaa gattccctac tgctgcctcc cgtaggagtt tgggccgtgt 1140
ctcagtccca atgtggccga tcaccctctc aggtcggcta tgcatcgtgg ccttggtgag 1200
ccgttacctc accaactagc taatgcaccg cgggtccatc catcagcgac acccgaaagc 1260
gcctttcaaa tcaaaaccat gcggtttcga ttgttatacg gtattagcac ctgtttccaa 1320
gtgttatccc cttctgatgg gcaggttacc cacgtgttac tcacccgttc gccactcctc 1380
tttttccggt ggagcaagct ccggtggaaa aagaagcgta cgacttgcat gtat 1434
<210> 2
<211> 1433
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
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atttgtggga ttggcttaac ctcgcggttt cgctgccctt tgttctgtcc attgtagcac 240
gtgtgtagcc caggtcataa ggggcatgat gatttgacgt catccccacc ttcctccggt 300
ttgtcaccgg cagtcacctt agagtgccca actgaatgct ggcaactaag atcaagggtt 360
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tcccggagtt atcccagtct tacaggcagg ttacccacgt gttactcacc cgtccgccgc 1380
taacatcagg gagcaagctc ccatcttccg ctcgactgca ttatagcacg cgt 1433
Claims (9)
1.一种乳酸菌，其特征在于，所述乳酸菌为菌株混合物，包含：屎肠球菌(Enterococcusfaecium)EF1903，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示和贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)BV1801，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.根据权利要求1所述乳酸菌，其特征在于，所述乳酸菌中屎肠球菌(Enterococcusfaecium)EF1903和贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)BV1801的数量比为2-4:1。
3.根据权利要求1所述乳酸菌，其特征在于，所述乳酸菌中屎肠球菌(Enterococcusfaecium)EF1903和贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)BV1801的数量比为3:1。
4.一种河蟹肠道微生物多样性调控饲料，其特征在于，所述调控饲料组分包括：权利要求1所述乳酸菌和基础饲料。
5.根据权利要求4所述调控饲料，其特征在于，所述河蟹肠道微生物多样性调控饲料中乳酸菌含量为8.4×109～1.68×1010cfu/kg。
6.根据权利要求5所述调控饲料，其特征在于，所述河蟹肠道微生物多样性调控饲料中乳酸菌含量为1.68×1010cfu/kg。
7.一种河蟹肠道微生物多样性调控饲料的制备方法，包括：
基础饲料制成后，将权利要求1所述乳酸菌菌液均匀喷洒在基础饲料表面，并烘干。
8.根据权利要求7所述制备方法，其特征在于，所述烘干温度为60℃。
9.一种权利要求4所述河蟹肠道微生物多样性调控饲料的应用。
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