CN114176096B - 一种阿佛曼链霉菌活性孢子杀虫剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种阿佛曼链霉菌活性孢子杀虫剂及其制备方法,所述阿佛曼链霉菌活性孢子杀虫剂,包括以下重量份的各原料:硫酸铵:15‑25份;糊精:15‑25份;膨润土:40‑60份;每克杀虫剂要求添加有5‑10亿个阿佛曼链霉菌活性孢子。所述制备方法包括如下步骤:步骤1、按重量份称取将硫酸铵、糊精、膨润土和阿佛曼链霉菌活性孢子固体发酵产物后,并混合均匀,然后粉碎至物料粒度达到100‑200目;步骤2、将粉碎后的物料喷水挤压造粒,得阿佛曼链霉菌活性孢子杀虫颗粒剂。本发明杀虫剂对地下害虫尤其病原线虫具有良好的防治效果。
Description
技术领域
本发明属于生物农药技术领域,具体涉及一种阿佛曼链霉菌活性孢子杀虫剂及其制备方法。
背景技术
阿佛曼链霉菌是一类具有杀虫杀螨功效的放线菌,其活孢子可寄生在多种作物病原线虫等地下害虫的幼虫及卵的体内及体表,并在寄主体内大量繁殖,最终杀死地下害虫,其代谢产物抗生素更是杀地下害虫的有效成分,且安全性高,对环境无污染。然而,由于目前生物农药技术还处于起步阶段,人们对阿佛曼链霉菌也仅仅集中于对其代谢产物进行研究开发,而对其活孢子产品的研究尚属空白,因此,急需研发一种阿佛曼链霉菌活性孢子杀虫剂及其制备方法,提高对地下害虫的防治效果,促进阿佛曼链霉菌活性孢子产业的发展。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中的的缺陷,提供了一种阿佛曼链霉菌活性孢子杀虫剂及其制备方法,其对地下害虫尤其病原线虫具有良好的防治效果。
为实现上述目的,本发明所采取的技术方案如下:
技术方案一:
一种阿佛曼链霉菌活性孢子杀虫剂,包括以下重量份的各原料:
硫酸铵:15-25份;
糊精:15-25份;
膨润土:40-60份;
每克杀虫剂要求添加有5-10亿个阿佛曼链霉菌活性孢子。
进一步的,其中,硫酸铵为20份;
糊精为20份;
膨润土为55份。
进一步的,所述阿佛曼链霉菌活性孢子采用阿佛曼链霉菌活性孢子固体发酵产物,
其中,1.05为活性孢子的损失补偿系数。由于微生物在加工过程中会存在一定量的损失,通常为0.5%左右,为了保证杀虫剂中活孢子的含量,在杀虫剂的生产过程中往往会多添加一定量的活孢子,以补偿杀虫剂生产过程中微生物的损失,而活性孢子的损失补偿系数即由此而来。
更进一步的,所述阿佛曼链霉菌活性孢子固体发酵产物的湿度≤10%。
更进一步的,所述杀虫剂为颗粒剂。
技术方案二:
一种阿佛曼链霉菌活性孢子杀虫剂的制备方法,包括如下步骤:
步骤1、按重量份称取将硫酸铵、糊精、膨润土和阿佛曼链霉菌活性孢子固体发酵产物后,并混合均匀,然后粉碎至物料粒度达到100-200目;
步骤2、将粉碎后的物料喷水挤压造粒,得阿佛曼链霉菌活性孢子杀虫颗粒剂。
进一步的,步骤1在称取阿佛曼链霉菌活性孢子固体发酵产物时,需要先测定固体发酵产物中阿佛曼链霉菌活性孢子的含量。
技术方案三:
一种阿佛曼链霉菌活性孢子杀虫剂在防治作物根结线虫中的应用。
与现有技术相比,本发明的有益效果在于:
1、本发明以阿佛曼链霉菌活性孢子为杀虫剂的主要药效成分,由于阿佛曼链霉菌是土壤中分离筛选出的菌种,益生菌在土壤中存活力高,利用自然条件即可繁殖生长,是土壤地下害虫的有效生物防治手段,其不仅可以防治地下害虫,还有助于改善土壤微生态环境。
2、本发明将阿佛曼链霉菌活性孢子制成活孢子含量在5-10亿/克的杀虫颗粒剂,可采用沟施、穴施、灌根、冲施、随种布施以及散施的方式进行使用,杀虫效力高、作用持久温度,可满足不同作物、树木,尤其蔬菜、瓜果等经济作物的害虫防治需求。
3、本发明阿佛曼链霉菌活性孢子采用固体发酵产物的形式进行添加,其固体发酵产物中不仅含有阿佛曼链霉菌活性孢子,还含有阿佛曼链霉菌的代谢产物,其阿佛曼链霉菌活性孢子,可通过在寄主体内繁殖杀死地下害虫,而阿佛曼链霉菌的代谢产物对地下害虫有直接的触杀作用,两者共用,极大的提高了对地下害虫尤其根线虫的防治效果。
具体实施方式
下面将结合具体实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
在本发明中,
1、阿佛曼链霉菌活性孢子的制备方法,包括如下步骤:
一、培养基配方:
茄子瓶斜面培养基,包括如下百分质量比的各原料:牛肉膏0.3%,蛋白胨0.5%,葡萄糖0.5%,磷酸二氢钾0.05%,硫酸镁0.03%,琼脂2.0%,水100mL,pH6.8;于0.11-0.12MPa压力下120摄氏度湿热消毒灭菌30min;
固体发酵培养基:先按如下百分质量比复配各原料:谷糠68.8%,麸皮13%,豆饼4%,花生饼粉4%,玉米粉9%,碳酸钙0.5%,硫酸铵0.5%,血胨0.2%,pH自然,然后加入水调整湿度为55%;于0.11-0.12MPa压力下120摄氏度湿热灭菌30min;
二、发酵工艺:
步骤1、阿佛曼链霉菌的菌种制备:
将冷冻保藏的阿佛曼链霉菌菌种接种于茄子瓶斜面培养基上,于28-30摄氏度培养7天,备用;所述阿佛曼链霉菌菌种保藏于中国农业大学菌种保藏中心,地址:中国北京;菌种保藏编号为M2021-001。
步骤2、固体发酵培养:
步骤2-1、配制固体发酵培养基,并灭菌;
步骤2-2、取步骤1制备的茄子瓶斜面菌种,用无菌水制成菌种悬浮液;
步骤2-3、将菌种悬浮液均匀接种于步骤2-1制备的固体发酵培养基中;
步骤2-4、在卧式固态生物反应器进行固体发酵培养,时间9-11天,至每克物料中活孢子数量大于等于50亿个后,停止发酵;固体发酵培养的培养条件为:无菌空气通气量1:0.35v/v/min;反应器压力:0.008MPa,培养温度28-30摄氏度,培养湿度50-60%。
步骤3、阿佛曼活性孢子的制备:
将步骤2发酵结束的固体培养物移入双锥旋转鼓风式干燥机中干燥,至物料含水量小于等于10%后,粉碎成80目的粉末,即得阿佛曼活性孢子固体发酵产物,经检测所制得的固体发酵产物中活性孢子的含量为50.3亿/克。
2、阿佛曼链霉菌活性孢子固体发酵产物中活性孢子含量的检测方法,包括如下步骤:
A、培养基的准备:
固体培养基,包括如下百分质量比的各原料:牛肉膏0.3%,蛋白胨0.5%,葡萄糖0.5%,琼脂2.1%,水100mL,pH6.5-7.0;
半固体培养基,包括如下百分质量比的各原料:牛肉膏0.3%,蛋白胨0.5%,葡萄糖0.5%,琼脂1.0%,水100mL;
将固体培养基和半固体培养基分别装入250mL三角瓶中,每瓶100mL,于0.11-0.12MPa压力下115-120摄氏度灭菌30min,备用;
B、检验:
1)、取1g待检样品,加入100mL无菌水中,得到10-2数量级的菌悬液,然后,取1mL10-2数量级菌悬液加入到99mL无菌水中,得到10-4数量级的菌悬液,然后取1mL10-4数量级菌悬液加入到99mL无菌水中,得到10-6数量级的菌悬液;1mL10-6数量级菌悬液加入到99mL无菌水中,得到10-8数量级的菌悬液;取1mL10-8数量级的菌悬液加入到半固体培养基中,制得含菌半固体培养基;
2)、将固体培养基加热至熔化后,倒入培养皿中,待固体培养基冷却凝固后,向其中倒入含菌半固体培养基,放平静置,待凝固后,于28-30摄氏度恒温箱中培养,然后记录每个培养皿中单个活孢子菌落的个数;
每个孢子粉中活孢子个数=单个活孢子菌落数*稀释倍数。
下面通过具体的实施例对本发明进行进一步的阐述。
实施例1:
一种阿佛曼链霉菌活性孢子杀虫剂,包括以下重量的各原料:
硫酸铵:20kg;
糊精:20kg;
膨润土:55kg;
阿佛曼链霉菌活性孢子固体发酵产物:15kg;
阿佛曼链霉菌活性孢子固体发酵产物中活性孢子的含量为50.3亿/克;
本实施例中,杀虫剂重量为110kg;
本实施例中阿佛曼链霉菌活性孢子固体发酵产物的理论添加量为6.8591亿/克。
一种阿佛曼链霉菌活性孢子杀虫颗粒剂的制备方法,包括如下步骤:
步骤1、按重量份称取将硫酸铵、糊精、膨润土和阿佛曼链霉菌活性孢子固体发酵产物后,并混合均匀,然后粉碎至物料粒度达到150目;
步骤2、将粉碎后的物料喷水挤压造粒,得阿佛曼链霉菌活性孢子杀虫颗粒剂。
对本实施例所制得的杀虫剂中的活性孢子进行检测,结果为:阿佛曼链霉菌活性孢子实际添加量为6.51亿/g。
实施例2
一种阿佛曼链霉菌活性孢子杀虫剂,包括以下重量的各原料:
硫酸铵:25kg;
糊精:25kg;
膨润土:50kg;
阿佛曼链霉菌活性孢子固体发酵产物:13kg;
阿佛曼链霉菌活性孢子固体发酵产物中活性孢子的含量为50.3亿/克;
本实施例中,杀虫剂重量为113kg;
本实施例中阿佛曼链霉菌活性孢子固体发酵产物的理论添加量为5.7867亿/克。
一种阿佛曼链霉菌活性孢子杀虫颗粒剂的制备方法,包括如下步骤:
步骤1、按重量份称取将硫酸铵、糊精、膨润土和阿佛曼链霉菌活性孢子固体发酵产物后,并混合均匀,然后粉碎至物料粒度达到100目;
步骤2、将粉碎后的物料喷水挤压造粒,得阿佛曼链霉菌活性孢子杀虫颗粒剂。
对本实施例所制得的杀虫剂中的活性孢子进行检测,结果为:阿佛曼链霉菌活性孢子实际添加量为5.49亿/g。
实施例3
一种阿佛曼链霉菌活性孢子杀虫剂,包括以下重量的各原料:
硫酸铵:15kg;
糊精:15kg;
膨润土:55kg;
阿佛曼链霉菌活性孢子固体发酵产物:13kg;
阿佛曼链霉菌活性孢子固体发酵产物中活性孢子的含量为50.3亿/克;
本实施例中,杀虫剂重量为98kg;
本实施例中阿佛曼链霉菌活性孢子固体发酵产物的理论添加量为6.6724亿/克。
一种阿佛曼链霉菌活性孢子杀虫颗粒剂的制备方法,包括如下步骤:
步骤1、按重量份称取将硫酸铵、糊精、膨润土和阿佛曼链霉菌活性孢子固体发酵产物后,并混合均匀,然后粉碎至物料粒度达到200目;
步骤2、将粉碎后的物料喷水挤压造粒,得阿佛曼链霉菌活性孢子杀虫颗粒剂。
对本实施例所制得的杀虫剂中的活性孢子进行检测,结果为:阿佛曼链霉菌活性孢子实际添加量为6.38亿/g。
以上所述实施方式仅为本发明的优选实施例,而并非本发明可行实施的穷举。对于本领域一般技术人员而言,在不背离本发明原理和精神的前提下对其所作出的任何显而易见的改动,都应当被认为包含在本发明的权利要求保护范围之内。
Claims (6)
1.一种阿佛曼链霉菌活性孢子杀虫剂,其特征在于,包括以下重量份的各原料:
硫酸铵:15-25份;
糊精:15-25份;
膨润土:40-60份;
每克杀虫剂要求添加有5-10亿个阿佛曼链霉菌活性孢子;
所述阿佛曼链霉菌活性孢子采用阿佛曼链霉菌活性孢子固体发酵产物,
阿佛曼链霉菌活性孢子固体发酵产物的制备方法,包括如下步骤:
步骤1、阿佛曼链霉菌的菌种制备:
将冷冻保藏的阿佛曼链霉菌菌种接种于茄子瓶斜面培养基上,于28-30摄氏度培养7天,备用;
步骤2、固体发酵培养:
步骤2-1、配制固体发酵培养基,并灭菌;
步骤2-2、取步骤1制备的茄子瓶斜面菌种,用无菌水制成菌种悬浮液;
步骤2-3、将菌种悬浮液均匀接种于步骤2-1制备的固体发酵培养基中;
步骤2-4、在卧式固态生物反应器进行固体发酵培养,时间9-11天,至每克物料中活孢子数量大于等于50亿个后,停止发酵;固体发酵培养的培养条件为:无菌空气通气量1:0.35v/v/min;反应器压力:0.008MPa,培养温度28-30摄氏度,培养湿度50-60%;
固体发酵培养基:先按如下百分质量比复配各原料:谷糠68.8%,麸皮13%,豆饼4%,花生饼粉4%,玉米粉9%,碳酸钙0.5%,硫酸铵0.5%,血胨0.2%,pH自然,然后加入水调整湿度为55%;于0.11-0.12MPa压力下120摄氏度湿热灭菌30min;
步骤3、阿佛曼活性孢子的制备:
将步骤2发酵结束的固体培养物移入双锥旋转鼓风式干燥机中干燥,至物料含水量小于等于10%后,粉碎成80目的粉末,即得阿佛曼活性孢子固体发酵产物;
其中,1.05为活性孢子的损失补偿系数;
所述阿佛曼链霉菌活性孢子固体发酵产物的湿度≤10%。
2.根据权利要求1所述的一种阿佛曼链霉菌活性孢子杀虫剂,其特征在于,
其中,硫酸铵为20份;
糊精为20份;
膨润土为55份。
3.根据权利要求1所述的一种阿佛曼链霉菌活性孢子杀虫剂,其特征在于,所述杀虫剂为颗粒剂。
4.一种如权利要求1所述阿佛曼链霉菌活性孢子杀虫剂的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
步骤1、按重量份称取将硫酸铵、糊精、膨润土和阿佛曼链霉菌活性孢子固体发酵产物后,并混合均匀,然后粉碎至物料粒度达到100-200目;
步骤2、将粉碎后的物料喷水挤压造粒,得阿佛曼链霉菌活性孢子杀虫颗粒剂。
5.根据权利要求4所述的一种阿佛曼链霉菌活性孢子杀虫剂的制备方法,其特征在于,步骤1在称取阿佛曼链霉菌活性孢子固体发酵产物时,需要先测定固体发酵产物中阿佛曼链霉菌活性孢子的含量。
6.一种如权利要求1-3任一项所述阿佛曼链霉菌活性孢子杀虫剂在防治作物根结线虫中的应用。
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