CN104531533B - 一种防治植物重茬病害的复合菌剂及其制备方法、应用 - Google Patents

一种防治植物重茬病害的复合菌剂及其制备方法、应用 Download PDF

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Abstract

本申请提供一种防治植物重茬病害的复合菌剂，该复合菌剂包含哈茨木霉、枯草芽孢杆菌和粉红粘帚霉，还包含解磷菌和解钾菌，所述哈茨木霉的菌株保藏编号是CGMCC NO.7861，所述枯草芽孢杆菌菌株的保藏号为CGMCC NO.7850，所述粉红粘帚霉的菌株保藏编号是CGMCC NO.9008。本申请还提供复合菌剂的制备方法及其应用。本发明的复合菌剂选用防病木霉菌、枯草芽孢杆菌、粉红粘帚霉、解磷菌、解钾菌等高效菌株，能够促进作物生长、提高肥料利用率，增强抗病等抗逆性和改善作物品质等功效，能够防治根腐病、枯黄萎病、立枯病、灰霉病、疫病、白粉病、菌核病、苗期猝倒病等病害。

Description

一种防治植物重茬病害的复合菌剂及其制备方法、应用
技术领域
本发明涉及一种复合菌剂，尤其涉及一种防治植物重茬病害的复合菌剂及其制备方法、应用。
背景技术
重茬病害是指因同一作物在同一地块长期耕种所带来的病害，随着全球沙漠化、荒漠化形势的日益严峻，可耕土地越来越少，而我国人多地少的矛盾更加突出，提高复种指数(重茬耕作)是解决问题的唯一办法。但是随之而来的土传病害等重茬病造成作物大面积减产、绝产，是一种毁灭性病害。重茬病害包括因病原菌发生严重而导致的病理性重茬病害，以及因连作而导致土壤营养物质不平衡等原因引起的生理性重茬病害。
病理性重茬病害严重发生的原因很多，如植物种类、土壤类型、栽培措施、连作年限等，但最重要的是重茬改变了土壤微生物的种群结构和数量，破坏了土壤微生物生态平衡，有利于致病微生物的生长和侵染，进而加剧了重茬病害的发生和危害，导致病理性重茬病害的生物因子主要有真菌(表一)、细菌、线虫、放线菌以及病毒等。
生理性重茬病害主要是因土壤营养元素的缺乏或失衡、理化性质的改变以及植物根部分泌的自毒物质的积累等所致。最常见的是由于连作对土壤氮、磷、钾等营养元素的不均衡消耗，导致植物发病。长期连作同一植物也会改变土壤的理化性质，进而影响植物的生长。
目前土传病害的防治主要采取农业防治、化学防治和生物防治三种防治措施。
农业防治主要包括抗病品种的使用、轮作倒茬和增施有机肥等，其优点是环保安全，对生理性和病理性重茬病害均有一定的防治效果，缺点是防效较低。
化学防治常用的化学杀菌剂有恶霉灵、福美双和普力克，三者掺混后土施，能杀灭一切土传病菌，但同时也把有益菌杀灭了，不是最好的办法。化学防治的优点是防效显著、防效快，缺点是环境相容性差，同时化学农药的长期使用，还易使病原物产生抗药性，导致防效下降甚至失败。
生物防治通过微生物之间的拮抗、竞争、诱导抗性以及寄生等相互作用来控制重茬病害的方法。一方面拮抗菌的使用通过分泌抗菌物质或种群竞争改变土壤微生物的种群结构和数量，降低病理性重茬病害的发生，还能通过改变土壤结构和理化性质而减轻生理性重茬病害的危害。目前报道的生防制剂主要有：小盾壳霉属、粘帚霉属、木霉属和无致病力尖孢镰刀菌属等真菌；放线菌属、土壤杆菌属、芽孢杆菌属、欧文氏菌属、产碱菌属、无定形孢囊菌属、节杆菌属、假单胞菌属、小单孢菌属、链霉菌属和根瘤菌属等细菌。
重茬病成为农业专家和广大农民研究和关注的重点课题，但长时间一直没有重大的突破性进展，传统的防治方法不能从根本上解决问题，而生物防治在控制植物重茬病害，提高植物产量具有重大的潜力。目前市场上还没用合适的微生物菌剂，本专利研究的目的就是提供一种防治土传病害的复合菌剂。
发明内容
本申请针对现有技术中的因病原菌发生严重而导致的病理性重茬病害，以及因连作而导致土壤营养物质不平衡等原因引起的生理性重茬病害的问题，从而提出一种防治植物重茬病害的复合菌剂及其制备方法、应用。
本申请提供了一种木霉菌株，该木霉菌株为哈茨木霉(Trichoderma harzianum-_znlkhc1)的菌株，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号是CGMCC NO.7861。
本发明还提供了一种枯草芽孢杆菌菌株，该枯草芽孢杆菌菌株为枯草芽孢杆菌(Baciilus subtilis-_znjdf1)的菌株，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号是CGMCC NO.7850。
本发明还提供了一种粘帚霉菌株，该粘帚霉菌株为粉红粘帚霉(Gliocladiumroseum-znlknz1)的菌株，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号是CGMCC NO.9008。
本发明还提供了一种防治植物重茬病害的复合菌剂，该复合菌剂包含哈茨木霉、枯草芽孢杆菌和粉红粘帚霉，还包含解磷菌和解钾菌，
所述哈茨木霉的菌株保藏编号是CGMCC NO.7861，所述枯草芽孢杆菌菌株的保藏号为CGMCC NO.7850，所述粉红粘帚霉的菌株保藏编号是CGMCC NO.9008。
其中，所述哈茨木霉、粉红粘帚霉和枯草芽孢杆菌的菌数比例为(0.5-1.5)：(0.5-1.5)：(2-4)。
其中，所述解磷菌为巨大芽孢杆菌，所述解钾菌为胶质芽孢杆菌。
其中，所述复合菌剂的含菌总量≥5亿/克。
其中，所述复合菌剂还包括吸附剂，所述哈茨木霉、枯草芽孢杆菌、粉红粘帚霉、含解磷菌和解钾菌吸附于吸附剂，所述吸附剂为草碳、玉米芯、钙粉、麦麸。
本发明还提供了一种如上述的复合菌剂的制备方法，该方法包括：
分别将哈茨木霉、枯草芽孢杆菌和粉红粘帚霉进行液体深层发酵和加入吸附剂，然后三者均匀混合，得到所述复合菌剂。
其中，所述液体深层发酵的操作包括如下步骤：
(1)菌种活化
分别将所述哈茨木霉、枯草芽孢杆菌和粉红粘帚霉接种到固体培养基，在pH值7.0-7.5、28-30℃温箱内培养24-72h；
(2)摇瓶培养
活化后的哈茨木霉和粉红粘帚霉接种到液体培养基，于28℃，转速120rpm的全温振荡培养箱中培养12-16h；活化后的枯草芽孢杆菌于32℃，转速180rpm的全温振荡培养箱中培养8-10h；
(3)种子罐培养
将摇瓶内培养好的哈茨木霉(Trichoderma harziarum)、枯草芽孢杆菌和粉红粘帚霉的菌液，接种于冷却至30℃的种子罐内进行培养，接种后在温度为28℃，转速120rpm，培养16-20h，镜检观察菌丝较多呈团簇状，即可转入发酵罐培养；
(4)发酵罐发酵
将种子罐内培养好的哈茨木霉(Trichoderma harziarum)、枯草芽孢杆菌和粉红粘帚霉的菌液，接种于冷却至30℃的发酵罐内进行培养，搅拌速度120rpm，罐压0.05MPa；通气量：发酵前期1:0.5(V/V·min)，后期逐渐调至1:1(V/V·min)，一般发酵培养周期为84-90h。
其中，所述哈茨木霉种子罐和发酵罐的培养基配方：玉米粉5％，硫酸铵0.05％，泡敌0.02％，注射青霉素钾3支，注射硫酸链霉素2支，pH值7.0-7.5；
所述枯草芽孢杆菌的种子罐和发酵罐的培养基配方：豆粕粉2％、鱼粉0.5％、玉米粉1.8％、淀粉0.4％，硫酸镁0.06％，磷酸氢二钾0.5％，泡敌0.025％，pH值7.0-7.5。
本发明还提供了上述的复合菌剂在防治植物病害中的应用。
其中，所述植物病害为土传植物病害。
其中，所述土传植物病害为根腐病、枯黄萎病、立枯病、灰霉病、疫病、白粉病、菌核病、苗期猝倒病中的至少一种。
与有关技术相比，本发明实施例的有益效果如下：
1、本发明的复合菌剂选用防病木霉菌、枯草芽孢杆菌、粉红粘帚霉、解磷菌、解钾菌等高效菌株，采用现代微生物发酵技术加工制备而成的农用微生物制剂。本产品主要通过菌株在作物根表、根际和体内定植、繁殖和转移，充分发挥菌株的促长、固氮、解磷、解钾、抗病、抗逆、改良土壤等功能，达到促进作物生长、提高肥料利用率，增强抗病等抗逆性和改善作物品质等功效。能够防治根腐病、枯黄萎病、立枯病、灰霉病、疫病、白粉病、菌核病、苗期猝倒病等病害。
2、本发明的复合菌剂中的木霉菌，可产生多种对植物病原真菌、细菌及昆虫具有拮抗作用的生物活性物质，比如细胞壁降解酶类和次级代谢产物，并能提高农作物的抗逆性，促进植物生长和提高农产品产量。
本发明的复合菌剂中的粉红粘帚霉，是一种植物病原菌的重寄生菌，对植物病害具有较好的生防潜力，主要通过重寄生作用、拮抗作用和产生细胞壁降解酶来抑制病原菌的生长，进而达到防治植物病害的目的。粉红粘帚霉能运用大范围的复合物作为C源和N源，能分泌各种酶类，如纤维素酶和半纤维素酶，降解顽固的植物多聚体，变成简单的糖类以提供能量供作物生长。粉红粘帚霉可以寄生多种土传病原菌，如核盘菌属、腐霉菌、立枯丝核菌和齐整小核菌等，研究结果表明，寄生过程中有多种重要的细胞壁降解酶参与，粉红粘帚霉的分生孢子通过蜜蜂转移到草莓的花上，能够抑制花或果实的灰霉病。
本发明的复合菌剂中的枯草芽孢杆菌，是一种的植物内生细菌，可以抑制多种植物病原菌，能够促进植物生长。枯草芽孢杆菌能够产生芽孢，抗逆性好，可以在一些极端的环境中长期存活，利于保藏，非常适合微生物制剂的生产、加工和应用。
本发明的复合菌剂中的解磷菌，可以采用巨大芽孢杆菌；本发明的复合菌剂中的解钾菌，可以采用胶质芽孢杆菌，作为微生物肥料中的重要功能菌，可提高土壤速效钾、磷含量，提高作物产量和品质等多种效果。
保藏说明
1、菌种名称：哈茨木霉
拉丁名：Trichoderma harzianum-_znlkhc1
保藏机构中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
保藏机构简称：CGMCC
地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号
保藏日期：2013.07.03
保藏中心登记入册编号：CGMCC NO.7861
2、菌种名称：枯草芽孢杆菌
拉丁名：Baciilus subtilis-_znjdf1
保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
保藏机构简称：CGMCC
地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号
保藏日期：2013.07.03
保藏中心登记入册编号：CGMCC NO.7850
3、菌种名称：粉红粘帚霉
拉丁名：Gliocladium roseum-znlknz1
保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
保藏机构简称：CGMCC
地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号
保藏日期：2014.4.2
保藏中心登记入册编号：CGMCC NO.9008
具体实施方式
下文中将对本发明的实施例进行详细说明。需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互任意组合。
实施例1
1.1菌株发酵工艺流程
哈茨木霉、枯草芽孢杆菌以及粉红粘帚霉的复合制剂防治重茬病害的生产工艺流程为经液体深层发酵法制成粉剂，工艺主要环节为原菌种活化→菌种扩大培养→种子罐培养→发酵罐培养→添加填充料→搅拌→链条机粉碎→粉剂过筛→产品检测→包装。
1.1.1哈茨木霉
哈茨木霉的菌株专利保藏号是CGMCC NO.7861。生产工艺如下：
1.1.1.1菌种活化
哈茨木霉培养基制备：土豆20％，葡萄糖2％，琼脂2％。用NaOH或HCl调pH值至7.0-7.5，然后分装三角瓶或试管，置于灭菌锅内，在0.11MPa压力下灭菌30min。
菌种活化与扩大培养：用接种针在无菌条件下从原菌种斜面上挑取少许菌苔，在倒有培养基的培养皿内进行划线，然后置28-30℃温箱内培养72h，肉眼观察，菌苔丰满，涂片、染色检查无杂菌，孢子整齐时，作为发酵生产的菌种。
1.1.1.2摇瓶培养
哈茨木霉摇瓶培养基配方：细麦麸5％。将配好的液体培养基分装2000mL三角瓶，每瓶装液量500ml，在高压湿热灭菌锅内121℃、0.11MPa下灭菌40min。从培养好哈茨木霉的平板上刮取少许菌苔放入摇瓶中，于28℃，转速120rpm的全温振荡培养箱中培养12-16h，镜检观察哈茨木霉菌丝较多呈团簇状，即可上种子罐培养。
1.1.1.3种子罐培养
哈茨木霉种子罐培养基配方：玉米粉5％，硫酸铵0.05％，泡敌0.02％，注射青霉素钾3支，注射硫酸链霉素2支，pH值4.0-4.5。
(1)空发酵罐灭菌：发酵罐在应用前清洗干净，排除污物，并在0.11MPa压力下，灭菌30min。
(2)种子罐装料：参考培养基配方比例装料，投料量不得超过罐容积70％。
(3)种子罐灭菌：装好料后，在0.11MPa压力下灭菌30min，冷却至30℃后即可接种。
(4)接种：将摇瓶内培养好的哈茨木霉(Trichoderma harziarum)菌液，接种于冷却至30℃的种子罐内进行培养。
(5)种子罐培养条件控制：哈茨木霉接种后在温度为28℃，转速120rpm，培养16-20h，镜检观察菌丝较多呈团簇状，即可转入发酵罐培养。
1.1.1.4发酵罐发酵
(1)发酵罐培养基
哈茨木霉发酵罐培养基同种子罐发酵培养基。
(2)发酵培养条件
搅拌速度160rpm，罐压0.05MPa；通气量：发酵前期1:0.5(V/V·min)，后期逐渐调至1:1(V/V·min)，一般发酵培养周期为84-90h，即可放罐。
1.1.2粉红粘帚霉
粉红粘帚霉菌株保藏号为CGMCC NO.9008，发酵工艺同哈茨木霉。
1.1.3枯草芽孢杆菌
枯草芽孢杆菌菌株保藏号为CGMCC NO.7850。生产工艺如下：
1.1.3.1原菌种活化
枯草芽孢杆菌培养基制备：牛肉膏0.3％，蛋白胨0.5％，NaCl0.5％，琼脂2％。用NaOH或HCl调pH值至7.0-7.5，然后分装三角瓶或试管，置于灭菌锅内，在0.11MPa压力下灭菌30min。
菌种活化与扩大培养：用接种针在无菌条件下从原菌种斜面上挑取少许菌苔，在倒有培养基的培养皿内进行划线，然后置28-30℃温箱内培养24h，肉眼观察，涂片、染色检查无杂菌，芽孢整齐时，作为发酵生产的菌种。
1.1.3.2摇瓶培养
枯草芽孢杆菌摇瓶培养基配方：牛肉膏0.3％，蛋白胨0.7％，氯化钠0.5％，pH值7.0。将配好的液体培养基分装2000ml三角瓶，每瓶装液量500ml，在高压湿热灭菌锅内121℃、0.11MPa灭菌30min。从培养好枯草芽孢杆菌的平板上刮取少许菌苔放入摇瓶中，于32℃，转速180rpm的全温振荡培养箱中培养8-10h，镜检观察枯草芽孢杆菌生长状态达到对数期，即可上种子罐培养。
1.1.3.3种子罐培养
枯草芽孢杆菌种子罐培养基配方：豆粕粉2％、鱼粉0.5％、玉米粉1.8％、淀粉0.4％，硫酸镁0.06％，磷酸氢二钾0.5％，泡敌0.025％，pH值7.0-7.5。
(1)空发酵罐灭菌：发酵罐在应用前清洗干净，排除污物，并在0.11MPa压力下，灭菌30min。
(2)种子罐装料：参考培养基配方比例装料，投料量不得超过罐容积70％。
(3)种子罐灭菌：装好料后，在0.11MPa压力下灭菌30min，冷却至30℃后即可接种。
(4)接种：将摇瓶内培养好的枯草芽孢杆菌(Baciilus subtilis)菌液，接种于冷却至30℃的种子罐内进行培养。
(5)种子罐培养条件控制：枯草芽孢杆菌接种后在温度为32℃，转速220rpm搅拌条件下，培养8-10h，镜检观察枯草芽孢杆菌生长状态达到对数期，即可转入发酵罐培养。
(6)发酵罐发酵
发酵培养基：
豆粕粉2％、鱼粉0.5％、玉米粉1.8％、淀粉0.4％，硫酸镁0.06％，磷酸氢二钾0.5％，泡敌0.025％，pH值7.0-7.5。
发酵罐的发酵条件：
转速为210-230rpm、压力为0.04-0.06兆帕的条件下发酵培养28-32小时，得到所述枯草芽孢杆菌发酵液。
1.1.4解磷菌
解磷菌巨大芽孢杆菌的发酵工艺同枯草芽孢杆菌。
1.1.5解钾菌
1.1.5.1原菌种活化
解钾菌培养基制备：淀粉0.5％，蔗糖0.5％，酵母粉0.05％，碳酸钙0.01％，硫酸钙0.05％，七水合硫酸镁0.05％，琼脂2％。用NaOH或HCl调pH值至7.0-7.5，然后分装三角瓶或试管，置于灭菌锅内，在0.11MPa压力下灭菌30min。
菌种活化与扩大培养：用接种针在无菌条件下从原菌种斜面上挑取少许菌苔，在倒有培养基的培养皿内进行划线，然后置28-30℃温箱内培养24h，肉眼观察，涂片、染色检查无杂菌，芽孢整齐时，作为发酵生产的菌种。
1.1.5.2摇瓶培养
解钾菌摇瓶培养基配方：糖蜜2％、豆粕粉0.5％、碳酸钙0.1％、硫酸镁0.1％，磷酸氢二钾0.5％，泡敌0.025％，pH值7.0-7.5。
1.1.5.3种子罐培养
解钾菌种子罐培养基配方：糖蜜2％、豆粕粉0.5％、碳酸钙0.1％、硫酸镁0.1％，磷酸氢二钾0.5％，泡敌0.025％，pH值7.0-7.5。
(1)空发酵罐灭菌：发酵罐在应用前清洗干净，排除污物，并在0.11MPa压力下，灭菌30min。
(2)种子罐装料：参考培养基配方比例装料，投料量不得超过罐容积70％。
(3)种子罐灭菌：装好料后，在0.11MPa压力下灭菌30min，冷却至32℃后即可接种。
(4)接种：将摇瓶内培养好的解钾菌菌液，接种于冷却至32℃的种子罐内进行培养。
(5)种子罐培养条件控制：解钾菌接种后在温度为32℃，转速220rpm搅拌条件下，培养8-10h，镜检观察解钾菌生长状态达到对数期，即可转入发酵罐培养。
(6)发酵罐发酵
发酵培养基同种子罐培养基配方，发酵条件为：解钾菌接种后在温度为32℃，转速220rpm搅拌条件下培养60-70小时。
1.1.6吸附
各个菌株发酵液按照哈茨木霉、粉红粘帚霉、枯草芽孢杆菌、解磷菌和解钾菌的菌数比例(0.5-1.5)：(0.5-1.5)：(2-5)：(2-3)：(2-3)配好混匀，然后添加草炭吸附，采用粒度为17目的草炭为吸附剂，往发酵液中加入吸附剂后，机械搅拌3-6min，使芽孢、孢子全部被吸附，混合均匀。得到的混料用皮带机传送到链条粉碎机粉碎，达到100％通过17目孔径筛。
1.1.7成品检验
用稀释平板法检测复合菌剂含菌量，含菌量≥5.0亿/克为合格。含水量用水份分析仪测定，含水率≤35％为合格。细度采用过国家标准检验准筛测定，100％通过17目筛为合格。
1.1.8包装
用塑料袋1公斤/袋包装，于干燥通风处贮存，保质期2年。
实施例2(施用复合菌剂对草莓促生及防病效果试验)
试验目的：为了验证该产品在草莓上大面积示范应用的增产和防病效果，在草莓上进行了该肥料的田间小区试验。
试验地点：北京市延庆县康庄镇小丰营绿菜园专业合作社
选用实施例1的复合菌剂：哈茨木霉、粉红粘帚霉、枯草芽孢杆菌、解磷菌和解钾菌的菌数比例为1：1：3：2：2，复合菌剂含菌量，含菌量≥5亿/克。
供试品种：草莓品种为“红颜”
试验方法：施用方法为穴施，本试验共4个处理，分别是：a1常规施肥，a2常规施肥+复合菌剂(粉剂)2kg/亩，a3常规施肥+复合菌剂(粉剂)4kg/亩，a4常规施肥+复合菌剂(粉剂)6kg/亩(穴施)。
试验结果：
表1
用量 株高(cm) 叶片数 死苗率(％) 开花株数
a1 0 9.9 7.6 13.0 27
a2 2kg/亩 13.7 9.2 12.5 32
a3 4kg/亩 14.9 10.8 11.5 81
a4 6kg/亩 17.8 11.6 10.1 86
试验结论:
通过表1数据可知，与未使用菌剂的相比，草莓施用复合菌剂60天后根系发达，植株增高，茎秆增粗，叶片增多增厚，叶色浓绿，生长稳健。数据统计结果显示，与对照处理1相比株高增加2.9～7.9cm，叶片数增加0.8～4个，死苗率降低0.5～2.9％，开花株数增加5～59株，其中复合菌剂的亩用量为6kg时防效最高，促生效果最好。
实施例3(施用复合菌剂对甜菜根腐病防治效果与增产增糖试验)
试验目的：为了验证该产品在甜菜上大面积示范应用的增产和防治根腐病效果，在甜菜上进行了该肥料的田间试验。
试验地点：内蒙古乌兰察布市商都县梁家村甜菜试验田(重茬地)
选用实施例1的复合菌剂：哈茨木霉、粉红粘帚霉、枯草芽孢杆菌、解磷菌和解钾菌的菌数比例为1：1：3：2：2，复合菌剂含菌量，含菌量≥5亿/克。
试验方法：施用方法为基施，处理分别是复合菌剂、空白对照，每个处理约3亩，亩用量是5kg，将生防菌和农家肥混合后施入土中。
调查指标：
(1)促生效果
甜菜收获期(10月)调查，处理区和对照区分别取5点，每点选2平方米的植株进行调查，只对块根进行称重，记录各点的产量，计算亩产量，统计分析促生效果。
(2)防治效果：
甜菜收获期(10月)调查，处理区和对照区分别取5点，每点选2平方米的植株进行调查。记录调查总株数和病株数，计算发病率，统计分析防病效果。
分级方法：
0级：块根生长正常、完好；
l级：块尾及根表组织有轻微病变，病变尚未侵及根体内组织；
2级：根尾及根表组织有明显病变，维管束呈褐色.但尚未木质化；
3级：维管束呈深褐色，导管木质化，生育严重受阻，病根有部分早开始腐烂，腐烂部分占块根的10％以下；
4级：腐烂部分占块根的10％～30％；
5级：块根腐烂部分占块根的30％以上或全株因病枯死。
在甜菜收获期(10月初)掘出取样点的全部块根统计根腐病的发病情况；
病情指数＝[Σ(病颗数×相对应级数值)/(调查总颗数×最高级)]×100
防治效果(％)＝[(对照区病情指数-处理区病情指数)/对照区病情指数]×100
死苗率(％)＝死苗颗数/调查总颗数×100
(3)甜菜产量和含糖量
甜菜产量的测定
处理区和对照区分别取5点，每点选2平方米的植株进行调查，只对块根进行称重，分别记载各点的产量，计算亩产量。
计算方法：
每平方米的实际产量(每次重复)＝(2×5)平方米甜菜块根产量/10
每亩理论产量(kg)＝每平方米的实际产量×666.67平方米
增产效果(％)＝(处理区平均产量-对照区平均产量)/对照区平均产量×100
甜菜含糖量的测定
每个处理区选5点，每点取5颗甜菜块根，每个块根在基部取样榨汁测定糖度，分别记载测定数据。
试验结果：
表2
试验结论:
商都县梁家村甜菜试验田试验结果表明，复合菌剂处理后的甜菜死苗率减少57.3％，糖度增加2度，增产5.3％，解决了当地甜菜上重要的生产问题，进一步推动了我国甜菜产业的发展。
实施例4(施用复合菌剂对向日葵黄萎病防治试验)
试验目的：为了验证该产品在向日葵上大面积示范应用的增产和防治枯黄萎病效果，在向日葵上进行了该肥料的田间试验。
试验地点：内蒙古巴彦淖尔市临河区。
选用实施例1的复合菌剂：哈茨木霉、粉红粘帚霉、枯草芽孢杆菌、解磷菌和解钾菌的菌数比例为1：1：3：2：2，复合菌剂含菌量，含菌量≥5亿/克。
试验方法：施用方法为基施，复合菌剂用量为6kg/亩，对照用普通农家肥。
试验结果如下:
表3
病情指数 防效(％) 发病率(％)
复合菌剂 1.6 10.0 97.5
无复合菌剂 64.2 89.0 —
试验结论:
由统计结果显示，对照区和示范区周边田黄萎病发病率为89～100％，严重的地块由于黄萎病导致向日葵死亡率达到100％，处理区黄萎病发病率为0～10％，未见死亡病株，病情指数最高为1.6，防治效果达到97.5％以上。
虽然本发明所揭露的实施方式如上，但所述的内容只是为了便于理解本发明而采用的实施方式，并非用以限定本发明。任何本发明所属技术领域内的技术人员，在不脱离本发明所揭露的精神和范围的前提下，可以在实施的形式上及细节上作任何的修改与变化，但本发明的专利保护范围，仍须以所附的权利要求书所界定的范围为准。

Claims (10)

1.一种防治植物重茬病害的复合菌剂，其特征在于，该复合菌剂包含哈茨木霉、枯草芽孢杆菌和粉红粘帚霉，还包含解磷菌和解钾菌，
所述哈茨木霉的菌株保藏编号是CGMCC NO.7861，所述枯草芽孢杆菌菌株的保藏号为CGMCC NO.7850，所述粉红粘帚霉的菌株保藏编号是CGMCC NO.9008；
其中，所述哈茨木霉、粉红粘帚霉和枯草芽孢杆菌的菌数比例为(0.5-1.5)：(0.5-1.5)：(2-5)。
2.根据权利要求1所述的复合菌剂，其中，所述解磷菌为巨大芽孢杆菌，所述解钾菌为胶质芽孢杆菌。
3.根据权利要求1或2所述的复合菌剂，其中，所述复合菌剂的含菌总量≥5亿/克。
4.根据权利要求1或2所述的复合菌剂，其中，所述复合菌剂还包括吸附剂，所述哈茨木霉、枯草芽孢杆菌、粉红粘帚霉、含解磷菌和解钾菌吸附于吸附剂，所述吸附剂为草碳、玉米芯、钙粉、麦麸。
5.一种如权利要求1-4中任意一项所述的复合菌剂的制备方法，其特征在于，该方法包括：
分别将哈茨木霉、枯草芽孢杆菌和粉红粘帚霉进行液体深层发酵和加入吸附剂，然后三者均匀混合，得到所述复合菌剂。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其中，所述液体深层发酵的操作包括如下步骤：
(1)菌种活化
分别将所述哈茨木霉、枯草芽孢杆菌和粉红粘帚霉接种到固体培养基，在pH值7.0-7.5、28-30℃温箱内培养24-72h；
(2)摇瓶培养
活化后的哈茨木霉和粉红粘帚霉接种到液体培养基，于28℃，转速120rpm的全温振荡培养箱中培养12-16h；活化后的枯草芽孢杆菌于32℃，转速180rpm的全温振荡培养箱中培养8-10h；
(3)种子罐培养
将摇瓶内培养好的哈茨木霉(Trichoderma harziarum)、枯草芽孢杆菌和粉红粘帚霉的菌液，接种于冷却至30℃的种子罐内进行培养，接种后在温度为28℃，转速120rpm，培养16-20h，镜检观察菌丝较多呈团簇状，即可转入发酵罐培养；
(4)发酵罐发酵
将种子罐内培养好的哈茨木霉(Trichoderma harziarum)、枯草芽孢杆菌和粉红粘帚霉的菌液，接种于冷却至30℃的发酵罐内进行培养，搅拌速度120rpm，罐压0.05MPa；通气量：发酵前期1:0.5(V/V·min)，后期逐渐调至1:1(V/V·min)，一般发酵培养周期为84-90h。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其中，所述哈茨木霉种子罐和发酵罐的培养基配方：玉米粉5％，硫酸铵0.05％，泡敌0.02％，注射青霉素钾3支，注射硫酸链霉素2支，pH值7.0-7.5；
所述枯草芽孢杆菌的种子罐和发酵罐的培养基配方：豆粕粉2％、鱼粉0.5％、玉米粉1.8％、淀粉0.4％，硫酸镁0.06％，磷酸氢二钾0.5％，泡敌0.025％，pH值7.0-7.5。
8.根据权利要求1-4中任意一项所述的复合菌剂在防治植物病害中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其中，所述植物病害为土传植物病害。
10.根据权利要求8所述的应用，其中，所述植物病害为根腐病、枯黄萎病、立枯病、灰霉病、疫病、白粉病、菌核病、苗期猝倒病中的至少一种。
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