CN107043727B - 一种造肥催腐型复合菌剂及其制备方法和应用 - Google Patents

一种造肥催腐型复合菌剂及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种造肥催腐型复合菌剂及其制备方法和应用。造肥催腐型复合菌剂由大豆根瘤菌、萤光假单胞菌、蜡样芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、淡紫拟青霉菌、哈茨木霉菌等菌种分别经固液双相培养并调整活菌数后混配而成；能促进秸秆分解利用，改善土壤板结酸化现象，防止肥分流失，保护生态环境，省肥料，省农药，降低农作物耕种成本，保证农作物生长旺盛，增产丰收。

Description

一种造肥催腐型复合菌剂及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于微生物菌剂技术领域，具体涉及－种造肥催腐型复合菌剂及其制备方法和应用。
背景技术
在过去化学肥料累积了大量的化学元素而造成了农田土壤酸化、硬化、病虫害与毒素的严重问题。过量的氮肥造成脱氨现象及形成亚硝酸盐的毒害，磷肥形成不溶性的磷盐化物而加深土壤酸化板结的问题，进而造成土壤深层厌气发酵而产生硫化氢气体与氨气，导致形成烂根败丛，致使植物根部营养不良而衰弱多病，植物病虫害问题随之加重。这样迫使大量化学激素与化学农药使用，结果又带来了农药化学残留与土壤污染的问题。
要解决这一连串的问题，目前最需要的是创制一种多样化复合菌剂提供多方位的功能，一气呵成地解决现今土壤面临的复杂难题。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供了－种造肥催腐型复合菌剂及其制备方法和应用。该造肥催腐型复合菌剂能促进秸秆分解利用，改善土壤板结酸化现象，防止肥分流失，保护生态环境，省肥料，省农药，降低农作物耕种成本，保证农作物生长旺盛，增产丰收。
本发明提供的技术方案为：
一种造肥催腐型复合菌剂，包括以下重量百分比的菌种原粉：
大豆根瘤菌10～15％；
萤光假单胞菌10～15％；
蜡样芽孢杆菌10～15％；
胶质芽孢杆菌10～15％；
枯草芽孢杆菌10～15％；
淡紫拟青霉菌10～15％；
哈茨木霉菌10～15％。
各菌种原粉的活菌数分别为：
大豆根瘤菌3～5×108cfu/g；
萤光假单胞菌3～5×108cfu/g；
蜡样芽孢杆菌3～5×108cfu/g；
胶质芽孢杆菌3～5×108cfu/g；
枯草芽孢杆菌3～5×108cfu/g；
淡紫拟青霉菌3～5×107cfu/g；
哈茨木霉菌3～5×107cfu/g。
本发明还提供了所述造肥催腐型复合菌剂的制备方法，其包括以下步骤：
(1)将大豆根瘤菌、萤光假单胞菌、蜡样芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、淡紫拟青霉菌、哈茨木霉菌菌种分别培养熟化成菌种液；
(2)将步骤(1)得到的各菌种液分别经粉末培养基培养成各菌种原粉；
(3)将步骤(2)得到的各菌种原粉调整至目标活菌数，具体为：大豆根瘤菌、萤光假单胞菌、蜡样芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌目标活菌数均为3～5×108cfu/g；淡紫拟青霉菌和哈茨木霉菌目标活菌数均为3～5×107cfu/g；
(4)将调整至目标活菌数的各菌种原粉按所述重量百分比的配比混合均匀，即可得到造肥催腐型复合菌剂。
所述步骤(1)中，大豆根瘤菌、萤光假单胞菌、蜡样芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌培养所用的培养基每升中所含成分及重量百分比均为：培养基中氨基酸2.0％，磷酸二氢钾1.0％，尿素1.0％，氯化钠0.2％，碳酸钙0.2％，葡萄糖0.5％，其余为蒸馏水，pH为6.8～7.2。
所述步骤(1)中，淡紫拟青霉菌培养所用的培养基每升中所含成分及重量百分比为：氨基酸1.0％，磷酸二氢钾1.0％，尿素1.0％，氯化钠0.2％，糖蜜5.0％，其余为蒸馏水，pH为7.0～7.4；
哈茨木霉菌培养所用的培养基每升中所含成分及重量百分比为：磷酸氢二钾0.2％，硝酸钾0.2％，氯化钾0.05％，氯化钠0.1％，糖蜜5.0％，葡萄糖1.0％，其余为蒸馏水，pH为6.8～7.2。
以上各培养基均经过高温高压反应罐灭菌。各菌种需要在各自适配培养基中培养，以提升各菌种的生长繁殖速度和菌种质量。
所述步骤(1)中，培养条件为将各菌种分别接种于各自适配培养基中，28～30℃搅拌培养48～72小时，然后再将培养后的菌种全部接种于80倍体积的培养基中，28～30℃扩大搅拌培养3～5天，即可得到菌种液。
所述步骤(1)中还包括在培养的过程中，向培养基中充氧。
所述步骤(2)中，菌种液与粉末培养基的重量之比为(4～8)：(42～63)，所述粉末培养基包括以下重量份的成分：玉米细粉400～600份、大豆蛋白细粉20～30份。
所述粉末培养基的制备方法为：将玉米细分和大豆蛋白细粉混合均匀后，加热至100～120℃，持续10-30分钟，达到无菌状态后冷却至30～35℃，待用。
所述步骤(2)中，培养条件为：用无菌水调节体系水分含量为40％～50％，于28～32℃培养，培养过程中保持无菌空气正压充氧，并断续搅拌，当菌种到达生长高峰期后改用30～40℃无菌干燥空气吹入体系并持续搅拌至体系水分含量降至10％以下，即可得到菌种原粉。
所述无菌空气的流量为0.2-0.5m3/min，所述断续搅拌为以24～36rpm/s的转速每3～6小时搅拌3～5分钟，所述生长高峰期的判断方式为：在培养的过程中每24小时检测菌株总菌数浓度，根据总菌数浓度判断生长高峰期；所述无菌干燥空气的流量为0.2-0.5m3/min。
所述步骤(3)中，所述调整的方法为向步骤(2)得到的各菌种原粉中加入无菌混合粉末，所述无菌混合粉末包括以下重量百分比的成分：玉米细粉75～90％，黄豆粕粉2～15％，葡萄糖2～12％。采用此配比的无菌混合粉末具有调整稀释活菌数的作用,同时又能为菌种繁殖提供营养成分,维持菌种活力的效果。
本发明还提供了所述造肥催腐型复合菌剂的应用，所述造肥催腐型复合菌剂具有固氮、溶磷、解钾、防止土壤肥分流失、腐化秸秆的作用。
在应用时，所述造肥催腐型复合菌剂的使用方法为：
a.活化：将上述造肥催腐型复合菌剂加9倍水稀释，放置室温24-72小时，令其相互拮抗以激发有效分泌物的大量产出后，稀释50-100倍，待用；
b.散布：将上述己稀释活化的造肥催腐型复合菌剂按200-500kg/亩散布于耕地；
c.翻耕：菌剂散布后，立即耕耘入土15-40厘米以上，保持湿度30-50％放置14-21天。
本发明公开的造肥催腐型复合菌剂，其成分中，大豆根瘤菌和萤光假单胞菌具有固氮能力，萤光假单胞菌和蜡样芽孢杆菌对土壤中不溶性磷具有解磷作用，地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌以及哈茨木霉菌具有强烈的分解能力，能够分解农残、秸秆有机质、木质纤维、淀粉、脂肪、蛋白。
在这群群体中，淡紫拟青霉菌、地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和哈茨木霉都是具备强烈生物防治能力的菌种。所述造肥催腐型复合菌剂存活力强大又能迅速繁殖，能缓冲土壤肥分，使可利用肥分不致于发生施肥瞬间过剩而流失的现象。防止肥分流失而污染河川湖泊。所述造肥催腐型复合菌剂各菌种功能搭配完美，能够有效解决目前国内农业与土地的难题，它有助于固氮、溶磷、防止化肥流失、病虫害防冶及秸秆和有机废弃物之资源再利用。是一种由多种功能范畴相辅相成的菌群完美结合而成的新颖生物土壤改良剂。
在所述造肥催腐型复合菌剂的制备过程中，为实现个菌种的高纯度高活菌数的品质，本发明使用高温高压反应罐消毒灭菌各适用液态培养基，采用各菌种单独各自培养以制得高纯度高菌数的量化菌种；接着再将此液态单一菌种投入己灭菌的固态培养基中继续量化培养，菌种在液态培养及固体培养过程中均为单一菌种，并在单一菌种的最适培养基与环境下培养，因此各菌种能充分繁殖茁壮，避免多种微生物一起培养过程中，因生存竞争产生拮抗作用或因繁殖生长速度悬殊而发生部分菌种衰微或近乎消迹的缺点；最后又依照合理安排的活菌数混配而成。施用时各种不同微生物都能充分发挥其特有功能，以达到预期效果。
本发明公开的造肥催腐型复合菌剂，可利用固氮菌将存在于大气中含量达80％以上，但不能为作物所直接吸收利用的氮分子转化为植物能够吸收利用的氮离子状态，即可为植物提供大量生长所需，又可使土壤中的氨及亚硝酸氧化而成硝酸态氮，解毒造肥。
本发明公开的造肥催腐型复合菌剂，可利用溶磷菌和解钾菌将累积在土壤中的不溶性磷钾化合物取代为可溶性磷钾盐类，如此一来不但解除了板结问题，同时也提升了土壤中的磷钾肥分。并采用具有强烈分解力的有益微生物群，包括大豆根瘤菌、萤光假单胞菌、蜡样芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、淡紫拟青霉菌、哈茨木霉菌等，这些微生物群的结合不但能迅速分解腐化秸秆为肥分，同时也能对抗病虫害，达到减免农药的目的。这群强势的微生物大量而快速地耗尽土壤中的营养资源而快速成长繁殖，使土壤中氮、磷、钾等无机肥分不致于发生施肥瞬间过剩而流失的现象。当土壤中的营养成分渐被耗尽时，微生物也随着渐次因饥饿而死亡，死亡菌体腐化而成有机营养回归大地，达到防止肥分流失又能转化无机肥分为缓效有机肥的效果。达到造肥催腐的双重效果。
本发明公开的造肥催腐型复合菌剂用于堆肥发酵时，可缩短堆肥熟化所需时间，菌群生长繁殖迅速而产生的高温可达75℃以上，由于持续高温能杀死病原体、虫卵和杂草种子，能彻底使堆肥无害化。当堆肥发酵完成而施用于耕地时，大量繁殖而强势的有益菌群即以其菌群优势占据大地发挥其益生功能。
与现有技术相比，本发明得到的造肥催腐型复合菌剂具有如下有益效果：
A.固定天然氮源：能使自然界中存在但不能为作物为所直接吸收利用的氮分子转化为植物能够吸收利用的氮离子状态或含氮盐类以提供植物生长所需。
B.解除磷钾板结：能将累积在土壤中的不溶性磷钾化合物化学取代为可溶性磷钾盐类，不但解除了板结问题，同时也提升了土壤中的磷钾肥分。
C.防止肥分流失：能快速地耗尽土壤中的营养资源而繁殖，当营养资源耗尽，微生物死亡之际，菌体腐化而成有机营养成分回归大地。即能防止无机肥分发生施肥瞬间过剩而流失的现象，同时转化化学肥分为缓效有机肥的效果。
D.腐化秸秆分解农残：具有强大分解能力的菌群能迅速分解有机质及农残物质，并能使秸秆的纤维质细胞壁结构破坏，使秸秆迅速破壁分解腐化并释出其养分供植物吸收利用。
E.防治病虫害：具有造肥、防流失、分解秸秆、解毒之外，并具有强烈生物防治的能力。萤光假单孢菌分泌假单孢菌素，对腐霉、丝囊霉、小麦全蚀病、棉花幼苗猝倒病、马铃薯软腐病、杀线虫有效。地衣芽孢杆菌防治黑星病及花生线虫。枯草芽孢杆菌能对付不同种类的病虫害，包括马铃薯疮痂、蕃茄青枯病、苹果红腐病、霉心病、炭疽病、小麦赤霉病、水稻纹枯病、立枯丝核菌、腐霉菌、镰霉菌等广幅度病害，同时也具有杀灭线虫的能力。淡紫拟青霉则为线虫卵寄生真菌，能消灭线虫包括大豆孢囊线虫、烟草根结线虫，亦可消灭块茎娥、粉蚧等。哈茨木霉木霉素分泌Trichodermin、peptaibole、chitinase。能防治腐霉、丝囊霉、小麦全蚀病、蕃茄、棉花幼苗猝倒病、马铃薯软腐病、立枯病、花生辣椒的白绢病、水稻纹枯病。
具体实施方式
一种造肥催腐型复合菌剂，包括如表1所示的重量百分比及活菌数的菌种：
表1
其制备方法，包括以下步骤：
(1)将大豆根瘤菌、萤光假单胞菌、蜡样芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、淡紫拟青霉菌、哈茨木霉菌菌种分别培养熟化成菌种液；
具体方法为：
将大豆根瘤菌、萤光假单胞菌、蜡样芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌分别经培养基一培养，淡紫拟青霉菌经培养基二培养，哈茨木霉菌经培养基三培养，各菌种培养条件均为：在28-30℃温度下，维持搅拌充氧，培养48-72小时后，再将此菌种全部投入种子罐中，种子罐中的培养基与上一步骤培养基相同，菌种与种子罐中培养基的重量之比为1：80，维持28-30℃温度，搅拌充氧培养3-5天，得到熟化后的菌种液备用。
培养基一每升中所含成分及重量百分比为：培养基中氨基酸2.0％，磷酸二氢钾1.0％，尿素1.0％，氯化钠0.2％，碳酸钙0.2％，葡萄糖0.5％，其余为蒸馏水，pH为6.8～7.2；
培养基二每升中所含成分及重量百分比为：氨基酸1.0％，磷酸二氢钾1.0％，尿素1.0％，氯化钠0.2％，糖蜜5.0％，其余为蒸馏水，pH为7.0～7.4；
培养基三每升中所含成分及重量百分比为：磷酸氢二钾0.2％，硝酸钾0.2％，氯化钾0.05％，氯化钠0.1％，糖蜜5.0％，葡萄糖1.0％，其余为蒸馏水，pH为6.8～7.2。
(2)将步骤(1)得到的各菌种液分别经粉末培养基培养成各菌种原粉；
将各菌种液添加到粉末培养基中充分搅拌混合均匀，菌种液与粉末培养基的重量之比为(4～8)：(42～63)，同时用常温无菌水调节体系水分含量为40-50％,达到最佳好气发酵含水率，控制温度为28-32℃，无菌空气以0.2-0.5m3/min正压充氧，同时以24-36rpm/s转速，每3-6小时搅拌3-5分钟的频率断续搅拌，培养24小时后，每24小时检测菌株总菌数浓度，根据总菌数浓度判断生长高峰期，当达到生长高峰期后即时改用30-40℃无菌干燥空气吹入，所述无菌干燥空气的流量为0.2-0.5m3/min，同时以24-36rpm/s转速持续搅拌，降低体系湿度达到水分10％以下时，即成固态“单一菌种原粉”，出料，备用；
所述粉末培养基包括以下重量份的成分：玉米细粉400～600份、大豆蛋白细粉20～30份。
(3)向步骤(2)得到的各菌种原粉中加入无菌混合粉末，所述无菌混合粉末包括以下重量百分比的成分：玉米细粉75～90％，黄豆粕粉2～15％，葡萄糖2～12％，调整至目标活菌数，具体为：大豆根瘤菌、萤光假单胞菌、蜡样芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌目标活菌数均为3～5×108cfu/g；淡紫拟青霉菌和哈茨木霉菌目标活菌数均为3～5×107cfu/g；
(4)将调整至目标活菌数的各菌种原粉按所述重量百分比的配比混合均匀，即可得到造肥催腐型复合菌剂。
下面结合具体实施例1～3对本发明进行详细说明。
实施例1
一种造肥催腐型复合菌剂，包括如表2所示的重量百分比及活菌数的菌种：
表2
造肥催腐型复合菌剂的制备方法为：
(1)将大豆根瘤菌、萤光假单胞菌、蜡样芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、淡紫拟青霉菌、哈茨木霉菌菌种分别培养熟化成菌种液；
具体方法为：
将大豆根瘤菌、萤光假单胞菌、蜡样芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌分别经培养基一培养，淡紫拟青霉菌经培养基二培养，哈茨木霉菌经培养基三培养，各菌种培养条件均为：在28℃温度下，维持搅拌充氧，培养72小时后，再将此菌种全部投入种子罐中，种子罐中的培养基与上一步骤培养基相同，菌种与种子罐中培养基的重量之比为1：80，维持28℃温度，搅拌充氧培养5天，得到熟化后的菌种液备用。
培养基一每升中所含成分及重量百分比为：培养基中氨基酸2.0％，磷酸二氢钾1.0％，尿素1.0％，氯化钠0.2％，碳酸钙0.2％，葡萄糖0.5％，其余为蒸馏水，pH为6.8；
培养基二每升中所含成分及重量百分比为：氨基酸1.0％，磷酸二氢钾1.0％，尿素1.0％，氯化钠0.2％，糖蜜5.0％，其余为蒸馏水，pH为7.0；
培养基三每升中所含成分及重量百分比为：磷酸氢二钾0.2％，硝酸钾0.2％，氯化钾0.05％，氯化钠0.1％，糖蜜5.0％，葡萄糖1.0％，其余为蒸馏水，pH为6.8。
(2)将步骤(1)得到的各菌种液分别经粉末培养基培养成各菌种原粉；
将各菌种液410kg添加到420kg粉末培养基中充分搅拌混合均匀，同时用常温无菌水调节体系水分含量为40％，达到最佳好气发酵含水率，控制温度为28℃，无菌空气以0.2-0.5m3/min正压充氧，同时以24rpm/s转速，每3小时搅拌3分钟的频率断续搅拌，培养24小时后，每24小时检测菌株总菌数浓度，根据总菌数浓度判断生长高峰期，当达到生长高峰期后即时改用30-40℃无菌干燥空气吹入，所述无菌干燥空气的流量为0.2-0.5m3/min，同时以24rpm/s转速持续搅拌，降低体系湿度达到水分10％以下时，即成固态“单一菌种原粉”，出料，备用；
所述粉末培养基包括以下重量份的成分：玉米细粉400kg、大豆蛋白细粉20kg。
(3)向步骤(2)得到的各菌种原粉中加入无菌混合粉末，所述无菌混合粉末包括以下重量百分比的成分：玉米细粉75％，黄豆粕粉15％，葡萄糖10％，调整至目标活菌数，具体为：大豆根瘤菌、萤光假单胞菌、蜡样芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌目标活菌数均为3×108cfu/g；淡紫拟青霉菌和哈茨木霉菌目标活菌数均为3×107cfu/g；
(4)将调整至目标活菌数的各菌种原粉按所述重量百分比的配比混合均匀，即可得到造肥催腐型复合菌剂。
将所述造肥催腐型复合菌剂，经活化并稀释后平均散布于耕地：
1.活化：使用上述造肥催腐型复合菌剂0.4kg，加水3.6kg，共4.0kg，放置室温24-72小时，令其相互拮抗以激发有效分泌物的大量产出后，稀释100倍，共400kg待用；
2.用量：每亩平均散布上述己活化并稀释之造肥催腐型复合菌剂200kg；
3.处理：菌剂散布后，立即耕耘入土20厘米以上，保持湿度40-50％放置21天。
田间试验作业及采样过程：
选取的2亩正在休耕的耕地作为供试田块。测试项目包据土壤的酸碱度、有机质含量、全氮、有效磷、速效钾等。第一天采样前先在地面依井字划分为九方区，于四角落方区内以及中央方区内采取样土共五袋，每袋一千克作为处理前样品送检，采土后，当天即全面平均喷哂上述己活化的造肥催腐型复合菌剂200kg/亩，并耕耘入土20厘米以上。测试期间保持地面湿度40-50％。第二十一天重新于四角落方区内以及中央方区内采样土共五袋，每袋一千克作为处理后样品送检。
检验结果：
处理前五袋样品及处理后五袋样品所检测各项目之平均数据如下表3所示：
表3
试验结果分析：依据处理前后各项数据平均值显示土壤酸碱值稍微倾向中性，有机质也微量增加，全氮含量则由0.0156％升为0.0262％，全氮含量明显提升。有效磷和速效钾则分别由29.49mg/kg及93.6mg/kg升为98.74mg/kg及325.6mg/kg。氮、磷、钾三元素的上升比率分别为1.68倍、3.35倍、3.48倍。由此可见，本发明公开的造肥催腐型复合菌剂具有固氮、溶磷、解钾及防止肥分流失的效果。
实施例2
一种造肥催腐型复合菌剂，包括如表4所示的重量百分比及活菌数的菌种：
表4
菌种 活菌数 重量百分比
大豆根瘤菌 4×10<sup>8</sup>cfu/g 15％
萤光假单胞菌 4×10<sup>8</sup>cfu/g 15％
蜡样芽孢杆菌 4×10<sup>8</sup>cfu/g 15％
胶质芽孢杆菌 4×10<sup>8</sup>cfu/g 14％
枯草芽孢杆菌 4×10<sup>8</sup>cfu/g 12％
淡紫拟青霉菌 4×10<sup>7</sup>cfu/g 14％
哈茨木霉菌 4×10<sup>7</sup>cfu/g 15％
造肥催腐型复合菌剂的制备方法为：
(1)将大豆根瘤菌、萤光假单胞菌、蜡样芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、淡紫拟青霉菌、哈茨木霉菌菌种分别培养熟化成菌种液；
具体方法为：
将大豆根瘤菌、萤光假单胞菌、蜡样芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌分别经培养基一培养，淡紫拟青霉菌经培养基二培养，哈茨木霉菌经培养基三培养，各菌种培养条件均为：在30℃温度下，维持搅拌充氧，培养48小时后，再将此菌种全部投入种子罐中，种子罐中的培养基与上一步骤培养基相同，菌种与种子罐中培养基的重量之比为1：80，维持30℃温度，搅拌充氧培养3天，得到熟化后的菌种液备用。
培养基一每升中所含成分及重量百分比为：培养基中氨基酸2.0％，磷酸二氢钾1.0％，尿素1.0％，氯化钠0.2％，碳酸钙0.2％，葡萄糖0.5％，其余为蒸馏水，pH为7.0；
培养基二每升中所含成分及重量百分比为：氨基酸1.0％，磷酸二氢钾1.0％，尿素1.0％，氯化钠0.2％，糖蜜5.0％，其余为蒸馏水，pH为7.2；
培养基三每升中所含成分及重量百分比为：磷酸氢二钾0.2％，硝酸钾0.2％，氯化钾0.05％，氯化钠0.1％，糖蜜5.0％，葡萄糖1.0％，其余为蒸馏水，pH为7.0。
(2)将步骤(1)得到的各菌种液分别经粉末培养基培养成各菌种原粉；
将各菌种液60kg添加到55kg粉末培养基中充分搅拌混合均匀，同时用常温无菌水调节体系水分含量为45％，达到最佳好气发酵含水率，控制温度为32℃，无菌空气以0.2-0.5m3/min正压充氧，同时以24rpm/s转速，每6小时搅拌5分钟的频率断续搅拌，培养24小时后，每24小时检测菌株总菌数浓度，根据总菌数浓度判断生长高峰期，当达到生长高峰期后即时改用32℃无菌干燥空气吹入，所述无菌干燥空气的流量为0.2-0.5m3/min，同时以24rpm/s转速持续搅拌，降低体系湿度达到水分10％以下时，即成固态“单一菌种原粉”，出料，备用；
所述粉末培养基包括以下重量份的成分：玉米细粉500kg、大豆蛋白细粉25kg。
(3)向步骤(2)得到的各菌种原粉中加入无菌混合粉末，所述无菌混合粉末包括以下重量百分比的成分：玉米细粉82％，黄豆粕粉6％，葡萄糖12％，调整至目标活菌数，具体为：大豆根瘤菌、萤光假单胞菌、蜡样芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌目标活菌数均为4×108cfu/g；淡紫拟青霉菌和哈茨木霉菌目标活菌数均为4×107cfu/g；
(4)将调整至目标活菌数的各菌种原粉按所述重量百分比的配比混合均匀，即可得到造肥催腐型复合菌剂。
使用所述造肥催腐型复合菌剂，经活化后平均散布于耕地：
所述造肥催腐型复合菌剂的活化方法为：将述造肥催腐型复合菌剂0.2kg，加水1.8kg，共2.0kg，放置室温24-72小时，令其相互拮抗以激发有效分泌物的大量产出后，稀释100倍，共200kg待用；
选取棉花为供试作物，供试田块面积2.0亩，将田块平均分成两份，即试验区和对比区，两区同等施以15-15-15氮磷钾三元复合肥50kg/亩，试验区均匀散布500kg秸秆，同时均匀喷洒上述己活化的造肥催腐型复合菌剂200kg，菌剂散布后，试验区及对比区同时耕耘入土20厘米，保持湿度为40-50％，放置5天后将棉花分别移裁到实验区和对比区。试验区每30天喷洒己活化的造肥催腐型复合菌剂200kg/亩，试验区及对比区的其它农艺措施保持一致。
试验结果：
棉花收成前两天由试验区及对比区随机采取五株棉花，实验区棉花株高平均113.4cm，对比区棉花株高平均为106.8cm.实验区单株结铃平均19.8个，对比区单株结铃平均18.2个。两区所产单铃籽棉重量无明显差异，但是实验区亩产籽棉为221.1kg，对比区亩产籽棉则仅为203.4kg。
试验结果分析:
实验区叶面翠绿光亮而平均株高相对于对比区增加6.18％，田间现场可明显看出实验区与对比区的差异。亩产籽棉总量实验区相对于对比区增加8.7％。
由此可见：本发明公开的造肥催腐型复合菌剂能使植株生长茁壮旺盛，无严重病虫害。
实施例3
一种造肥催腐型复合菌剂，包括如表4所示的重量百分比及活菌数的菌种：
表4
菌种 活菌数 重量百分比
大豆根瘤菌 5×10<sup>8</sup>cfu/g 15％
萤光假单胞菌 5×10<sup>8</sup>cfu/g 15％
蜡样芽孢杆菌 5×10<sup>8</sup>cfu/g 15％
胶质芽孢杆菌 5×10<sup>8</sup>cfu/g 15％
枯草芽孢杆菌 5×10<sup>8</sup>cfu/g 10％
淡紫拟青霉菌 5×10<sup>7</sup>cfu/g 15％
哈茨木霉菌 5×10<sup>7</sup>cfu/g 15％
造肥催腐型复合菌剂的制备方法为：
(1)将大豆根瘤菌、萤光假单胞菌、蜡样芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、淡紫拟青霉菌、哈茨木霉菌菌种分别培养熟化成菌种液；
具体方法为：
将大豆根瘤菌、萤光假单胞菌、蜡样芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌分别经培养基一培养，淡紫拟青霉菌经培养基二培养，哈茨木霉菌经培养基三培养，各菌种培养条件均为：在30℃温度下，维持搅拌充氧，培养56小时后，再将此菌种全部投入种子罐中，种子罐中的培养基与上一步骤培养基相同，菌种与种子罐中培养基的重量之比为1：80，维持30℃温度，搅拌充氧培养5天，得到熟化后的菌种液备用。
培养基一每升中所含成分及重量百分比为：培养基中氨基酸2.0％，磷酸二氢钾1.0％，尿素1.0％，氯化钠0.2％，碳酸钙0.2％，葡萄糖0.5％，其余为蒸馏水，pH为7.2；
培养基二每升中所含成分及重量百分比为：氨基酸1.0％，磷酸二氢钾1.0％，尿素1.0％，氯化钠0.2％，糖蜜5.0％，其余为蒸馏水，pH为7.4；
培养基三每升中所含成分及重量百分比为：磷酸氢二钾0.2％，硝酸钾0.2％，氯化钾0.05％，氯化钠0.1％，糖蜜5.0％，葡萄糖1.0％，其余为蒸馏水，pH为7.2。
(2)将步骤(1)得到的各菌种液分别经粉末培养基培养成各菌种原粉；
将各菌种液80kg添加到630kg粉末培养基中充分搅拌混合均匀，同时用常温无菌水调节体系水分含量为50％，达到最佳好气发酵含水率，控制温度为30℃，无菌空气以0.2-0.5m3/min正压充氧，同时以36rpm/s转速，每4.5小时搅拌4分钟的频率断续搅拌，培养24小时后，每24小时检测菌株总菌数浓度，根据总菌数浓度判断生长高峰期，当达到生长高峰期后即时改用35℃无菌干燥空气吹入，所述无菌干燥空气的流量为0.2-0.5m3/min，同时以36rpm/s转速持续搅拌，降低体系湿度达到水分10％以下时，即成固态“单一菌种原粉”，出料，备用；
所述粉末培养基包括以下重量份的成分：玉米细粉600kg、大豆蛋白细粉30kg。
(3)向步骤(2)得到的各菌种原粉中加入无菌混合粉末，所述无菌混合粉末包括以下重量百分比的成分：玉米细粉90％，黄豆粕粉2％，葡萄糖8％，调整至目标活菌数，具体为：大豆根瘤菌、萤光假单胞菌、蜡样芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌目标活菌数均为5×108cfu/g；淡紫拟青霉菌和哈茨木霉菌目标活菌数均为5×107cfu/g；
(4)将调整至目标活菌数的各菌种原粉按所述重量百分比的配比混合均匀，即可得到造肥催腐型复合菌剂。
本发明所使用的各菌种均为购买得到。
上述参照实施例对造肥催腐型复合菌剂及其制备方法和应用进行的详细描述，是说明性的而不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例，因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种造肥催腐型复合菌剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
（1）将大豆根瘤菌、萤光假单胞菌、蜡样芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、淡紫拟青霉菌、哈茨木霉菌菌种分别培养熟化成菌种液；
（2）将步骤（1）得到的各菌种液分别经粉末培养基培养成各菌种原粉；所述粉末培养基包括以下重量份的成分：玉米细粉400~600份、大豆蛋白细粉20~30份；
（3）将步骤（2）得到的各菌种原粉调整至目标活菌数，具体为：大豆根瘤菌、萤光假单胞菌、蜡样芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌目标活菌数均为3~5×108cfu/g；淡紫拟青霉菌和哈茨木霉菌目标活菌数均为3~5×107cfu/g；
（4）将调整至目标活菌数的各菌种原粉按所述重量百分比的配比混合均匀，即可得到造肥催腐型复合菌剂；
步骤（4）中，所述各菌种原粉的重量百分比为：
大豆根瘤菌10~15 %；
萤光假单胞菌10~15 %；
蜡样芽孢杆菌10~15 %；
胶质芽孢杆菌10~15 %；
枯草芽孢杆菌10~15 %；
淡紫拟青霉菌10~15 %；
哈茨木霉菌10~15 %。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中，大豆根瘤菌、萤光假单胞菌、蜡样芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌培养所用的培养基每升中所含成分及重量百分比均为：培养基中氨基酸2.0%，磷酸二氢钾1.0%，尿素1.0%，氯化钠0.2%，碳酸钙0.2%，葡萄糖0.5%，其余为蒸馏水，pH为6.8~7.2。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中，淡紫拟青霉菌培养所用的培养基每升中所含成分及重量百分比为：氨基酸1.0%，磷酸二氢钾1.0%，尿素1.0%，氯化钠0.2%，糖蜜5.0%，其余为蒸馏水，pH为7.0~7.4；哈茨木霉菌培养所用的培养基每升中所含成分及重量百分比为：磷酸氢二钾0.2%，硝酸钾0.2%，氯化钾0.05%，氯化钠0.1%，糖蜜5.0%，葡萄糖1.0%，其余为蒸馏水，pH为6.8~7.2。
4.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中，培养条件为将各菌种分别接种于各自培养基中，28~30℃搅拌培养48~72小时，然后再将培养后的菌种全部接种于80倍体积的培养基中，28~30℃扩大搅拌培养3~5天，即可得到菌种液。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中，菌种液与粉末培养基的重量之比为（4~8）：（42~63）。
6.根据权利要求1或5所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中，培养条件为：用无菌水调节体系水分含量为40%~50%，于28~32℃培养，培养过程中保持无菌空气正压充氧，并断续搅拌，当菌种到达生长高峰期后改用30~40℃无菌干燥空气吹入体系并持续搅拌至体系水分含量降至10%以下，即可得到菌种原粉。
7.根据权利要求1或2或5所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中，所述调整的方法为向步骤（2）得到的各菌种原粉中加入无菌混合粉末，所述无菌混合粉末包括以下重量百分比的成分：玉米细粉75~90%，黄豆粕粉2~15%，葡萄糖2~12%。
8.根据权利要求1所述的造肥催腐型复合菌剂的应用，其特征在于，所述造肥催腐型复合菌剂具有固氮、溶磷、解钾、防止土壤肥分流失、腐化秸秆的作用。
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