CN103910545B - 利用猪粪废弃物生产哈茨木霉菌肥的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种利用猪粪废弃物生产哈茨木霉菌肥的方法，其步骤如下：以哈茨木霉(Trichoderma？harzianum)FJAT-9040为菌种制作生产用液体菌种；以猪粪废弃物为主要成份制备菌肥生产的固体培养基物，添加麸皮、麦粒、蔗糖和硫酸铵；调整含水体积比，混合后分装于食用菌袋中；灭菌后，接种所制备的液体菌种，28～30℃恒温培养发酵18-20天，结束后将其通风干燥后拌匀，即得哈茨木霉菌肥。本发明利用农业副产物猪粪废弃物为培养基主成份制备哈茨木霉菌肥，一方面可提高农业副产物资源化再利用效率；另一方面通过有机肥料与有益生防菌剂相结合，达到防病促长作用，本发明制备过程简单易行，培养的哈茨木霉生物菌肥的菌量高、活性好，操作方便、成本低。
Description
【技术领域】
本发明涉及一种利用猪粪废弃物生产哈茨木霉菌肥的方法。
【背景技术】
随着社会及经济的发展，化学农药带来生态环境和人类健康等弊端越来越突出，如化学农药的残留；土壤结构、肥力及植物生态系统的失衡；植物病菌耐药性的产生等。因此，科研人员开始将目光转向于研发生物制剂，目前有很多生物制剂已商品化，如菲律宾的淡紫拟青霉商品，Biocon；江苏省农业科学院的解淀粉芽胞杆菌商品，叶斑宁等。由于很多生物制剂都是液体性制剂，在运输及其药效的保质期上都会受到较大影响。在这种情况下，一些厂家及科研学者开始研发具有肥效和生防作用的固体生物制剂，以减少化肥和农药的使用，达到节约成本，降低土壤污染，保护环境的目的。
作物枯萎病是由尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)引起的一种典型毁灭性土传病害，可造成严重的连作障碍，对重要农作物的生产构成严重的威胁。病原菌从根部为害植物，引起维管束病害，造成植株枯死，在植株的全生育期均可发生。土传性病害在3～4年内就会由零星点片发展为普遍流行性病害。作物枯萎病一般导致减产20％～30％，严重田块可达50％～80％，甚至绝产，已成为限制着我国作物生产发展重要因素。一直以来，化学防治是控制土传病害的主要手段，但会带来病原的耐药性，及环境污染等问题，越来越多的学者认识到控制枯萎病应采用以农业可持续发展为宗旨的生物防治的可持续治理系统。真菌是作物枯萎病重要的生物防治之一。其中木霉菌是一种具有重要价值的生防菌株。
木霉菌对环境具有很强的适应性，杀菌具有广谱性，是一种理想的、难得的生防资源。据不完全资料统计，木霉菌至少对18个属29个种病原菌在体外或体内表现有拮抗作用，尤其对土传病原真菌具有显著的拮抗作用。目前，木霉的防治应用多采用孢子菌剂，要获得产量高，而且质量好的孢子菌剂，发酵是关键，其中固体发酵被公认为是获得真菌孢子的最好方法之一。在固体发酵中，由于菌体在湿度较低的条件下生长，因而通常得到的孢子对干旱条件更具抗性，而且在干燥的环境中更稳定。固体发酵培养基主要以稻草，麸皮，秸秆等农业副产物为主，但来源有限，且成本较高，因此寻找一种新的农业副产物作为固体发酵的主要培养基是必需的。
【发明内容】
本发明要解决的技术问题，在于提供一种利用猪粪废弃物生产哈茨木霉菌肥的方法，能够解决现有的肥料与有益生防菌剂分开，或者单纯地将有益生防菌剂与肥料混合，从而带来的生防作用及肥料效果不佳和环境污染等的一系列问题。同时，也可提高农业副产物资源化再利用效率，减少环境污染。
本发明是这样实现的：
一种利用猪粪废弃物生产哈茨木霉菌肥的方法，所述方法步骤如下：
(1)生产用液体菌种的制备：以哈茨木霉(Trichodermaharzianum)FJAT-9040为菌种，以马铃薯葡萄糖液体培养基为液体菌种用培养基，制备生产用液体菌种；
(2)哈茨木霉固体菌肥的制备：以猪粪废弃物为主要成份制备菌肥生产的固体培养基物，与麸皮、麦粒混合后，分装于食用菌袋中，灭菌后，接种步骤(1)所制备的液体菌种，28～30℃恒温培养发酵18-20天，制备哈茨木霉固体发酵产物，发酵结束后将其拌匀，即得哈茨木霉菌肥；
所述哈茨木霉(Trichodermaharzianum)FJAT-9040，于2012年5月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNo.6109。
进一步地，所述步骤(1)中生产用液体菌种制作步骤为：
步骤A.菌种的活化：配置PDA培养基，121℃灭菌20min，冷却至45℃倒于灭菌平板中，备用；取-70℃保存的哈茨木霉(Trichodermaharzianum)FJAT-9040菌株于PDA培养基平板上划线培养，28～30℃恒温培养3～4天；
步骤B.挑取步骤A中菌丝接种于马铃薯葡萄糖液体培养基中，28～30℃，170～200rpm摇床培养4～5天，即为生产用液体菌种。
进一步地，所述步骤(2)中哈茨木霉菌肥的制备步骤为：
步骤C.以猪粪废弃物为主要成份的固体基础培养基配制：猪粪废弃物与麸皮按重量比为9:1～5:5配制形成固体基础培养基；
步骤D.基础培养基中麦粒、无机碳源和无机氮源的添加：在基础培养基中添加麦粒作为固体培养基的疏松物质，再添加蔗糖和硫酸铵，搅拌均匀后加水，调整含水体积比为30％～50％，转入食用菌袋中，灭菌；
步骤F.哈茨木霉固体菌肥的培养与制备：往步骤D的培养基中接种步骤(1)中制备的液体菌种5～10体积份，28～30℃恒温下发酵18-20天，即哈茨木霉固体发酵产物，发酵结束后将其通风干燥后拌匀，即得哈茨木霉菌肥。
进一步地，步骤C中猪粪废弃物与麸皮的重量比为9：1-8：2。
进一步地，步骤D中的麦粒需浸泡处理，浸泡时间大于12h，使麦粒充分吸水膨胀。
进一步地，每100mL基础培养基所需的麦粒为30～50mL、蔗糖为2～4g、硫酸铵为1～3g。
进一步地，每100mL基础培养基所需的麦粒为40mL、蔗糖为3g、硫酸铵为2g。
本发明具有如下优点：
本发明的目的是提供一种以农业副产物猪粪废弃物为培养基主成份发酵哈茨木霉，用食用菌袋培养法制备哈茨木霉菌肥的方法。一方面可解决农业副产物随意丢弃带来的环境污染和化学肥料的使用带来的土壤结构变化等问题；另一方面可解决现有的肥料与有益生防菌剂分开，或者单纯地将有益生防菌剂与肥料混合，从而带来的生防作用及肥料效果不佳，环境污染等的一系列问题。本发明制备过程简单易行，培养的哈茨木霉生物菌肥的菌量高、活性好，操作方便、成本低。固体发酵培养时直接以猪粪废弃物作为主要培养基成份，在此基础上培养具有生防作用的微生物，因此本发明的菌肥将生防和肥用有机地结合起来，而且对环境无污染，具有显著的经济效益和环境保护效益。
【附图说明】
下面参照附图结合实施例对本发明作进一步的说明。
图1为本发明不同处理组的茄子盆栽苗枯萎病防治情况。
图2为本发明不同处理组的苦瓜盆栽苗枯萎病防治情况。
【具体实施方式】
本发明涉及一种利用猪粪废弃物生产哈茨木霉菌肥的方法，所述方法步骤如下：
(1)生产用液体菌种的制备：以哈茨木霉(Trichodermaharzianum)FJAT-9040为菌种，以马铃薯葡萄糖液体培养基为液体菌种用培养基，制备生产用液体菌种；
(2)哈茨木霉固体菌肥的制备：以猪粪废弃物为主要成份制备菌肥生产的固体培养基物，与麸皮、麦粒混合后，分装于食用菌袋中，灭菌后，接种步骤(1)所制备的液体菌种，28～30℃恒温培养发酵18-20天，制备哈茨木霉固体发酵产物，发酵结束后将其拌匀，即得哈茨木霉菌肥；
所述哈茨木霉(Trichodermaharzianum)FJAT-9040，于2012年5月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNo.6109。
所述步骤(1)中生产用液体菌种制作步骤为：
步骤A.菌种的活化：配置PDA培养基，121℃灭菌20min，冷却至45℃倒于灭菌平板中，备用；取-70℃保存的哈茨木霉(Trichodermaharzianum)FJAT-9040菌株于PDA培养基平板上划线培养，28～30℃恒温培养3～4天；
步骤B.挑取步骤A中菌丝接种于马铃薯葡萄糖液体培养基中，28～30℃，170～200rpm摇床培养4～5天，即为生产用液体菌种。
所述步骤(2)中哈茨木霉菌肥的制备步骤为：
步骤C.以猪粪废弃物为主要成份的固体基础培养基配制：猪粪废弃物与麸皮按重量比为9:1～5:5配制形成固体基础培养基；
步骤D.基础培养基中麦粒、无机碳源和无机氮源的添加：在基础培养基中添加麦粒作为固体培养基的疏松物质，再添加蔗糖和硫酸铵，搅拌均匀后加水，调整含水体积比为30％～50％，转入食用菌袋中，灭菌；
步骤F.哈茨木霉固体菌肥的培养与制备：往步骤D的培养基中接种步骤(1)中制备的液体菌种5～10体积份，28～30℃恒温下发酵18-20天，即哈茨木霉固体发酵产物，发酵结束后将其通风干燥后拌匀，即得哈茨木霉菌肥。
较优的，步骤C中猪粪废弃物与麸皮的重量比为9：1-8：2。
步骤D中的麦粒需浸泡处理，浸泡时间大于12h，使麦粒充分吸水膨胀。
每100mL基础培养基所需的麦粒为30～50mL、蔗糖为2～4g、硫酸铵为1～3g。
较优的，每100mL基础培养基所需的麦粒为40mL、蔗糖为3g、硫酸铵为2g。
所述PDA培养基的制备：马铃薯去皮后称取200g，切成1cm×1cm的小块，煮沸30min，八层纱布过滤后加入20g蔗糖、17～20g琼脂，pH自然，充分溶解后定容于1000mL，按瓶装量200mL/250mL分装于三角瓶中灭菌；
所述马铃薯葡萄糖液体培养基(PDB培养基)的制备：马铃薯去皮后称取200g，切成1cm×1cm的小块，煮沸30min，八层纱布过滤后加入20g蔗糖，pH自然，充分溶解后定容于1000mL，按瓶装量100mL/250mL分装于三角瓶中灭菌。
上述猪粪废弃物来源于零污染养猪技术的微生物发酵床养猪垫料，该技术是以发酵床为载体，把微生物菌种、谷壳、锯末、木屑等按一定比例混合，作为猪舍垫料，铺设于猪舍中。通过微生物作用，将猪粪尿中的有机物质进行充分分解、转化、发酵、最终除去异味并达到无害化，是一种零污染、微生物发酵床的新型环保技术。
下面结合具体的实施例，进一步阐述本发明。
实施例1
(1)生产用液体菌种的制备：
A.菌种的活化：配置马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基，121℃灭菌20min，冷却至45-50℃时倒于灭菌平板中，备用。取-70℃保存的哈茨木霉FJAT-9040菌株于PDA平板上划线培养，28～30℃恒温培养3～4天；
所述PDA培养基：马铃薯去皮后称取200g，切成1cm×1cm的小块，煮沸30min，八层纱布过滤后加入20g蔗糖、17～20g琼脂，pH自然，充分溶解后定容于1000mL，按瓶装量200mL/250mL分装于三角瓶中灭菌；
B.挑取步骤A中菌丝接种于马铃薯葡萄糖液体培养基中，28～30℃，170～200rpm摇床培养4～5天；
所述PDB培养基：马铃薯去皮后称取200g，切成1cm×1cm的小块，煮沸30min，八层纱布过滤后加入20g蔗糖，pH自然，充分溶解后定容于1000mL，按瓶装量100mL/250mL分装于三角瓶中灭菌。
(2)哈茨木霉固体菌肥的制备：
C.按90体积份的猪粪废弃物与10体积份的麸皮进行混合作为基础培养基，每100mL的基础培养基辅助添加40mL的麦粒，及2g的硫酸铵和3g的蔗糖，搅拌均匀后加水，调整含水体积比为50％，转入食用菌袋中，培养基中心插入钻有孔的50mL离心管，灭菌；
所述猪粪废弃物以发酵床为载体，按体积比谷壳50％、锯末50％、米糠2公斤/m3、微生物菌种短短芽胞杆菌1：1000的比例稀释均匀喷洒并拌匀，控制水份45-50％，作为猪舍垫料，铺设于猪舍中。通过微生物作用，将猪粪尿中的有机物质进行充分分解、转化、发酵、最终除去异味并达到无害化。
所述麦粒需浸泡处理，浸泡时间大于12小时，使麦粒充分吸水膨胀。
D.培养基冷却后，接种7份体积步骤(1)制备的种子液，28～30℃恒温下发酵18-20天，即可结束发酵，将发酵产物通风干燥并搅拌均匀，即得到哈茨木霉菌肥。
该哈茨木霉的固体发酵产物，孢子含量可达108个/g。
实施例2
(1)同实施例1步骤(1)
(2)利用实施例1相同的猪粪废弃物为主要培养基质生产哈茨木霉菌肥：
C.按80份体积的猪粪废弃物与20份体积的麸皮进行混合作为基础培养基，每100mL的基础培养基辅助添加40mL的麦粒，及2g的硫酸铵和3g的蔗糖，搅拌均匀后加入适量的水，调整含水体积比为30％，转入食用菌袋中，灭菌；
所述麦粒需浸泡处理，浸泡时间大于12小时，使麦粒充分吸水膨胀。
D.培养基冷却后，接种5份体积步骤(1)制备的种子液，28～30℃恒温下发酵18-20天，即可结束发酵，将发酵产物搅拌均匀，即得到哈茨木霉菌肥。
该哈茨木霉的固体发酵产物，孢子含量可达108个/g。
以下是利用本发明制备的哈茨木霉菌肥的防治实验
试验一、茄子和苦瓜盆栽苗的生物防治
1.实验材料
苦瓜幼苗和茄子幼苗若干，致病性病原菌为苦瓜枯萎病原菌FJAT-3015、茄子枯萎病原菌FJAT-30545。
2.方法
2.1哈茨木霉生物菌肥对茄子盆栽苗枯萎病防效的测定
2.1.1哈茨木霉生物菌肥对茄子盆栽苗的肥效实验
采用食用菌棒培养法生产出的哈茨木霉生物菌肥，与基质土分别按一定体积比进行混合后，用于种植茄子苗，设以下7个处理组：
处理组1——基质土中含10％哈茨木霉生物菌肥
处理组2——基质土中含20％哈茨木霉生物菌肥
处理组3——基质土中含30％哈茨木霉生物菌肥
处理组4——基质土中含40％哈茨木霉生物菌肥
处理组5——基质土中含50％哈茨木霉生物菌肥
处理组6——使用100％哈茨木霉生物菌肥
处理组7——纯基质土
以上每组处理30株茄子幼苗，定期观察茄子植株的生长情况，筛选出最适茄子苗生长的哈茨木霉生物菌肥含量。
2.1.2哈茨木霉生物菌肥对茄子盆栽苗枯萎病的防治效果
茄子枯萎病原菌FJAT-30545采用摇瓶发酵，并将发酵液稀释成106cfu/mL，备用。实验设以下5个处理组：
处理组1——茄子苗采用含10％哈茨木霉生物菌肥基质土种植，同时浇灌接种枯萎病原菌；
处理组2——茄子苗采用含10％哈茨木霉生物菌肥基质土种植，于7天后伤根浇灌接种枯萎病原菌；
处理组3——茄子苗采用含10％哈茨木霉生物菌肥基质土种植，于7天后伤根浇灌清水；
处理组4——茄子苗纯基质土种植，于7天后伤根浇灌接种枯萎病原菌，作为阳性对照；
处理组5——茄子苗采用纯基质土中种植，于7天后伤根浇灌清水，作为阴性对照；
以上每组处理30株茄子幼苗，各处理的其他栽培管理方式均一致，接菌后观察茄子植株生长和发病情况，第40天时调查其发病率，计算防治效果。
防治效果(％)＝(阳性对照组发病率－处理组发病率)/阳性对照组发病率×100％
2.2哈茨木霉生物菌肥对苦瓜盆栽苗枯萎病防效的测定
2.2.1哈茨木霉生物菌肥对苦瓜盆栽苗的肥效实验
采用食用菌棒培养法生产出的哈茨木霉生物菌肥，与基质土分别按一定体积比进行混合后，用于种植苦瓜苗，设以下7个处理组：
处理组1——基质土中含5％哈茨木霉生物菌肥
处理组2——基质土中含10％哈茨木霉生物菌肥
处理组3——基质土中含15％哈茨木霉生物菌肥
处理组4——基质土中含20％哈茨木霉生物菌肥
处理组5——基质土中含25％哈茨木霉生物菌肥
处理组6——使用100％哈茨木霉生物菌肥
处理组7——纯基质土
以上每组处理30株苦瓜幼苗，定期观察苦瓜植株的生长情况，筛选出最适苦瓜生长的哈茨木霉生物菌肥含量。
2.2.2哈茨木霉生物菌肥对苦瓜盆栽苗枯萎病的防治效果
苦瓜枯萎病原菌FJAT-3015采用摇瓶发酵，并将发酵液稀释成106cfu/mL，备用。实验设以下5个处理组：
处理组1——苦瓜苗采用含5％哈茨木霉生物菌肥基质土种植，同时浇灌接种枯萎病原菌；
处理组2——苦瓜苗采用含5％哈茨木霉生物菌肥基质土种植，于7天后伤根浇灌接种枯萎病原菌；
处理组3——苦瓜苗采用含5％哈茨木霉生物菌肥基质土种植，于7天后伤根浇灌清水；
处理组4——苦瓜苗采用纯基质土种植，于7天后伤根浇灌接种枯萎病原菌，作为阳性对照；
处理组5——苦瓜苗采用纯基质土中种植，于7天后伤根浇灌清水，作为阳性对照；
以上每组处理30株苦瓜幼苗，各处理的其他栽培管理方式均一致，接菌后观察苦瓜植株的生长和发病情况，第40天时调查其发病率，计算防治效果。
防治效果(％)＝(阳性对照组发病率－处理组发病率)/对照组发病率×100％
3.结果与分析
3.1哈茨木霉生物菌肥对茄子盆栽苗枯萎病防效的测定
3.1.1哈茨木霉生物菌肥对茄子盆栽苗的肥效实验
茄子苗栽培40天后，不同处理间的植株生长情况见表1所示。不同含量的哈茨木霉生物菌肥对茄子盆栽苗的株高，叶长，叶宽均有不同程度的影响。从株高方面，含10％哈茨木霉生物菌肥(处理组1)株高为8.87cm，其他处理组株高均低于8.87cm，介于5.00-6.12cm之间；从叶长方面，处理组1叶长为16.56cm，其他处理组叶长均低于16.56cm，介于8.31-13.62cm之间；叶宽方面，处理组1叶宽为9.81cm，其他处理组叶宽均低于9.81cm，介于4.31-7.62cm之间。不论是从株高，叶长还是叶宽，处理组1与其他处理组间均存在显著差异(P<0.05)，说明含10％哈茨木霉生物菌肥对茄子盆栽苗生长促进最大。
表1不同处理茄子盆栽苗的生长指标
3.1.2哈茨木霉生物菌肥对茄子盆栽苗枯萎病的防治效果
茄子苗栽培40天后，不同处理间防效见图1。采用含10％哈茨木霉生物菌肥基质土种植，于7天后伤根浇灌接种枯萎病原菌(处理组2)防效最好，防效达到88.89％；采用含10％哈茨木霉生物菌肥基质土种植，同时浇灌接种枯萎病原菌(处理组1)防效次之，为66.67％；处理组3仅采用含10％哈茨木霉生物菌肥基质土种植，没有接种病原菌，未出现发病植株。说明哈茨木霉生物菌肥提前使用更能有效的防治茄子枯萎病。
3.2哈茨木霉生物菌肥对苦瓜盆栽苗枯萎病防效的测定
3.2.1哈茨木霉生物菌肥对苦瓜盆栽苗的肥效实验
苦瓜苗栽培40天后，不同处理间苦瓜生长情况见表2。不同含量的哈茨木霉生物菌肥对苦瓜盆栽苗的生长有一定影响。从根长来看，含5％哈茨木霉生物菌肥(处理组1)根长为9.27cm，仅次于纯基质土(处理组7)的根长10.05cm，其他各处理组的根长均低于9.27cm，介于5.61-8.83cm之间；从藤蔓长来看，处理组1藤蔓长为69.88cm，其他处理组藤蔓长均低于69.88cm，介于46.22-60.33cm之间；从叶片数来看，各处理间的叶片数相差不多，处理组1平均叶片数为14.44片，其余各处理组叶片数均低于14.44片，介于10.44-13.11片之间。不论从根长、藤蔓长还是叶片数，处理组1与其余各处理组均存在显著差异(P<0.05)，说明含5％哈茨木霉生物菌肥对苦瓜盆栽苗的促进作用最明显。
表2不同处理间苦瓜的生长指标
3.2.2哈茨木霉生物菌肥对苦瓜盆栽苗枯萎病的防治效果
苦瓜栽培40天后，不同处理组间防效见图2。采用含5％哈茨木霉生物菌肥基质土种植，于7天后伤根浇灌接种枯萎病原菌(处理组2)的防效最好，防效高达83.33％；采用含5％哈茨木霉生物菌肥基质土种植，于7天后伤根浇灌接种枯萎病原菌(处理组1)防效次之，为33.33％；处理组3仅采用含5％哈茨木霉生物菌肥基质土种植，没有接种病原菌，未出现发病植株。说明哈茨木霉生物菌肥提前使用更能有效的防治苦瓜枯萎病。
试验二、茄子和苦瓜枯萎病田间实验的生物防治
1.试验材料
长势均一健壮的茄子幼苗、苦瓜幼苗若干。
2.试验方法
茄子枯萎病防治试验地选在福建厦门，往年发病率20-30％。苦瓜枯萎病防治试验地选在福州闽候，往年发病率30-40％。两种作物枯萎病防治试验分别设3个处理。处理1为茄子移栽时，哈茨木霉菌肥按10％的比例拌土后穴施于植株根际周围；苦瓜移栽时，哈茨木霉菌肥按5％的比例拌土后穴施于植株根际周围；处理2为移栽时，50％多菌灵可湿性粉剂按稀释倍数1000倍稀释后，浇灌于植株根际周围；处理3为清水对照。每个处理种植500株，观察茄子和苦瓜植株整个生长过程的发病情况，记录发病株数，计算发病率和防治效果。
发病率(％)＝各处理组发病株数/总株数×100
防治效果(％)＝对照发病率－处理发病率/对照发病率×100
3.试验结果
3.1哈茨木霉菌肥对茄子枯萎病的田间防治效果
如表3所示，对茄子苗的发病情况调查表明，处理1和处理2的发病率分别为9.4％和10.8％，均低于处理3的27.4％，校正防治效果分别为65.69％和60.58％，哈茨木霉菌肥处理的防治效果较优于多菌灵处理，说明哈茨木霉菌肥对茄子枯萎病的防治效果能达到化学试剂防治效果。后续研究可通过增加施用次数，进一步提高防治效果。
表3哈茨木霉菌肥防治茄子枯萎病各处理的发病率及防治效果
3.2哈茨木霉菌肥对苦瓜枯萎病的田间防治效果
如表4所示，对苦瓜苗的发病情况调查表明，处理1和处理2的发病率分别为13.4％和13.8％，均低于处理3的34.4％，校正防治效果分别为61.04％和59.88％，哈茨木霉菌肥处理的防治效果与多菌灵处理的相近，说明哈茨木霉菌肥对苦瓜枯萎病的防治效果能达到化学试剂防治效果。后续研究可通过增加施用次数，进一步提高防治效果。
表4哈茨木霉菌肥防治苦瓜枯萎病各处理的发病率及防治效果
本发明所用固体培养基质以猪粪废弃物为主要培养基质，本身即是很好的有机肥料，将其利用可以为作物提供肥料，还可以为菌株生长提供营养条件，同时为猪粪废弃物的运用提供了一条新出路，避免了猪粪废弃物随意丢弃造成的环境污染及资源浪费，实现循环利用，达到资源利用最大化。
本发明所用菌株为生防菌哈茨木霉，该菌株生长速度快，对多种作物病原真菌有拮抗作用，同时产生的一些代谢产物还有促进生长的作用；该培养方法所获得产物不仅含有生防菌哈茨木霉，同时还含有可作为肥料的猪粪废弃物，既可作为菌剂使用，又可作为肥料使用，有效地将菌与肥有机地结合在一起，两者相互促进；
该培养方法操作简便，成本低，可获得大量的发酵产物，所获得产物中哈茨木霉孢子含量能达到108个/g以上；该培养方法所获产物对茄子和苦瓜等作物有明显的促进生长作用。
虽然以上描述了本发明的具体实施方式，但是熟悉本技术领域的技术人员应当理解，我们所描述的具体的实施例只是说明性的，而不是用于对本发明的范围的限定，熟悉本领域的技术人员在依照本发明的精神所作的等效的修饰以及变化，都应当涵盖在本发明的权利要求所保护的范围内。
Claims (5)
1.一种利用猪粪废弃物生产哈茨木霉菌肥的方法，其特征在于：所述方法步骤如下：
(1)生产用液体菌种的制备：以哈茨木霉(Trichodermaharzianum)FJAT-9040为菌种，以马铃薯葡萄糖液体培养基为液体菌种用培养基，制备生产用液体菌种；具体为：
步骤A.菌种的活化：配置PDA培养基，121℃灭菌20min，冷却至45℃倒于灭菌平板中，备用；取-70℃保存的哈茨木霉(Trichodermaharzianum)FJAT-9040菌株于PDA培养基平板上划线培养，28～30℃恒温培养3～4天；
步骤B.挑取步骤A中菌丝接种于马铃薯葡萄糖液体培养基中，28～30℃，170～200rpm摇床培养4～5天，即为生产用液体菌种；
(2)哈茨木霉固体菌肥的制备：以猪粪废弃物为主要成份制备菌肥生产的固体培养基物，与麸皮、麦粒混合后，分装于食用菌袋中，灭菌后，接种步骤(1)所制备的液体菌种，28～30℃恒温培养发酵18-20天，制备哈茨木霉固体发酵产物，发酵结束后将其拌匀，即得哈茨木霉菌肥；具体为：
步骤C.以猪粪废弃物为主要成份的固体基础培养基配制：猪粪废弃物与麸皮按重量比为9:1～5:5配制形成固体基础培养基；
步骤D.基础培养基中麦粒、无机碳源和无机氮源的添加：在基础培养基中添加麦粒作为固体培养基的疏松物质，再添加蔗糖和硫酸铵，搅拌均匀后加水，调整含水体积比为30％～50％，转入食用菌袋中，灭菌；
步骤F.哈茨木霉固体菌肥的培养与制备：往步骤D的培养基中接种步骤(1)中制备的液体菌种5～10体积份，28～30℃恒温下发酵18-20天，即哈茨木霉固体发酵产物，发酵结束后将其通风干燥后拌匀，即得哈茨木霉菌肥；
所述哈茨木霉(Trichodermaharzianum)FJAT-9040，于2012年5月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNo.6109。
2.根据权利要求1所述的利用猪粪废弃物生产哈茨木霉菌肥的方法，其特征在于：步骤C中猪粪废弃物与麸皮的重量比为9：1-8：2。
3.根据权利要求1所述的利用猪粪废弃物生产哈茨木霉菌肥的方法，其特征在于：步骤D中的麦粒需浸泡处理，浸泡时间大于12h，使麦粒充分吸水膨胀。
4.根据权利要求1所述的利用猪粪废弃物生产哈茨木霉菌肥的方法，其特征在于：每100mL基础培养基所需的麦粒为30～50mL、蔗糖为2～4g、硫酸铵为1～3g。
5.根据权利要求4所述的利用猪粪废弃物生产哈茨木霉菌肥的方法，其特征在于：每100mL基础培养基所需的麦粒为40mL、蔗糖为3g、硫酸铵为2g。
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