CN114164217A

CN114164217A - 水稻OsSTE24基因在提高水稻对稻瘟病菌抗性中的应用

Info

Publication number: CN114164217A
Application number: CN202111326383.8A
Authority: CN
Inventors: 寇艳君; 孟帅; 时焕斌; 邱结华
Original assignee: China National Rice Research Institute
Current assignee: China National Rice Research Institute
Priority date: 2021-11-10
Filing date: 2021-11-10
Publication date: 2022-03-11
Anticipated expiration: 2041-11-10
Also published as: CN114164217B

Abstract

本发明公开了水稻OsSTE24基因在提高水稻对稻瘟病菌抗性中的应用。水稻OsSTE24基因CDS区的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。本发明研究发现水稻OsSTE24基因与水稻对稻瘟病防卫相关，OsSTE24基因突变降低了水稻对稻瘟病菌的基础防卫能力，而过表达OsSTE24基因能够提高水稻对稻瘟病菌的抗病能力。所以水稻OsSTE24基因能够用于提高水稻对稻瘟病菌抗性。

Description

水稻OsSTE24基因在提高水稻对稻瘟病菌抗性中的应用

技术领域

本发明涉及水稻育种技术领域，特别是涉及水稻OsSTE24基因在提高水稻对稻瘟病菌抗性中的应用。

背景技术

水稻稻瘟病是由稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)引起的真菌性病害，在世界各水稻主产区均有发生，已成为世界性病害，在我国也属于水稻主要病害之一。稻瘟病的发生严重影响水稻的产量和品质。严重时每年可造成的水稻产量损失在10％-30％之间。

稻瘟病是水稻生产上最严重的病害之一。稻瘟病害每年给农业生产造成严重的损失，化学杀菌剂在稻瘟病菌的控制中具有重要作用，但是稻瘟病菌的多样性和变异性给病害的化学防治带来困难；而且化学杀菌剂对环境的污染和生态平衡的破坏，也引起广泛的关注。随着对水稻和稻瘟病菌的研究逐渐深入，水稻-稻瘟病菌是研究植物与病原真菌相互作用的模式体系。对稻瘟病菌的致病分子机理的深入研究，不仅可以加深对对植物病原真菌致病机理的理解，而且对稻瘟病的防治具有指导意义，为水稻抗稻瘟病分子育种提供新的研究方向，为防控稻瘟病发生提供重要理论依据，保障我国粮食生产安全和稻米品质提供参考。

水稻自身的一些基因可能会抗稻瘟病菌具有作用。比如：

公开号为CN113106104A的发明公开了一个介导水稻稻瘟病抗性相关基因OsNAC29的克隆、功能验证和应用，首次发现并证明OsNAC29基因在水稻抗稻瘟病反应中的正调控作用，通过基因工程方法敲除OsNAC29 会降低了水稻对稻瘟病的抗性，而提高OsNAC29的表达水平则可以显著增强水稻对稻瘟病的抵抗能力，田间实验统计发现OsNAC29功能缺失并不影响水稻农艺性状，本发明可应用于提高水稻等相关农业作物抗性的遗传改良。

再比如，公开号为CN112779271A的发明公开了一种水稻基因OsFd2 及其抗稻瘟病的应用，该发明采用CRISPR/Cas9的方法对水稻基因OsFd2 进行敲除，并通过过表达载体遗传转化方法进行突变体植株表型回补。分别对野生型、敲除突变体与过表达回补植株进行稻瘟病菌接种实验。结果显示，敲除OsFd2明显提高了水稻植株对稻瘟病菌的抗性，但产生苗期致死表型；而OsFd2过表达回补植株与突变体相比，生长恢复正常，表现为比野生型更感稻瘟病。上述结果表明，OsFd2为负调控水稻抗稻瘟病免疫的基因，也是水稻正常生长所必需的关键基因。本发明内容为田间稻瘟病发生时通过诱导沉默方式提高水稻抗性提供一种内源基因靶标。

发明内容

本发明研究发现水稻OsSTE24基因与水稻对稻瘟病防卫相关， OsSTE24基因突变降低了水稻对稻瘟病菌的基础防卫能力，而过表达 OsSTE24基因能够提高水稻对稻瘟病菌的抗病能力。

本发明首先提供了水稻OsSTE24基因在提高水稻对稻瘟病菌抗性中的应用。优选的，所述的应用，水稻OsSTE24基因CDS区的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

本发明又提供了水稻致病因子OsSTE24蛋白在提高水稻对稻瘟病菌抗性中的应用。优选的，所述的应用，水稻致病因子OsSTE24蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

本发明又提供了水稻OsSTE24基因在水稻育种中的应用，通过筛选高表达水稻OsSTE24基因的水稻植株获得抗稻瘟病菌的水稻株系。

本发明又提供了水稻致病因子OsSTE24蛋白在水稻育种中的应用，通过筛选水稻致病因子OsSTE24蛋白表达量高的水稻植株获得抗稻瘟病菌的水稻株系。

本发明还提供了一种抗稻瘟病菌的转基因水稻构建方法，将水稻 OsSTE24基因转入水稻植株内获得高表达水稻OsSTE24基因的转基因水稻。

优选的，所述抗稻瘟病菌的转基因水稻构建方法，将水稻OsSTE24 基因的CDS区克隆到载体中，通过愈伤转化转入水稻细胞内，获得高表达水稻OsSTE24基因的转基因水稻。更优选的，载体为pCAMBIA1390 载体。更优选的，水稻OsSTE24基因的CDS区核苷酸序列如SEQ ID No.2 所示。

本发明研究发现水稻OsSTE24基因与水稻对稻瘟病防卫相关， OsSTE24基因突变降低了水稻对稻瘟病菌的基础防卫能力，而过表达 OsSTE24基因能够提高水稻对稻瘟病菌的抗病能力。所以水稻OsSTE24 基因能够用于提高水稻对稻瘟病菌抗性。

附图说明

图1为OsSTE24敲除阳性植株及超量表达OxOsSTE24阳性植株序列及转录水平结果图，其中，A：OsSTE24敲除靶位点位置信息；B：阳性突变体序列比对结果；C：OsSTE24超量表达的转录水平。

图2为OsSTE24纯化突变体稻瘟病抗性鉴定结果图，其中，A：打孔接种；B：相对菌丝生物量；C：活体接种；D：相对菌丝生物量。

图3为OsSTE24纯合突变体对稻瘟病防卫相关基因表达及活性氧测定结果图，其中，A-D：OsSTE24对稻瘟病防卫相关基因OsPAL、OsNAC4、 OsPR1a和OsPAD4相关基因表达量分析；E：几丁质处理后野生型和突变体Osste24植株内ROS的积累量。

具体实施方式

实施例1

水稻致病因子OsSTE24蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示； OsSTE24基因CDS区的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，水稻OsSTE24 基因的完整基因序列如SEQ ID No.3所示，其中包括了内含子等非编码区域。

(1)为了阐明OsSTE24基因在水稻生长发育和致病中的生物学功能，我们构建水稻OsSTE24基因敲除突变体。按照下面的方法进行敲除载体构建：

我们通过Crispr/Cas9技术来定向的对目的基因进行敲除突变，从而获得OsSTE24基因的敲除突变体。

具体步骤如下：

以水稻品系Tp309为背景，首先根据OsSTE24的基因号，在网站“http://rice.uga.edu/cgi-bin/sequence_display.cgi？orf＝LOC_Os02g45650.1”下载OsSTE24基因在日本晴(Nipponbare)中的参考序列，然后设计靶位点检测引物OsSte24-F/R，以Tp309(中国台北309)的基因组为模板进行扩增，最后将扩增出来的目的条带送测序，来确定靶位点序列OsSte24-gF/gR在 Tp309中没有发生改变。

引物序列如下：

OsSte24-F：5’-ACATCCGTCAGCATAGAGCC-3’；

OsSte24-R：3’-GCTGGAAGACAACTGGAAGC-5’；

OsSte24-gF：5’-TGTGTGTGTACTATAGAGTTCTTCCC-3’；

OsSte24-gR：3’-AAACGGGAAGAACTCTATAGTACACA-5’。

PCR反应体系为：

PCR反应条件为：

94℃预变性2min；94℃变性30s，58℃退火20s，68℃延伸，延伸时间根据扩增片段大小确定(30s/kb)，共34个循环；68℃延伸2min。

引物退火反应体系为：

OsSte24-gF(100μM) 20μL，

OsSte24-gR(100μM) 20μL。

引物退火反应条件为：

将上述混合后的引物OsSte24-gF/gR，100℃处理5min，16℃处理5min。

将上述处理后的引物混合物OsSte24-gF/gR用T4连接酶连接到 BGK03载体上。测序正确后送武汉伯远生物科技有限公司做愈伤转化，获得水稻OsSTE24基因敲除突变植株。

(2)OsSTE24基因的过表达：为了验证OsSTE24在水稻发育和致病过程中的生物学意义，我们将OsSTE24基因在TP309背景材料中进行过表达。

引物序列如下：

OxOsSte24-F：gttacttctgcactaggtaccATGGCGCTTCCTTACCTGG，

OxOsSte24-R：cggggatccgtcgacctgcagTTAGTTTTCCTTTTTGCTGTCTGC。

我们通过引物OxOsSte24-F/R扩增OsSTE24的CDS序列，并通过T4 连接酶连接到载体pCAMBIA1390载体(KpnI/PstI双酶切)上。测序正确后送武汉伯远生物科技有限公司做愈伤转化，获得水稻OsSTE24基因的过表达植株。

实施例2：OsSTE24基因敲除突变体及过表达植株的鉴定

通过靶位点检测引物OsSte24-F/R，我们对转基因敲除植株进行PCR 扩增，然后和TP309序列进行比对，分别获得不同类型的敲除突变体。结果如图1A、B，我们选取OsSte24-2，OsSte24-7突变植株进行下一步的研究。

我们选取定量引物qSte24-F/R通过实时荧光定量PCR分析，引物 qOsUBQ-F/R用于扩增内参Ubiquitin基因，结果如图1C，我们选取 OxOsste24-6的过表达植株进行下一步的研究。

qSte24-F：CCCATCGTGATAGCACCTCT，

qSte24-R：GTAGACCCATCCACCACGAA；

qOsUBQ-F：AAGAAGCTGAAGCATCCAGC，

qOsUBQ-R：CCAGGACAAGATGATCTGCC。

实施例3：OsSTE24对稻瘟病菌致病力的影响

将野生稻瘟病菌菌株KJ201接到OA培养基上，25℃光照下培养14 天，用灭菌水洗脱稻瘟菌孢子，并用神奇滤布过滤得到孢子收集液，将孢子液浓度调至1×10⁶个/ml，并向孢子液中加入1/10体积的0.1％ Gelatin(Gelatin最终浓度约为0.01％)，用于稻瘟病喷雾接种。

喷雾接种：将水稻龄期3-4叶龄幼苗(野生型TP309，突变植株Osste24-2，Osste24-7和过表达植株OxOsste24-6)用透明的PVC膜做成卷筒状密封，取配制好的孢子溶液喷雾水稻使每个叶片上形成雾化的小水滴，用保鲜膜密封。黑暗培养24h后恢复正常光照周期，在高湿环境下培养5-7天后，调查发病情况。每个实验重复三次。

打孔接种：用10μl的灭菌枪头打孔水稻叶片，吸取10μl孢子悬浮液滴到叶片的打孔部位，接种叶片密封放置培养箱，7d左右对接种叶片进行拍照并统计病斑面积。同时取相同叶面积的病斑部分提取 DNA进行生物量检测，以水稻Ubiquitin作为内参基因检测稻瘟病菌 Mopot2基因的量，通过实时荧光定量PCR分析真菌生物量。用2^-ΔΔCT法计算基因的相对表达量。

结果如图2所示，喷雾接种表明：与野生型相比，敲除突变体 Osste24-2，Osste24-7的病斑面积明显大于野生型，致病力明显增加，过表达植株OxOsste24-6的病斑面积明显低于野生型和突变体，致病力明显降低。打孔接种结果同喷雾结果。表明OsSTE24对稻瘟病菌致病力是必需的。

实施例4：OsSTE24基因对稻瘟病菌防卫相关基因表达及活性氧爆发的影响

取实施例3中喷雾接种3天后的样品，放置-80℃冰箱中备用。将收集的样品采用Trizol试剂提取总RNA，然后取1μg，利用M-MLV逆转录酶和Olig(dT)18进行反转录合成cDNA。定量qRT-PCR引物设计使用在线软件GenScript qRT-PCR (www.genscript.com/tools/real-time-pcr-tagman-primer-design-tool)，设计的引物如表1所示。内参选取水稻Ubiquitin(LOC_Os03g13170)。对稻瘟病防卫相关基因进行实时荧光定量PCR。

反应体系：

反应条件：

95℃预变性30s；95℃变性20s，60℃延伸30s，40个循环。用2^-ΔΔCT法计算基因的相对表达量。

表1

剪取野生型和突变体Osste24-2，Osste24-7的水稻叶片，分别用0.5cm 的打孔器在主叶脉两侧打孔，将获取的叶盘放入双氧水中黑暗过夜处理。然后随机选取每个样品的3个叶盘置于含有100μL鲁米诺、1μL辣根过氧化物酶和1μL几丁质的1.5mL的试管中，最后将其迅速放入Glomax 20/20Luminometer仪器中，每隔10s检测一次荧光，共监测20min。每个样品重复三次。

荧光定量PCR结果表明图3A-D，防卫相关基因OsOsPAL、OsNAC4、OsPR1a、OsPAD4在突变体Osste24中的表达量显著下调(图3A-D)，暗示OsSTE24可能参与水稻抗稻瘟病反应。

鲁米诺化学发光法检测结果表明，相较与野生型，Chitin诱导的ROS 在Osste24突变体中增长速率较慢，其积累量亦明显低于野生型，图3E 所示。结果表明，OsSTE24基因突变降低了水稻对稻瘟病菌的基础防卫能力。

序列表

<110> 中国水稻研究所

<120> 水稻OsSTE24基因在提高水稻对稻瘟病菌抗性中的应用

<160> 21

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 425

<212> PRT

<213> 水稻(Oryza sativa L.)

<400> 1

Met Ala Leu Pro Tyr Leu Glu Ala Val Leu Cys Phe Met Ile Leu Met

1 5 10 15

Tyr Ile Phe Glu Thr Tyr Leu Asp Ile Arg Gln His Arg Ala Leu Lys

20 25 30

Leu Pro Thr Leu Pro Lys Pro Leu Val Gly Val Ile Ser Gly Glu Lys

35 40 45

Phe Glu Arg Ser Arg Ala Tyr Ser Leu Asp Lys Ser Lys Phe His Phe

50 55 60

Ile His Glu Ala Val Thr Ile Leu Met Asp Thr Thr Ile Leu Tyr Tyr

65 70 75 80

Arg Val Leu Pro Trp Val Trp Lys Lys Ser Gly Glu Leu Ala Thr Asn

85 90 95

Ala Gly Leu Asn Ala Glu Asn Glu Ile Leu His Thr Leu Ala Phe Leu

100 105 110

Ala Gly Val Met Ile Trp Ser Gln Ile Thr Asp Leu Pro Phe Ser Leu

115 120 125

Tyr Ser Thr Phe Val Ile Glu Ala Lys His Gly Phe Asn Lys Gln Thr

130 135 140

Ile Trp Leu Phe Ile Arg Asp Met Ile Lys Gly Ile Leu Leu Ser Ile

145 150 155 160

Leu Leu Gly Pro Pro Ile Val Ala Ala Ile Ile Ile Ile Val Gln Asn

165 170 175

Gly Gly Pro Tyr Leu Ala Ile Tyr Leu Trp Gly Phe Met Phe Ala Leu

180 185 190

Ser Leu Val Met Met Thr Ile Tyr Pro Ile Val Ile Ala Pro Leu Phe

195 200 205

Asn Lys Phe Thr Pro Leu Pro Glu Gly Val Leu Arg Glu Lys Ile Glu

210 215 220

Lys Leu Ala Ala Ser Leu Ser Phe Pro Leu Lys Lys Leu Phe Val Val

225 230 235 240

Asp Gly Ser Thr Arg Ser Ser His Ser Asn Ala Tyr Met Tyr Gly Phe

245 250 255

Phe Lys Asn Lys Arg Ile Val Leu Tyr Asp Thr Leu Ile Gln Gln Cys

260 265 270

Ser Ser Glu Asp Glu Ile Val Ser Val Ile Ala His Glu Leu Gly His

275 280 285

Trp Lys Leu Asn His Thr Val Tyr Ser Phe Val Ala Val Gln Leu Leu

290 295 300

Met Phe Leu Gln Phe Gly Gly Tyr Thr Leu Val Arg Asn Ser Lys Asp

305 310 315 320

Leu Phe Glu Ser Phe Gly Phe Glu Asp Gln Pro Val Ile Ile Gly Leu

325 330 335

Ile Ile Phe Gln His Thr Ile Ile Pro Val Gln His Leu Leu Ser Phe

340 345 350

Cys Leu Asn Leu Val Ser Arg Ala Phe Glu Phe Gln Ala Asp Ala Phe

355 360 365

Ala Lys Asn Leu Gly Tyr Ala Pro Gln Leu Arg Ala Ala Leu Val Lys

370 375 380

Leu Gln Glu Glu Asn Leu Ser Ala Met Asn Thr Asp Pro Trp Tyr Ser

385 390 395 400

Ala Tyr His Tyr Ser His Pro Pro Leu Val Glu Arg Leu Ser Ala Leu

405 410 415

Glu Asp Ala Asp Ser Lys Lys Glu Asn

420 425

<210> 2

<211> 1278

<212> DNA

<213> 水稻(Oryza sativa L.)

<400> 2

atggcgcttc cttacctgga ggccgtgctg tgctttatga ttctcatgta tatatttgag 60

acatatcttg acatccgtca gcatagagcc cttaagttgc caacactgcc aaaacccctg 120

gtaggagtaa ttagtggtga aaagtttgag cgctccagag cttatagcct tgataaaagc 180

aaattccatt ttatccatga agctgtaact atattaatgg ataccacaat tctgtactat 240

agagttcttc cctgggtttg gaagaaatct ggagagctag caaccaatgc tggcctaaat 300

gctgaaaatg agatactaca cactcttgca ttcttagcag gtgtcatgat ttggtcacag 360

atcacagact taccattctc tctttattca acatttgtta ttgaagctaa acatggtttt 420

aacaagcaaa ctatttggct cttcattagg gacatgatca aagggatttt gctatccatc 480

ttacttggac ctcctattgt ggctgctatt atcatcatag tacagaatgg agggccctac 540

ctggcaatat atctatgggg ttttatgttt gcattatctc ttgtgatgat gacaatatac 600

cccatcgtga tagcacctct gttcaacaaa ttcactccgc ttccagaagg agtactcaga 660

gagaaaatag agaaattagc agcttcactc agttttccat tgaaaaagct tttcgtggtg 720

gatgggtcta ccagatcaag ccacagtaat gcttacatgt atgggttttt caagaacaag 780

cgcattgttc tctatgacac gttgattcag cagtgtagta gtgaggatga aatagtttct 840

gttattgcac atgaacttgg gcactggaaa ctcaaccaca ctgtgtattc ctttgtagct 900

gtccagctcc ttatgttcct acaatttgga ggatatacgc tagtaaggaa ctccaaagac 960

ctttttgaaa gttttggttt cgaggatcag cctgtaataa ttgggctgat catatttcag 1020

cacactataa tacctgtcca gcaccttctg agtttttgtc tgaaccttgt cagtcgggca 1080

tttgaatttc aggctgatgc ttttgccaag aaccttgggt atgctcctca gctccgtgca 1140

gcccttgtta aactacagga agagaactta tctgcaatga acacagatcc gtggtattca 1200

gcctaccact actcccatcc accccttgtt gaaaggctct ctgctcttga agacgcagac 1260

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<211> 5621

<212> DNA

<213> 水稻(Oryza sativa L.)

<400> 3

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gcgggtaggg tggattaatc taagttgagt cgagggagct taatgcgatt ggcgatggcg 300

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tgtagttaga gtggagatgt gcgatagagc tgcgaagtca tcttggctta attgatcatg 600

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tatcttgaca tccgtcagca tagagccctt aagttgccaa cactgccaaa acccctggta 960

ggagtaatta gtggtgaaaa gtttgagcgc tccagagctt atagccttga taaaaggtat 1020

gtgtaatact gctctcacct tttgcaacct tacattattc attttactgc aatcgttcta 1080

aagtaattca gactgccaat tttttggatt ttgtgtgttg acatttatgc tcatgttaca 1140

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atagagttct tccctgggtt tggaaggtaa aacaaaatca atcagcttgc ctctgtaaac 1260

tctttatgca agtattttgt tgtgattagc cttcttttgt agaaatctgg agagctagca 1320

accaatgctg gcctaaatgc tgaaaatgag atactacaca ctcttgcatt cttagcaggt 1380

gtcatgattt ggtcacaggt atagaataat tacttgtacc tgccaagcat cttatatgtt 1440

tattgcacat atatttttac cttcattgca ttcaaaatta aattagcttc cagttgtctt 1500

ccagcacatt gagttaggta taaactgaag ccttagcttt ccatgattga caatcgctag 1560

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agttattatt agtcaggact gaagcgcata gcatagtgac acctatgaaa ctattgacat 1680

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gaccgctata acagcccgct attgactttg ttggaccatt ataacgctta aatgttgttc 1920

ttcatttatg gattgtagaa ctttacattg tttatcttat ttatcttata tatctatatg 1980

ttatttcata ctttttatgt tatgaaatat aggagtaatt aaaaatgtat gaatttgatg 2040

ttaatattga tatatttatg gttattttct tatatttgct attggaactt agcgtccgca 2100

atagcgcccg ctatccgcaa tccgctacac agacactaat ccgctaacaa cccgctatac 2160

actatttatt accttggata agagtaatca tccttttgcc cttttctgtt gagtacatcc 2220

agtgactttt acatgttaat ctacacctat gttcatagtt gcatactgat attgattgtt 2280

taggtctaca tctactagaa ctttggcata gtgttctctt atggtgaatc aacttctttt 2340

gcaagccatc agctaaaaca tgccaactcc actatttgat gtgaaacact gatacatact 2400

tcatgcaatg cagatcacag acttaccatt ctctctttat tcaacatttg ttattgaagc 2460

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gttttaacat ttgaatggtg ttcacctgca agattagtga agtacaaaag tatcttggct 2580

tatgaatttg ctatgttcta atccccaaca tatttattct gaacctctag ctttggactt 2640

ttttcagcaa actatttggc tcttcattag ggacatgatc aaagggattt tgctatccat 2700

cttacttgga cctcctattg tggctgctat tatcatcata gtacaggtat ctcctgtctt 2760

tctaccacac acttcttcat tgttggctag tatctggaga acaggcttac ctgttttttg 2820

cgggatctgg gcccgaatac cacaaactcg tagaagtgtg tgaactgatt agtttatttc 2880

tctgtgcttc agaatggagg gccctacctg gcaatatatc tatggggttt tatgtttgca 2940

ttatctcttg tgatgatgac aatatacccc atcgtgatag cacctctgtt caacaaattc 3000

actccggtta gtatcttttt ctgttgtaga gcatacctag tatgctgtaa ttagttcact 3060

tgtctgtttt ttgtgtgaga aaggtacatg catccattgt gcatcttcta attcgtgtcc 3120

catgttattg aactacgttg acctattaat aagccgtacg gatggcaaaa gctcttttga 3180

ggtataacta gatatggttg cacatatttt aacagcttcc agaaggagta ctcagagaga 3240

aaatagagaa attagcagct tcactcagtt ttccattgaa aaagcttttc gtggtggatg 3300

ggtctaccag atcaagccac agtaatgtat gttgattact ctaccttcag ggttgtggtt 3360

cattgataac tgatagtttg taattttctg tgtgctttga actgacaatt ttctttcagg 3420

cttacatgta tgggtttttc aagaacaagc gcattgttct ctatgacacg ttgattcagc 3480

aggttatatg ctaagttgtt tagtttcatt ataattttga attacatgca tgaaactcac 3540

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gatcactagg acagggtagc taatttcaat attgtttctg gtaaagaatt tactattaag 3960

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actggtgctt aactggtcac tctgctggta cttggtttta ctggtctacc cggtccaatt 4080

ggtgaattgt caaaaatatt atattcaaac gtattttaag tctgatcccg caactaatac 4140

actttttttc aaatatgcat aatatcgcca aagaataata tttagctcaa tccatttggc 4200

tagaagccca acatacttgt gagatgggac ccaagtttgg tttgactcaa aaaactattt 4260

cccctatttt taccataact ttcttttttt ctgaccgaac caaactagga tctggtcctg 4320

ggtttttcca gttggacccg cctggcccct ttttttgtac tgtgtttgac atgcctgctt 4380

ctatgatgga tatgatgtgt gatgactgat gagtggctac taggttatgc taagcatgcc 4440

atttccttag atggatgact atttaacaaa acaaaccttg gcataaggtt agcagaaaaa 4500

gttactattc aatatccaga gcaaataaac agtgtttagc atgtaagtag gattaatggt 4560

tctttttcga aattgaatct gtgatacagt ccctttgcat ctgttgctgg agagtactgc 4620

tgctttttag tacaaagaag gaaaaaaaac agataaatct tcttttgtgt gttgagagtt 4680

ttttcacttc gtctcctttt tatgcagctc cttatgttcc tacaatttgg aggatatacg 4740

ctagtaagga actccaaaga cctttttgaa agttttggtt tcgaggatca gcctgtaata 4800

attgggctga tcatatttca ggtatgttta ctcatatttg tgaagaatat tttcttcctt 4860

agatatacaa agtctttccc tagcacaact acctgcttgt actgtgaaaa tagtactaca 4920

ggtattgtaa tttttcattt aagtttgcag tggcttgcat tttttggtgg atttctagta 4980

ttgctctatt acaagttaca acttgattga catgtccgtt gcttgattgt agcacactat 5040

aatacctgtc cagcaccttc tgagtttttg tctgaacctt gtcagtcggg catttgaatt 5100

tcaggttcat ttttctattt cccttcaaag tttctgctac tgctgcttta taactttcag 5160

ttgcacttac cttgatataa tttctaggct gatgcttttg ccaagaacct tgggtatgct 5220

cctcagctcc gtgcagccct tgttaaacta caggtaacca tcgaaagatc cttttgattt 5280

attctcactc taattgctag acacctgaac cgcaaggtct gtctgattct tgttctgtta 5340

cccaaagtac tttcacgctc attattcact tgaactgaac atccgcatta gcgttctctt 5400

atcgtactgt cggttctcgt tgttcgtatt gcccttggtc acctgcacaa actgcttgca 5460

aatttgcata gcctaatttg gaatttgctt tcaaatttca ggaagagaac ttatctgcaa 5520

tgaacacaga tccgtggtat tcagcctacc actactccca tccacccctt gttgaaaggc 5580

tctctgctct tgaagacgca gacagcaaaa aggaaaacta a 5621

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

acatccgtca gcatagagcc 20

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

gctggaagac aactggaagc 20

<210> 6

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

tgtgtgtgta ctatagagtt cttccc 26

<210> 7

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

aaacgggaag aactctatag tacaca 26

<210> 8

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

gttacttctg cactaggtac catggcgctt ccttacctgg 40

<210> 9

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

cggggatccg tcgacctgca gttagttttc ctttttgctg tctgc 45

<210> 10

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

cccatcgtga tagcacctct 20

<210> 11

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 11

gtagacccat ccaccacgaa 20

<210> 12

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 12

aagaagctga agcatccagc 20

<210> 13

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 13

ccaggacaag atgatctgcc 20

<210> 14

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 14

ctacccgctg atgaagaagc 20

<210> 15

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 15

gaaccttgtt cagctcctcg 20

<210> 16

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 16

tcctgccacc attctgagat g 21

<210> 17

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 17

ttgcagaatc atgcttgcca g 21

<210> 18

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 18

tcgtatgcta tgctacgtgt tt 22

<210> 19

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 19

cactaagcaa atacggctga ca 22

<210> 20

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 20

gccagctccc ctacgacttc 20

<210> 21

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 21

cgtgtgcggt gtaggttgtt 20

Claims

1.水稻OsSTE24基因在提高水稻对稻瘟病菌抗性中的应用。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，水稻OsSTE24基因CDS区的核苷酸序列如SEQID No.2所示。

3.水稻致病因子OsSTE24蛋白在提高水稻对稻瘟病菌抗性中的应用。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，水稻致病因子OsSTE24蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

5.水稻OsSTE24基因在水稻育种中的应用，通过筛选高表达水稻OsSTE24基因的水稻植株获得抗稻瘟病菌的水稻株系。

6.水稻致病因子OsSTE24蛋白在水稻育种中的应用，通过筛选水稻致病因子OsSTE24蛋白表达量高的水稻植株获得抗稻瘟病菌的水稻株系。

7.一种抗稻瘟病菌的转基因水稻构建方法，其特征在于，将水稻OsSTE24基因转入水稻植株内获得高表达水稻OsSTE24基因的转基因水稻。

8.如权利要求7所述抗稻瘟病菌的转基因水稻构建方法，其特征在于，将水稻OsSTE24基因的CDS区克隆到载体中，通过愈伤转化转入水稻细胞内，获得高表达水稻OsSTE24基因的转基因水稻。

9.如权利要求8所述抗稻瘟病菌的转基因水稻构建方法，其特征在于，载体为pCAMBIA1390载体。

10.如权利要求8所述抗稻瘟病菌的转基因水稻构建方法，其特征在于，水稻OsSTE24基因的CDS区核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。