CN101589147A - 改善农作物的植物生长、蒸腾效率和耐旱性的玉米erecta基因 - Google Patents

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Abstract

本发明提供Zm ERECTA基因家族的多核苷酸和相关多肽。本发明提供Zm ERECTA基因的核酸序列。Zm ERECTA负责控制农作物的植物生长、器官大小和产量。

Description

改善农作物的植物生长、蒸腾效率和耐旱性的玉米ERECTA基因
发明领域
本发明总的来讲涉及分子生物学领域。
发明背景
许多植物的驯化与产量大幅提高有关。发生在自然种群中的大多数表型变异是连续的，是通过多种基因影响实现的。在驯化植物中鉴定出引起产量巨大差异的特定基因，已成为农业研究中的重要焦点。
研究表明，在拟南芥中，ERECTA基因通过促进细胞增殖来控制器官生长和花的发育(Shpak等(2003)Plant Cell 15：1095-1110；Development(2004)131：1491-501)。拟南芥ERECTA基因通过促进细胞增殖从而影响花序发育，控制器官生长。异位过量表达ERECTA基因的转基因拟南芥植物通过影响气孔密度、表皮细胞膨胀、叶肉细胞增殖和细胞间接触，从而改善植物蒸腾效率和耐旱性。ERECTA基因编码富含亮氨酸重复序列受体样激酶(leucine-rich repeat receptor-like kinase，LRR-RLK)，可以控制植物生长/器官大小和生物量累积。另外，Masle Gilmore和Farquhar指出除已知对植物构造的不同作用以外，拟南芥ERECTA基因还决定了植物的转化效率(Masle Gilmore和Farquhar，Nature(2005)436：866)。这在农业，尤其在耐旱性和农艺性能方面具有意义。
ERECTA与生长加快有关。ERECTA基因可用于控制玉米或其它农作物整株植物或特定器官的大小。该基因的潜在用途是在转基团植物中使之过量表达以增加生物量累积，使用组织特异性启动子使该基因的表达靶定在特定组织中从而促进根生长、加快幼苗生长以实现快速的林冠郁闭、叶片变大、穗大小增加、胚加大、胚乳生长适于较大谷粒和操控整个谷粒中的油、蛋白质或淀粉含量等等。通过改变玉米穗丝生长率，可以操控同步化或ASI(雌雄穗开花间隔(anthesis and silking interval))，这可改善胁迫耐受性。另一个潜在的应用是改善得自体外组织培养的作物的转化和再生。可以控制此基因的表达以提高细胞增殖率和培养组织生长率。ERECTA还可用于通过在特定组织中使表达下调，从而操控基因以减小器官大小，例如雄花穗大小。ERECTA基因可用于通过改善玉米和其它作物的蒸腾效率，从而提高耐旱性。探索此基因的天然等位基因变异可用于通过鉴定与近交种胁迫抗性表型有关的等位基因单元型，从而改善育种或转基团植物。该基因作图位于染色体的干旱QTL附近的位置，这表明可能是抗性等位基因变体。
本发明包括鉴定与拟南芥ERECTA基因(SEQ ID NO：1和SEQ IDNO：3)有关的推定的玉米ERECTA基因，即ZmERECTA A和ZmERECTA B(SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：7)。具有与拟南芥ERECTA(SEQ ID NO：1)最大相似性的直向同源物(ortholog)是ZmERECTA 1(SEQ ID NO：5)。该基因的表达与未成熟的生殖组织有关，主要见于花序分生组织和茎端分生组织，在其它分生组织相关的组织中水平较低。
预期表达ZmERECTA A(SEQ ID NO：5)的转基因植物对生物量累积和玉米植物的生长率以及器官大小增大都有着积极的效果。同样预期表达ZmERECTA的转基因植物耐旱性得到改善。这些玉米基因可用于改善玉米(和其它作物)的农艺性状。
本发明还包括鉴定其它植物品种的ERECTA基因。水稻基因家族由2个家族成员表示。大豆(Glycine max)中还发现了4个基因序列，两色蜀黍(Sorghum bicolor)中发现了3个基因。本文公开了ERECTA拟南芥基因家族的两个成员。
发明概述
本发明提供用于控制植物生长和器官大小以提高植物产量的组合物和方法。所述组合物包括得自玉米、大豆、拟南芥、水稻和高粱的ERECTA序列。本发明的组合物包含选自SEQ ID NO：5-8的氨基酸序列和核苷酸序列及其变体和片段。
本发明在DNA构建体中提供编码ERECTA序列的多核苷酸用于在目标植物中进行表达。本发明还提供包含本发明序列的表达盒、植物、植物细胞、植物组成部分和种子。在具体的实施方案中，所述多核苷酸与组成型启动子有效连接。
本发明提供用于调节植物或植物组成部分的ERECTA序列水平的方法。该方法包括将包含本发明ERECTA序列的异源多核苷酸导入植物或植物组成部分。可以提高或降低ERECTA多肽的水平。这类方法可用来提高植物的产量；在一个实施方案中，所述方法用来提高谷类的谷粒产量。
附图简述
图1：B73、Mo17、B73xMo17 F1杂种和Mo17xB73 F1杂种(MG 6006.42，44)的穗状花序分生组织(EIM)和茎端分生组织(SAM)在三个阶段的ZmERECTA-A的MPSS表达。所述基因在穗状花序分生组织中以高水平进行表达，而在茎端分生组织中则以略微较低的水平进行表达。
图2：显示共有序列和保守区的得自玉米、拟南芥、水稻、高粱和大豆的ERECTA序列的比对。
图3：ERECTA A基因(SEQ ID NO：3)优选在分生组织和未成熟穗中表达，在多种组织中的表达详见图中所示。
图4：树形图表示得自拟南芥、玉米、大豆、高粱和水稻的ERECTA序列的亲缘关系。
发明详述
除非另有说明，否则本文所用的所有科技术语具有本发明所属领域普通技术人员通常所理解的相同含义。除非另有说明，否则本发明所采用或包括的技术是本领域普通技术人员所熟知的标准方法。材料、方法和实施例只是说明性的，而不是限制性的。下面通过举例进行说明，但无意限制本发明的范围。
下文将参照附图对本发明进行更详尽的说明，其中仅显示本发明的一些实施方案，而非全部实施方案。事实上，这些发明可用许多种不同的方式进行表达，因此不得解释为限于本文所提出的实施方案；然而，这些实施方案应按这样的方式提供，即令本公开内容符合适用的法律要求。在通篇说明书中，近似的数量是指相近的元素。
在获得先前描述和有关附图中所提出的教导内容的益处之后，本发明所属领域技术人员将会想到本文所公开的本发明的许多修改和其它实施方案。因此，要了解的是，本发明不限于所公开的具体实施方案，有关修改和其它实施方案均包括在所附权利要求书的范围内。虽然本文采用特定的术语，但是这些术语只按普通描述性意义使用，而不是用于限制目的。
除非另有说明，否则为了实施本发明将应用植物学、微生物学、组织培养、分子生物学、化学、生物化学和重组DNA技术的常规技术，这些技术为本领域技术人员所掌握。这类技术详细记载于文献中。参见例如Langenheim和Thimann，(1982)Botany：Plant Biology and Its RelationTo Human Affairs，John Wiley；Cell Culture and Somatic Cell Genetics ofPlants(1984)，第1卷，Vasil主编；Stanier等(1986)The Microbial World，第5版，Prentice-Hall；Dhringra和Sinclair，(1985)Basic Plant PathologyMethods，CRC Press；Maniatis等(1982)Molecular Cloning：A LaboratoryManual；DNA Cloning，第I卷和第II卷，(1985)Glover主编；Oligonucleotide Synthesis，(1985)Gait，主编；Nucleic Acid Hybridization，(1984)Hames和Higgins主编；以及Methods In Enzymology系列丛书，Colowick和Kaplan主编，Academic Press，Inc.，San Diego，CA。
单位、前缀和符号可以按其SI可接受的形式表示。除非另有说明，否则核酸按5’到3’的方向自左向右书写；氨基酸序列按氨基到羧基的方向自左向右书写。限定范围的数字也包括在数字范围内。本文可按周知的氨基酸三字母符号或由IUPAC-IUB生物化学命名委员会(IUPAC-IUBBiochemical Nomenclature Commission)推荐的一字母符号使用氨基酸。同样，可按公认的核苷酸单字母代码使用核苷酸。下面定义的术语将通过参照整个说明书总体上得到更详细的定义。
为了描述本发明，将采用下列术语，并按以下说明来定义。
术语“微生物”是指任何微生物(包括真核和原核微生物)，例如真菌、酵母、细菌、放线菌、藻类和原生动物以及其它单细胞结构。
术语“扩增”是指用至少一个核酸序列作为模板构建多拷贝的核酸序列或与该核酸序列互补的多个拷贝。扩增系统包括聚合酶链式反应(PCR)系统、连接酶链式反应(LCR)系统、基于核酸序列的扩增(NASBA、Cangene、Mississauga、Ontario)、Qβ复制酶系统、基于转录的扩增系统(TAS)和链置换扩增(SDA)。参见例如Diagnostic Molecular Microbiology：Principles and Applications，(1993)Persing等主编，American Society forMicrobiology，Washington，DC。扩增产物称为扩增子。
术语“保守修饰的变体(conservatively modified variant)”适用于氨基酸序列和核酸序列两者。对于特定核酸序列，保守修饰的变体是指编码相同氨基酸序列或氨基酸序列保守修饰的变体的核酸。由于遗传密码的简并性，因此许多功能上相同的核酸都编码任一指定蛋白质。例如，密码子GCA、GCC、GCG和GCU全都编码氨基酸丙氨酸。因此，在丙氨酸出现的每个位置都用一个密码子标明，该密码子可变成所述相应的任何密码子而又不改变所编码的多肽。这类核酸变异是“沉默变异(silentvariation)”，代表一种保守修饰的变异。本文编码多肽的每个核酸序列还记载了核酸的每一个可能的沉默变异。普通技术人员应当了解的是，可以对核酸中的每个密码子(AUG除外，它通常是甲硫氨酸的唯一密码子；一个例外是红色微球菌(Micrococcus rubens)，GTG是其甲硫氨酸的密码子(Ishizuka等(1993)，J.Gen.Microbiol.139：425-32)进行修饰以产生功能相同的分子。因此，编码本发明多肽的核酸的每种沉默变异在各个所述多肽序列中都是隐含的，并且通过引用结合到本文中。
至于氨基酸序列，技术人员应当了解的是，当改变导致氨基酸被化学上相似的氨基酸取代时，在被编码序列上改变、添加或缺失单个氨基酸或小百分比的氨基酸的核酸、肽、多肽或蛋白质序列的各个取代、缺失或添加，即为“保守修饰的变体”。因此，选自1-15任何整数中的任何数目的氨基酸残基可被如此改变。因此，可产生例如1、2、3、4、5、7或10种变化。保守修饰的变体通常提供与未修饰多肽序列(保守修饰的变体从中衍生)类似的生物活性。例如，对于天然底物，底物特异性、酶活性或配体/受体结合一般是天然蛋白质的至少30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％，优选60-90％。提供功能相似的氨基酸的保守取代表是本领域众所周知的。
下面6组分别含有彼此保守取代的氨基酸：
1)丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)；
2)天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)；
3)天冬酰酸(N)、谷氨酰胺(Q)；
4)精氨酸(R)、赖氨酸(K)；
5)异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、甲硫氨酸(M)、缬氨酸(V)；和
6)苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)。
另参见Creighton，Proteins，(1984)W.H.Freeman and Co.。
本文所用“基本由......组成”是指包含对于目标多核苷酸而言的附加序列(additional sequence)在内，其中所述附加序列在严格性条件下，不与与所述多核苷酸相同的cDNA选择性杂交，其中所述杂交条件包括在65℃下在0.1X SSC和0.1％十二烷基硫酸钠中的洗涤步骤。
术语“编码”或“编码的”对于特定核酸而言，是指包含用于翻译成特定蛋白质的信息。蛋白质编码核酸可包含核酸翻译区内的非翻译序列(例如内含子)，或者可缺乏这类间插非翻译序列(例如cDNA中的间插非翻译序列)。编码蛋白质的信息通过密码子使用而被具体化。通常由使用“通用”遗传密码的核酸编码氨基酸序列。然而，当采用以下这些生物表达核酸时，可以使用通用密码的变体，例如存在于某些植物、动物和真菌线粒体、细菌山羊枝原体(Mycoplasma capricolum)(Yamao等，(1985)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82：2306-9)或纤毛虫大核(Macronucleus)中的通用密码的变体。
当通过合成来制备或改变核酸时，可利用将在其中表达核酸的目标宿主的已知的密码子偏爱性。例如，虽然本发明的核酸序列可同时在单子叶植物品种和双子叶植物品种两者中表达，但是可根据单子叶植物或双子叶植物对特定密码子的偏爱和GC含量的偏爱，来对序列进行修饰，研究表明因为这些偏爱有所不同(Murray等(1989)，Nucleic Acids Res.17：477-98，该文献通过引用结合到本文中)。因此，可从玉米的已知基因序列，得到特定氨基酸的玉米偏爱的密码子。得自玉米植物的28个基因的玉米密码子选择见Murray等人文献中的表4，出处同上。
本文所用“异源”当指核酸时是起源于外源品种的核酸，或者如果得自同一品种，则是由其天然组成形式和/或基因组基因座通过人为刻意干预的基本修饰形式。例如，与异源结构基因有效连接的启动子得自不同于得到结构基因的品种，或者如果都得自同一品种，则一个或两个是其原始形式的基本修饰形式。异源蛋白可源自外源品种，或者如果得自同一品种，则它是由其原始形式通过刻意人为干预得到的基本修饰形式。
术语“宿主细胞”是指含有载体并支持表达载体复制和/或表达的细胞。宿主细胞可以是原核细胞(例如大肠杆菌(E.coli))，或者是真核细胞，例如酵母、昆虫、植物、两栖动物或哺乳动物细胞。优选宿主细胞是单子叶植物或双子叶植物细胞，包括但不限于玉米、高粱、向日葵、大豆、小麦、苜蓿、水稻、棉花、油菜、大麦、粟和番茄。特别优选的单子叶植物宿主细胞是玉米宿主细胞。
术语“杂交复合体(hybridization complex)”包括有关由2条单链核酸序列彼此选择性杂交所形成的双链体核酸结构。
有关将核酸插入细胞方面的术语“导入”，是指“转染”或“转化”或“转导”，并且包括有关将核酸掺入真核细胞或原核细胞，其中核酸可掺到细胞的基因组(例如染色体、质粒、质体或线粒体DNA)、转化成自主复制子或者进行瞬时表达(例如转染的mRNA)。
术语“分离的”是指这样的材料，例如核酸或蛋白质，它基本或根本不含正常时在其天然存在的环境下伴随存在或者与之相互作用的组分。分离材料任选包含在其天然环境中不与该材料一起存在的材料。作为如本文定义的“分离的”核酸，亦称“异源”核酸。除非另有说明，否则术语“ERECT核酸”是指包含编码ERECTA多肽的多核苷酸(“ERECTA多核苷酸”)的核酸。
本文所用“核酸”是指单链或双链形式的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸多聚体，除非特别限定，否则包括已知的具有天然核苷酸基本性质的类似物，因为它们按与天然存在的核苷酸(例如肽核酸)同样的方式与单链核酸杂交。
术语“核酸文库”是指一批分离的DNA或RNA分子，它包含并基本上代表了特定生物基因组的整个转录部分。示例性核酸文库(例如基因组文库和cDNA文库)的构建可参见标准分子生物学文献，例如Berger和Kimmel，Guide To Molecular Cloning Techniques，Methods In Enzymology系列丛书，第152卷，Academic Press，Inc.，San Diego，CA(1987)；Sambrook等(1989)，Molecular Cloning：ALaboratory Manual，第二版，第1-3卷；以及Current Protocols In Molecular Biology，Ausubel等主编，Current Protocols，Greene Publishing Associates，Inc.与John Wiley&Sons，Inc.合资企业(1994增刊)。
本文所用“有效连接”是指第一序列(例如启动子)和第二序列之间的功能性连接，其中启动子序列启动和介导相当于第二序列的DNA序列的转录。一般而言，有效连接是指待连接的核酸序列是邻接的，必要时将2个蛋白质编码区相邻连接并在同一读框内。
本文所用术语“植物”是指完整植物、植物器官(例如叶、茎、根等)、种子及植物细胞和它们的子代。本文所用植物细胞包括但不限于种子悬浮培养物、胚、分生组织区、愈伤组织、叶、根、茎干(shoot)、配子体、孢子体、花粉和小孢子。可用于本发明方法的植物类别，通常与适于转化技术的高等植物的类别一样广泛，包括单子叶植物和双子叶植物，包括下列属的品种：南瓜属(Cucurbita)、蔷薇属(Rosa)、葡萄属(Vitis)、核桃属(Juglans)、草莓属(Fragaria)、百脉根属(Lotus)、苜蓿属(Medicago)、驴食豆属(Ohobrychis)、三叶草属(Trifolium)、胡卢巴属(Trigonella)、豇豆属(Vigna)、柑橘属(Citrus)、亚麻属(Linum)、老鹳草属(Geranium)、木薯属(Manihot)、胡萝卜属(Daucus)、拟南芥属(Arabidopsis)、芸苔属(Brassica)、萝卜属(Raphanus)、白芥属(Sinapis)、颠茄属(Atropa)、辣椒属(Capsicum)、曼陀罗属(Datura)、天仙子属(Hyoscyamus)、番茄属(Lycopersicon)、烟草属(Nicotiana)、茄属(Solanum)、碧冬茄属(Petunia)、毛地黄属(Digitalis)、Majorana、菊苣属(Cichorium)、向日葵属(Helianthus)、莴苣属(Lactuca)、雀麦属(Bromus)、天门冬属(Asparagus)、金鱼草属(Antirrhinum)、萱草属(Hemerocallis)、Nemesis、天竺葵属(Pelargonium)、稷属(Panieum)、狼尾草属(Pennisetum)、毛茛属(Ranunculus)、千里光属(Senecio)、Salpiglossis、黄瓜属(Cucumis)、蓝英花属(Browallia)、大豆属(Glycine)、豌豆属(Pisum)、菜豆属(Phaseolus)、黑麦草属(Lolium)、稻属(Oryza)、燕麦属(Avena)、大麦属(Hordeum)、黑麦属(Secale)、葱属(Allium)和小麦属(Triticum)。特别优选的植物是玉米(Zea mays)。
本文所用的“产量”是指收获时经调整谷类水分(通常为15％)后每英亩谷类农作物蒲式耳。谷类水分在收获的谷物中测量。收获时调整谷类水分水平后测定经调整的谷类测试重量(test weight)，以磅/蒲式耳重量表示。
本文所用“多核苷酸”是指具有天然核糖核苷酸基本性质的脱氧核糖多核苷酸(deoxyribopolynucleotide)、核糖多核苷酸(ribopolynucleotide)或其类似物，因为在严格性杂交条件下，它们与与天然存在的核苷酸基本相同的核苷酸序列杂交和/或允许翻译成与天然存在的核苷酸所翻译的氨基酸相同的氨基酸。多核苷酸可以是天然基因、异源结构基因或调节基因的全长序列或亚序列。除非另有说明，否则该术语是指特定序列及其互补序列。因此，出于稳定性或其它原因，骨架经修饰的DNA或RNA是本文所用术语“多核苷酸”。此外，包含稀有碱基例如肌苷或经修饰的碱基例如三苯基甲基化碱基(仅举两个例子)的DNA或RNA也是本文所用术语多核苷酸。应当了解的是，可以对DNA和RNA进行各种修饰，以达到本领域技术人员已知的多种有用目的。本文所采用的术语多核苷酸包括这类化学修饰形式、酶促修饰形式或代谢修饰形式的多核苷酸，以及病毒和细胞(还包括简单细胞和复杂细胞)特有的DNA和RNA的化学形式。
术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”本文中可互换使用，是指氨基酸残基的多聚体。该术语适用于其中一个或多个氨基酸残基是相应天然存在的氨基酸的人工化学类似物的氨基酸多聚体，并适用于天然存在的氨基酸多聚体。
本文所用的“启动子”是指自转录开始并参与识别和结合RNA聚合酶和其它蛋白质以启动转录的DNA上游区域。“植物启动子”是能够在植物细胞中启动转录的启动子。示例性植物启动子包括但不限于从植物、植物病毒和包含在植物细胞中表达基因的细菌(如土壤杆菌属(Agrobacterium)或根瘤菌属(Rhizobium))得到的启动子。实例有在某些组织例如叶、根、种子、须根、木质部导管、管胞或厚壁组织中优先启动转录的启动子。这类启动子被称为“组织优选的”启动子。“细胞型”特异性启动子主要驱动在一种或多种器官中的某些细胞类型(例如根或叶的维管细胞)中进行表达。“诱导型”或“可调节”启动子是受环境控制的启动子。可通过诱导型启动子影响转录的环境条件的实例包括厌氧条件或光线的存在。另一类型的启动子是发育调节启动子，例如在花粉发育期间驱动表达的启动子。组织优选的启动子、细胞型特异性启动子、发育调节启动子和诱导型启动子构成“非组成型”启动子类别。“组成型”启动子是在大多数环境条件下都有活性的启动子。
术语“ERECTA多肽”是指一个或多个氨基酸序列。该术语还包括氨基酸序列的片段、变体、同源物、等位基因或前体(例如前蛋白质或蛋白质原)。“ERECTA蛋白”包含ERECTA多肽。除非另有说明，否则术语“ERECT核酸”是指包含编码ERECTA多肽的多核苷酸(“ERECTA多核苷酸”)的核酸。
本文所用“重组”是指通过导入异源核酸而被修饰细胞或载体，或者从如此修饰的细胞衍生的细胞。因此，例如重组细胞表达在天然(非重组)形式的细胞中不会以相同形式存在的基因，或者由于人为刻意干预从而表达否则会异常表达、表达不足或完全不表达的天然基因。本文所用术语“重组”不包括由天然存在的事件(例如自发突变、天然转化/转导/转座)所引起的细胞或载体变化，例如由无人为刻意干预而发生的细胞或载体变化。
本文所用“重组表达盒”是经重组或合成产生的具有一系列特定核酸元件的核酸构建体，该构建体允许特定核酸在靶细胞中进行转录。可将重组表达盒掺到质粒、染色体、线粒体DNA、质体DNA、病毒或核酸片段中。表达载体的重组表达盒部分除其它序列以外，通常还包括待转录的核酸和启动子。
术语“残基”或“氨基酸残基”或“氨基酸”在本文中可互换使用，是指掺到蛋白质、多肽或肽(总称“蛋白质”)的氨基酸。氨基酸可以是天然存在的氨基酸，除非另有限定，否则可包括已知的可按与天然存在的氨基酸同样的方式起作用的天然氨基酸的类似物。
术语“选择性杂交”是指在严格性杂交条件下，比起其与非靶核酸序列杂交的程度，核酸序列以可检测的较高程度(例如超过本底的至少2倍)与特定核酸靶序列杂交，并且基本不包括非靶核酸。选择性杂交序列彼此间通常具有约至少40％序列同一性，优选60-90％序列同一性，最优选100％序列同一性(即互补)。
术语“严格性条件”或“严格性杂交条件”是指比起其它序列，探针可与其靶序列以可检测的较高程度(例如超出本底的至少2倍)杂交的条件。严格性条件是序列依赖性的，在不同情况下将有所不同。通过控制杂交和/或洗涤条件的严格性，可鉴定出与探针互补可高达100％的靶序列(同源探测)。或者，可调整严格性条件，使得序列中存在一些错配，从而检测较低程度的相似性(异源探测)。探针长度最理想约为500个核苷酸，但是也可在长度500个核苷酸以下到等于靶序列完整长度之间大幅变化。
严格性条件通常是这样的条件，其中在pH 7.0-8.3下盐浓度小于约1.5M钠离子，通常约0.01-1.0M钠离子浓度(或其它盐)，对于短探针(例如10-50个核苷酸)，温度至少约为30℃，对于长探针(例如大于50个核苷酸)至少约为60℃。还可加入去稳定剂例如甲酰胺或Denhardt试剂来达到严格性条件。示例性的低严格性条件包括在37℃下在30-35％甲酰胺、1MNaCl、1％SDS(十二烷基硫酸钠)的缓冲溶液中进行杂交，并在50-55℃下用1X-2X SSC(20X SSC＝3.0M NaCl/0.3M柠檬酸三钠)洗涤。示例性的中等严格性条件包括在37℃下在40-45％甲酰胺、1M NaCl、1％SDS中进行杂交，并在55-60℃下用0.5X-1X SSC洗涤。示例性的高严格性条件包括在37℃下在50％甲酰胺、1M NaCl、1％SDS中进行杂交，并在60-65℃下用0.1X SSC洗涤。特异性通常随杂交后洗涤而变化，关键因素是最终洗涤溶液的离子强度和温度。对于DNA-DNA杂交，可由下列公式得到Tm的近似值：Tm＝81.5℃+16.6(log M)+0.41(％GC)-0.61(％form)-500/L(Meinkoth和Wahl，Aanl.Bochem.，(1984)138：267-84)；其中M是一价阳离子的体积摩尔浓度，％GC是DNA中鸟嘌呤核苷酸和胞嘧啶核苷酸的百分比，％form是杂交溶液中甲酰胺的百分比，L是以碱基对为单位的杂交序列长度。Tm是互补靶序列与完全匹配的探针杂交达50％时的温度(在规定的离子强度和pH下)。对于每1％的错配，Tm便降低大约1℃；因此，可以调整Tm、杂交和/或洗涤条件从而与所需同一性的序列杂交。例如，如果要寻获同一性≥90％的序列，则可将Tm降低10℃。一般选择在规定离子强度和pH下低于特定序列及其互补序列热熔点(Tm)约5℃的严格性条件。然而，极严格性条件可采用比热熔点(Tm)低1℃、2℃、3℃或4℃的杂交和/或洗涤；中等严格性条件可采用比热熔点(Tm)低6℃、7℃、8℃、9℃或10℃的杂交和/或洗涤；低严格性条件可采用比热熔点(Tm)低11℃、12℃、13℃、14℃、15℃或20℃的杂交和/或洗涤。在使用所述公式、杂交和洗涤组合物及所需的Tm时，普通技术人员应清楚杂交和/或洗涤溶液的变化是固有发生的。如果所需的错配程度引起Tm低于45℃(含水溶液)或32℃(甲酰胺溶液)，则优选增加SSC浓度以便可使用较高的温度。核酸杂交的详尽指南可参见Tijssen，Biology-Hybridization with Nucleic Acid Probes，第2章，第I部分，“Overview of principles of hybridization and the strategy of nucleic acidprobe assays(杂交原理与核酸探针实验策略综述)”，Elsevier，New York(1993)；以及Current Protocols In Molecular Biology，第2章，Ausubel等主编，Greene Publishing and Wiley-Interscience，New York(1995)。除非另有说明，否则本申请中高严格性定义为在65℃下在4X SSC、5X Denhardt试剂(含5g菲可(Ficoll)、5g聚乙烯吡咯烷酮、5g胎牛血清白蛋白的500ml水)、0.1mg/ml煮沸的鲑精DNA和25mM磷酸钠中进行杂交，并在65℃下用0.1X SSC、0.1％SDS洗涤。
本文所用“转基因植物”是指在其基因组中包含异源多核苷酸的植物。异源多核苷酸一般稳定地整合到基因组中，使得多核苷酸传递给连续世代。异源多核苷酸可单独或者作为重组表达盒的组成部分整合到基因组中。本文所用“转基因的”包括任何细胞、细胞系、愈伤组织、组织、植物组成部分或植物，其基因型由于异源核酸的存在而发生了改变，所述异源核酸包括最初如此改变的转基团植物的异源核酸，以及由最初的转基因植物经有性杂交或无性繁殖所产生的异源核酸。本文所用术语“转基因的”不包括通过常规植物育种方法或者由天然存在的事件(例如随机异花受精、非重组病毒感染、非重组细菌转化、非重组转座或自发突变)引起的基因组(染色体或染色体外)改变。
本文所用“载体”是指用于转染宿主细胞的核酸，并且在载体中可插入多核苷酸。载体常常是复制子。表达载体允许插入其中的核酸进行转录。
使用下列术语来描述两个或更多个核酸或多核苷酸或者多肽之间的序列关系：(a)“参比序列”，(b)“比较窗(comparison window)”，(c)“序列同一性”，(d)“序列同一性百分比”，和(e)“基本相同”。
本文所用“参比序列”是用作序列比较基础的规定序列。参比序列可以是特定序列的亚序列或全序列；例如作为全长cDNA或基因序列的区段，或者是完整的cDNA或基因序列。
本文所用“比较窗”是指包括多核苷酸序列连续的特定区段，其中可将多核苷酸序列与参比序列进行比较，且其中与用于两个序列的最佳比对的参比序列(其不包含添加或缺失)相比，比较窗的多核苷酸序列部分可包含添加或缺失(即空位)。比较窗长度一般至少为20个连续核苷酸，任选可以是30、40、50、100个或更长。本领域技术人员清楚，为了避免由于多核苷酸序列含有空位所致的与参比序列有较高的相似性，通常会引入空位罚分并且从匹配数中扣减。
用于比较的核苷酸序列和氨基酸序列的比对方法是本领域众所周知的。局部同源算法(BESTFIT)(见Smith和Waterman，(1981)Adv.Appl.Math 2：482)，可进行最佳序列比对以便比较；还可通过以下方法进行：同源比对算法(GAP)(Needleman和Wunsch，(1970)J.Mol. Biol.48：443-53)；检索相似性方法(Tfasta和Fasta)(Pearson和Lipman，(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：2444)；这些算法的计算机运行，包括但不限于PC/Gene程序中的CLUSTAL(Intelligenetics，Mountain View，California)、GAP、BESTFIT、BLAST、FASTA和Wisconsin遗传软件包第8版(Wisconsin Genetics Software Package)的TFASTA(可得自GeneticsComputer Group(
Figure A20078004316500191
程序(Accelrys，Inc.，San Diego，CA))。有关CLUSTAL程序的详情参见Higgins和Sharp，(1988)Gene 73：237-44；Higgins和Sharp，(1989)CABIOS 5：151-3；Corpet等(1988)Nucleic AcidsRes.16：10881-90；Huang等(1992)Computer Applications in the Biosciences8：155-65；以及Pearson等(1994)Meth.Mol.Biol.24：307-31。用于多个序列的最佳全局比对的优选程序是PileUp(Feng和Doolittle，(1987)J.Mol.Evol.，25：351-60，该方法与Higgins和Sharp所述方法(Higgins和Sharp(1989)CABIOS 5：151-53)类似，并通过引用结合到本文中)。可用于数据库相似性检索的一类BLAST程序包括：对照核苷酸数据库序列用于核苷酸查询序列的BLASTN；对照蛋白质数据库序列用于核苷酸查询序列的BLASTX；对照蛋白质数据库序列用于蛋白质查询序列的BLASTP；对照核苷酸数据库序列用于蛋白质查询序列的TBLASTN；以及对照核苷酸数据库序列用于核苷酸查询序列的TBLASTX。参见CURRENTPROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY，第19章，Ausubel等主编，Greene Publishing and Wiley-Interscience，New York(1995)。
GAP使用Needleman和Wunsch的算法(出处同上)，来查找使匹配数最大且空位数最小的2个全序列的比对。GAP将所有可能的比对和空位都考虑在内，创建具有碱基匹配数最大和空位最少的比对。这允许提供以匹配碱基为单位的空位建立罚分(gap creation penalty)和空位延伸罚分(gap extension penalty)。对于其插入的每个空位，GAP都必须得到(makea profit of)匹配的空位建立罚分数。如果选择空位延伸罚分大于零，则GAP另还必须因每个插入的空位而得到空位长度乘以空位延伸罚分的值。Wisconsin遗传软件包(第10版)中默认空位建立罚分值和空位延伸罚分值分别为8和2。空位建立罚分和空位延伸罚分可用选自0-100之间的整数表示。因此，例如空位建立罚分和空位延伸罚分可以为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30、40、50或以上。
GAP是最佳比对类别的一员。该类别中可有许多成员，但其它成员并不具有较好的质量。GAP显示出比对的4项品质因素：质量(quality)、比率、同一性和相似性。质量是为了对序列进行比对的量度(metric)最大化。比率是质量除以较短区段的碱基数。百分比同一性是实际匹配符号的百分比。百分比相似性是相似符号的百分比。空位跨过的符号可忽略不计。当一对符号的评分矩阵值(scoring matrix value)≥0.50(即相似性阈值)时，被评为有相似性。Wisconsin遗传软件包(第10版)中所用的评分矩阵是BLOSUM62(参见Henikoff和Henikoff，(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：10915)。
除非另有说明，否则本文所提供的序列同一性/相似性数值是指应用BLAST 2.0程序组采用默认参数所得到的分值(Altschul等(1997)NucleicAcids Res.25：3389-402)。
正如本领域普通技术人员所了解的一样，BLAST假定蛋白质可作为随机序列模型来进行检索。然而，许多真实蛋白质包含非随机序列区域，它可以是同聚束(homopolymeric tract)、短周期重复序列(short-periodrepeat)或富含一种或多种氨基酸的区域。可对无关蛋白质之间的这类低复杂性区域进行比对，即使蛋白质的其它区域完全不同。可采用多种低复杂性过滤程序(filter program)以减少这类低复杂性比对。可单独或联合使用例如SEG(Wooten和Federhen，(1993)Comput.Chem.17：149-63)和XNU(Claverie和States，(1993)Comput.Chem.17：191-201)低复杂性过滤程序。
本文所用“序列同一性”或“同一性”在两个核酸序列或两个多肽序列的情况下，是指两个序列中的残基，当在特定比较窗内对最大对应性进行比对时是相同的。当序列同一性百分比用来提及蛋白质时，一般认为不相同的残基位置常常因保守氨基酸取代而不同，其中氨基酸残基被具有相似化学性质(例如电荷或疏水性)的其它氨基酸残基取代，因此不会改变分子的功能性质。如果序列在保守取代方面不同，则百分比序列同一性可以向上调整以纠正保守性质的取代。由于这类保守取代而不同的序列，被称为具有“序列相似性”或“相似性”。进行这类调整的方法为本领域技术人员所熟知。这通常包括将保守取代作为部分错配而不是完全错配进行评分，从而提高百分比序列同一性。因此，例如当相同的氨基酸得分为1，且非保守取代得分为0时，保守取代的得分介于0和1之间。例如，按照Meyers和Miller算法(Meyers和Miller，(1988)ComputerApplic.Biol.Sci.4：11-17)，例如执行程序PC/GENE(Intelligenetics，Mountain View，California，USA)，计算出保守取代的得分。
本文所用“序列同一性百分比”是指在比较窗内对两个最佳比对序列进行比较所测定的值，其中与用于两个序列最佳比对的参比序列(不包含添加或缺失)相比，比较窗内的多核苷酸序列部分可包含添加或缺失(即空位)。如下计算百分比：确定同时在两个序列中出现相同核酸碱基或氨基酸残基的位置数，得到匹配位置数，用比较窗的位置总数除匹配位置数，结果乘以100便得到序列同一性的百分比。
术语多核苷酸序列的“基本相同”是指包含与参比序列相比，序列同一性介于50-100％之间的序列的多核苷酸，优选至少50％序列同一性，优选至少60％序列同一性，优选至少70％，更优选至少80％，更优选至少90％，最优选至少95％，所述序列同一性通过应用所述比对程序之一用标准参数计算得出。技术人员应当了解的是，可以将密码子简并性、氨基酸相似性、读框定位等考虑在内，对这些数值进行适当调整，以确定由两个核苷酸序列编码的相应蛋白质的同一性。出于这些目的的氨基酸序列的基本相同通常是指介于55-100％之间的序列同一性，优选至少55％，优选至少60％，更优选至少70％、80％、90％，最优选至少95％。
核苷酸序列是基本相同的另一个标志是如果两个分子在严格性条件下能彼此杂交。遗传密码的简并性为许多氨基酸取代创造了条件，该取代导致了编码相同氨基酸的核苷酸序列的多样性，因此，有可能出现的是，可编码相同多肽的DNA序列在严格性条件下彼此间不会杂交。例如，当用遗传密码所允许的最大密码子简并产生核酸拷贝时，这种情况便可能出现。2个核酸序列是基本相同的一个标志是这样的多肽，即第一核酸编码的多肽与第二核酸的多肽有免疫交叉反应性。
术语“基本相同”在肽的情况下是指肽包含在特定比较窗内与参比序列相比序列同一性介于55-100％的序列，优选至少55％序列同一性，优选60％、优选70％、更优选80％、最优选至少90％或95％序列同一性。优选采用Needleman和Wunsch的同源比对算法(出处同上)进行最佳比对。两个肽序列是基本相同的标志是一种肽与针对第二种肽所产生的抗体有免疫反应性。因此，例如当两种肽仅因保守取代而不同时，第一肽与第二肽是基本相同的。另外，当两种肽因非保守变化而不同时，如果抗体识别的表位是基本相同的，则第一肽与第二肽是基本相同的。与如上所述序列有共同序列只是残基位置有所不同的“基本相似”的肽，可因保守氨基酸改变而有所不同。
本发明公开了ERECTA多核苷酸和ERECTA多肽。本发明的新的核苷酸和蛋白质具有的表达模式表明它们在植物发育中起着重要作用。所述多核苷酸在多种植物组织中进行表达。因此，所述多核苷酸和多肽为操控植物发育以改变种子和营养组织发育、时间控制或组成提供了机会。这可用来产生不育植物、无籽植物或胚乳组成改变的植物。
表1序列鉴定
  名称   品种  SEQ ID NO：多核苷酸   SEQ IDNO：多肽   SEQ ID NO：多核苷酸可读框
  AtERECTA   拟南芥(Arabidopsisthaliana)  1   2   27
  AtERECTA样   拟南芥  3   4   28
  ZmERECTA A   玉米  5   6   29
  ZmERECTA B   玉米  7   8   30
  OsERECTA A   水稻(Oryzasativa)  9   10   31
  OsERECTA B   水稻  11   12   32
  SbERECTA A   两色蜀黍(Sorghumbicolor)  13   14   33
  SbERECTA B   两色蜀黍  15   16   34
  SbERECTA C   两色蜀黍  17   18   35
  GmERECTA A   大豆(Glycinemax)  19   20   36
  GmERECTA B   大豆  21   22   37
  GmERECTA C   大豆  23   24   38
  GmERECTA D   大豆  25   26   39
核酸
本发明此外还提供包含ERECTA多核苷酸的RNA、DNA及其类似物和/或嵌合体的分离核酸。
本发明还包括使在不同生物中表达最优化的多核苷酸。例如，对于玉米植物中多核苷酸的表达，可按照Murray等的方法(出处同上)，使序列改变以符合特定的密码子偏爱，并改变GC含量。对于得自玉米植物28个基因的玉米密码子选择可参见Murray等人(出处同上)的表4。
本发明的ERECT核酸包含分离的ERECTA多核苷酸，其包括：
(a)编码ERECTA多肽的多核苷酸及其保守性修饰的变体和多态性变体；
(b)与(a)或(b)的多核苷酸具有至少70％序列同一性的多核苷酸；
(c)(a)或(b)的多核苷酸的互补序列。
核酸的构建
可采用(a)标准重组方法，(b)合成技术，或其组合，来制备本发明的分离核酸。在一些实施方案中，本发明的多核苷酸可被克隆、扩增，或者另由真菌或细菌构建。
核酸可适宜包含除本发明多核苷酸以外的序列。例如，可将包含一个或多个内切核酸酶限制位点的多克隆位点插入核酸中以助于分离多核苷酸。同样，可以插入可翻译序列以助于分离翻译的本发明多核苷酸。例如，六聚组氨酸标记序列为纯化本发明的蛋白质提供方便的方法。本发明的上述核酸-多核苷酸序列除外-任选为用于本发明多核苷酸克隆和/或表达的载体、衔接子或接头。可将附加序列添加到这类克隆和/或表达序列上以使其在克隆和/或表达时最优化，从而有助于分离多核苷酸，或者促进多核苷酸导入细胞。本发明核酸的长度减去其本发明多核苷酸的长度通常小于20千碱基对，常常小于15kb，时常小于10kb。克隆载体、表达载体、衔接子和接头的使用是本领域众所周知的。示例性的核酸包括诸如这样的载体：M13、λZAP Express、λZAP II、λgt10、λgt11、pBK-CMV、pBK-RSV、pBluescript II、λDASH II、λEMBL 3、λEMBL 4、pWE15、SuperCos 1、SurfZap、Uni-ZAP、pBC、pBS+/-、pSG5、pBK、pCR-Script、pET、pSPUTK、p3’SS、pGEM、pSK+/-、pGEX、pSPORTI和II、pOPRSVI CAT、pOPI3 CAT、pXT1、pSG5、pPbac、pMbac、pMClneo、pOG44、pOG45、pFRTβGAL、pNEOβGAL、pRS403、pRS404、pRS405、pRS406、pRS413、pRS414、pRS415、pRS416、λMOSSlox和λMOSElox。用于本发明的任选的载体包括但不限于λZAP II和pGEX。有关各种核酸的描述参见例如Stratagene Cloning Systems，1995、1996、1997目录(LaJolla，CA)；以及Amersham Life Sciences，Inc，’97目录(Arlington Heights，IL)。
构建核酸的合成方法
可用以下方法通过直接化学合成来制备本发明的分离核酸：例如磷酸三酯方法(Narang等(1979)Meth.Enzymol.68：90-9)；磷酸二酯方法(Brown等，(1979)Meth.Enzymol.68：109-51)；二乙基亚磷酰胺(diethylphosphoramidite)方法(Beaucage等(1981)Tetra.Letts.22(20)：1859-62)；固相亚磷酰胺三酯方法(Beaucage等(出处同上)，该方法例如使用自动合成仪，参见例如Needham-VanDevanter等(1984)Nucleic Acids Res.12：6159-68)；以及固相支持体方法(美国专利第4,458,066号)。化学合成法一般产生单链寡核苷酸。这可通过与互补序列杂交或者通过用该单链作为模板用DNA聚合酶聚合来转化成双链DNA。技术人员应当了解的是，虽然DNA的化学合成限于约100个碱基的序列，但是可通过较短序列的连接得到较长的序列。
UTR和密码子偏爱
研究发现翻译效率一般受RNA的5’非编码区或非翻译区(5’UTR)特定序列元件的调节。正向序列基序包括翻译起始共有序列(Kozak，(1987)Nucleic Acids Res.15：8125)和5<G>7甲基GpppG RNA帽子结构(Drummond等(1985)Nucleic Acids Res.13：7375)。负向元件包括稳定的分子内5’UTR茎-环结构(Muesing等(1987)Cell48：691)和AUG序列或位于5’UTR中合适AUG之后的短可读框(Kozak，出处同上，Rao等(1988)Mol.and Cell.Biol.8：284)。因此，本发明提供5’和/或3’UTR区用于调节异源编码序列的翻译。
此外，可以对本发明多核苷酸的多肽编码区段进行修饰以改变密码子选择。可利用已改变的密码子选择来改变翻译效率和/或使编码序列在所需宿主中的表达最优化，或者使在玉米中表达的异源序列中的密码子选择最优化。可以应用获自University of Wisconsin Genetics ComputerGroup的市售软件包例如“Codon Preference”，对本发明多核苷酸编码区中的密码子选择进行统计分析。参见Devereaux等(1984)Nucleic AcidsRes.12：387-395；或MacVector 4.1(Eastman Kodak Co.，New Haven，Conn.)。因此，本发明提供至少一个本发明多核苷酸的编码区密码子选择频率特征。可以用来确定密码子选择频率的多核苷酸数(3个核苷酸/氨基酸)，可以是3个至本文所提供的本发明多核苷酸数之间的任何整数。任选多核苷酸可以是全长序列。用于统计分析的示例性序列数可为至少1、5、10、20、50或100。
序列改组
本发明提供使用本发明的多核苷酸进行序列改组的方法以及从其中得到的组合物。序列改组可参见WO公布号97/20078。另参见Zhang等(1997)，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94：4504-9；以及Zhao等(1998)NatureBiotech 16：258-61。序列改组一般提供用于产生具有所需特征的多核苷酸文库的方法，所述特征是可被选择或筛选的。重组多核苷酸文库由一群序列相关的多核苷酸产生，所述序列相关的多核苷酸包含具有基本序列同一性并可在体外或体内进行同源重组的序列区。所述序列重组的多核苷酸群包含多核苷酸亚群，该多核苷酸亚群具有所需要的特征或优势特征，并且可通过合适的选择或筛选方法被选出。所述特征可以是能够在筛选系统中被选出或被检测的性质或属性，可包括以下蛋白、元件或序列的性质：编码的蛋白质；转录元件；控制转录、RNA加工、RNA稳定性、染色质构象、翻译或基因或转基因的其它表达性质的序列；复制元件；蛋白质结合元件等，例如赋予可筛选或可检测性质的任何特征。在一些实施方案中，选择特征可以是与如本文所提供的野生型蛋白质相比Km和/或Kcat改变。在其它实施方案中，由序列改组产生的蛋白质或多核苷酸的配体结合亲和力可大于未改组野生型多核苷酸的配体结合亲和力。在又一些实施方案中，与未改组野生型多核苷酸的相比，由序列改组产生的蛋白质或多核苷酸最适宜pH被改变。这类性质的提高可以是野生型数值的至少110％、120％、130％、140％或150％以上。
重组表达盒
本发明还提供包含本发明核酸的重组表达盒。编码所需的本发明多核苷酸的核酸序列(例如长度足以编码本发明活性蛋白的cDNA或编码多肽的基因组序列)，可用来构建可导入所需宿主细胞的重组表达盒。重组表达盒通常可包含与转录起始调节序列有效连接的本发明多核苷酸，该转录起始调节序列可指导多核苷酸在既定宿主细胞(例如转化植物的组织)中转录。
例如，植物表达载体可包括：(1)受5’和3’调节序列转录控制的克隆的植物基因，(2)显性选择标记。如有需要，这类植物表达载体还可包含启动子调节区(例如赋予诱导型或组成型表达、环境或发育调节性表达或者细胞或组织特异性/选择性表达的启动子调节区)、转录起始位点、核糖体结合位点、RNA加工信号、转录终止位点和/或聚腺苷酸化信号。
可以采用植物启动子片段，该片段可指导本发明多核苷酸在再生植物的所有组织中表达。这类启动子本文称为“组成型”启动子，并且在大多数环境条件和发育或细胞分化状态下都具有活性。组成型启动子的实例包括1’启动子或2’启动子(衍生自根癌土壤杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)的T-DNA)、Smas启动子、肉桂醇脱氢酶启动子(美国专利第5,683,439号)、Nos启动子、核酮糖二磷酸羧化酶-加氧酶启动子、GRP1-8启动子、得自花椰菜花叶病毒(CaMV)的35S启动子(参见Odell等(1985)Nature 313：810-2)、水稻肌动蛋白启动子(McElroy等(1990)Plant Cell163-171)、泛素启动子(Christensen等(1992)Plant Mol.Biol.12：619-632和Christensen等(1992)Plant Mol.Biol.18：675-89)、pEMU(Last等(1991)Theor.Appl.Genet.81：581-8)、MAS(Velten等(1984)EMBO J.3：2723-30)、玉米H3组蛋白启动子(Lepetit等(1992)Mol.Gen.Genet.231：276-85)和Atanassvoa等(1992)Plant Journal 2(3)：291-300)、ALS启动子(参见PCT专利申请号WO 96/30530、GOS2(美国专利第6,504,083号)以及得自本领域技术人员已知的各种植物基因的其它转录起始区。对于本发明而言，泛素启动子是优选的用于在单子叶植物中表达的启动子。
或者，植物启动子可指导本发明的多核苷酸在特定组织中表达，或者另可处于更精细的环境或发育控制之下。这类启动子在此称为“诱导型”启动子(Rab17、RAD29)。可影响通过诱导型启动子转录的环境条件包括病原体攻击、厌氧条件或光线的存在。诱导型启动子的实例有由缺氧或冷胁迫诱导的Adhl启动子、由热胁迫诱导的Hsp70启动子和由光诱导的PPDK启动子。
受发育控制的启动子的实例包括仅仅或优先在某些组织(例如叶、根、果实、种子或花)中启动转录的启动子。启动子的操作还可随启动子在基因组中的位置而变化。因此，诱导型启动子在某些位置上可能变成完全组成型或部分组成型。
如果需要多肽表达，则一般需要的是在多核苷酸编码区的3’端包括聚腺苷酸化区。可从多种植物基因或者从T-DNA中得到聚腺苷酸化区。待添加的3’端序列可得自例如胭脂碱合酶或章鱼碱合酶基因，或者得自其它植物基因，或者次优选得自任何其它真核基因。这类调节元件的实例包括但不限于3’终止区和/或聚腺苷酸化区，例如根癌土壤杆菌胭脂碱合酶(nos)基因的3’终止区和/或聚腺苷酸化区(Bevan等(1983)NucleicAcids Res.12：369-85)；马铃薯蛋白酶抑制剂II(PINII)基因(Keil等(1986)Nucleic Acids Res.14：5641-50；An等(1989)Plant Cell 1：115-22)；以及CaMV 19S基因(Mogen等(1990)Plant Cell 2：1261-72)。
可将内含子序列添加到5’非翻译区或部分编码序列的编码序列中以增加在细胞溶胶积蓄的成熟信息的量。在植物和动物表达构建体两者的转录单元中包括可剪接内含子显示出在mRNA和蛋白质水平上的基因表达提高多达1000倍(Buchman和Berg，(1988)Mol.Cell Biol.8：4395-4405；Callis等(1987)Genes Dev.1：1183-200)。这类内含子增强的基因表达通常在置于接近转录单元5’端时最高。玉米内含子Adh1-S内含子1、2和6及Bronze-1内含子的使用是本领域已知的。一般参见The MaizeHandbook，第116章，Freeling和Walbot主编，Springer，New York(1994)。
植物信号序列可用于本发明，所述植物信号序列包括但不限于使蛋白质靶向植物细胞胞外基质的信号肽编码DNA/RNA序列(Dratewka-Kos等(1989)J.Biol.Chem.264：4896-900)，例如白花丹叶烟草(Nicotianaplumbaginifolia)扩延基因(DeLoose等(1991)基因99：95-100)；使蛋白质靶向液泡的信号肽，例如甘薯块根贮存蛋白(sporamin)基因(Matsuka等(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88：834)和大麦凝集素基因(Wilkins等(1990)Plant Cell，2：301-13)；引起蛋白质分泌的信号肽，例如PRIb信号肽(Lind等(1992)Plant Mol.Biol.18：47-53)或大麦α淀粉酶(BAA)(Rahmatullah等(1989)Plant Mol.Biol.12：119，该文献通过引用结合到本文中)；或者使蛋白质靶向质体的信号肽，例如油菜籽烯酰Acp还原酶的信号肽(Verwaert等(1994)Plant Mol.Biol.26：189-202)。对于本发明，与ERECTA多核苷酸融合的大麦α淀粉酶信号序列是用于在玉米中表达的优选的构建体。
包含得自本发明多核苷酸的序列的载体通常包含标记基因，它赋予植物细胞可选择的表型。选择标记基因一般可通过合适的基因编码抗生素抗性，合适的基因包括抗生素大观霉素抗性编码基因(例如aada基因)、编码链霉素抗性的链霉素磷酸转移酶(SPT)基因、编码卡那霉素或遗传霉素抗性的新霉素磷酸转移酶(NPTII)基因、编码潮霉素抗性的潮霉素磷酸转移酶(HPT)基因、起抑制乙酰乳酸合酶(ALS)、特别是抑制磺酰脲型除草剂作用的除草剂抗性的编码基因(例如因含有导致这种抗性的突变、特别是S4和/或Hra突变的乙酰乳酸合酶(ALS)基因)、起抑制谷氨酰胺合酶作用的除草剂(例如膦丝菌素或basta)抗性的编码基因(例如bar基因)或者本领域已知的其它这类基因。bar基因编码除草剂basta抗性，ALS基因编码除草剂氯磺隆抗性。
用于在高等植物中进行基因表达的典型载体是本领域众所周知的，包括得自根癌土壤杆菌诱导根癌的(Ti)质粒的载体，参见Rogers等(1987)Meth.Enzymol.153：253-77。这些载体是植物整合性载体，因为在转化时，载体将部分载体DNA整合到宿主植物的基因组中。本文可用的示例性根癌土壤杆菌载体是质粒pKYLX6和pKYLX7(Schardl等(1987)Gene61：1-11和Berger等(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA，86：8402-6)。本文另一个可用的载体是可获自CLONTECH Laboratories，Inc.(Palo Alto，CA)的质粒pBI101.2。
宿主细胞中蛋白质的表达
采用本发明的核酸，可以在重组改造的细胞例如细菌细胞、酵母细胞、昆虫细胞、哺乳动物细胞或者优选植物细胞中表达本发明的蛋白质。细胞以非天然状况(例如数量、组成、位置和/或时间)产生出蛋白质，因为它们已通过人为干预如按计划进行了遗传改造。
期望本领域技术人员已掌握可用于本发明蛋白质编码核酸表达的多个表达系统。因此不再试图详述用于在原核生物或真核生物中表达蛋白质的各种已知方法。
简而言之，编码本发明蛋白质的分离核酸的表达通常可通过将例如DNA或cDNA与启动子(它是组成型或是诱导型的)有效连接，随后掺入表达载体中来实现。载体可适于在原核生物或真核生物中复制并整合。表达载体通常含有转录和翻译终止子、起始序列和用于调节编码本发明蛋白质的DNA表达的启动子。为了获得高水平表达的克隆基因，需要构建表达载体至少含有指导转录的强启动子(例如泛素启动子)、用于翻译起始的核糖体结合位点和转录/翻译终止子。可将组成型启动子归类以提供各种组成型表达。因此，有些是弱组成型启动子，有些是强组成型启动子。所谓“弱启动子”一般是指驱动编码序列按低水平表达的启动子。所谓“低水平”是指约1/10,000转录物至约1/100,000转录物至约1/500,000转录物的水平。相反地，“强启动子”驱动编码序列按“高水平”或约1/10转录物至约1/100转录物至约1/1,000转录物进行表达。
技术人员应当了解的是，可对本发明的蛋白质进行修饰但不降低它的生物活性。可以进行某些修饰以促进克隆、表达或寻靶分子掺入融合蛋白。这类修饰为本领域技术人员所熟知，包括例如将甲硫氨酸添加到N端以提供起始位点，或者将额外的氨基酸(例如poly His)置于任一端以形成方便定位的限制位点或终止密码子或纯化序列。
原核生物中的表达
原核细胞可用作表达宿主。原核生物最常用的代表是不同的大肠杆菌菌株；然而，也可使用其它的微生物菌株。本文定义的包括用于转录起始的启动子、任选的操纵基因、以及核糖体结合位点序列一起的常用的原核控制序列，包括诸如以下常用的启动子：β内酰胺酶(青霉素酶)和乳糖(lac)启动子系统(Chang等(1977)Nature 198：1056)、色氨酸(trp)启动子系统(Goeddel等(1980)Nucleic Acids Res.8：4057)和λ衍生PL启动子和N-基因核糖体结合位点(Shimatake等(1981)Nature 292：128)。在已转进大肠杆菌内的DNA载体中包含选择标记也是有用的。这类标记的实例包括赋予氨苄西林、四环素或氯霉素抗性的基因。
选择载体以使目标基因能够导入合适的宿主细胞。细菌载体通常是质粒或噬菌体源的。合适的细菌细胞用噬菌体载体颗粒感染，或者用裸露的噬菌体载体DNA转染。如果使用质粒载体，则细菌细胞用质粒载体DNA转染。用芽孢杆菌(Bacillus sp.)和沙门氏菌(Salmonella)可获得用于表达本发明蛋白质的表达系统(Palva等(1983)Gene 22：229-35；Mosbach等(1983)Nature 302：543-5)。得自Pharmacia的pGEX-4T-1质粒载体是本发明优选的大肠杆菌表达载体。
真核生物中的表达
多种真核表达系统例如酵母、昆虫细胞系、植物和哺乳动物细胞为本领域技术人员所知。正如下面简要说明的一样，本发明可在这些真核系统中进行表达。在一些实施方案中，使用如下文中论述的转化/转染的植物细胞，作为生产本发明蛋白质的表达系统。
酵母中异源蛋白质的合成是众所周知的。Sherman等(1982)Methodsin Yeast Genetics(Cold Spring Harbor Laboratory)是公认的巨著，它描述了可在酵母中生产蛋白质的各种方法。用于生产真核蛋白质的两种普遍使用的酵母是酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)。用于在酿酒酵母和毕赤酵母中表达的载体、菌株和方案是本领域已知的，可由供应商(例如Invitrogen)提供。合适的载体通常根据需要具有表达控制序列(例如启动子包括3-磷酸甘油酸激酶或醇氧化酶启动子和复制起点)和终止序列等。
本发明的蛋白质一经表达，便可通过使细胞裂解并将标准蛋白质分离技术用于裂解物或沉淀，从而从酵母中分离出来。可通过应用蛋白质印迹技术或放射免疫测定法或其它标准免疫测定法技术，实现对纯化过程的监测。
本发明蛋白质的编码序列还可与用于转染例如哺乳动物、昆虫或植物源的细胞培养物的各种表达载体连接。哺乳动物细胞系统常常是单层细胞的形式，尽管也可使用哺乳动物细胞悬液。本领域已开发出能够表达完整蛋白质的许多合适的宿主细胞系，包括HEK293、BHK21和CHO细胞系。用于这些细胞的表达载体可包括表达控制序列，例如复制起点、启动子(例如CMV启动子、HSV tk启动子或pgk(磷酸甘油酸激酶)启动子)、增强子(Queen等(1986)Immunol.Rev.89：49)和必需的加工信息位点(例如核糖体结合位点、RNA剪接位点、聚腺苷酸化位点(例如SV40大TAg加poly A位点))和转录终止子序列。可从例如美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)细胞系和杂交瘤目录(第7版，1992)获得用于生产本发明蛋白质的其它动物细胞。
用于在昆虫细胞中表达本发明蛋白质的合适载体一般得自SF9杆状病毒。合适的昆虫细胞系包括蚊幼虫、蚕、粘虫、蛾和果蝇(Drosophila)细胞系，例如Schneider细胞系(参见例如Schneider，(1987)J.Embryol.Exp.Morphol.27：353-65)。
如使用酵母的情况一样，当使用高等动物或植物宿主细胞时，聚腺苷酸化序列或转录终止子序列通常被掺入载体中。终止子序列的一个实例是得自牛生长激素基因的聚腺苷酸化序列。还包括用于精确剪接转录物的序列。剪接序列的一个实例是得自SV40的VP1内含子(Sprague等(1983)J.Virol.45：773-81)。另外，可将在宿主细胞中控制复制的基因序列掺到载体中，例如存在于牛乳头瘤型载体的载体(Saveria-Campo，“Bovine Papilloma Virus DNA a Eukaryotic Cloning Vector(一种真核克隆载体牛乳头瘤DNA)”，DNA Cloning：A Practical Approach，第II卷，Glover主编，IRL Press，Arlington，VA，第213-38页(1985))。
另外，置于合适植物表达载体上的ERECTA基因可用来转化植物细胞。然后从植物愈伤组织分离出多肽，或者转化细胞可用来再生出转基因植物。可收获这类转基因植物，并可对合适的组织(例如种子或叶)进行大规模的蛋白质提取和纯化。
植物转化方法
将外源基因导入植物的多种方法是已知的，可用来将ERECTA多核苷酸插入植物宿主中，包括生物和物理的植物转化方案。参见例如Miki等，“Procedure for Introducing Foreign DNA into Plants(外源DNA导入植物的方法)”，Plant Molecular Biology and Biotechnology，Glick和Thompson主编，CRC Press，Inc.，Boca Raton，第67-88页(1993)。所选择的方法因宿主植物而异，包括化学转染方法(例如磷酸钙法)、微生物介导的基因转移(例如土壤杆菌)(Horsch等(1985)Science 227：1229-31)、电穿孔、显微注射和生物射弹轰击。
用于植物细胞或组织转化和植物再生的表达盒和载体以及体外培养方法是已知并可获得的。参见例如Gurber等，“Vectors for PlantTransformation(植物转化的载体)”，载于Plant Molecular Biology andBiotechnology，出处同上，第89-119页。
可以通过通常用于直接递送给细胞的一种或多种技术，将分离多核苷酸或分离多肽导入植物中。这类方案可随基因修饰所靶定的生物、细胞、植物或植物细胞的类型(即单子叶植物或双子叶植物)而变化。转化植物细胞合适的方法包括显微注射(Crossway等(1986)Biotechniques4：320-334和美国专利第6,300,543号)、电穿孔(Riggs等(1986)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 83：5602-5606)、直接基因转移(Paszkowski等(1984)EMBOJ.3：2717-2722)和射弹粒子加速法(ballistic particle acceleration)(参见例如Sanford等，美国专利第4,945,050号；WO 91/10725；以及McCabe等(1988)Biotechnology 6：923-926)。另参见Tomes等，Direct DNA Transfer intoIntact Plant Cells Via Microprojectile Bombardment(通过微粒轰击使DNA直接转移到完整植物细胞中)，第197-213页，载于Plant Cell，Tissue andOrgan Culture，Fundamental Methods，O.L.Gamborg和G.C.Phillips主编，Springer-Verlag Berlin Heidelberg New York，1995；美国专利第5,736,369号(分生组织)；Weissinger等(1988)Ann.Rev.Genet.22：421-477；Sanford等(1987)Particulate Science and Technology 5：27-37(洋葱)；Christou等(1988)Plant Physiol.87：671-674(大豆)；Datta等(1990)Biotechnology 8：736-740(水稻)；Klein等(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA85：4305-4309(玉米)；Klein等(1988)Biotechnology 6：559-563(玉米)；WO91/10725(玉米)；Klein等(1988)Plant Physiol.91：440-444(玉米)；Fromm等(1990)Biotechnology 8：833-839；以及Gordon-Kamm等(1990)Plant Cell2：603-618(玉米)；Hooydaas-Van Slogteren & Hooykaas(1984)Nature(London)311：763-764；Bytebier等(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.USA84：5345-5349(百合科(Liliaceae))；De Wet等(1985)，载于The ExperimentalManipulation of Ovule Tissues，G.P.Chapman等，第197-209页，Longman，NY(花粉)；Kaeppler等(1990)Plant Cell Reports 9：415-418；以及Kaeppler等(1992)Theor.Appl.Genet.84：560-566(颈须介导的转化)；美国专利第5,693,512号(超声处理)；D’Halluin等(1992)Plant Cell 4：1495-1505(电穿孔)；Li等(1993)Plant Cell Reports 12：250-255；以及Christou和Ford(1995)Annals of Botany 75：407-413(水稻)；Osjoda等(1996)Nature Biotech.14：745-750；土壤杆菌介导的玉米转化(美国专利第5,981,840号)；碳化硅晶须(silicon carbide whisker)方法(Frame等(1994)Plant J.6：941-948)；激光方法(Guo等(1995)Physiologia Plantarum 93：19-24)；超声处理方法(Bao等(1997)Ultrasound in Medicine&Biology 23：953-959；Finer和Finer(2000)Lett Appl Microbiol.30：406-10；Amoah等(2001)J Exp Bot52：1135-42)；聚乙二醇方法(Krens等(1982)Nature 296：72-77)；单子叶植物和双子叶植物细胞的原生质体可用电穿孔(Fromm等(1985)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82：5824-5828)和显微注射(Crossway等(1986)Mol.Gen.Genet.202：179-185进行转化；所述所有文献均通过引用结合到本文中。
土壤杆菌介导的转化
将表达载体导入植物的最普遍使用的方法以土壤杆菌的天然转化系统为基础。根癌土壤杆菌和发根土壤杆菌(A.rhizogenes)是植物致病性土壤细菌，它从遗传上转化植物细胞。根癌土壤杆菌的Ti质粒和发根土壤杆菌的Ri质粒分别携带负责遗传转化植物的基因。参见例如Kado，(1991)Crit.Rev.Plant Sci.10：1。有关用于土壤杆菌介导的基因转移的土壤杆菌载体系统和方法的描述参见Gruber等(出处同上)、Miki等(出处同上)和Moloney等(1989)Plant Cell Reports 8：238。
同样，可将基因插入分别得自根癌土壤杆菌的Ti质粒或发根土壤杆菌Ri质粒的T-DNA区内。因此，可以用这些质粒根据以上所述来构建表达盒。多种控制序列是已知的，当其与异源编码序列偶联并转化到宿主生物内时，相对于原始编码序列的组织/器官特异性，在基因表达时具有保真度。参见例如Benfey和Chua，(1989)Science 244：174-81。用于这些质粒的特别合适的控制序列是用于在各种靶植物中的基因组成型叶特异性表达的启动子。其它有用的控制序列包括得自胭脂碱合酶基因(NOS)的启动子和终止子。NOS启动子和终止子存在于质粒pARC2中，可获自美国典型培养物保藏中心，并被命名为ATCC 67238。如果使用这类系统，则还需存在来自Ti或Ri质粒的毒力(vir)基因，所述毒力基因或者连同T-DNA部分一起存在，或者借助其中vir基因存在于单独载体上的二元系统。这类系统、用于其中的载体，以及转化植物细胞的方法参见美国专利第4,658,082号；1986年10月1日提交的美国专利申请号913,914，正如1993年11月16日授予的美国专利第5,262,306号中所引用的一样；以及Simpson等(1986)Plant Mol.Biol.6：403-15(同样在‘306专利中引用)；所述所有文献均通过引用全部结合到本文中。
这些质粒一经构建，便可置于发根土壤杆菌或根癌土壤杆菌以及用于转化植物品种的细胞的载体中，所述植物品种通常易受镰孢(Fusarium)或链格孢(Alternaria)感染。本发明还包括若干其它的转基因植物，包括但不限于大豆、玉米、高粱、苜蓿、水稻、三叶草、甘蓝、香蕉、咖啡树、芹菜、烟草、豇豆、棉花、甜瓜和辣椒。根癌土壤杆菌或发根土壤杆菌任一种的选择将取决于其转化的植物。根癌土壤杆菌一般是用于转化的优选生物。大多数双子叶植物、一些裸子植物和少数单子叶植物(例如某些百合目(Liliales)和天南星目(Atales)的某些成员)易受根癌土壤杆菌感染。发根土壤杆菌的宿主范围也十分广，包括大多数双子叶植物和一些裸子植物，它们包括豆科(Leguminosae)、菊科(Compositae)和藜科(Chenopodiaceae)成员。目前单子叶植物的转化也取得了一定成效。欧洲专利申请号604662A1公开了利用土壤杆菌转化单子叶植物的方法。欧洲专利申请号672752A1公开了使用未成熟胚盾盖用土壤杆菌转化单子叶植物的方法。Ishida等人对通过将未成熟胚暴露于根癌土壤杆菌以转化玉米的方法进行了论述(Nature Biotechnology 14：745-50(1996))。
这些细胞一经转化，则可用来再生转基因植物。例如可通过割伤植物然后将载体引入伤口部位，从而用这些载体感染整株植物。可以割伤植物的任何组成部分，包括叶、茎和根。或者，可将这些载体接种到外植体形式的植物组织中，例如子叶组织或叶盘，并在促进植物再生的条件下进行培养。用发根土壤杆菌或根癌土壤杆菌接种植物组织转化得到的根或茎干(含有串珠镰孢黄菌素降解酶编码基因)，可用作植物组织源，通过体细胞胚胎发生或器官发生，再生出串珠镰孢黄菌素抗性转基因植物。再生植物组织的这类方法的实例公开于Shahin，(1985)Theor.Appl.Genet.69：235-40；美国专利第4,658,082号；Simpson等(出处同上)；以及1986年10月1日同时提交的美国专利申请号913,913和913,914，如在1993年11月16日授予的美国专利第5,262,306号中引用一样，该处的全部公开内容通过引用结合到本文中。
直接基因转移
尽管土壤杆菌介导的转化的宿主范围较广，但是一些主要谷类农作物品种和裸子植物通常抗拒这种模式的基因转移，即使最近在水稻中取得一定成果(Hiei等(1994)Plant Journal6：271-82)。已经开发出替代土壤杆菌介导的转化的若干种植物转化方法，统称为直接基因转移。
普遍适用的植物转化方法是微弹介导的转化，其中尺寸约为1-4μm的微弹表面上携带DNA。用将微弹加速至300-600m/秒速度的生物射弹装置，将表达载体导入植物组织中，该速度足以穿透植物细胞壁和细胞膜(Sanford等(1987)Part.Sci.Technol.5：27；Sanford，(1988)TrendsBiotech 6：299；Sanford，(1990)Physiol.Plant 79：206；以及Klein等(1992)Biotechnology 10：268)。
将DNA物理性传递到植物中的另一种方法是对靶细胞进行超声处理，参见Zang等(1991)BioTechnology 9：996。或者，使用脂质体或原生质球融合将表达载体导入植物中。参见例如Deshayes等(1985)EMBO J.4：2731；以及Christou等(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84：3962。有研究报道了采用CaCl2沉淀、聚乙烯醇或聚-L-鸟氨酸使DNA直接被摄取进入原生质体。参见例如Hain等(1985)Mol.Gen.Genet.199：161；以及Draper等(1982)Plant Cell Physiol.23：451。
还有研究披露了原生质体和整个细胞和组织的电穿孔。参见例如Donn等，载于Abstracts of the VIIth Int’l.Congress on Plant Cell and TissueCulture IAPTC(IAPTC第七届国际植物细胞和组织培养会议文摘)，A2-38，第53页(1990)；D’Halluin等(1992)Plant Cell 4：1495-505；以及Spencer等(1994)Plant Mol.Biol.24：51-61。
提高ERECTA多肽的活性和/或水平
本发明提供提高本发明ERECTA多肽的活性和/或水平的方法。可通过向植物提供ERECTA多肽来实现本发明ERECTA多肽的水平和/或活性的提高。可通过将编码ERECTA多肽的氨基酸序列导入植物、将编码ERECTA多肽的核苷酸序列导入植物或者通过对编码本发明ERECTA多肽的基因组基因座进行修饰，来提供ERECTA多肽。
如本文其它部分所述，本领域已知向植物提供多肽的多种方法，包括但不限于将多肽直接导入植物、将编码具有植物生长调节活性的多肽的多核苷酸构建体(瞬时或稳定地)导入植物。还要了解的是，本发明的方法可采用无法在转化植物中指导蛋白质或RNA表达的多核苷酸。因此，可通过改变编码ERECTA多肽的基因或其启动子来提高ERECTA多肽的水平和/或活性。参见例如Kmiec，美国专利第5,565,350号；Zarling等，PCT/US93/03868。因此，本发明提供携带ERECTA基因突变的经诱变的植物，其中所述突变增加ERECTA基因的表达或提高已编码的ERECTA多肽的植物生长和/或器官发育的活性。
降低ERECTA多肽的活性和/或水平
本发明提供了通过用表达抑制ERECTA多肽表达的多核苷酸的表达盒转化植物细胞，来降低或消除本发明ERECTA多肽活性的方法。所述多核苷酸可通过防止ERECTA信使RNA翻译，直接抑制ERECTA多肽的表达；或者通过编码抑制编码ERECTA多肽的ERECTA基因转录或翻译的多肽，间接抑制ERECTA多肽表达。用于在植物中抑制或消除基因在植物中表达的方法是本领域众所周知的，而且任何的这类方法都可用于本发明以抑制ERECTA多肽的表达。
根据本发明，以下情况说明ERECTA多肽的表达受到抑制：ERECTA多肽的蛋白质水平低于未经遗传修饰或诱变以抑制同一ERECTA表达的植物中该ERECTA多肽的蛋白质水平的70％。在本发明的具体实施方案中，在本发明的改性植物中，ERECTA多肽的蛋白质水平低于不是突变型或未经遗传修饰以抑制ERECTA多肽表达的植物中的同一ERECTA多肽蛋白质水平的60％、低于50％、低于40％、低于30％、低于20％、低于10％、低于5％或低于2％。可以通过例如测定ERECTA多肽在植物细胞或植物中的表达水平，来直接测定ERECTA多肽的表达水平；或者可以通过例如测定ERECTA多肽在植物细胞或植物中的植物生长和/或器官发育活性，或测定植物的生物量，来间接测定ERECTA多肽的表达水平。用于进行这类测定的方法见本文其它部分的描述。
在本发明的其它实施方案中，通过用包含编码抑制ERECTA多肽活性的多肽的多核苷酸的表达盒转化植物细胞，降低或消除ERECTA多肽的活性。根据本发明，以下情况说明ERECTA多肽的植物生长和/或器官发育活性受到抑制：ERECTA多肽的植物生长和/或器官发育活性小于未经改性以抑制该ERECTA多肽的植物生长和/或器官发育活性的植物的同一ERECTA多肽的植物生长和/或器官发育活性的70％。在本发明的具体实施方案中，本发明改性植物的ERECTA多肽的植物生长和/或器官发育活性小于未经改性以抑制ERECTA多肽表达的植物的同一ERECTA多肽的植物生长和/或器官发育活性的60％、小于50％、小于40％、小于30％、小于20％、小于10％或小于5％。当使用本文其它部分所述测定方法未检出ERECTA多肽的植物生长和/或器官发育活性时，则表示本发明ERECTA多肽的植物生长和/或器官发育活性被“消除”。ERECTA多肽的植物生长和/或器官发育活性的测定方法见本文其它部分的描述。
在其它实施方案中，可通过破坏ERECTA多肽的编码基因，来降低或消除ERECTA多肽的活性。本发明包括在ERECTA基因中携带突变的诱变植物，其中突变降低ERECTA基因的表达或者抑制编码的ERECTA多肽的植物生长和/或器官发育活性。
因此，可以采用多种方法以降低或消除ERECTA多肽的活性。另外，可使用不止一种方法来降低单一ERECTA多肽的活性。下文中给出了降低或消除ERECTA多肽表达的方法的非限制性实例。
1.基于多核苷酸的方法：
在本发明的一些实施方案中，用能够表达抑制本发明ERECTA多肽表达的多核苷酸的表达盒来转化植物。本文所用术语“表达”是指基因产物的生物合成，包括所述基因产物的转录和/或翻译。例如，对于本发明的目的，能够表达抑制至少一种ERECTA多肽表达的多核苷酸的表达盒是能够产生抑制至少一种本发明ERECTA多肽转录和/或翻译的RNA分子的表达盒。由DNA分子“表达”或“产生”蛋白质或多肽是指产生蛋白质或多肽的编码序列进行转录和翻译，而由RNA分子“表达”或“产生”蛋白质或多肽则是指产生蛋白质或多肽的RNA编码序列进行翻译。
抑制ERECTA多肽表达的多核苷酸的实例见下文。
i.有义抑制/共抑制
在本发明的一些实施方案中，可通过有义抑制(sense suppression)或共抑制(cosuppression)来达到ERECTA多肽表达的抑制。对于共抑制，表达盒被设计成表达RNA分子，该RNA分子对当于按“有义”方向编码ERECTA多肽的信使RNA的全部或部分。该RNA分子的过量表达可导致天然基因表达的降低。因此，对用共抑制表达盒转化的得到多个植物系进行筛选，以鉴定ERECTA多肽表达受最大抑制的植物系。
用于共抑制的多核苷酸可相当于ERECTA多肽编码序列的全部或部分、ERECTA多肽转录物5′和/或3′非翻译区的全部或部分、或者编码ERECTA多肽的转录物的编码序列以及非翻译区两者的全部或部分。在其中多核苷酸包含ERECTA多肽编码区全部或部分的一些实施方案中，表达盒被设计来消除多核苷酸的起始密码子，从而不翻译任何蛋白质产物。
可利用共抑制来抑制植物基因的表达，从而产生这样植物，其中测不出由这些基因编码的蛋白质的蛋白质水平。参见例如Broin等(2002)Plant Cell 14：1417-1432。还可利用共抑制来抑制同一植物中多种蛋白质的表达。参见例如美国专利第5,942,657号。利用共抑制来抑制植物内源基因表达的方法参见Flavell等(1994)Proc.Natl.Acad.Sci.USA91：3490-3496；Jorgensen等(1996)Plant Mol.Biol.31：957-973；Johansen和Carrington(2001)Plant Physiol.126：930-938；Broin等(2002)Plant Cell14：1417-1432；Stoutjesdijk等(2002)Plant Physiol.129：1723-1731；Yu等(2003)Phytochemistry 63：753-763；以及美国专利号5,034,323、5,283,184和5,942,657；所述每个文献均通过引用结合到本文中。通过在表达盒有义序列的3′端位置包括poly-dT区以及5′包括聚腺苷酸化信号，来提高共抑制的效率。参见美国专利公布号20020048814，该专利通过引用结合到本文中。这类核苷酸序列通常与内源基因转录物的序列具有基本序列同一性，宜大于约65％序列同一性，更宜大于约85％序列同一性，最宜大于约95％序列同一性。参见美国专利号5,283,184和5,034,323；所述专利通过引用结合到本文中。
ii.反义抑制
在本发明的一些实施方案中，可以通过反义抑制实现对ERECTA多肽表达的抑制。对于反义抑制，表达盒被设计来表达与编码ERECTA多肽的信使RNA的全部或部分互补的RNA分子。反义RNA分子的过量表达可导致天然基因的表达降低。因此，对用反义抑制表达盒转化得到的多个植物系进行筛选，以鉴定ERECTA多肽表达受最大抑制的植物系。
用于反义抑制的多核苷酸可相当于ERECTA多肽编码序列的互补序列的全部或部分、ERECTA转录物5′和/或3′非翻译区的互补序列的全部或部分或者编码ERECTA多肽的转录物的编码序列和非翻译区两者的互补序列的全部或部分。另外，反义多核苷酸可与靶序列完全互补(即与靶序列的互补序列同一性为100％)或部分互补(即与靶序列的互补序列的同一性小于100％)。反义抑制可用来抑制同一植物多种蛋白质的表达。参见例如美国专利第5,942,657号。此外，部分反义核苷酸可用来破坏靶基因的表达。一般可采用至少50个核苷酸、100个核苷酸、200个核苷酸、300、400、450、500、550个以上核苷酸的序列。用反义抑制以抑制植物内源基因表达的方法参见例如Liu等(2002)Plant Physiol.129：1732-1743和美国专利号5,759,829和5,942,657，所述文献均通过引用结合到本文中。可通过在表达盒反义序列3′端位置包括poly-dT区以及包括5′聚腺苷酸化信号，来提高反义抑制的效率。参见美国专利公布号20020048814，该专利通过引用结合到本文中。
iii.双链RNA干扰
在本发明的一些实施方案中，可以通过双链RNA(dsRNA)干扰实现对ERECTA多肽表达的抑制。对于dsRNA干扰，在同一细胞中表达如上文所述用于共抑制的有义RNA分子以及与有义RNA分子完全或部分互补的反义RNA分子，导致对相应内源信使RNA表达的抑制。
通过设计同时包含有义序列和反义序列的表达盒，可实现有义和反义分子的表达。或者，可以使用有义序列和反义序列分开的表达盒。用dsRNA干扰表达盒转化多个植物系，或者之后对表达盒进行筛选，以鉴定ERECTA多肽表达受最大抑制的植物系。用dsRNA干扰以抑制内源植物基因表达的方法参见Waterhouse等(1998)Proc.Natl.Acad.Sci.USA95：13959-13964；Liu等(2002)Plant Physiol.129：1732-1743；以及WO99/49029、WO 99/53050、WO 99/61631和WO 00/49035；所述每个文献均通过引用结合到本文中。
iv.发夹RNA干扰和含有内含子的发夹RNA干扰
在本发明的一些实施方案中，可以通过发夹RNA(hpRNA)干扰或含有内含子的发夹RNA(ihpRNA)干扰，来获得对ERECTA多肽之一的表达的抑制。这些方法在抑制内源基因表达中非常有效。参见Waterhouse和Helliwell(2003)Nat.Rev.Genet.4：29-38及其中引用的参考文献。
对于hpRNA干扰，表达盒被设计成表达与自身杂交形成发夹结构的RNA分子，所述发夹结构包含单链环区和碱基配对茎。碱基配对茎区包含相当于编码其表达将被抑制的基因的内源信使RNA全部或部分的有义序列，以及与该有义序列完全或部分互补的反义序列。因此，该分子的碱基配对茎区一般决定RNA干扰的特异性。hpRNA分子在抑制内源基因表达时十分有效，它们诱导的RNA干扰被遗传给植物后代。参见例如Chuang和Meyerowitz(2000)Proc.Natl.Acad.Sci.USA97：4985-4990；Stoutjesdijk等(2002)Plant Physiol.129：1723-1731；以及Waterhouse和Helliwell(2003)Nat.Rev.Genet.4：29-38。用hpRNA干扰抑制基因表达或使基因表达沉默的方法参见例如Chuang和Meyerowitz(2000)Proc.Natl. Acad.Sci.USA 97：4985-4990；Stoutjesdijk等(2002)PlantPhysiol.129：1723-1731；Waterhouse和Helliwell(2003)Nat.Rev.Genet.4：29-38；Pandolfini等，BMC Biotechnology 3：7；以及美国专利公布号20030175965；所述每个文献均通过引用结合到本文中。hpRNA构建体体内使基因表达沉默的效率的瞬时测定法参见Panstruga等(2003)Mol.Biol.Rep.30：135-140，该文献通过引用结合到本文中。
对于ihpRNA，该干扰分子具有与hpRNA相同的通用结构，但是该RNA分子另包含在ibpRNA进行表达的细胞中能够被剪接的内含子。内含子的使用使发夹RNA分子环的大小在剪接后减到最小，这就提高了干扰的效率。参见例如Smith等(2000)Nature 407：319-320。实际上，Smith等人指出，用ihpRNA介导的干扰100％抑制内源基因的表达。用ihpRNA干扰以抑制内源植物基因表达的方法参见例如Smith等(2000)Nature407：319-320；Wesley等(2001)Plant J.27：581-590；Wang和Waterhouse(2001)Curr.Opin.Plant Biol.5：146-150；Waterhouse和Helliwell(2003)Nat.Rev.Genet.4：29-38；Helliwell和Waterhouse(2003)Methods30：289-295以及美国专利公布号20030180945，所述每个文献均通过引用结合到本文中。
还可设计这样的hpRNA干扰表达盒，使得有义序列和反义序列不与内源RNA相对应。在本实施方案中，有义序列和反义序列在包含与靶基因内源信使RNA全部或部分相应的核苷酸序列的环序列的两侧。因此，正是该环区决定了RNA干扰的特异性。参见例如WO 02/00904，该专利通过引用结合到本文中。
v.扩增子介导的干扰
扩增子表达盒包含植物病毒衍生的序列，该序列含有靶基因的全部或部分，但是一般不含天然病毒基因的全部。表达盒转录产物中存在的病毒序列使转录产物能够指导自我复制。由扩增子产生的转录物相对于靶序列(即ERECTA多肽的信使RNA)可以是有义或反义的。用扩增子抑制内源植物基因表达的方法参见例如Angell和Baulcombe(1997)EMBOJ.16：3675-3684；Angell和Baulcombe(1999)Plant J.20：357-362；以及美国专利第6,646,805号，所述每个文献均通过引用结合到本文中。
vi.核酶
在一些实施方案中，通过本发明表达盒表达的多核苷酸是催化性RNA或具有对ERECTA多肽信使RNA有特异性的核酶活性。因此，该多核苷酸引起内源信使RNA降解，导致ERECTA多肽表达降低。该方法参见例如美国专利第4,987,071号，该专利通过引用结合到本文中。
vii.小干扰RNA或微小RNA
在本发明的一些实施方案中，可以经微小RNA(miRNA)编码基因的表达通过RNA干扰来实现对ERECTA多肽表达的抑制。miRNA是由约22个核糖核苷酸组成的调节剂。miRNA在抑制内源基因表达中非常有效。参见例如Javier等(2003)Nature 425：257-263，该文献通过引用结合到本文中。
对于miRNA干扰，表达盒被设计成表达模仿内源miRNA基因的RNA分子。所述miRNA基因编码形成发夹结构的RNA，所述发夹结构含有与另一内源基因(靶序列)互补的22个核苷酸的序列。对于抑制ERECTA表达，22个核苷酸的序列选自ERECTA转录物序列，并含有所述ERECTA序列按有义方向的22个核苷酸以及对应于与有义序列互补的反义序列的21个核苷酸。miRNA分子在抑制内源基因表达中非常有效，且它们诱导的RNA干扰被遗传给植物后代。
2.基于多肽的基因表达的抑制
在一个实施方案中，多核苷酸编码与ERECTA多肽编码基因结合的锌指蛋白，导致基因表达降低。在具体实施方案中，锌指蛋白与ERECTA基因的调节区结合。在其它实施方案中，锌指蛋白与编码ERECTA多肽的信使RNA结合并阻止其进行翻译。选择被锌指蛋白靶向的位点的方法参见例如美国专利第6,453,242号，利用锌指蛋白抑制植物中基因表达的方法参见例如美国专利公布号20030037355；所述每个专利均通过引用结合到本文中。
3.基于多肽的蛋白质活性的抑制
在本发明的一些实施方案中，多核苷酸编码与至少一种ERECTA多肽结合的抗体，并降低ERECTA多肽的植物生长调节活性。在另一个实施方案中，抗体的结合通过细胞质量控制机制使抗体-ERECTA复合体的更新加快。植物细胞中抗体的表达，以及植物细胞中通过抗体表达及抗体与蛋白质的结合来进行的抑制分子途径是本领域众所周知的。参见例如Conrad和Sonnewald(2003)Nature Biotech.21：35-36，该文献通过引用结合到本文中。
4.基因破坏
在本发明的一些实施方案中，通过破坏编码ERECTA多肽的基因来降低或消除ERECTA多肽的活性。可以通过本领域已知方法破坏编码ERECTA多肽的基因。例如，在一个实施方案中，基因被转座子标记破坏。在另一个实施方案中，采用随机诱变或定向诱变对植物进行诱变来破坏基因，并选出植物生长调节活性降低的植物。
i.转座子标记
在本发明的一个实施方案中，转座子标记用来降低或消除一种或多种ERECTA多肽的ERECTA活性。转座子标记包括将转座子插入内源ERECTA基因中以降低或消除ERECTA多肽的表达。“ERECTA基因”是指编码本发明ERECTA多肽的基因。
在本实施方案中，通过将转座子插入ERECTA多肽编码基因的调节区或编码区来降低或消除一种或多种ERECTA多肽的表达。可以使用在外显子、内含子、5′或3′非翻译序列、启动子或ERECTA基因的任何其它调节序列内的转座子来降低或消除编码ERECTA多肽的表达和/或活性。
植物中用于特定基因转座子标记的方法是本领域众所周知的。参见例如Maes等(1999)Trends Plant Sci.4：90-96；Dharmapuri和Sonti(1999)FEMS Microbiol.Lett.179：53-59；Meissner等(2000)Plant J.22：265-274；Phogat等(2000)J.Biosci.25：57-63；Walbot(2000)Curr.Opin.Plant Biol.2：103-107；Gai等(2000)Nucleic Acids Res.28：94-96；Fitzmaurice等(1999)Genetics 153：1919-1928)。另外，在选定基因中选出μ插入的TUSC法参见Bensen等(1995)Plant Cell 7：75-84；Mena等(1996)Science274：1537-1540；以及美国专利第5,962,764号；所述每个文献均通过引用结合到本文中。
ii.活性降低的突变型植物
用于在植物中降低或消除内源基因表达的其它方法也是本领域已知的，同样可适用于本发明。这些方法包括其它诱变形式，例如甲磺酸乙酯诱导的诱变、缺失诱变和用于在(用PCR)反向遗传学有义(reversegenetics sense)的快速中子缺失诱变(fast neutron deletion mutagenesis)，以鉴定其中内源基因已缺失的植物系。这些方法的实例参见Ohshima等(1998)Virology 243：472-481；Okubara等(1994)Genetics 137：867-874；以及Quesada等(2000)Genetics 154：421-436；所述每个文献均通过引用结合到本文中。另外，用于筛选化学诱导突变的自动化快速方法TILLING(定向诱导基因组局部突变法(Targeting Induced Local Lesions InGenomes))，利用变性HPLC或选择性内切核酸酶消化选出的PCR产物，同样适用于本发明。参见McCallum等(2000)Nat.Biotechnol.18：455-457，该文献通过引用结合到本文中。
影响基因表达或者干扰编码蛋白质的功能(植物生长调节活性)的突变是本领域众所周知的。在基因外显子中的插入突变常常导致无效突变体。保守残基的突变在抑制编码蛋白质的植物生长调节活性时特别有效。有研究指出适于诱变以达消除植物生长调节活性目的的植物ERECTA多肽的保守残基。这类突变型可按照众所周知的方法分离出来，而且不同ERECTA基因座中的突变可以通过遗传杂交堆积。参见例如Gruis等(2002)Plant Cell 14：2863-2882。
在本发明的另一个实施方案中，显性突变型可用来引发由复制基因座的基因倒置和重组基因所致的RNA沉默。参见例如Kusaba等(2003)Plant Cell 15：1455-1467。
本发明包括用于降低或消除一种或多种ERECTA多肽活性的其它方法。用于使植物基因组核苷酸序列改变或突变的其它方法的实例是本领域已知的，包括但不限于使用RNA:DNA载体、RNA:DNA突变载体、RNA:DNA修复载体、混合双链体寡核苷酸(mixed-duplexoligonucleotide)、自身互补的RNA:DNA寡核苷酸(self-complementaryRNA:DNA oligonucleotide)和诱重组的寡核苷酸碱基(recombinogenicoligonucleobase)。这类载体和使用方法是本领域已知的。参见例如美国专利号5,565,350、5,731,181、5,756,325、5,760,012、5,795,972和5,871,984；所述每个专利均通过引用结合到本文中。另参见WO 98/49350、WO99/07865、WO 99/25821和Beetham等(1999)Proc.Natl.Acad.Sci.USA96：8774-8778；所述每个专利均通过引用结合到本文中。
iii.调节植物生长和/或器官发育活性
在具体方法中，植物中特定组织生长的水平和/或活性随植物中ERECTA多肽水平或活性的提高而提高。本文其它部分论述了用于提高植物中ERECTA多肽的水平或活性的方法。简单来说，这类方法包括向植物提供本发明的ERECTA多肽从而提高ERECTA多肽的水平或活性。在其它实施方案中，可按如下方式提供编码ERECTA多肽的ERECTA核苷酸序列：将包含本发明ERECTA核苷酸序列的多核苷酸导入植物，使ERECTA序列进行表达，提高ERECTA多肽的活性，从而增加植物或植物组成部分中的组织细胞数。在其它实施方案中，导入植物的ERECTA核苷酸构建体被稳定掺入植物的基因组。
在其它方法中，通过提高植物中ERECTA多肽的水平和/或活性来增加细胞数和植物组织的生物量。本文其它部分详细公开了这类方法。在这类的一种方法中，ERECTA核苷酸序列被导入植物，且所述ERECTA核苷酸序列的表达降低ERECTA多肽的活性，从而加快植物或植物组成部分的植物生长和/或器官发育。在其它实施方案中，导入植物的ERECTA核苷酸构建体被稳定掺入植物的基因组。
如上所述，技术人员应当了解用于调节植物中植物生长和/或器官发育多核苷酸和多肽的水平/活性的合适的启动子。本文其它部分公开了该实施方案的示例性启动子。
因此，本发明还提供当与对照植物组织的植物生长和/或器官发育相比时，植物生长和/或器官发育得到改进的植物。在一个实施方案中，本发明植物中的本发明ERECTA多肽的水平/活性提高，从而植物组织中植物生长和/或器官发育加快。在其它实施方案中，本发明植物中的本发明ERECTA多肽水平降低或消除，从而植物组织中植物生长和/或器官发育减缓。在其它实施方案中，这类植物具有稳定掺入其基因组的核酸分子，该核酸分子包含与在植物细胞中驱动表达的启动子有效连接的本发明ERECTA核苷酸序列。
iv.调节根发育
本发明提供用于调节植物根发育的方法。所谓“调节根发育”是指当与对照植物相比时，植物根发育中产生的任何变化。这类根发育中的变化包括但不限于初生根生长率、新鲜根重、侧根和不定根形成程度、维管系统、分生组织发育或辐射延伸的变化。
本发明提供用于调节植物根发育的方法。该方法包括调节植物ERECTA多肽的水平和/或活性。在一种方法中，向植物提供本发明的ERECTA序列。在另一种方法中，按如下方式提供ERECTA核苷酸序列：将包含本发明ERECTA核苷酸序列的多核苷酸导入植物，使ERECTA序列进行表达，从而改善根发育。在另外的其它方法中，导入植物的ERECTA核苷酸构建体稳定掺入植物基因组。
在其它方法中，通过改变植物中ERECTA多肽的水平或活性来调节根发育。当与对照植物相比时，ERECTA活性的提高可引起至少一种或多种根发育的下列变化，包括但不限于根分生组织变大、根生长加快、辐射延伸加强、维管系统增加、根分支增加、不定根较多和/或新鲜根重增加。
本文所用“根生长”包括在单子叶植物和双子叶植物根系发育不同阶段构成根系不同部分的生长的所有方面。要了解的是，根生长的加快可以由根的一个或多个组成部分(包括初生根、侧根、不定根等)的生长加快引起。
测定根系的这类发育变化的方法是本领域已知的。参见例如美国专利申请号20030074698和Werner等(2001)PNAS 18：10487-10492，这两个文献均通过引用结合到本文中。
如上所述，技术人员应当了解用来调节植物根发育的合适的启动子。本实施方案的示例性启动子包括组成型启动子和根优选的启动子(root-preferred promoter)。本文其它部分公开了示例性的根优选的启动子。
通过提高ERECTA多肽的活性和/或水平以刺激根生长和增加根质量还用于改善植物的抗倒伏性(standability)。术语“抗倒伏”或“抗倒伏性”是指植物将自身固定在土壤中的能力。对于具有直立或半直立生长习性的植物，该术语还指不利(环境)条件下保持竖立的能力。该性状与根系的大小、深度和形态有关。另外，通过提高ERECTA多肽的水平和/或活性来刺激根生长和增加根质量还用于体外促进外植体的繁殖。
此外，由ERECTA活性的水平和/或活性提高所致的较高的根生物产量对产量有直接作用，并对由根细胞或转基因根细胞或所述转基因根细胞的细胞培养物产生的化合物产量有间接作用。根培养物中产生有价值的化合物的一个实例是紫草宁，可以通过所述方法有利地提高其产量。
因此，本发明还提供当与对照植物的根发育相比时根发育受到调节的植物。在一些实施方案中，本发明植物中的本发明ERECTA多肽的水平/活性提高，而且根生长增强和/或根生物量增加。在其它实施方案中，这类植物具有稳定掺到其基因组的核酸分子，该核酸分子包含与在植物细胞中驱动表达的启动子有效连接的本发明ERECTA核苷酸序列。
v.调节茎干和叶发育
本发明还提供用于调节植物茎干(shoot)和叶发育的方法。所谓“调节茎干和/或叶发育”是指植物茎干和/或叶发育中的任何变化。茎干和/或叶发育中的这类变化包括但不限于以下变化：茎干分生组织(shoot meristem)发育、叶数、叶大小、叶和茎维管、节间长度和叶衰老。本文所用“叶发育”和“茎干发育”分别包括在单子叶植物和双子叶植物的叶和茎干发育的不同阶段，构成叶系和茎轴系不同组成部分生长的所有方面。用于测定茎轴系和叶系的这类发育变化的方法是本领域已知的。参见例如Werner等(2001)PNAS 98：10487-10492和美国专利申请号20030074698，所述每个文献均通过引用结合到本文中。
用于调节植物茎干和/或叶发育的方法包括调节本发明ERECTA多肽的活性和/或水平。在一个实施方案中，提供本发明的ERECTA序列。在其它实施方案中，可通过以下方式提供ERECTA核苷酸序列：将包含本发明ERECTA核苷酸序列的多核苷酸导入植物，使ERECTA序列进行表达，从而改善茎干和/或叶发育。在其它实施方案中，导入植物的ERECTA核苷酸构建体被稳定掺入植物基因组。
在具体的实施方案中，通过降低植物中ERECTA多肽的水平或活性来调节茎干或叶发育。当与对照植物相比时，ERECTA活性的降低可引起至少一种或多种茎干和/或叶发育的下列变化，包括但不限于叶数减少、叶表面缩小、维管减少、节间变短和生长受阻和叶衰老延迟。
如上所述，技术人员应当了解用于调节植物茎干和叶发育的合适的启动子。本实施方案的示例性启动子包括组成型启动子、茎干优选的启动子、茎干分生组织优选的启动子和叶优选的启动子。本文其它部分公开了示例性的启动子。
降低植物的ERECTA活性和/或水平导致节间变短且生长受阻。因此，本发明的方法可用于产生矮生植物。另外，如上所述，调节植物的ERECTA活性可调节根和茎干的生长。因此，本发明还提供用于改变根冠比的方法。还可通过降低植物的ERECTA多肽的水平和/或活性来调节茎干或叶发育。
因此，本发明还提供当与对照植物相比时茎干和/或叶发育受到调节的植物。在一些实施方案中，本发明植物中的本发明ERECTA多肽的水平/活性提高，茎干和/或叶发育发生改变。这类变化包括但不限于当与对照植物相比时叶数增多、叶表面扩大、维管增加、节间变长和植物高度增高以及叶衰老发生改变。在其它实施方案中，本发明植物中的本发明ERECTA多肽的水平/活性降低。
vi调节生殖组织发育
本发明提供用于调节生殖组织发育的方法。在一个实施方案中，提供调节植物花发育的方法。所谓“调节花发育”是指当与其中ERECTA多肽的活性或水平未受调节的对照植物相比时，植物生殖组织结构的任何变化。“调节花发育”还包括当与其中ERECTA多肽活性或水平未受调节的对照植物相比时，植物生殖组织发育时间上的任何变化(即花发育的时间延迟或加快)。宏观变化可包括以下方面的改变：生殖器官的大小、形状、数量或位置、这些结构形成的发育时期或者在环境胁迫期间维持或继续整个开花过程的能力。微观变化可包括构成生殖器官的细胞类型或形状的改变。
用于调节植物花发育的方法包括调节植物中的ERECTA活性。在一种方法中，提供本发明的ERECTA序列。可按如下方式提供ERECTA核苷酸序列：将包含本发明ERECTA核苷酸序列的多核苷酸导入植物，使ERECTA序列进行表达，从而改善花发育。在其它实施方案中，导入植物的ERECTA核苷酸构建体被稳定掺到植物基因组。
在具体方法中，通过降低植物中ERECTA多肽的水平或活性来调节花发育。ERECTA活性的降低可导致花发育的至少一种或多种下列变化，包括但不限于当与对照植物相比时开花延迟、花的数量减少、部分雄性不育和结籽减少。诱导开花延迟或抑制开花可用来提高饲料作物(例如苜蓿)的产量。用于测定花发育中的这类发育变化的方法是本领域已知的。参见例如Mouradov等(2002)The Plant Cell S111-S130，该文献通过引用结合到本文中。
如上所述，技术人员应当了解用于调节植物花发育的合适的启动子。本实施方案的示例性启动子包括组成型启动子、诱导型启动子、茎干优选的启动子和花序优选的启动子。
在其它方法中，提高本发明ERECTA序列的水平和/或活性来调节花的发育。这类方法可包括将ERECTA核苷酸序列导入植物及提高ERECTA多肽的活性。在其它方法中，导入植物的ERECTA核苷酸构建体被稳定掺到植物基因组。增加本发明ERECTA序列的表达可在胁迫期间调节花的发育。这类方法见本文其它部分。因此，本发明还提供与对照植物的花发育相比，花的发育受到调节的植物。组合物(composition)包括本发明ERECTA多肽的水平/活性提高且花的发育受到调节的植物。组合物还包括本发明ERECTA多肽的水平/活性得到提高的植物，其中植物在胁迫期间维持或继续整个开花过程。
本发明还提供使用本发明的ERECTA序列以增加种子大小和/或种子重量的方法。该方法包括提高植物或植物组成部分(例如种子)中ERECTA序列的活性。种子大小和/或重量的增加包括种子大小或重量的增加和/或一个或多个种子组成部分大小或重量的增加，包括例如胚、胚乳、种皮、糊粉或子叶。
如上所述，技术人员应当了解用来增加种子大小和/或种子重量的合适的启动子。本实施方案的示例性启动子包括组成型启动子、诱导型启动子、种子优选的启动子、胚优选的启动子和胚乳优选的启动子。
用于减小植物种子大小和/或减轻种子重量的方法包括降低植物的ERECTA活性。在一个实施方案中，可按如下方式提供ERECTA核苷酸序列：将包含本发明ERECTA核苷酸序列的多核苷酸导入植物，使ERECTA序列进行表达，从而减轻种子重量和/或减小种子大小。在其它实施方案中，导入植物的ERECTA核苷酸构建体被稳定掺入到植物基因组。
还要了解的是，增加种子大小和/或重量还伴随着幼苗生长速度加快或早期活力增强。本文所用术语“早期活力(early vigor)”是指植物在早期发育期快速生长的能力，并且与萌发之后成功建立起发育完善的根系和发育充分的光合器有关。另外，当与对照相比时，种子大小和/或重量的增加还可导致植物产量提高。
因此，本发明还提供当与对照植物相比时种子重量和/或种子大小增加的植物。在其它实施方案中，还提供活力和植物产量提高的植物。在一些实施方案中，本发明植物中的本发明ERECTA多肽的水平/活性提高，且种子重量和/或种子大小增加。在其它实施方案中，这类植物具有稳定掺入其基因组的核酸分子，该核酸分子包含与在植物细胞中驱动表达的启动子有效连接的本发明ERECTA核苷酸序列。
vii.ERECTA启动子多核苷酸的使用方法
包含本发明所公开的ERECTA启动子及其变体和片段的多核苷酸当与DNA构建体进行装配使得启动子序列与包含目标多核苷酸的核苷酸序列有效连接时，可用于任何宿主细胞、优选植物细胞的遗传操控。按这种方式，在表达盒中提供连同用于在目标宿主细胞中表达的目标多核苷酸序列的本发明ERECT启动子多核苷酸。如下面的实施例2中所论述的一样，本发明的ERECTA启动子序列在多种组织中表达，因此该启动子序列可用于调节目标多核苷酸的时序表达和/或空间表达。
合成杂合启动子区是本领域已知的。这类区域包含与另一种多核苷酸的启动子元件有效连接的一种多核苷酸的上游启动子元件。在本发明的一个实施方案中，异源序列表达受合成杂合启动子的控制，该杂合启动子包含与得自异源启动子的上游启动子元件有效连接的本发明ERECTA启动子序列或其变体或片段。已鉴定出参与植物防御系统的上游启动子元件，并可用来产生合成启动子。参见例如Rushton等(1998)Curr.Opin.Plant Biol.1：311-315。或者，合成ERECTA启动子序列可包含ERECTA启动子序列内存在的上游启动子元件的重复。
要了解的是，本发明的启动子序列可与其天然ERECTA编码序列一起使用。包含与其天然ERECTA基因有效连接的ERECTA启动子的DNA构建体可用来转化任何目标植物以产生所需要的表型变化，例如调节细胞数、调节根、茎干、叶、花和胚发育、胁迫耐受性和本文其它部分所述的其它任何表型。
为了改变植物的表型，本文所公开的启动子核苷酸序列和方法可用来调节宿主植物中任何异源核苷酸序列的表达。各种表型变化是有益的，包括改善植物中的脂肪酸组成、改变植物的氨基酸含量、改变植物的病原体防御机制等。可通过提供表达的异源产物或增加植物中内源产物的表达，来达到这类效果。或者，可通过降低植物一种或多种内源产物(特别是酶或辅因子)的表达，来达到这类效果。这些变化导致转化植物表型发生改变。
目标基因反映出商业市场和参与作物开发的各方的利益。目标作物和目标市场不断改变，而且因为发展中国家向世界开放市场，所以新的作物和技术也将涌现。另外，当我们对农艺性状和特征(例如产量和杂种优势)的了解加深时，对用于转化的基因的选择也会因此发生改变。目标基因的通用种类包括例如参与信息的基因(例如锌指)、参与通讯的基因(例如激酶)和参与持家的基因(例如热激蛋白)。转基因更特别的种类例如包括重要农艺性状、抗虫性、抗病性、除草剂抗性、不育性、谷类特征和商业产物的编码基因。目标基因一般包括参与油、淀粉、糖或营养代谢的基因以及影响谷粒大小、蔗糖负载等的基因。
在某些实施方案中，为了产生具有所需表型的植物，可将本发明的核酸序列与其它目标多核苷酸序列组合使用(“堆积(stacked)”)。所形成的组合可包括目标多核苷酸任一种或多种的多个拷贝。本发明的多核苷酸还可与任何基因或组合基因堆积以产生具有多种所需性状组合的植物，包括但不限于用于动物饲料的所需性状，例如高油基因(例如美国专利第6,232,529号)；平衡型氨基酸(例如hordothionins(美国专利号5,990,389、5,885,801、5,885,802和5,703,409)；大麦高赖氨酸(Williamson等(1987)Eur.J.Biochem.165：99-106和WO 98/20122)；高甲硫氨酸蛋白(Pedersen等(1986)J.Biol.Chem.261：6279；Kirihara等(1988)Gene 71：359和Musumura等(1989)Plant Mol.Biol.12：123)；提高可消化性(例如改性贮藏蛋白(2001年11月7日提交的美国专利申请顺序号10/053,410)；以及硫氧还蛋白(2001年12月3日提交的美国专利申请顺序号10/005,429))，所述文献的公开内容通过引用结合到本文中。本发明的多核苷酸还可与抗虫性、抗病性或除草剂抗性等所需要的性状堆积(例如苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)毒蛋白(美国专利号5,366,892、5,747,450、5,737,514、5723,756、5,593,881；Geiser等(1986)Gene 48：109)；凝集素(Van Damme等(1994)Plant Mol.Biol.24：825)；串珠镰孢黄菌素解毒基因(美国专利第5,792,931号)；无毒基因和抗病性基因(Jones等(1994)Science266：789；Martin等(1993)Science 262：1432；Mindrinos等(1994)Cell78：1089)；导致除草剂抗性的乙酰乳酸合酶(ALS)突变型，例如S4和/或Hra突变；谷氨酰胺合酶抑制剂，例如膦丝菌素或basta(例如bar基因)；草甘膦抗性(EPSPS基因))；用于处理或加工产品所需要的性状，例如高油(例如美国专利第6,232,529号)；改良油(例如脂肪酸去饱和酶基因(美国专利第5,952,544号、WO 94/11516))；改性淀粉(例如ADPG焦磷酸化酶(AGPase)、淀粉合酶(SS)、淀粉分支酶(SBE)和淀粉脱支酶(SDBE))；聚合物或生物塑料(bioplastics)(例如美国专利第5.602,321号；促进聚羟基链烷酸酯(PHA)表达的β-酮硫解酶、聚羟基丁酸合酶和乙酰乙酰辅酶A还原酶(Schubert等(1988)J.Bacteriol.170：5837-5847))，所述文献的公开内容通过引用结合到本文中。还可以将本发明的多核苷酸与影响以下农艺性状的多核苷酸组合：例如雄性不育(例如参见美国专利第5,583,210号)、柄(stalk)强度、开花时间或转化技术性状(例如细胞周期调节或基因寻靶)(例如WO 99/61619、WO 00/17364、WO 99/25821)，所述文献的公开内容通过引用结合到本文中。
在一个实施方案中，目标序列改进植物生长和/或提高农作物产量。例如，目标序列包括导致初生根系或侧根系改善的具有农艺重要性的基因。这类基因包括但不限于养分/水转运蛋白基因和生长诱导基因。这类基因的实例包括但不限于玉米质膜H+-ATP酶(MHA2)(Frias等(1996)Plant Cell 8：1533-44)；AKT1，一种拟南芥钾摄取器(potassium uptakeapparatus)的组分(Spalding等(1999)J Gen Physiol 113：909-18)；在根端细胞中激活细胞分裂周期的RML基因(Cheng等(1995)Plant Physiol108：881)；玉米谷氨酰胺合成酶基因(Sukanya等(1994)Plant Mol Biol26：1935-46)和血红蛋白(Duff等(1997)J.Biol.Chem 27：16749-16752，Arredondo-Peter等(1997)Plant Physiol.115：1259-1266；Arredondo-Peter等(1997)PlantPhysiol 114：493-500及其中所引用的参考文献)。目标序列还可用于表达对根发育有负面影响的基因的反义核苷酸序列。
另外，除采用传统育种方法以外，还可从遗传上改变具有农艺重要性的性状(例如油、淀粉和蛋白质含量)。有关改进包括增加油酸、饱和与不饱和油的含量、提高赖氨酸和硫的水平、提供必需氨基酸，还包括淀粉改性。Hordothionin蛋白改进参见美国专利号5,703,049、5,885,801、5,885,802和5,990,389，这些专利均通过引用结合到本文中。另一个实例是由大豆2S白蛋白编码的富含赖氨酸和/或硫的种子蛋白(参见美国专利第5,850,016号)和得自大麦的胰凝乳蛋白酶抑制剂(参见Williamson等(1987)Eur.J.Biochem.165：99-106，所述文献的公开内容通过引用结合到本文中)。
可通过位点定向诱变制备编码序列的衍生物以提高编码多肽中预选定氨基酸的水平。例如，大麦高赖氨酸多肽(BHL)编码基因得自大麦胰凝乳蛋白酶抑制剂(1996年11月1日提交的美国专利专利申请顺序号08/740,682，以及WO 98/20133，所述专利的公开内容通过引用结合到本文中)。其它蛋白质包括例如得自向日葵种子的富含甲硫氨酸的植物蛋白(Lilley等(1989)Proceedings of the World Congress on Vegetable ProteinUtilization in Human Foods and Animal Feedstuffs(植物蛋白质在人类食物和动物饲料中利用世界大会会议录)，Applewhite主编(美国油类化学家学会(American Oil Chemists Society)，Champaign，Illinois)，第497-502页；该文献通过引用结合到本文中)；玉米(Pedersen等(1986)J.Biol.Chem.261：6279；Kirihara等(1988)Gene 71：359；所述两份文献均通过引用结合到本文中)；以及水稻(Musumura等(1989)Plant Mol.Biol.12：123，该文献通过引用结合到本文中)。其它有农艺重要性的基因编码乳胶、Floury2、生长因子、种子贮藏因子(seed storage factor)和转录因子。
抗虫性基因可编码害虫抗性，所述害虫显著拉低产量，例如根虫、切根虫、欧洲玉米螟等。这类基因包括例如苏云金芽孢杆菌毒蛋白基因(美国专利号5,366,892、5,747,450、5,736,514、5,723,756、5,593,881；以及Geiser等(1986)Gene 48：109)等。
抗病性性状编码基因包括解毒基因，例如针对串珠镰孢菌素的解毒基因(美国专利第5,792,931号)；无毒(avr)基因和抗病(R)基因(Jones等(1994)Science 266：789；Martin等(1993)Science 262：1432；以及Mindrinos等(1994)Cell 78：1089)等。
除草剂抗性性状可包括起抑制乙酰乳酸合酶(ALS)作用的除草剂、特别是磺酰脲型除草剂的抗性编码基因(例如含有导致这类抗性的突变的乙酰乳酸合酶(ALS)基因，特别是S4和/或Hra突变)；起抑制谷氨酰胺合酶作用的除草剂(例如膦丝菌素或basta)的抗性编码基因(例如bar基因)或者本领域已知的其它这类基因。bar基因编码除草剂basta抗性，nptII基因编码抗生素卡那霉素和遗传霉素抗性，ALS-基因突变型编码除草剂氯磺隆抗性。
还可在表达盒中编码不育基因，并提供物理去雄的替代方法。用于这类方式的基因的实例包括雄性组织优选的基因和具有雄性不育表型的基因，例如QM，参见美国专利第5,583,210号。其它基因包括激酶和编码对雄性或雌性配子体发育有毒的化合物的基因。
谷类品质反映在性状上，例如饱和及不饱和油的水平和类型、必需氨基酸的品质和数量以及纤维素的水平。玉米中，改良的hordothionin蛋白可参见美国专利号5,703,049、5,885,801、5,885,802和5,990,389。
商业性状还可编码到一个或多个基因上，从而可增加例如用于生产乙醇的淀粉或者提供蛋白质表达。转化植物的另一种重要的商业用途是生产聚合物和生物塑料，例如参见美国专利第5,602,321号。基因例如β-酮硫解酶、PHBase(聚羟基丁酸酯合酶)和乙酰乙酰辅酶A还原酶(参见Schubert等(1988)J.Bacteriol.170：5837-5847)可促进聚羟基链烷酸酯(PHA)表达。
外源产物包括植物酶和植物产物以及得自包括原核生物和其它真核生物在内的其它来源的产物。这些产物包括酶、辅因子、激素等。可以提高蛋白质、特别是修饰蛋白质的水平，所述修饰蛋白质具有改进的能提高植物营养价值的氨基酸分布。这可通过表达这类氨基酸含量提高的蛋白质来实现。
可参照下列非限制性实施例来更好地理解本发明。本领域技术人员应当了解的是，可以实施本发明的其它实施方案但不偏离本文所公开及要求保护的本发明的精神和范围。
实施例
实施例1ERECTA序列的分离
采用确定基因家族所有成员的常规方法以检索目标ERECTA基因。准备一组各式的所有基因家族已知成员作为蛋白质序列。该数据包括来自其它品种的序列。对照专有玉米序列数据集对这些品种进行检索，确定出一组非冗余(nonredundant)的重叠命中数(hits)。分别对任何目标基因的核苷酸序列进行处理，并对照数据库进行检索，重新得到一组非冗余的所有重叠命中数。然后将蛋白质命中数组与核苷酸命中数相比较。如果基因家族是完整的，则所有蛋白质命中数都包含在核苷酸命中数内。ERECTA家族的基因由2个拟南芥基因、2个水稻基因、2个玉米基因、3个高粱基因和4个大豆基因组成。图4提供表示由这些基因编码的蛋白质的相互关系的系统树图。
实施例2ERECTA序列分析
本发明的ZmERECTA多肽与多种植物品种的ERECTA基因有共同特征。比对分析显示得自多个植物品种的基因、保守区和共有序列间之间的关系，参见图2。
实施例3转基因植物的转化和再生
用质粒轰击得自温室供体植物的未成熟玉米胚，该质粒含有与干旱诱导型启动子RAB17启动子有效连接的ZmERECTA序列(Vilardell等(1990)Plant Mol Biol 14：423-432)和赋予除草剂双丙氨膦抗性的选择标记基因PAT。或者，选择标记基因用单独的质粒提供。转化如下进行。培养基配方见下。
靶组织的制备：
剥开玉米穗的苞叶，在30％
Figure A20078004316500641
漂白剂加上0.5％Micro洗涤剂中进行表面灭菌20分钟，用无菌水漂洗2次。切取未成熟胚，将胚轴端向下(盾盖端向上)，按25个胚/板接种到560Y培养基中4小时，然后排列在2.5cm靶区内以备轰击。
DNA的制备：
制备包含与泛素启动子有效连接的ERECTA序列的质粒载体。如下应用CaCl2沉淀法将该质粒DNA加上含有PAT选择标记的质粒DNA沉淀在1.1μm(平均直径)钨沉淀上：
100μl在水中制备的钨颗粒
10μl含(1μg)DNA的Tris EDTA缓冲液(总DNA 1μg)
100μl 2.5M CaCl2
10μl 0.1M亚精胺
依次将每种试剂加到钨颗粒悬液中，同时保持在多管涡旋仪中。对最终的混合物进行短时超声处理后，使之在恒定涡旋下温育10分钟。在沉淀期之后，各管进行短时离心，弃去液体，用500ml 100％乙醇洗涤后，离心30秒钟。再次弃去液体，将105μl 100％乙醇加到最终的钨颗粒沉淀。对于基因枪轰击，对钨/DNA颗粒进行短时超声处理，将10μl点到每个巨载体的中心，轰击前使之干燥约2分钟。
基因枪处理：
用基因枪#HE34-1或#HE34-2按4号水平对样品板进行轰击。所有样品受到单次射击(650PSI)，从每管制备的颗粒/DNA中取等分量，共10份。
后续处理：
轰击后，使胚在560Y培养基中培养2天，然后转移到含有3mg/升双丙氨膦的560R选择培养基中，每2周进行继代培养。在大约10周选择后，将选择-抗性愈伤组织克隆转移到288J培养基以开始使植物再生。在体细胞胚成熟后(2-4周)，将发育良好体细胞胚转移到培养基以便出芽，并转移到有照明的培养室。大约7-10天后，将发育中的小植株转移到管中的272V无激素培养基内达7-10天，直到小植株完全形成。然后将植物移栽到装有盆栽土的平台的插入物(inserts)中(等同于2.5″花盆)，并在生长室中生长1周，随后在温室中再生长1-2周，然后移载到典型600盆(1.6加仑)中，生长至成熟。对植物进行监测，并对耐旱性的提高进行评分。测定耐旱性改进的实验是本领域的常规方法，包括例如当与在相同环境条件下的对照玉米植物相比时，在干旱条件下玉米粒-抽穗能力产量(kernel-earring capacity yield)增加。或者，可监测转化植物对分生组织发育的调节(即玉米穗上小穗形成减少)。参见例如Bruce等(2002)Journal of Experimental Botany 53：1-13。
轰击和培养基：
轰击培养基(560Y)含有4.0g/l N6基础盐(SIGMA C-1416)、1.0ml/lEriksson维生素混合物(1000X SIGMA-1511)、0.5mg/l盐酸硫胺、120.0g/l蔗糖、1.0mg/l 2，4-D和2.88g/l L-脯氨酸(用D-I H2O调整体积后，用KOH调节至pH 5.8)；2.0g/l脱乙酰吉兰糖胶(Gelrite)(用D-I H2O调整体积后加入)；以及8.5mg/l硝酸银(将培养基灭菌并冷却至室温后加入)。选择培养基(560R)含有4.0g/l N6基础盐(SIGMA C-1416)、1.0ml/l Eriksson维生素混合物(1000X SIGMA-1511)、0.5mg/l盐酸硫胺、30.0g/l蔗糖和2.0mg/l 2，4-D(用D-I H2O调整体积后用KOH调节至pH 5.8)；3.0g/l脱乙酰吉兰糖胶(用D-I H2O调整体积后加入)；以及0.85mg/l硝酸银和3.0mg/l双丙氨膦(两者均在将培养基灭菌并冷却至室温后加入)。
植物再生培养基(288J)含有4.3g/l MS盐(GIBCO 11117-074)、5.0ml/l MS维生素母液(0.100g烟酸、0.02g/l盐酸硫胺、0.10g/l盐酸吡多醇和0.40g/l甘氨酸，用精制D-I H2O调整体积)(Murashige和Skoog(1962)Physiol.Plant.5：473)、100mg/l肌醇、0.5mg/l玉米素、60g/l蔗糖和1.0ml/l 0.1mM脱落酸(调节至pH 5.6后，用精制D-I H2O调整体积)；3.0g/l脱乙酰吉兰糖胶(用D-I H2O调整体积后加入)；以及1.0mg/l吲哚乙酸和3.0mg/l双丙氨膦(将培养基灭菌并冷却至60℃后加入)。无激素培养基(272V)含有4.3g/l MS盐(GIBCO 11117-074)、5.0ml/l MS维生素母液(0.100g/l烟酸、0.02g/l盐酸硫胺、0.10g/l盐酸吡多醇和0.40g/l甘氨酸，用精制D-I H2O调整体积)、0.1g/l肌醇和40.0g/l蔗糖(调节pH至5.6后，用精制D-I H2O调整体积)；以及6g/l细菌培养用琼脂(bacto-agar)(用精制D-I H2O调整体积后加入)，灭菌后冷却至60℃。
实施例4土壤杆菌介导的转化
对于用本发明ZmERECTA序列的反义序列的土壤杆菌介导的玉米转化，优选采用Zhao的方法(美国专利第5,981,840号和PCT专利公布号WO98/32326；所述专利的内容通过引用结合到本文中)。简单地讲，从玉米中分离出未成熟胚，使胚与土壤杆菌悬液接触，其中该细菌能够将ERECTA序列转移到至少一个未成熟胚的至少一个细胞中(步骤1：感染步骤)。在这一步骤中，优选将未成熟胚浸入用于开始接种的土壤杆菌悬液。使胚与土壤杆菌共同培养一段时间(步骤2：共培养步骤)。优选使未成熟胚在感染步骤后在固体培养基上培养。在该共培养期后，包括了任选的“静息”步骤。在该静息步骤中，在至少一种已知抑制土壤杆菌生长的抗生素存在下无需加入植物转化体的选择剂，使胚孵育(步骤3：静息步骤)。优选将未成熟胚在有抗生素但无选择剂的固体培养基上培养，为感染细胞清除土壤杆菌，并提供静息阶段。随后，将经接种的胚在含有选择剂的培养基上培养，回收生长中的转化愈伤组织(步骤4：选择步骤)。优选将未成熟胚在有选择剂的固体培养基上培养，所述选择剂可引起转化细胞进行选择性生长。然后使愈伤组织再生成植物(步骤5：再生步骤)，优选将在选择性培养基上生长的愈伤组织在固体培养基上培养以再生出植物。对植物进行监测，并对在分生组织发育中的调节进行评分。例如，大小的改变、茎干和花分生组织出现和/或叶、花和/或果实产量的提高。
实施例5ZmERECTA的过量表达影响植物生长率、花序发育、器官大小和耐旱性。
ZmERECTA基因在其中细胞分裂活跃的茎端分生组织和玉米穗特异性分生组织中表达(图1)。该基因的功能与细胞增殖有关。我们通过在组成型启动子控制下使ZmERECTA基因过量表达来测试此基因的功能。将产生出转基因植物和非转基因同胞，并对转基因效果进行比较。可通过转基因特异性RT-PCR证实表达转基因的转基因植物。预期ZmERECTA基因影响植物生长率。与转基因阴性同胞相比，预期转基因阳性植物显示生长率提高、植物和器官大小增大和生物量累积增加。
有研究表明ERECTA基因控制拟南芥的花发育。如图1所示，ZmERECTA基因无疑优先在玉米穗花序分生组织(ear inflorescencemeristem)中表达，并在茎端分生组织以略低的水平表达。转基因植物过量表达ZmERECTA基因，预期对花序发育产生影响。与非转基因同胞相比，预期转基因植物的玉米穗和玉米粒生长加快，总玉米粒产量提高。
ERECTA基因调节拟南芥的蒸腾效率，并影响耐旱性。通过用组成型或胁迫诱导型启动子使ZmERECTA基因过量表达，来测试转基因植物中ZmERECTA基因的这个功能。可对转基因植物及其非转基因同胞进行干旱胁迫处理，通过测量胁迫环境下的植物生长、生物量累积和产量，来测定其耐受性。预期转基因植物通过影响蒸腾效率而改善了耐旱性，并在胁迫或非胁迫生长条件下促进植物生长，提高谷粒产量。
实施例6大豆胚转化
如下用含有与泛素启动子有效连接的ERECTA序列的质粒轰击大豆胚。为了诱导体细胞胚，从经表面灭菌的大豆栽培种A2872未成熟种子中剖出长度3-5mm的子叶，在26℃、光或暗中，在合适的琼脂培养基中培养6-10周。然后切取体细胞胚产生的次生胚，接种到合适的液体培养基中。在对繁殖成早期球形期胚的体细胞胚聚簇进行重复选择后，按下述方法维持悬液。
将大豆胚胎发生悬浮培养物维持在旋转振荡器(150rpm)上的35ml液体培养基中，26℃，荧光灯16:8小时昼/夜周期。将约35mg组织接种到35ml液体培养基中，每两周对培养物进行继代培养。
然后，可通过基因枪轰击方法转化大豆胚胎发生悬浮培养物(Klein等(1987)Nature(London)327：70-73；美国专利第4,945,050号)。Du Pont生物射弹PDS 1000/HE仪(helium retrofit)可用于这些转化。
可用来促进大豆转化的选择标记基因是由以下元件组成的转基因：得自花椰菜花叶病毒的35S启动子(Odell等(1985)Nature 313：810-812)、得自质粒pJR225(得自大肠杆菌；Gritz等(1983)Gene 25：179-188)的潮霉素磷酸转移酶基因和得自根癌土壤杆菌Ti质粒T-DNA的胭脂碱合酶基因的3′区。包含与泛素启动子有效连接的ERECTA有义序列的表达盒可被分离成限制片段。然后，可将该片段插入携带标记基因的载体的独特限制位点。
向50μl的60mg/ml 1μm金颗粒悬液中加入(依次)：5μl DNA(1μg/μl)、20μl亚精胺(0.1M)和50μl CaCl2(2.5M)。然后搅拌颗粒制备物3分钟，在台式微量离心机中离心10秒钟，弃去上清液。然后将DNA包被的颗粒在400μl 70％乙醇中洗涤一次后，重新悬浮于40μl无水乙醇中。可对DNA/颗粒悬液进行超声处理三次，每次一秒钟。然后将5微升DNA包被的金颗粒加到每个巨载体盘中。
将约300-400mg生长两周的悬浮培养物接种到60x15mm空培养皿中，用移液枪从组织中弃去残余液体。对于每次转化实验，通常对约5-10块板的组织进行轰击。破膜压力设定为1100psi，将室(chamber)抽真空至28英寸汞柱。将组织置于距阻挡网(retaining screen)约3.5英寸处，轰击三次。轰击后，可将组织分成两半，如上所述，接种回液体中后按上述方法培养。
轰击后5-7天，液体培养基可用新鲜培养基更换，轰击后11-12天用含有50mg/ml潮霉素的新鲜培养基更换。可以每周更换该选择性培养基。轰击后7-8周，可以观察到从未转化的坏死胚胎发生聚簇中生长出绿色的转化组织。取出分离的绿色组织，并接种到各个培养瓶中以产生新的无性繁殖的转化胚胎发生悬浮培养物。每个新株系可作为独立的转化事件来处理。然后，可将这些悬液进行继代培养，并作为未成熟胚聚簇维持，或者随每个体细胞胚的成熟和出芽再生出整株植物。
实施例7向日葵分生组织的转化
如下用含有与泛素启动子有效连接的ERECTA序列的表达盒转化向日葵分生组织(另参见欧洲专利号EP 0486233，该专利通过引用结合到本文中，以及Malone-Schoneberg等(1994)Plant Science 103：199-207)。成熟向日葵种子(向日葵(Helianthus annuus L.))用单麦穗脱粒机(singlewheathead thresher)去壳。用每50ml溶液2滴吐温(Tween)20的20％
Figure A20078004316500691
漂白溶液中进行表面灭菌种子30分钟。用无菌蒸馏水漂洗种子两次。
用Schrammeijer等人所述方法的改进方法制备剖开的胚轴外植体(Schrammeijer等(1990)Plant Cell Rep.9：55-60)。在表面灭菌步骤后，使种子在蒸馏水中吸胀60分钟。然后折断每粒种子的子叶，在胚的轴线平面产生平滑的断面。切除根尖后，将外植体在初叶之间纵切成两半。将两半(切面向上)接种到GBA培养基中，培养基由Murashige和Skoog矿物元素(Murashige等(1962)Physiol.Plant.，15：473-497)、Shepard维生素添加物(Shepard(1980)，载于Emergent Techniques for the GeneticImprovement of Crops(University of Minnesota Press，St.Paul，Minnesota))、40mg/l硫酸腺嘌呤、30g/l蔗糖、0.5mg/l 6-苄基-氨基嘌呤(BAP)、0.25mg/l吲哚-3-乙酸(IAA)、0.1mg/l赤霉酸(GA3)(pH 5.6)和8g/l植物琼脂(Phytagar)组成。
在土壤杆菌处理之前，对外植体进行微粒轰击(Bidney等(1992)PlantMol.Biol.18：301-313)。将30-40个外植体成环形置于60X20mm板的中心以进行该处理。将大约4.7mg的1.8mm钨微弹重新悬浮于25ml无菌TE缓冲液(10mM Tris HCl、1mM EDTA，pH 8.0)中，每次轰击使用1.5ml的等分量。在PDS
Figure A20078004316500701
颗粒加速装置中，通过置于样品上方2cm的150mm nytex网(nytex screen)轰击各板两次。
在所有转化实验中使用卸甲根癌土壤杆菌菌株EHA105。按照Holsters等人所述方法(Holsters等(1978)Mol.Gen.Genet.163：181-187)，将包含表达盒的双元质粒载体(binary plasmid vector)通过冻融导入土壤杆菌菌株EHA105，所述表达盒含有与泛素启动子有效连接的ERECTA基因。该质粒还包含卡那霉素选择标记基因(即nptII)。使用于植物转化实验的细菌在液体YEP培养基(10gm/l酵母提取物、10gm/l细菌用蛋白胨(Bactopeptone)和5gm/l NaCl，pH 7.0)与细菌菌株和双元质粒维持所需要的合适抗生素中生长过夜(28℃，100RPM连续搅拌)。当悬液OD600达到约0.4-0.8时便可使用。使土壤杆菌细胞沉淀，并按最终OD600为0.5重新悬浮于接种培养基中，所述接种培养基由12.5mM MES(pH 5.7)、1gm/l NH4Cl和0.3gm/l MgSO4组成。
将新鲜轰击的外植体接种到土壤杆菌悬液中，混合，静置30分钟。然后将外植体转移到GBA培养基上，切面向下，在26℃和18小时白昼下共培养。共培养3天后，将外植体转移到补充了250mg/l头孢噻肟和50mg/l硫酸卡那霉素的374B(缺乏生长调节剂且蔗糖水平降低1％的GBA培养基)中。外植体培养2-5周进行选择后，转移到缺乏卡那霉素的新鲜374B培养基上继续发育1-2周。将具有分化的、尚未出苗适于切割的抗生素抗性生长区的外植体转移到GBA培养基(含有250mg/l头孢噻肟)进行第二次为期3天的植物激素处理。通过ELISA，分析得自卡那霉素抗性绿色苗的叶样品中存在的NPTII，并通过分析对分生组织发育的调节(即大小改变以及茎干和花分生组织出现)，分析存在转基因表达。
将NPTII阳性苗嫁接到
Figure A20078004316500711
杂合6440体外生长的向日葵幼苗砧木上。使经表面灭菌的种子在48-0培养基(一半浓度的Murashige和Skoog盐、0.5％蔗糖、0.3％脱乙酰吉兰糖胶，pH 5.6)中萌发，并在用于外植体培养的所述条件下生长。摘除幼苗上部分，将下胚轴纵切开1cm，将转化苗插入切口。整个部位用石蜡膜包裹以保护苗。体外培养一周后，可将嫁接的植物移栽到土壤中。将土壤中的嫁接体维持在高湿度条件下，随后慢慢适应温室环境。通过NPTII ELISA和/或通过叶提取物的ERECTA活性分析来鉴定在温室中成熟的T0植物(亲代)的转化区(transformed sector)，而通过少部分干种子子叶的ERECTA活性分析来鉴定由NPTII阳性T0植物收获的转基因种子。
向日葵转化的替代方案可供回收转基因子代而无需使用化学选择压力。将种子去壳，在每100ml溶液加入2-3滴吐温20的20％
Figure A20078004316500712
漂白溶液中，进行表面灭菌20分钟，然后用蒸馏水漂洗3次。在26℃下，使灭菌种子在用水湿润的滤纸上避光吸胀20小时。去除子叶和根，将分生组织外植体在374E(由MS盐、Shepard维生素、40mg/l硫酸腺嘌呤、3％蔗糖、0.5mg/l 6-BAP、0.25mg/l IAA、0.1mg/l GA和0.8％植物琼脂组成的GBA培养基(pH为5.6))上避光培养24小时。摘除初生叶暴露出顶端分生组织，将大约40个外植体顶端圆顶面向上接种到374M(具有1.2％植物琼脂的GBA培养基)中部2cm的环上，然后在培养基中避光培养24小时。
将约18.8mg的1.8μm钨颗粒重新悬浮于150μl无水乙醇中。超声处理之后，将其中8μl滴到巨载体表面中心。每板用650psi可裂圆片(rupture discs)在第一搁板(shelf)中按26mm Hg氦枪真空(helium gunvacuum)下轰击两次。
按上述方法通过冻融将目标质粒导入根癌土壤杆菌菌株EHA105。将在50μg/l卡那霉素存在下的液体YEP培养基(10g/l酵母提取物，10g/l细菌用蛋白胨，和5g/l NaCl，pH 7.0)中于28℃过夜生长的细菌沉淀重新悬浮于接种培养基(12.5mM 2-mM 2-(N-吗啉代)乙磺酸、MES、1g/lNH4Cl和0.3g/l MgSO4(pH 5.7))中，以达到OD 600下终浓度为4.0。将颗粒轰击的外植体转移到GBA培养基(374E)上，将细菌悬液滴直接接种到分生组织顶端。使外植体在培养基上共培养4天，之后将外植体转移到374C培养基(具有1％蔗糖，无BAP、IAA、GA3，并补充250μg/ml头孢噻肟的GBA)上。在16小时白昼和26℃孵育条件下，将小植株在培养基上培养约2周。
根据分生组织发育的调节情况(即大小改变及苗和花分生组织出现)，对得自在374C培养基中培养2周的外植体(长约2cm)进行筛选。鉴定阳性(即ERECTA表达改变)外植体，弃去没有显示ERECTA活性变化的苗，将每个阳性外植体再分成结节外植体(nodal explant)。一个结节外植体含有至少一个潜在结节。将该成结区段在GBA培养基上培养3-4天以促进从每结节中形成副芽(auxiliary bud)。然后将它们转移到374C培养基上，使之再发育4周。分离出发育中的芽，在374C培养基上再培养4周。通过合适的蛋白质活性测定法，再次对得自每个重获的新苗的合并叶样品进行筛选。此时，从一个单节重获的阳性苗一般都富含在结节培养之前的最初测定中所检测到的转基因区。
将对于ERECTA表达改变为阳性的再生苗嫁接到Pioneer杂合6440体外生长的向日葵幼苗砧木上。砧木按以下方式制备。将种子去壳，并在每100ml溶液加入2-3滴吐温20的20％
Figure A20078004316500731
漂白溶液中进行表面灭菌20分钟，用蒸馏水漂洗3次。使灭菌种子在用水湿润的滤纸上萌发3天，然后将它们转移到48培养基(一半浓度的MS盐、0.5％蔗糖、0.3％脱乙酰吉兰糖胶，pH 5.0)上，在26℃下避光生长3天，然后在16小时白昼培养条件下培育。摘除选出小植株的上部分，纵切开各下胚轴，将转化苗插入V型切口。切口部位用石蜡膜包裹。在培养基上培养1周后，将嫁接植物移栽到土壤中。在头两周内，维持在高湿度条件下以适应温室环境。
实施例8干旱胁迫下玉米营养性能的测定方案
可以利用生长条件、胁迫处理和确定的诊断方法，以高通量方式在FAST-玉米(参见美国专利申请号10/367,417)背景中鉴定出赋予转基因玉米耐旱性的基因。
处理与材料：
采用2个处理组，一个是充分浇水处理(对照)，另一个是干旱胁迫处理。
植物材料由T1期的转基因玉米幼苗组成。
处理详述：
可以自10-14天或移栽后7天开始施以胁迫，并在穗丝生长(silking)整个过程中持续。可通过安装定时器的自动系统给花盆浇水，以便在整个干旱胁迫处理期间按田间持水量的25％或50％浇水。该胁迫可供鉴定对植物生长以及雌雄穗开花间隔的影响。
盆栽混合物：建议使用1/3 Turface MVP(Profile Products LLC，IL，USA)、1/3沙和1/3 SB300 Universal(Sun Gro Horticulture，WA，USA)的混合物。SB300 Uiversal可用Fafard特级萌发混合物(SuperfineGerminating Mix)(Conrad Fafard，Inc.，MA，USA)替换。同样，可以降低混合物中沙的比例。因此，最终的盆栽混合物可以是3/8(37.5％)turface、3/8(37.5％)Fafard和1/4(25％)沙。
田间持水量测定：测定用在一个S200花盆中的土壤混合物重量(w1)(减去花盆重量)。在测定w1之前，可以将土壤在100℃下干燥至恒重(如果土壤混合物的所有组分已经变干的，则不再将其干燥)。给花盆中的土壤浇水至完全饱和，使所有重力水排干。在所有重力水渗出后，测定土壤重量(w2)(减去花盆重量)。田间持水量是保持在土壤中的水份重量，按w2-w1得到。技术上可写作烘干土壤重量的百分比。对于我们的目的，w2-w1便足够。
胁迫处理：在植物生长早期(10天至21天)，给充分浇水对照每天浇水75％田间持水量和给干旱胁迫处理每天浇水25％田间持水量，两者都在每天上午10点按一次日浇水量浇水。当植物长得较大时，增加充分浇水对照的每天浇水量至最大田间持水量，增加干旱胁迫处理的至50％田间持水量。这种增加以对代表性花盆的重量测量为基础，以确定当植物长得较大时植物的排水程度。
营养液：使用改进的Hoagland溶液，用灌溉用自来水按1/16稀释。用下列配方配制20L改进的Hoagland溶液：
  10X微量营养液   16ml
  KH2PO4(分子量：136.02)   22g
  MgSO4(分子量：120.36)   77g
  KNO3(分子量：101.2)   129.5g
  Ca(NO3)2.4H2O(分子量：236.15)   151g
  NH4NO3(分子量：80.04)   25.6g
  Sprint330(铁螯合物)   32g
用下列配方配制1L 10X微量营养液：
  10X微量营养液   ml/L
  H3BO3-30mM   1854
  MnCl2.4H2O-10mM   1980
  ZnSO4.7H2O-10mM   2874
  CuSO4.5H2O-1mM   250
  H2MoO4.H2O-1mM   242
使用肥料级KNO3。
注意：在移栽时或在出苗后，将半茶匙奥绿肥(Osmocote)(NPK15∶9∶12)加到花盆是有益的(Scotts Miracle-Gro Company，OH，USA)。
边界植物：在温室玻璃壁附近或者微环境变化潜在因素(例如冷却风扇)附近的育苗台边缘有一排边界植物是十分关键的。
自动化：自动化可如下进行：采用虹吸装置，利用有钻孔的PVC管向系统性摆放的花盆供水。灌溉时间安排可用定时器控制。
统计分析：可采用因素随机区组设计(用事件或构建方法和胁迫处理作为因素)，将数据输入Spotfire(Spotfire，Inc.，MA，USA)，最终用于每个干旱转基因程序组内的ANOVA。
重复：每事件每次处理8-10株单株植物。
花盆大小：S200
观察结果：
(1)在整个生长期内一周三次进行LemnaTec测量以获取植物生长率(LemnaTec GmbH，Wurselen，Germany)。
(2)在整个胁迫期用Lemnatec一周三次测定叶色。
(3)使用Hansatech FMS2仪，一周两次自上午11点开始记录叶绿素荧光为PhiPSII。在胁迫处理第0天开始测定直到实验结束，记录最嫩最完全伸展叶的测量值(Hansatech Instruments，Norfolk，England)。
(4)记录各株植物抽穗和长出穗丝的日期，并计算雌雄穗开花间隔(ASI)。通过确定脱落的生长度日(GDU)至与长出穗丝的生长度日之差，计算出ASI。脱落时间是当观察到第一次脱落的天数，其中第一次脱落定义为至少一个花药脱落。穗丝生长时间是当观察到第一条穗丝长出的天数，其中第一条穗丝长出定义为出现至少1毫米的一根穗丝。
实施例9ERECTA的表达及与耐旱性和农艺性能的关联性。
根据(1)已公布的有关直向同源物的信息，所述直向同源物可表示在胁迫感受或耐受性中的作用，以及(2)表示胁迫相关基因表达的内部谱型分析(profiling study)，鉴定出一组蛋白质激酶。它们包括2个组分信号转导系统的基因，以及根据胁迫相关表达模式鉴定出的基因-包括ERECTA-A。
ERECTA-A
背景信息：ERECTA是对农业、尤其是对耐旱性和农艺性能领域具有意义的推定的富含亮氨酸重复序列受体样激酶(LRR-RLK)。拟南芥中，已知该基因通过包括气孔密度、表皮细胞膨胀、叶肉细胞增殖和细胞间接触在内的机制对植物蒸腾效率产生影响。另还了解到该基因影响花序发育。对于该蛋白质，还没有激酶活性实验的报告。
序列信息：克隆出全长CDS。该基因作图位于染色体箱(chromosome-bin)位置6.04，已知大致在其附近出现干旱QTL。该基因优选在分生组织、未成熟穗中表达，在如图3中所述的多种组织中进行表达。
实施例10ERECTA序列的变体
A.不改变编码氨基酸序列的ERECTA的变体核苷酸序列
用ERECTA核苷酸序列来产生当与相应SEQ ID NO的起始未改变的ORF核苷酸序列相比时，可读框的核苷酸序列具有约70％、75％、80％、85％、90％和95％核苷酸序列同一性的变体核苷酸序列。用标准密码子表可产生这些功能性变体。虽然变体核苷酸序列改变，但是由可读框编码的氨基酸序列不改变。
B.ERECTA多肽的变体氨基酸序列
制备ERECTA多肽的变体氨基酸序列。在本实施例中，一个氨基酸发生了改变。具体地讲，检查可读框以确定合适的氨基酸变化。通过查阅蛋白质比对(与得自不同品种的其它直向同源物和其它基因家族成员)，选出待改变的氨基酸。选出一般认为不在高选择压力下(不是高度保守的)且更易于被化学特征相似(即相似的官能侧链)的氨基酸取代的氨基酸。用图2中所列的蛋白质比对，可改变合适的氨基酸。一旦鉴定出靶氨基酸，则随后进行以下C部分中所述方法。用该方法产生具有约70％、75％、80％、85％、90％和95％核酸序列同一性的变体。
C.ERECTA多肽的其它变体氨基酸序列
在本实施例中，制备相对于参比蛋白质序列具有80％、85％、90％和95％同一性的人工蛋白序列。这一最新努力需要鉴定得自图2中所列比对的保守区和可变区，然后审慎应用氨基酸取代表。下面将更详细论述这些部分。
很大程度上，根据ERECTA蛋白之中或根据其它ERECTA多肽之中的保守区来测定被改变的氨基酸序列。根据序列比对，很可能被改变的ERECTA多肽各个区用小写字母表示，而保守区则用大写字母表示。要了解的是，下列保守区可进行保守取代但不改变功能。另外，技术人员应当了解的是，本发明ERECTA序列的功能性变体在保守结构域中可具有较少的非保守氨基酸变化。
因此产生以80-85％、85-90％、90-95％和95-100％同一性为区间不同于源蛋白序列的人工蛋白序列。以这些区间的中点为目标，具有例如+或-1％的自由范围。可通过自定义Perl script实现氨基酸取代。取代表参见下表2。
表2.取代表
氨基酸   极相似和最佳取代   改变的分级顺序 注释
  I   L，V   1   50:50取代
  L   I，V   2   50:50取代
  V   I，L   3   50:50取代
  A   G   4
  G   A   5
  D   E   6
  E   D   7
  W   Y   8
  Y   W   9
  S   T   10
  T   S   11
  K   R   12
  R   K   13
  N   Q   14
  Q   N   15
  F   Y   16
M L 17 第一个甲硫氨酸不能改变
  H   不适用   无良好取代
  C   不适用   无良好取代
  P   不适用   无良好取代
首先，鉴定出蛋白质中不能改变的任何保守氨基酸，“标出”以便与取代隔离开。起始甲硫氨酸当然被自动加到该列表中。然后，进行改变。
H、C和P在任何情况下都不得改变。改变先由异亮氨酸开始，从N端扫描到C端。然后是亮氨酸，如此沿列表进行直到达到所需目标。可进行中数取代(Interim number substitution)，从而不引起改变逆转。列表顺序为1-17，因此，从按与需要一样多的异亮氨酸开始，之后是亮氨酸，并如此进行到甲硫氨酸。显然按这种方式许多氨基酸不必改变。L、I和V将包括两种替代性最佳取代的50:50取代。
书面输出变体氨基酸序列。运用Perl script计算百分比同一性。采采该方法，将产生ERECTA多肽的变体，其与起始未改变的SEQ ID NO：27-39ORF核苷酸序列的氨基酸同一性约为80％、85％、90％和95％。
实施例11表达ZmERECTA A的转基因植物证实生长加快
在田间，对过量表达ZmERECTA A基因的转基因植物进行了评价。对转基因阳性事件及其无效对照与植物和器官生长有关的性状进行了表征。在早期生长季节，转基因阳性植物显示生长加快，特别是生长率较高。转基因植物比非转基因对照早约2天到达开花期。转基因植物还显示株冠加大，这与叶尺寸增大有关。叶长度和宽度两者都有加大，这是引起转基因植物叶面积显著增加的原因。发现与非转基因对照相比，叶面积增加高达34％。ZmERECTA A对生长率和器官大小的转基因作用与其所预计的在控制植物和器官大小及促进细胞增殖中的作用一致(Shpak，E.D.等，Plant Cell(2003)15：1095-1110；Development(2004)131：1491-501)。这些数据支持这样的见解，即ZmERECTA A可用于控制玉米或其它作物整株植物或特定器官的大小。
测定气孔密度(气孔数/mm2)，收集数据。在每叶3个区域且每事件2片叶(植物)的基础上，观察到与阴性对照相比，在所有5项事件中，转基因阳性植物的气孔密度都降低。与转基因阴性对照相比，降低幅度为5-22％。转基因对气孔密度的作用与该基因在拟南芥中的作用一致，拟南芥中该基因显示可降低气孔密度和改善蒸腾效率，从而改善耐旱性(Masle，Gilmore和Farquhar，(2005)Nature 436：866)。该转基因在玉米气孔密度中的作用的一致性提高了赋予农作物品种耐旱性的潜力。
转基因阳性植物中，叶片毛状体(tricome)生长受到影响，因为转基因阳性植物具有更多的毛状体或更浓密分布的毛状体。如各项事件所测一样，发现毛状体生长提高高达28％。一般认为毛状体生长通过提供阻水性(hydro-repellency)和叶的反射性质以及对昆虫摄食的物理和化学阻碍，而与植物耐旱性和抗虫性有关(Esau，K.(1977)Anatomy of SeedPlants，第2版)。转基因ERECTA的这种表型作用可对耐旱性和抗虫性产生影响。
本说明书中的所有出版物和专利申请可表示本发明所属领域的基本技术水平。所有出版物和专利申请均通过引用结合到本文中，其程度与每个独立出版物或专利申请具体而单独指明通过引用结合到本文中一样。
参照各个具体和优选的实施方案和技术对本发明进行了描述。然而，应当了解的是，可进行多种更改和修饰而仍保持在本发明的精神和范围内。
序列表
<110>先锋高级育种国际公司
<120>改善农作物的植物生长、蒸腾效率和耐旱性的玉米ERECTA基因
<130>2290-PCT
<150>60/847,304
<151>2006-09-25
<160>39
<170>FastSEQ for Windows Version 4.0
<210>1
<211>3191
<212>DNA
<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)
<400>1
gtttcttctt catggagact tgaaagcttt taaagtatat ctaaaaacgc agtcgtttta   60
agactgtgtg tgagaaatgg ctctgtttag agatattgtt cttcttgggt ttctcttctg  120
cttgagctta gtagctactg tgacttcaga ggagggagca acgttgctgg agattaagaa  180
gtcattcaaa gatgtgaaca atgttcttta tgactggaca acttcacctt cttcggatta  240
ttgtgtctgg agaggtgtgt cttgtgaaaa tgtcaccttc aatgttgttg ctcttaattt  300
gtcagatttg aatcttgatg gagaaatctc acctgctatt ggagatctca agagtctctt  360
gtcaattgat ctgcgaggta atcgcttgtc tggacaaatc cctgatgaga ttggtgactg  420
ttcttctttg caaaacttag acttatcctt caatgaatta agtggtgaca taccgttttc  480
gatttcgaag ttgaagcaac ttgagcagct gattctgaag aataaccaat tgataggacc  540
gatcccttca acactttcac agattccaaa cctgaaaatt ctggacttgg cacagaataa  600
actcagtggt gagataccaa gacttattta ctggaatgaa gttcttcagt atcttgggtt  660
gcgaggaaac aacttagtcg gtaacatttc tccagatttg tgtcaactga ctggtctttg  720
gtattttgac gtaagaaaca acagtttgac tggtagtata cctgagacga taggaaattg  780
cactgccttc caggttttgg acttgtccta caatcagcta actggtgaga tcccttttga  840
catcggcttc ctgcaagttg caacattatc attgcaaggc aatcaactct ctgggaagat  900
tccatcagtg attggtctca tgcaagccct tgcagtctta gatctaagtg gcaacttgtt  960
gagtggatct attcctccga ttctcggaaa tcttactttc accgagaaat tgtatttgca 1020
cagtaacaag ctgactggtt caattccacc tgagcttgga aacatgtcaa aactccatta 1080
cctggaactc aatgataatc atctcacggg tcatatacca ccagagcttg ggaagcttac 1140
tgacttgttt gatctgaatg tggccaacaa tgatctggaa ggacctatac ctgatcatct 1200
gagctcttgc acaaatctaa acagcttaaa tgttcatggg aacaagttta gtggcactat 1260
accccgagca tttcaaaagc tagaaagtat gacttacctt aatctgtcca gcaacaatat 1320
caaaggtcca atcccggttg agctatctcg tatcggtaac ttagatacat tggatctttc 1380
caacaacaag ataaatggaa tcattccttc ttcccttggt gatttggagc atcttctcaa 1440
gatgaacttg agtagaaatc atataactgg tgtagttcca ggcgactttg gaaatctaag 1500
aagcatcatg gaaatagatc tttcaaataa tgatatctct ggcccaattc cagaagagct 1560
taaccaatta cagaacataa ttttgctgag actggaaaat aataacctga ctggtaatgt 1620
tggttcatta gccaactgtc tcagtctcac tgtattgaat gtatctcata acaacctcgt 1680
aggtgatatc cctaagaaca ataacttctc aagattttca ccagacagct tcattggcaa 1740
tcctggtctt tgcggtagtt ggctaaactc accgtgtcat gattctcgtc gaactgtacg 1800
agtgtcaatc tctagagcag ctattcttgg aatagctatt gggggacttg tgatccttct 1860
catggtctta atagcagctt gccgaccgca taatcctcct ccttttcttg atggatcact 1920
tgacaaacca gtaacttatt cgacaccgaa gctcgtcatc cttcatatga acatggcact 1980
ccacgtttac gaggatatca tgagaatgac agagaatcta agtgagaagt atatcattgg 2040
gcacggagca tcaagcactg tatacaaatg tgttttgaag aattgtaaac cggttgcgat 2100
taagcggctt tactctcaca acccacagtc aatgaaacag tttgaaacag aactcgagat 2160
gctaagtagc atcaagcaca gaaatcttgt gagcctacaa gcttattccc tctctcactt 2220
ggggagtctt ctgttctatg actatttgga aaatggtagc ctctgggatc ttcttcatgg 2280
ccctacgaag aaaaagactc ttgattggga cacacggctt aagatagcat atggtgcagc 2340
acaaggttta gcttatctac accatgactg tagtccaagg atcattcaca gagacgtgaa 2400
gtcgtccaac attctcttgg acaaagactt agaggctcgt ttgacagatt ttggaatagc 2460
gaaaagcttg tgtgtgtcaa agtcacatac ttcaacttac gtgatgggca cgataggtta 2520
catagacccc gagtatgctc gcacttcacg gctcactgag aaatccgatg tctacagtta 2580
tggaatagtc cttcttgagt tgttaacccg aaggaaagcc gttgatgacg aatccaatct 2640
ccaccatctg ataatgtcaa agacggggaa caatgaagtg atggaaatgg cagatccaga 2700
catcacatcg acgtgtaaag atctcggtgt ggtgaagaaa gttttccaac tggcactcct 2760
atgcaccaaa agacagccga atgatcgacc cacaatgcac caggtgactc gtgttctcgg 2820
cagttttatg ctatcggaac aaccacctgc tgcgactgac acgtcagcga cgctggctgg 2880
ttcgtgctac gtcgatgagt atgcaaatct caagactcct cattctgtca attgctcttc 2940
catgagtgct tctgatgctc aactgtttct tcggtttgga caagttattt ctcagaacag 3000
tgagtagttt ttcgttagga ggagaatctt taaaacggta tcttttcgtt gcgttaagct 3060
gttagaaaaa ttaatgtctc atgtaaagta ttatgcactg ccttattatt attagacaag 3120
tgtgtggtgt gaatatgtct tcagactggc acttagactt cctataagtt cttgcctatc 3180
taagtttttc t                                                      3191
<210>2
<211>976
<212>PRT
<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)
<400>2
Met Ala Leu Phe Arg Asp Ile Val Leu Leu Gly Phe Leu Phe Cys Leu
 1               5                  10                  15
Ser Leu Val Ala Thr Val Thr Ser Glu Glu Gly Ala Thr Leu Leu Glu
            20                  25                  30
Ile Lys Lys Ser Phe Lys Asp Val Asn Asn Val Leu Tyr Asp Trp Thr
        35                  40                  45
Thr Ser Pro Ser Ser Asp Tyr Cys Val Trp Arg Gly Val Ser Cys Glu
    50                  55                  60
Asn Val Thr Phe Asn Val Val Ala Leu Asn Leu Ser Asp Leu Asn Leu
65                  70                  75                  80
Asp Gly Glu Ile Ser Pro Ala Ile Gly Asp Leu Lys Ser Leu Leu Ser
               85                  90                  95
Ile Asp Leu Arg Gly Asn Arg Leu Ser Gly Gln Ile Pro Asp Glu Ile
            100                 105                 110
Gly Asp Cys Ser Ser Leu Gln Asn Leu Asp Leu Ser Phe Asn Glu Leu
        115                 120                 125
Ser Gly Asp Ile Pro Phe Ser Ile Ser Lys Leu Lys Gln Leu Glu Gln
    130                 135                 140
Leu Ile Leu Lys Asn Asn Gln Leu Ile Gly Pro Ile Pro Ser Thr Leu
145                 150                 155                 160
Ser Gln Ile Pro Asn Leu Lys Ile Leu Asp Leu Ala Gln Asn Lys Leu
                165                 170                 175
Ser Gly Glu Ile Pro Arg Leu Ile Tyr Trp Asn Glu Val Leu Gln Tyr
            180                 185                 190
Leu Gly Leu Arg Gly Asn Asn Leu Val Gly Asn Ile Ser Pro Asp Leu
        195                 200                 205
Cys Gln Leu Thr Gly Leu Trp Tyr Phe Asp Val Arg Asn Asn Ser Leu
    210                 215                 220
Thr Gly Ser Ile Pro Glu Thr Ile Gly Asn Cys Thr Ala Phe Gln Val
225                 230                 235                 240
Leu Asp Leu Ser Tyr Asn Gln Leu Thr Gly Glu Ile Pro Phe Asp Ile
                245                 250                 255
Gly Phe Leu Gln Val Ala Thr Leu Ser Leu Gln Gly Asn Gln Leu Ser
            260                 265                 270
Gly Lys Ile Pro Ser Val Ile Gly Leu Met Gln Ala Leu Ala Val Leu
        275                 280                 285
Asp Leu Ser Gly Asn Leu Leu Ser Gly Ser Ile Pro Pro Ile Leu Gly
    290                 295                 300
Asn Leu Thr Phe Thr Glu Lys Leu Tyr Leu His Ser Asn Lys Leu Thr
305                 310                 315                 320
Gly Ser Ile Pro Pro Glu Leu Gly Asn Met Ser Lys Leu His Tyr Leu
                325                 330                 335
Glu Leu Asn Asp Asn His Leu Thr Gly His Ile Pro Pro Glu Leu Gly
            340                 345                 350
Lys Leu Thr Asp Leu Phe Asp Leu Asn Val Ala Asn Asn Asp Leu Glu
        355                 360                 365
Gly Pro Ile Pro Asp His Leu Ser Ser Cys Thr Asn Leu Asn Ser Leu
    370                 375                 380
Asn Val His Gly Asn Lys Phe Ser Gly Thr Ile Pro Arg Ala Phe Gln
385                 390                 395                 400
Lys Leu Glu Ser Met Thr Tyr Leu Asn Leu Ser Ser Asn Asn Ile Lys
                405                 410                 415
Gly Pro Ile Pro Val Glu Leu Ser Arg Ile Gly Asn Leu Asp Thr Leu
            420                 425                 430
Asp Leu Ser Asn Asn Lys Ile Asn Gly Ile Ile Pro Ser Ser Leu Gly
        435                 440                 445
Asp Leu Glu His Leu Leu Lys Met Asn Leu Ser Arg Asn His Ile Thr
    450                 455                 460
Gly Val Val Pro Gly Asp Phe Gly Asn Leu Arg Ser Ile Met Glu Ile
465                 470                 475                 480
Asp Leu Ser Asn Asn Asp Ile Ser Gly Pro Ile Pro Glu Glu Leu Asn
                485                 490                 495
Gln Leu Gln Asn Ile Ile Leu Leu Arg Leu Glu Asn Asn Asn Leu Thr
            500                 505                 510
Gly Asn Val Gly Ser Leu Ala Asn Cys Leu Ser Leu Thr Val Leu Asn
        515                 520                 525
Val Ser His Asn Asn Leu Val Gly Asp Ile Pro Lys Asn Asn Asn Phe
    530                 535                 540
Ser Arg Phe Ser Pro Asp Ser Phe Ile Gly Asn Pro Gly Leu Cys Gly
545                 550                 555                 560
Ser Trp Leu Asn Ser Pro Cys His Asp Ser Arg Arg Thr Val Arg Val
                565                 570                 575
Ser Ile Ser Arg Ala Ala Ile Leu Gly Ile Ala Ile Gly Gly Leu Val
            580                 585                 590
Ile Leu Leu Met Val Leu Ile Ala Ala Cys Arg Pro His Asn Pro Pro
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Pro Phe Leu Asp Gly Ser Leu Asp Lys Pro Val Thr Tyr Ser Thr Pro
    610                 615                 620
Lys Leu Val Ile Leu His Met Asn Met Ala Leu His Val Tyr Glu Asp
625                 630                 635                 640
Ile Met Arg Met Thr Glu Asn Leu Ser Glu Lys Tyr Ile Ile Gly His
                645                 650                 655
Gly Ala Ser Ser Thr Val Tyr Lys Cys Val Leu Lys Asn Cys Lys Pro
            660                 665                 670
Val Ala Ile Lys Arg Leu Tyr Ser His Asn Pro Gln Ser Met Lys Gln
        675                 680                 685
Phe Glu Thr Glu Leu Glu Met Leu Ser Ser Ile Lys His Arg Asn Leu
    690                 695                 700
Val Ser Leu Gln Ala Tyr Ser Leu Ser His Leu Gly Ser Leu Leu Phe
705                 710                 715                 720
Tyr Asp Tyr Leu Glu Asn Gly Ser Leu Trp Asp Leu Leu His Gly Pro
                725                 730                 735
Thr Lys Lys Lys Thr Leu Asp Trp Asp Thr Arg Leu Lys Ile Ala Tyr
            740                 745                 750
Gly Ala Ala Gln Gly Leu Ala Tyr Leu His His Asp Cys Ser Pro Arg
        755                 760                 765
Ile Ile His Arg Asp Val Lys Ser Ser Asn Ile Leu Leu Asp Lys Asp
    770                 775                 780
Leu Glu Ala Arg Leu Thr Asp Phe Gly Ile Ala Lys Ser Leu Cys Val
785                 790                 795                 800
Ser Lys Ser His Thr Ser Thr Tyr Val Met Gly Thr Ile Gly Tyr Ile
                805                 810                 815
Asp Pro Glu Tyr Ala Arg Thr Ser Arg Leu Thr Glu Lys Ser Asp Val
            820                 825                 830
Tyr Ser Tyr Gly Ile Val Leu Leu Glu Leu Leu Thr Arg Arg Lys Ala
        835                 840                 845
Val Asp Asp Glu Ser Asn Leu His His Leu Ile Met Ser Lys Thr Gly
    850                 855                 860
Asn Asn Glu Val Met Glu Met Ala Asp Pro Asp Ile Thr Ser Thr Cys
865                 870                 875                 880
Lys Asp Leu Gly Val Val Lys Lys Val Phe Gln Leu Ala Leu Leu Cys
                885                 890                 895
Thr Lys Arg Gln Pro Asn Asp Arg Pro Thr Met His Gln Val Thr Arg
            900                 905                 910
Val Leu Gly Ser Phe Met Leu Ser Glu Gln Pro Pro Ala Ala Thr Asp
        915                 920                 925
Thr Ser Ala Thr Leu Ala Gly Ser Cys Tyr Val Asp Glu Tyr Ala Asn
    930                 935                 940
Leu Lys Thr Pro His Ser Val Asn Cys Ser Ser Met Ser Ala Ser Asp
945                 950                 955                 960
Ala Gln Leu Phe Leu Arg Phe Gly Gln Val Ile Ser Gln Asn Ser Glu
                965                 970                 975
<210>3
<211>2901
<212>DNA
<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)
<400>3
atgaaggaga agatgcagcg aatggtttta tctttagcaa tggtgggttt tatggttttt  60
ggtgttgctt cggctatgaa caacgaaggg aaagctctga tggcgataaa aggctctttc 120
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ctgaatcttg gaggggagat atctccagct attggagacc tacggaattt gcaatcaata 300
gacttgcaag gtaataaact agcaggtcaa attccagatg agattggaaa ctgtgcttct 360
cttgtttatc tggatttgtc cgagaatctg ttatatggag acataccttt ctcaatctct 420
aaactcaagc agcttgaaac tctgaatctg aagaacaatc agctcacagg tcctgtacca 480
gcaaccttaa cccagattcc aaaccttaag agacttgatc ttgctggcaa tcatctaacg 540
ggtgagatat cgagattgct ttactggaat gaagttttgc agtatcttgg attacgaggg  600
aatatgttga ctggaacgtt atcttctgat atgtgtcagc taaccggttt gtggtacttt  660
gatgtgagag gaaataatct aactggaacc atcccggaga gcatcggaaa ttgcacaagc  720
tttcaaatcc tggacatatc ttataatcag ataacaggag agattcctta caatatcggc  780
ttcctccaag ttgctactct gtcacttcaa ggaaacagat tgacgggtag aattccagaa  840
gttattggtc taatgcaggc tcttgctgtt ttggatttga gtgacaatga gcttgttggt  900
cctatcccac cgatacttgg caatctctca tttaccggaa agttgtatct ccatggcaat  960
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cagatgattg atgtatcatt caatctgctc tccggagtta ttccaactga acttggccaa 1500
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gaagggttaa ccaagctagt gattctccac atggacatgg caattcatac atttgatgat 1920
atcatgagag tgactgagaa tcttaacgaa aagtttataa ttggatatgg tgcttctagc 1980
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cttgatgaga atttcgaagc acatttatct gatttcggga ttgctaagag cataccagct 2400
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gctcgtactt cacgaatcaa tgagaaatcc gatatataca gcttcggtat tgttcttctt 2520
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atctccaaaa gtagcatata a                                           2901
<210>4
<211>966
<212>PRT
<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)
<400>4
Met Lys Glu Lys Met Gln Arg Met Val Leu Ser Leu Ala Met Val Gly
 1               5                  10                  15
Phe Met Val Phe Gly Val Ala Ser Ala Met Asn Asn Glu Gly Lys Ala
            20                  25                  30
Leu Met Ala Ile Lys Gly Ser Phe Ser Asn Leu Val Asn Met Leu Leu
        35                  40                  45
Asp Trp Asp Asp Val His Asn Ser Asp Leu Cys Ser Trp Arg Gly Val
    50                  55                  60
Phe Cys Asp Asn Val Ser Tyr Ser Val Val Ser Leu Asn Leu Ser Ser
65                  70                  75                  80
Leu Asn Leu Gly Gly Glu Ile Ser Pro Ala Ile Gly Asp Leu Arg Asn
                85                  90                  95
Leu Gln Ser Ile Asp Leu Gln Gly Asn Lys Leu Ala Gly Gln Ile Pro
            100                 105                 110
Asp Glu Ile Gly Asn Cys Ala Ser Leu Val Tyr Leu Asp Leu Ser Glu
        115                 120                 125
Asn Leu Leu Tyr Gly Asp Ile Pro Phe Ser Ile Ser Lys Leu Lys Gln
    130                 135                 140
Leu Glu Thr Leu Asn Leu Lys Asn Asn Gln Leu Thr Gly Pro Val Pro
145                 150                 155                 160
Ala Thr Leu Thr Gln Ile Pro Asn Leu Lys Arg Leu Asp Leu Ala Gly
                165                 170                 175
Asn His Leu Thr Gly Glu Ile Ser Arg Leu Leu Tyr Trp Asn Glu Val
            180                 185                 190
Leu Gln Tyr Leu Gly Leu Arg Gly Asn Met Leu Thr Gly Thr Leu Ser
        195                 200                 205
Ser Asp Met Cys Gln Leu Thr Gly Leu Trp Tyr Phe Asp Val Arg Gly
    210                 215                 220
Asn Asn Leu Thr Gly Thr Ile Pro Glu Ser Ile Gly Asn Cys Thr Ser
225                 230                 235                 240
Phe Gln Ile Leu Asp Ile Ser Tyr Asn Gln Ile Thr Gly Glu Ile Pro
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Tyr Asn Ile Gly Phe Leu Gln Val Ala Thr Leu Ser Leu Gln Gly Asn
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        275                 280                 285
Ala Val Leu Asp Leu Ser Asp Asn Glu Leu Val Gly Pro Ile Pro Pro
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Met Leu Thr Gly Pro Ile Pro Ser Glu Leu Gly Asn Met Ser Arg Leu
                325                 330                 335
Ser Tyr Leu Gln Leu Asn Asp Asn Lys Leu Val Gly Thr Ile Pro Pro
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Glu Leu Gly Lys Leu Glu Gln Leu Phe Glu Leu Asn Leu Ala Asn Asn
        355                 360                 365
Arg Leu Val Gly Pro Ile Pro Ser Asn Ile Ser Ser Cys Ala Ala Leu
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Asn Gln Phe Asn Val His Gly Asn Leu Leu Ser Gly Ser Ile Pro Leu
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                405                 410                 415
Asn Phe Lys Gly Lys Ile Pro Val Glu Leu Gly His Ile Ile Asn Leu
            420                 425                 430
Asp Lys Leu Asp Leu Ser Gly Asn Asn Phe Ser Gly Ser Ile Pro Leu
        435                 440                 445
Thr Leu Gly Asp Leu Glu His Leu Leu Ile Leu Asn Leu Ser Arg Asn
    450                 455                 460
His Leu Ser Gly Gln Leu Pro Ala Glu Phe Gly Asn Leu Arg Ser Ile
465                 470                 475                 480
Gln Met Ile Asp Val Ser Phe Asn Leu Leu Ser Gly Val Ile Pro Thr
                485                 490                 495
Glu Leu Gly Gln Leu Gln Asn Leu Asn Ser Leu Ile Leu Asn Asn Asn
            500                 505                 510
Lys Leu His Gly Lys Ile Pro Asp Gln Leu Thr Asn Cys Phe Thr Leu
        515                 520                 525
Val Asn Leu Asn Val Ser Phe Asn Asn Leu Ser Gly Ile Val Pro Pro
    530                 535                 540
Met Lys Asn Phe Ser Arg Phe Ala Pro Ala Ser Phe Val Gly Asn Pro
545                 550                 555                 560
Tyr Leu Cys Gly Asn Trp Val Gly Ser Ile Cys Gly Pro Leu Pro Lys
                565                 570                 575
Ser Arg Val Phe Ser Arg Gly Ala Leu Ile Cys Ile Val Leu Gly Val
            580                 585                 590
Ile Thr Leu Leu Cys Met Ile Phe Leu Ala Val Tyr Lys Ser Met Gln
        595                 600                 605
Gln Lys Lys Ile Leu Gln Gly Ser Ser Lys Gln Ala Glu Gly Leu Thr
    610                 615                 620
Lys Leu Val Ile Leu His Met Asp Met Ala Ile His Thr Phe Asp Asp
625                 630                 635                 640
Ile Met Arg Val Thr Glu Asn Leu Asn Glu Lys Phe Ile Ile Gly Tyr
                645                 650                 655
Gly Ala Ser Ser Thr Val Tyr Lys Cys Ala Leu Lys Ser Ser Arg Pro
            660                 665                 670
Ile Ala Ile Lys Arg Leu Tyr Asn Gln Tyr Pro His Asn Leu Arg Glu
        675                 680                 685
Phe Glu Thr Glu Leu Glu Thr Ile Gly Ser Ile Arg His Arg Asn Ile
    690                 695                 700
Val Ser Leu His Gly Tyr Ala Leu Ser Pro Thr Gly Asn Leu Leu Phe
705                 710                 715                 720
Tyr Asp Tyr Met Glu Asn Gly Ser Leu Trp Asp Leu Leu His Gly Ser
                725                 730                 735
Leu Lys Lys Val Lys Leu Asp Trp Glu Thr Arg Leu Lys Ile Ala Val
            740                 745                 750
Gly Ala Ala Gln Gly Leu Ala Tyr Leu His His Asp Cys Thr Pro Arg
        755                 760                 765
Ile Ile His Arg Asp Ile Lys Ser Ser Asn Ile Leu Leu Asp Glu Asn
    770                 775                 780
Phe Glu Ala His Leu Ser Asp Phe Gly Ile Ala Lys Ser Ile Pro Ala
785                 790                 795                 800
Ser Lys Thr His Ala Ser Thr Tyr Val Leu Gly Thr Ile Gly Tyr Ile
                805                 810                 815
Asp Pro Glu Tyr Ala Arg Thr Ser Arg Ile Asn Glu Lys Ser Asp Ile
            820                 825                 830
Tyr Ser Phe Gly Ile Val Leu Leu Glu Leu Leu Thr Gly Lys Lys Ala
        835                 840                 845
Val Asp Asn Glu Ala Asn Leu His Gln Leu Ile Leu Ser Lys Ala Asp
    850                 855                 860
Asp Asn Thr Val Met Glu Ala Val Asp Pro Glu Val Thr Val Thr Cys
865                 870                 875                 880
Met Asp Leu Gly His Ile Arg Lys Thr Phe Gln Leu Ala Leu Leu Cys
                885                 890                 895
Thr Lys Arg Asn Pro Leu Glu Arg Pro Thr Met Leu Glu Val Ser Arg
            900                 905                 910
Val Leu Leu Ser Leu Val Pro Ser Leu Gln Val Ala Lys Lys Leu Pro
        915                 920                 925
Ser Leu Asp His Ser Thr Lys Lys Leu Gln Gln Glu Asn Glu Val Arg
    930                 935                 940
Asn Pro Asp Ala Glu Ala Ser Gln Trp Phe Val Gln Phe Arg Glu Val
945                 950                 955                 960
Ile Ser Lys Ser Ser Ile
                965
<210>5
<211>3533
<212>DNA
<213>玉米(Zea mays)
<400>5
cctacgctgc cactctatcg cccagccata cagcagctac cccgctgcct gtcactgagc  60
cagcgcggcg caagtgcgca aagccgagcg cgagaaccca cgaaaccaac ccagagcccc 120
cattaaggca ggctcgctgc agcacgtctc gcgctccatc gccgcctgtc ctcttcctgt 180
aatgtcactc ccccgatgcc tgtgcgcagc tcagtggcca tgacgacgac ggccgcccgt   240
gctctcgccg ccctcgtgct cgtcaccgcc gccgccgccg ccgccgccgt cgccgacgat   300
ggggcggcgc tggtggagat caagaagtcc ttccgcaacg tcggcaacgt actgtacgat   360
tgggccggcg acgactactg ctcctggcgc ggcgtcctgt gcgacaacgt cacgttcgcc   420
gtcgccgcgc tcaacctctc tggcctcaac cttgagggtg agatctctcc agccgtcggc   480
agcctcaaga gcctcgtctc catcgacctc aagtcaaatg gcctatccgg gcagatccct   540
gatgagattg gcgattgttc gtcacttagg acgctggact tttcattcaa caacttggac   600
ggcgacatac cattttcaat atcaaagctg aagcacctgg agaacttgat attgaagaac   660
aaccggctga ttggtgcgat cccctcaaca ttgtcacagc tcccaaattt gaagattctg   720
gacttggcac aaaacaaact gactggggag ataccgaggc ttatctattg gaacgaggtt   780
cttcaatact tgggtttgcg gggaaatcat ttagaaggaa gcctctctcc tgatatgtgc   840
cagcttactg gcctttggta ctttgatgtg aagaacaata gtttgactgg ggcgatacca   900
gacaccattg ggaactgtac aagttttcag gtcttggatt tgtcttacaa ccgctttact   960
ggaccaatcc cattcaacat tggtttccta caagtggcta cactatcctt gcaagggaac  1020
aagttcactg gcccaattcc ttcagtaatt ggccttatgc aggctctcgc tgtcctagat  1080
ctgagttaca accaattatc tggtcctata ccatctatac taggcaactt gacatacact  1140
gagaagctgt acatgcaagg caacaggtta actggatcga taccaccaga gctaggaaat  1200
atgtcaacac ttcattacct agaactgaat gataatcaac ttactgggtc aattccacca  1260
gagcttggaa ggctaacagg cttgtttgac ctgaaccctg cgaataacca ccttgaagga  1320
ccaattcctg acaacctaag ttcatgtgtg aatctcaata gcttcaatgc ttatggcaac  1380
aagttaaatg gaaccattcc tcgttcgctg cggaaacttg aaagcatgac ctatttaaat  1440
ctttcatcaa atttcataag tggttctatt cctattgagc tatcaaggat caacaatttg  1500
gacacgttgg gcttatcctg taacatgatg acgggtccaa ttccatcatc cattggcaac  1560
ctagagcatc tattgaggct taacttgagc aagaatgatc tagttggatt catccctgcg  1620
gagtttggta atttgggaag tgtcatggag attgatttat cctataatca tcttggtggt  1680
ctgattcctc aagaacttgg aatgctgcaa aacctgatgt tgctaaaact ggaaaacaac  1740
aatataactg gcgatgtctc ttctctgatg aactgcttca gcctcaatat cttaaatgtg  1800
tcatacaata atttagctgg tgctgtccct actgacaaca acttcacacg gttttcacat  1860
gacagctttt taggtaatcc tggactctgt ggatattggc ttggttcttc atgtcgttcc  1920
actggccacc gagacaaacc gccaatctca aaggctgcca taattggtgt tgctgtgggt  1980
ggacttgtta tcctcctgat gatcttagta gctgtatgca ggccacacca tccacctgct  2040
tttaaagatg ccactgtaag caagccagtg agcaatggtc cacccaagct gatgatcctt  2100
catatgaaca tggctcttca tgtctttgat gatataatga ggatgactga gaacttgagt  2160
gagaaataca tcattggata cggggcatca agtacagttt ataaatgtgt tctaaagaat  2220
tgcaaaccag tggcaataaa aaagctgtat gcccactacc ctcagagcct taaggaattt  2280
gaaactgagc tcgagactgt tggtagcatc aaacaccgga atctagtcag ccttcaaggg  2340
tactcgttgt cacctgttgg gaacctcctc ttttatgatt atatggagag tggcagctta  2400
tgggatgttt tacatgaagg ctcatccaag gagaacaaac ttgactgggt gactcgccta  2460
cggatcgctc ttggtgcagc tcaaggcctc gcttaccttc accatgactg cagcccacga  2520
ataattcacc gggacgtaaa atcaaagaat atactcctcg acaaagatta tgaggcccat  2580
cttacagact tcggcatcgc taagagctta tgtgtctcga agactcacac gtcaacctac  2640
gtcatgggca ctattggtta cattgatccc gagtacgccc gcacctcccg cctcaacgag  2700
aagtctgatg tctacagcta cggcatcgtt ctgctggagc tgctgaccgg caagaagcca  2760
gtggacaacg agtgcaatct ccatcacttg atcctatcga agacggcgag caacgaggtc  2820
atggagacgg tggaccccga cgtgggagac acctgcaagg acctgggcga ggtgaagaag  2880
ctgttccagc tggcgctcct ctgcaccaag cggcagccct cggaccggcc gacgatgcac 2940
gaggtggtgc gcgtccttga ctgcctggtg aacccggagc cgccgccgca gccgcagcag 3000
cagcagcaga aggcgcacgc gcaccaccag ctgccgccgc agccgtcgcc gccggcctac 3060
gtcgacgagt acgtcagcct gcggggcacc ggcgccctct cctgcgccaa ctcgtccagc 3120
acctcggacg ccgagctgtt cctcaagttc ggcgaggcca tctcgcagaa catggtgtag 3180
gggaagacgt agacgttcgg tgaggcgcct tgagtgaggc cgattgcagg gggagtagtt 3240
tgactgacat tttgtgggac gcagcgcagg agattaacat gggactcagt agctagggtg 3300
ttgttagctg taaaaaaagt catgtgacgc aagagcagcg gagcttcttc ctcttcttta 3360
tcccccctcc ccatttttct ttggtggtct aacttactag gaggctgtat tgatccatca 3420
tcatctctcc cgttcctctg cttgatgatc ttttgtgact ttcgcggtcc tctgtattga 3480
tccatgatct tttgtgacct ctgctttatt ttctgggatc tttacctcag aac        3533
<210>6
<211>994
<212>PRT
<213>玉米(Zea mays)
<400>6
Met Pro Val Arg Ser Ser Val Ala Met Thr Thr Thr Ala Ala Arg Ala
 1               5                  10                  15
Leu Ala Ala Leu Val Leu Val Thr Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Val
            20                  25                  30
Ala Asp Asp Gly Ala Ala Leu Val Glu Ile Lys Lys Ser Phe Arg Asn
        35                  40                  45
Val Gly Asn Val Leu Tyr Asp Trp Ala Gly Asp Asp Tyr Cys Ser Trp
    50                  55                  60
Arg Gly Val Leu Cys Asp Asn Val Thr Phe Ala Val Ala Ala Leu Asn
65                  70                  75                  80
Leu Ser Gly Leu Asn Leu Glu Gly Glu Ile Ser Pro Ala Val Gly Ser
                85                  90                  95
Leu Lys Ser Leu Val Ser Ile Asp Leu Lys Ser Asn Gly Leu Ser Gly
            100                 105                 110
Gln Ile Pro Asp Glu Ile Gly Asp Cys Ser Ser Leu Arg Thr Leu Asp
        115                 120                 125
Phe Ser Phe Asn Asn Leu Asp Gly Asp Ile Pro Phe Ser Ile Ser Lys
    130                 135                 140
Leu Lys His Leu Glu Asn Leu Ile Leu Lys Asn Asn Arg Leu Ile Gly
145                 150                 155                 160
Ala Ile Pro Ser Thr Leu Ser Gln Leu Pro Asn Leu Lys Ile Leu Asp
                165                 170                 175
Leu Ala Gln Asn Lys Leu Thr Gly Glu Ile Pro Arg Leu Ile Tyr Trp
            180                 185                 190
Asn Glu Val Leu Gln Tyr Leu Gly Leu Arg Gly Asn His Leu Glu Gly
        195                 200                 205
Ser Leu Ser Pro Asp Met Cys Gln Leu Thr Gly Leu Trp Tyr Phe Asp
    210                 215                 220
Val Lys Asn Asn Ser Leu Thr Gly Ala Ile Pro Asp Thr Ile Gly Asn
225                 230                 235                 240
Cys Thr Ser Phe Gln Val Leu Asp Leu Ser Tyr Asn Arg Phe Thr Gly
                245                 250                 255
Pro Ile Pro Phe Asn Ile Gly Phe Leu Gln Val Ala Thr Leu Ser Leu
           260                 265                 270
Gln Gly Asn Lys Phe Thr Gly Pro Ile Pro Ser Val Ile Gly Leu Met
        275                 280                 285
Gln Ala Leu Ala Val Leu Asp Leu Ser Tyr Asn Gln Leu Ser Gly Pro
    290                 295                 300
Ile Pro Ser Ile Leu Gly Asn Leu Thr Tyr Thr Glu Lys Leu Tyr Met
305                 310                 315                 320
Gln Gly Asn Arg Leu Thr Gly Ser Ile Pro Pro Glu Leu Gly Asn Met
                325                 330                 335
Ser Thr Leu His Tyr Leu Glu Leu Asn Asp Asn Gln Leu Thr Gly Ser
            340                 345                 350
Ile Pro Pro Glu Leu Gly Arg Leu Thr Gly Leu Phe Asp Leu Asn Pro
        355                 360                 365
Ala Asn Asn His Leu Glu Gly Pro Ile Pro Asp Asn Leu Ser Ser Cys
    370                 375                 380
Val Asn Leu Asn Ser Phe Asn Ala Tyr Gly Asn Lys Leu Asn Gly Thr
385                 390                 395                 400
Ile Pro Arg Ser Leu Arg Lys Leu Glu Ser Met Thr Tyr Leu Asn Leu
                405                 410                 415
Ser Ser Asn Phe Ile Ser Gly Ser Ile Pro Ile Glu Leu Ser Arg Ile
            420                 425                 430
Asn Asn Leu Asp Thr Leu Gly Leu Ser Cys Asn Met Met Thr Gly Pro
        435                 440                 445
Ile Pro Ser Ser Ile Gly Asn Leu Glu His Leu Leu Arg Leu Asn Leu
    450                 455                 460
Ser Lys Asn Asp Leu Val Gly Phe Ile Pro Ala Glu Phe Gly Asn Leu
465                 470                 475                 480
Gly Ser Val Met Glu Ile Asp Leu Ser Tyr Asn His Leu Gly Gly Leu
                485                 490                 495
Ile Pro Gln Glu Leu Gly Met Leu Gln Asn Leu Met Leu Leu Lys Leu
            500                 505                 510
Glu Asn Asn Asn Ile Thr Gly Asp Val Ser Ser Leu Met Asn Cys Phe
        515                 520                 525
Ser Leu Asn Ile Leu Asn Val Ser Tyr Asn Asn Leu Ala Gly Ala Val
    530                 535                 540
Pro Thr Asp Asn Asn Phe Thr Arg Phe Ser His Asp Ser Phe Leu Gly
545                 550                 555                 560
Asn Pro Gly Leu Cys Gly Tyr Trp Leu Gly Ser Ser Cys Arg Ser Thr
                565                 570                 575
Gly His Arg Asp Lys Pro Pro Ile Ser Lys Ala Ala Ile Ile Gly Val
            580                 585                 590
Ala Val Gly Gly Leu Val Ile Leu Leu Met Ile Leu Val Ala Val Cys
        595                 600                 605
Arg Pro His His Pro Pro Ala Phe Lys Asp Ala Thr Val Ser Lys Pro
    610                 615                 620
Val Ser Asn Gly Pro Pro Lys Leu Met Ile Leu His Met Asn Met Ala
625                 630                 635                 640
Leu His Val Phe Asp Asp Ile Met Arg Met Thr Glu Asn Leu Ser Glu
                645                 650                 655
Lys Tyr Ile Ile Gly Tyr Gly Ala Ser Ser Thr Val Tyr Lys Cys Val
            660                 665                 670
Leu Lys Asn Cys Lys Pro Val Ala Ile Lys Lys Leu Tyr Ala His Tyr
        675                 680                 685
Pro Gln Ser Leu Lys Glu Phe Glu Thr Glu Leu Glu Thr Val Gly Ser
    690                 695                 700
Ile Lys His Arg Asn Leu Val Ser Leu Gln Gly Tyr Ser Leu Ser Pro
705                 710                 715                 720
Val Gly Asn Leu Leu Phe Tyr Asp Tyr Met Glu Ser Gly Ser Leu Trp
                725                 730                 735
Asp Val Leu His Glu Gly Ser Ser Lys Glu Asn Lys Leu Asp Trp Val
            740                 745                 750
Thr Arg Leu Arg Ile Ala Leu Gly Ala Ala Gln Gly Leu Ala Tyr Leu
        755                 760                 765
His His Asp Cys Ser Pro Arg Ile Ile His Arg Asp Val Lys Ser Lys
    770                 775                 780
Asn Ile Leu Leu Asp Lys Asp Tyr Glu Ala His Leu Thr Asp Phe Gly
785                 790                 795                 800
Ile Ala Lys Ser Leu Cys Val Ser Lys Thr His Thr Ser Thr Tyr Val
                805                 810                 815
Met Gly Thr Ile Gly Tyr Ile Asp Pro Glu Tyr Ala Arg Thr Ser Arg
            820                 825                 830
Leu Asn Glu Lys Ser Asp Val Tyr Ser Tyr Gly Ile Val Leu Leu Glu
        835                 840                 845
Leu Leu Thr Gly Lys Lys Pro Val Asp Asn Glu Cys Asn Leu His His
    850                 855                 860
Leu Ile Leu Ser Lys Thr Ala Ser Asn Glu Val Met Glu Thr Val Asp
865                 870                 875                 880
Pro Asp Val Gly Asp Thr Cys Lys Asp Leu Gly Glu Val Lys Lys Leu
                885                 890                 895
Phe Gln Leu Ala Leu Leu Cys Thr Lys Arg Gln Pro Ser Asp Arg Pro
            900                 905                 910
Thr Met His Glu Val Val Arg Val Leu Asp Cys Leu Val Asn Pro Glu
        915                 920                 925
Pro Pro Pro Gln Pro Gln Gln Gln Gln Gln Lys Ala His Ala His His
    930                 935                 940
Gln Leu Pro Pro Gln Pro Ser Pro Pro Ala Tyr Val Asp Glu Tyr Val
945                 950                 955                 960
Ser Leu Arg Gly Thr Gly Ala Leu Ser Cys Ala Asn Ser Ser Ser Thr
                965                 970                 975
Ser Asp Ala Glu Leu Phe Leu Lys Phe Gly Glu Ala Ile Ser Gln Asn
            980                 985                 990
Met Val
<210>7
<211>3224
<212>DNA
<213>玉米(Zea mays)
<400>7
gagaaacact gctggagatc aagaaatcct tccgcgacgg cggcaacgcg ctgtacgatt   60
ggtccggcga cggcgcgtcg ccgggctact gctcgtggcg cggcgtgcta tgcgacaacg  120
tcaccttcgc tgtcgcggcg ctcaacctct ctgggctcaa tctcgagggt gaaatctcag  180
cggccatcgg gagtctgcaa cgtcttgtct caatcgattt gaagtcgaat ggactctctg  240
gacagatccc cgatgagatt ggtgattgtt ctttgctcga aactttggat ttgtcatcta  300
acaatctaga aggagacata ccattctcca tgtccaagct gaagcacctt gagaacttga  360
ttttgaagaa caacaaactg gtgggagtga tcccatcgac actctctcaa cttccaaatt  420
tgaagatatt ggacttggct caaaacaagt taagtggtga aattccgaat ctaatatatt  480
ggaatgaggt tcttcaatac ttgggattgc gaagcaatag tttagaagga agcctctctc  540
ccgatatgtg ccagttaact ggtctgtggt actttgatgt gaagaacaat agcttgacgg  600
gtgcaatacc agaaaccata gggaactgta cgagctttca ggtcttagat ttgtcaaaca  660
atcatcttac tggagaaatc ccgttcaata ttggtttcct gcaagtggct acgttatctt  720
tgcaagggaa caagttctct ggtcctatac catcagtgat tggccttatg caggcgcttg  780
cagtgctaga tctgagtttc aatgagctat ctggcccaat accctctata ctgggcaact  840
tgacatacac tgagaaatta tacctgcaag gcaataggtt aactggattg ataccgccag  900
agcttggtaa tatgtcgaca ctgcattacc tggaactgaa cgacaatctg ttgactgggt  960
tcattcctcc tgatcttgga aaacttacag aattgtttga attgaacctt gcaaacaaca 1020
accttatagg acctatccct gagaatttaa gttcatgtgc aaatctcatt agtttcaatg 1080
cttatggcaa taaattgaat ggaaccattc cacgttcatt tcacaagctt gagagtctga 1140
cttatctgaa tctgtcatca aatcatctca gtggagcact tccaattgag gttgcaagaa 1200
tgagaaattt ggacactctg gacttatcct gtaacatgat cactggttca attccctcgg 1260
ctattgggaa actagagcat cttttgaggc tcaacttaag caaaaataat gtggctggac 1320
acattcctgc tgaatttggg aacttaagga gcatcatgga gattgatttg tcttacaacc 1380
acctcagtgg cctgattcct caagaggttg ggatgctaca aaatttgata ctgttaaaat 1440
tagaaagcaa taatattact ggagatgtct cttcacttat ttactgcttg agtctcaata 1500
tcttaaatgt atcatacaac catctttatg gtactgtacc tacagacaac aacttctcac 1560
gattttcacc cgacagcttc ttgggtaacc ctggactttg tggctattgg cttcactctg 1620
cttcatgcac acaattatcc aatgcagagc aaatgaagag atcctctagc gcaaaggcct 1680
caatgtttgc agctattggt gttggtgccg tattgcttgt tattatgctc gttatcctag 1740
tagttatttg ctggccacat aactctccag tgctcaaaga tgtctctgta aacaaaccag 1800
ataaccttgc ttcagcatca aacaacattc atcccaagct tgtgatcctc cacatgaaca 1860
tggccctcta tgtatatgat gatataatga ggatgactga aaacttgagc gaaaaataca 1920
ttattggtta tggagcctca agtacagtct acagatgcga cctgaagaac tgcaagccaa 1980
ttgcgattaa aaagctgtat gctcactacc ctcagagctt gaaggaattc gagactgaac 2040
ttgagactgt tggaagcatc aaacaccgga atcttgtaag ccttcagggg tactccctgt 2100
caccatctgg gaatctcctc ttctatgatt acatggaaaa tggcagcctc tgggacattt 2160
tacatgcttc atcgaagaaa aagaaactcg attgggaggc tcgcctcaag attgctctcg 2220
gagctgctca aggcctggct tatcttcacc atgaatgcag tccacgaata atccacaggg 2280
atgtgaagtc aaagaatatc ctcctagaca aagactacga ggctcatctt gctgacttcg 2340
gtattgccaa gagcttgtgt gtgtcgaaga cgcacacatc aacgtacgtg atgggcacca 2400
ttggctacat tgaccctgag tatgcacgga catcccggat caacgagaaa tcggatgtgt 2460
acagctacgg cattgtcttg ctggagctgc ttaccggcaa aaagcctgtc gacgacgagt 2520
gcaaccttca ccacttgatc ctatccaaag ccgcagaaaa cacggtcatg gagacggtag 2580
accaggacat caecgacacg tgcaaggacc tcggcgaggt caagaaggtg ttccagctgg 2640
cgctcctttg cagcaagagg cagccgtcgg atcgaccgac catgcacgag gtcgcgcgcg 2700
tcctggacag cctcgtctgc ccagcaggcc cgcccccgaa gcaggcgcag gcgcaggcac 2760
aggcacaggc gtcggagaag ccgtccacca cggcgccgag ctatgtcagc gagtacgtcg 2820
gcctacgagg cggcggcggc ggcagcgccc tctcctgcac caactcgtcg agcgcgtccg 2880
acgccgagct cttcatgaag tttggcgagg tgatctcgcg gagcacggaa tagtccaata 2940
gatcgacgat cattttgtgt tacagtttac aataggtgtc tggccggcgc cctgtgatgt 3000
gactcgctgt aaatatgctg ctgccttctc gttgggactc cactaggcac tagtagctat 3060
ttttctccgt tatgcacgtc tctctctttt tttttgctgg gaaactcgaa ctgtaactaa 3120
aggaatggat ttatgtgcag gctgcgttta ctgacaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3180
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaa                  3224
<210>8
<211>976
<212>PRT
<213>玉米(Zea mays)
<400>8
Glu Thr Leu Leu Glu Ile Lys Lys Ser Phe Arg Asp Gly Gly Asn Ala
 1               5                  10                  15
Leu Tyr Asp Trp Ser Gly Asp Gly Ala Ser Pro Gly Tyr Cys Ser Trp
            20                  25                  30
Arg Gly Val Leu Cys Asp Asn Val Thr Phe Ala Val Ala Ala Leu Asn
        35                  40                  45
Leu Ser Gly Leu Asn Leu Glu Gly Glu Ile Ser Ala Ala Ile Gly Ser
    50                  55                  60
Leu Gln Arg Leu Val Ser Ile Asp Leu Lys Ser Asn Gly Leu Ser Gly
65                  70                  75                  80
Gln Ile Pro Asp Glu Ile Gly Asp Cys Ser Leu Leu Glu Thr Leu Asp
                85                  90                  95
Leu Ser Ser Asn Asn Leu Glu Gly Asp Ile Pro Phe Ser Met Ser Lys
            100                 105                 110
Leu Lys His Leu Glu Asn Leu Ile Leu Lys Asn Asn Lys Leu Val Gly
        115                 120                 125
Val Ile Pro Ser Thr Leu Ser Gln Leu Pro Asn Leu Lys Ile Leu Asp
    130                 135                 140
Leu Ala Gln Asn Lys Leu Ser Gly Glu Ile Pro Asn Leu Ile Tyr Trp
145                 150                 155                 160
Asn Glu Val Leu Gln Tyr Leu Gly Leu Arg Ser Asn Ser Leu Glu Gly
                165                 170                 175
Ser Leu Ser Pro Asp Met Cys Gln Leu Thr Gly Leu Trp Tyr Phe Asp
            180                 185                 190
Val Lys Asn Asn Ser Leu Thr Gly Ala Ile Pro Glu Thr Ile Gly Asn
        195                 200                 205
Cys Thr Ser Phe Gln Val Leu Asp Leu Ser Asn Asn His Leu Thr Gly
    210                 215                 220
Glu Ile Pro Phe Asn Ile Gly Phe Leu Gln Val Ala Thr Leu Ser Leu
225                 230                 235                 240
Gln Gly Asn Lys Phe Ser Gly Pro Ile Pro Ser Val Ile Gly Leu Met
                245                 250                 255
Gln Ala Leu Ala Val Leu Asp Leu Ser Phe Asn Glu Leu Ser Gly Pro
            260                 265                 270
Ile Pro Ser Ile Leu Gly Asn Leu Thr Tyr Thr Glu Lys Leu Tyr Leu
        275                 280                 285
Gln Gly Asn Arg Leu Thr Gly Leu Ile Pro Pro Glu Leu Gly Asn Met
    290                 295                 300
Ser Thr Leu His Tyr Leu Glu Leu Asn Asp Asn Leu Leu Thr Gly Phe
305                 310                 315                 320
Ile Pro Pro Asp Leu Gly Lys Leu Thr Glu Leu Phe Glu Leu Asn Leu
                325                 330                 335
Ala Asn Asn Asn Leu Ile Gly Pro Ile Pro Glu Asn Leu Ser Ser Cys
            340                 345                 350
Ala Asn Leu Ile Ser Phe Asn Ala Tyr Gly Asn Lys Leu Asn Gly Thr
        355                 360                 365
Ile Pro Arg Ser Phe His Lys Leu Glu Ser Leu Thr Tyr Leu Asn Leu
    370                 375                 380
Ser Ser Asn His Leu Ser Gly Ala Leu Pro Ile Glu Val Ala Arg Met
385                 390                 395                 400
Arg Asn Leu Asp Thr Leu Asp Leu Ser Cys Asn Met Ile Thr Gly Ser
                405                 410                 415
Ile Pro Ser Ala Ile Gly Lys Leu Glu His Leu Leu Arg Leu Asn Leu
            420                 425                 430
Ser Lys Asn Asn Val Ala Gly His Ile Pro Ala Glu Phe Gly Asn Leu
        435                 440                 445
Arg Ser Ile Met Glu Ile Asp Leu Ser Tyr Asn His Leu Ser Gly Leu
    450                 455                 460
Ile Pro Gln Glu Val Gly Met Leu Gln Asn Leu Ile Leu Leu Lys Leu
465                 470                 475                 480
Glu Ser Asn Asn Ile Thr Gly Asp Val Ser Ser Leu Ile Tyr Cys Leu
                485                 490                 495
Ser Leu Asn Ile Leu Asn Val Ser Tyr Asn His Leu Tyr Gly Thr Val
            500                 505                 510
Pro Thr Asp Asn Asn Phe Ser Arg Phe Ser Pro Asp Ser Phe Leu Gly
        515                 520                 525
Asn Pro Gly Leu Cys Gly Tyr Trp Leu His Ser Ala Ser Cys Thr Gln
    530                 535                 540
Leu Ser Asn Ala Glu Gln Met Lys Arg Ser Ser Ser Ala Lys Ala Ser
545                 550                 555                 560
Met Phe Ala Ala Ile Gly Val Gly Ala Val Leu Leu Val Ile Met Leu
                565                 570                 575
Val Ile Leu Val Val Ile Cys Trp Pro His Asn Ser Pro Val Leu Lys
            580                 585                 590
Asp Val Ser Val Asn Lys Pro Asp Asn Leu Ala Ser Ala Ser Asn Asn
        595                 600                 605
Ile His Pro Lys Leu Val Ile Leu His Met Asn Met Ala Leu Tyr Val
    610                 615                 620
Tyr Asp Asp Ile Met Arg Met Thr Glu Asn Leu Ser Glu Lys Tyr Ile
625                 630                 635                 640
Ile Gly Tyr Gly Ala Ser Ser Thr Val Tyr Arg Cys Asp Leu Lys Asn
                645                 650                 655
Cys Lys Pro Ile Ala Ile Lys Lys Leu Tyr Ala His Tyr Pro Gln Ser
            660                 665                 670
Leu Lys Glu Phe Glu Thr Glu Leu Glu Thr Val Gly Ser Ile Lys His
        675                 680                 685
Arg Asn Leu Val Ser Leu Gln Gly Tyr Ser Leu Ser Pro Ser Gly Asn
    690                 695                 700
Leu Leu Phe Tyr Asp Tyr Met Glu Asn Gly Ser Leu Trp Asp Ile Leu
705                 710                 715                 720
His Ala Ser Ser Lys Lys Lys Lys Leu Asp Trp Glu Ala Arg Leu Lys
                725                 730                 735
Ile Ala Leu Gly Ala Ala Gln Gly Leu Ala Tyr Leu His His Glu Cys
            740                 745                 750
Ser Pro Arg Ile Ile His Arg Asp Val Lys Ser Lys Asn Ile Leu Leu
        755                 760                 765
Asp Lys Asp Tyr Glu Ala His Leu Ala Asp Phe Gly Ile Ala Lys Ser
    770                 775                 780
Leu Cys Val Ser Lys Thr His Thr Ser Thr Tyr Val Met Gly Thr Ile
785                 790                 795                 800
Gly Tyr Ile Asp Pro Glu Tyr Ala Arg Thr Ser Arg Ile Asn Glu Lys
                805                 810                 815
Ser Asp Val Tyr Ser Tyr Gly Ile Val Leu Leu Glu Leu Leu Thr Gly
            820                 825                 830
Lys Lys Pro Val Asp Asp Glu Cys Asn Leu His His Leu Ile Leu Ser
        835                 840                 845
Lys Ala Ala Glu Asn Thr Val Met Glu Thr Val Asp Gln Asp Ile Thr
    850                 855                 860
Asp Thr Cys Lys Asp Leu Gly Glu Val Lys Lys Val Phe Gln Leu Ala
865                 870                 875                 880
Leu Leu Cys Ser Lys Arg Gln Pro Ser Asp Arg Pro Thr Met His Glu
                885                 890                 895
Val Ala Arg Val Leu Asp Ser Leu Val Cys Pro Ala Gly Pro Pro Pro
            900                 905                 910
Lys Gln Ala Gln Ala Gln Ala Gln Ala Gln Ala Ser Glu Lys Pro Ser
        915                 920                 925
Thr Thr Ala Pro Ser Tyr Val Ser Glu Tyr Val Gly Leu Arg Gly Gly
    930                 935                 940
Gly Gly Gly Ser Ala Leu Ser Cys Thr Asn Ser Ser Ser Ala Ser Asp
945                 950                 955                 960
Ala Glu Leu Phe Met Lys Phe Gly Glu Val Ile Ser Arg Ser Thr Glu
                965                 970                 975
<210>9
<211>2937
<212>DNA
<213>水稻(Oryza sativa)
<400>9
atgacgccgg cgccggcggc cgcctcctac cgcgctctcg tcgcgctcct gctcgtcgcc   60
gtcgccgttg ccgatgatgg gtcgacgctg ctggagatca agaagtcctt ccgcaatgtg  120
gacaacgtac tgtacgattg ggccggcggc gactactgct cgtggcgcgg cgtcctctgc  180
gacaacgtca ccttcgccgt cgccgcgctc aacctatccg ggctcaacct cggaggcgag  240
atctctccgg ccgtcggcag gttgaagggc atcgtctcga ttgacttgaa gtcgaatggg  300
ctgtctgggc agatccctga tgagattggc gattgttcat cactaaaaac tctggatttg  360
tctttcaata gcttggatgg ggacattccg ttctcagtat cgaagctgaa gcacattgag  420
agcttgatat tgaagaacaa ccaactgatc ggagtgatcc catcaacgct ctcacagctc  480
ccaaatttga agattttgga cttggcacag aacaaactga gtggagagat accaagactg  540
atatattgga acgaggttct tcaatacttg ggattacgcg gtaataattt agaaggcagc  600
atctccccag atatatgcca gttgactggg ctttggtact ttgacgtaaa gaacaacagc  660
ttgactgggc cgataccaga aaccattggg aactgtacaa gttttcaggt cttggatttg  720
tcttacaata aactttctgg atcaattcct ttcaacattg gtttcctaca agttgctaca  780
ctatctttgc aagggaacat gtttactggt cctattccat cagttattgg acttatgcag  840
gctctcgctg tactggatct gagttacaac caattgtctg gtcctattcc atcgatacta  900
ggcaatttaa catacactga gaagctgtat atgcaaggca ataagttaac aggtccaata  960
ccacctgagc ttggaaatat gtcaaccctt cattacttag aacttaacga taatcaactt 1020
agcgggttca ttcctccaga gttcggaaag ctaacagggt tatttgactt aaaccttgca 1080
aacaacaact ttgaaggtcc aatccctgat aacataagct catgtgtgaa tctcaatagc 1140
ttcaatgctt atggcaacag attaaatggg accattcctc cttcattgca taaacttgag 1200
agcatgactt atttgaattt gtcatcaaat tttctaagtg gttctattcc tattgagcta 1260
tcgagaatca acaatttgga caccttggat ttatcctgta acatgattac tggcccaatt 1320
ccatcaacca ttgggagttt ggagcatcta ttaagactta acttgagcaa caatggtcta 1380
gtaggattca ttcctgcaga aattggcaac ttgaggagta tcatggagat tgatatgtcc 1440
aacaatcatc ttggcggttt gattcctcaa gaactcggaa tgctgcaaaa tctgatgttg 1500
ttaaatctca aaaacaacaa cataactggg gatgtctctt cactgatgaa ctgcttcagc 1560
ctcaatatct taaatgtatc ctataataat ttggctggtg ttgtacctac tgataacaac 1620
ttctcacggt tttcgcctga cagctttttg ggtaatccag gactttgtgg atattggctt 1680
ggttcttcgt gccgttcatc tggccatcaa cagaaaccac taatctcaaa ggctgcaata 1740
cttggaattg ccgtgggtgg gcttgttatc ctcctgatga tcttagtagc ggtctgcagg 1800
cctcatagtc cacctgtttt caaagatgtc tctgttagca aaccagtgag caatgttccc 1860
cccaagctgg ttatccttca tatgaacctt tcccttcttg tatacgagga tataatgacg 1920
atgactgaaa acctgagtga gaagtacatc attgggtacg gagcatccag cacggtttat 1980
aaatgtgttt cgaagaaccg caaaccagtg gcagtaaaaa agctatatgc ccactatcca 2040
cagagcttca aggaatttga aactgagctt gagactgttg gtagcatcaa acaccggaat 2100
ctagtcagtc ttcaaggata ttccctatct cctgttggaa atcttctctt ctacgattac 2160
atggaaaatg gaagcctctg ggatgttttg catgaaggtc caactaagaa gaaaaaactt 2220
gattgggaaa ctcgtctacg aattgctcta ggtgcggccc aaggccttgc ttatcttcat 2280
catgactgta gcccacggat aatacacagg gatgtgaaat caaaaaatat actccttgat 2340
aaagattatg aggcacatct tacagacttt ggcattgcta agagtttgtg tgtttcaaaa 2400
actcacacgt ccacctatgt catgggaact attggctata tcgatcctga gtatgctcgc 2460
acctcccgtc tcaatgaaaa gtctgatgtc tacagctatg gcattgttct gcttgagctg 2520
ctgaccggaa aaaagccagt ggacaacgag tgcaatctcc atcacttgat cttgtcaaag 2580
acggctaaca atgctgtcat ggagacagtc gacccggaca ttgcagacac ttgcaaggat 2640
cttggtgagg tcaagaaggt gttccagctg gcgctccttt gcaccaagag acaaccatcg 2700
gatcggccga caatgcacga ggttgtgcgc gtcctggact gcctagttcg tcccgacccg 2760
ccaccgaagt ccgcacagca gctggccatg ccgcagcggc ctgctgtccc gagctacatc 2820
aacgagtatg tcagcttaag aggcaccagc gtgctctcct gcgccaactc gtcgtgtact 2880
tccgatgctg agctgtttct caagtttggc gaggtcattt ctcagaacac agagtag    2937
<210>10
<211>978
<212>PRT
<213>水稻(Oryza sativa)
<400>10
Met Thr Pro Ala Pro Ala Ala Ala Ser Tyr Arg Ala Leu Val Ala Leu
 1               5                  10                  15
Leu Leu Val Ala Val Ala Val Ala Asp Asp Gly Ser Thr Leu Leu Glu
            20                  25                  30
Ile Lys Lys Ser Phe Arg Asn Val Asp Asn Val Leu Tyr Asp Trp Ala
        35                  40                  45
Gly Gly Asp Tyr Cys Ser Trp Arg Gly Val Leu Cys Asp Asn Val Thr
    50                  55                  60
Phe Ala Val Ala Ala Leu Asn Leu Ser Gly Leu Asn Leu Gly Gly Glu
65                  70                  75                  80
Ile Ser Pro Ala Val Gly Arg Leu Lys Gly Ile Val Ser Ile Asp Leu
                85                  90                  95
Lys Ser Asn Gly Leu Ser Gly Gln Ile Pro Asp Glu Ile Gly Asp Cys
            100                 105                 110
Ser Ser Leu Lys Thr Leu Asp Leu Ser Phe Asn Ser Leu Asp Gly Asp
        115                 120                 125
Ile Pro Phe Ser Val Ser Lys Leu Lys His Ile Glu Ser Leu Ile Leu
    130                 135                 140
Lys Asn Asn Gln Leu Ile Gly Val Ile Pro Ser Thr Leu Ser Gln Leu
145                 150                 155                 160
Pro Asn Leu Lys Ile Leu Asp Leu Ala Gln Asn Lys Leu Ser Gly Glu
                165                 170                 175
Ile Pro Arg Leu Ile Tyr Trp Asn Glu Val Leu Gln Tyr Leu Gly Leu
            180                 185                 190
Arg Gly Asn Asn Leu Glu Gly Ser Ile Ser Pro Asp Ile Cys Gln Leu
        195                 200                 205
Thr Gly Leu Trp Tyr Phe Asp Val Lys Asn Asn Ser Leu Thr Gly Pro
    210                 215                 220
Ile Pro Glu Thr Ile Gly Asn Cys Thr Ser Phe Gln Val Leu Asp Leu
225                 230                 235                 240
Ser Tyr Asn Lys Leu Ser Gly Ser Ile Pro Phe Asn Ile Gly Phe Leu
                245                 250                 255
Gln Val Ala Thr Leu Ser Leu Gln Gly Asn Met Phe Thr Gly Pro Ile
            260                 265                 270
Pro Ser Val Ile Gly Leu Met Gln Ala Leu Ala Val Leu Asp Leu Ser
        275                 280                 285
Tyr Asn Gln Leu Ser Gly Pro Ile Pro Ser Ile Leu Gly Asn Leu Thr
    290                 295                 300
Tyr Thr Glu Lys Leu Tyr Met Gln Gly Asn Lys Leu Thr Gly Pro Ile
305                 310                 315                 320
Pro Pro Glu Leu Gly Asn Met Ser Thr Leu His Tyr Leu Glu Leu Asn
                325                 330                 335
Asp Asn Gln Leu Ser Gly Phe Ile Pro Pro Glu Phe Gly Lys Leu Thr
            340                 345                 350
Gly Leu Phe Asp Leu Asn Leu Ala Asn Asn Asn Phe Glu Gly Pro Ile
        355                 360                 365
Pro Asp Asn Ile Ser Ser Cys Val Asn Leu Asn Ser Phe Asn Ala Tyr
    370                 375                 380
Gly Asn Arg Leu Asn Gly Thr Ile Pro Pro Ser Leu His Lys Leu Glu
385                 390                 395                 400
Ser Met Thr Tyr Leu Asn Leu Ser Ser Asn Phe Leu Ser Gly Ser Ile
                405                 410                 415
Pro Ile Glu Leu Ser Arg Ile Asn Asn Leu Asp Thr Leu Asp Leu Ser
            420                 425                 430
Cys Asn Met Ile Thr Gly Pro Ile Pro Ser Thr Ile Gly Ser Leu Glu
        435                 440                 445
His Leu Leu Arg Leu Asn Leu Ser Asn Asn Gly Leu Val Gly Phe Ile
    450                 455                 460
Pro Ala Glu Ile Gly Asn Leu Arg Ser Ile Met Glu Ile Asp Met Ser
465                 470                 475                 480
Asn Asn His Leu Gly Gly Leu Ile Pro Gln Glu Leu Gly Met Leu Gln
                485                 490                 495
Asn Leu Met Leu Leu Asn Leu Lys Asn Asn Asn Ile Thr Gly Asp Val
            500                 505                 510
Ser Ser Leu Met Asn Cys Phe Ser Leu Asn Ile Leu Asn Val Ser Tyr
        515                 520                 525
Asn Asn Leu Ala Gly Val Val Pro Thr Asp Asn Asn Phe Ser Arg Phe
    530                 535                 540
Ser Pro Asp Ser Phe Leu Gly Asn Pro Gly Leu Cys Gly Tyr Trp Leu
545                 550                 555                 560
Gly Ser Ser Cys Arg Ser Ser Gly His Gln Gln Lys Pro Leu Ile Ser
                565                 570                 575
Lys Ala Ala Ile Leu Gly Ile Ala Val Gly Gly Leu Val Ile Leu Leu
            580                 585                 590
Met Ile Leu Val Ala Val Cys Arg Pro His Ser Pro Pro Val Phe Lys
        595                 600                 605
Asp Val Ser Val Ser Lys Pro Val Ser Asn Val Pro Pro Lys Leu Val
    610                 615                 620
Ile Leu His Met Asn Leu Ser Leu Leu Val Tyr Glu Asp Ile Met Thr
625                 630                 635                 640
Met Thr Glu Asn Leu Ser Glu Lys Tyr Ile Ile Gly Tyr Gly Ala Ser
                645                 650                 655
Ser Thr Val Tyr Lys Cys Val Ser Lys Asn Arg Lys Pro Val Ala Val
            660                 665                 670
Lys Lys Leu Tyr Ala His Tyr Pro Gln Ser Phe Lys Glu Phe Glu Thr
        675                 680                 685
Glu Leu Glu Thr Val Gly Ser Ile Lys His Arg Asn Leu Val Ser Leu
    690                 695                 700
Gln Gly Tyr Ser Leu Ser Pro Val Gly Asn Leu Leu Phe Tyr Asp Tyr
705                 710                 715                 720
Met Glu Asn Gly Ser Leu Trp Asp Val Leu His Glu Gly Pro Thr Lys
                725                 730                 735
Lys Lys Lys Leu Asp Trp Glu Thr Arg Leu Arg Ile Ala Leu Gly Ala
            740                 745                 750
Ala Gln Gly Leu Ala Tyr Leu His His Asp Cys Ser Pro Arg Ile Ile
        755                 760                 765
His Arg Asp Val Lys Ser Lys Asn Ile Leu Leu Asp Lys Asp Tyr Glu
    770                 775                 780
Ala His Leu Thr Asp Phe Gly Ile Ala Lys Ser Leu Cys Val Ser Lys
785                 790                 795                 800
Thr His Thr Ser Thr Tyr Val Met Gly Thr Ile Gly Tyr Ile Asp Pro
                805                 810                 815
Glu Tyr Ala Arg Thr Ser Arg Leu Asn Glu Lys Ser Asp Val Tyr Ser
            820                 825                 830
Tyr Gly Ile Val Leu Leu Glu Leu Leu Thr Gly Lys Lys Pro Val Asp
        835                 840                 845
Asn Glu Cys Asn Leu His His Leu Ile Leu Ser Lys Thr Ala Asn Asn
    850                 855                 860
Ala Val Met Glu Thr Val Asp Pro Asp Ile Ala Asp Thr Cys Lys Asp
865                 870                 875                 880
Leu Gly Glu Val Lys Lys Val Phe Gln Leu Ala Leu Leu Cys Thr Lys
                885                 890                 895
Arg Gln Pro Ser Asp Arg Pro Thr Met His Glu Val Val Arg Val Leu
            900                 905                 910
Asp Cys Leu Val Arg Pro Asp Pro Pro Pro Lys Ser Ala Gln Gln Leu
        915                 920                 925
Ala Met Pro Gln Arg Pro Ala Val Pro Ser Tyr Ile Asn Glu Tyr Val
    930                 935                 940
Ser Leu Arg Gly Thr Ser Val Leu Ser Cys Ala Asn Ser Ser Cys Thr
945                 950                 955                 960
Ser Asp Ala Glu Leu Phe Leu Lys Phe Gly Glu Val Ile Ser Gln Asn
                965                 970                 975
Thr Glu
<210>11
<211>3000
<212>DNA
<213>水稻(Oryza sativa)
<400>11
atggcggcgg cgagggcgcc gtggctgtgg tggtgggtgg tggtggttgt tggtgtggcg  60
gtggcggagg cggcctccgg aggaggagga gggggagatg gggaggggaa ggcgctgatg 120
ggcgtgaagg ccggtttcgg gaacgcggcc aacgcgctcg tcgactggga cggcggcgcc 180
gaccactgcg cgtggcgcgg cgtcacctgc gacaacgcct ccttcgccgt cctcgccctg 240
aacttgtcaa atctaaacct aggaggtgag atctcgccgg ccatcggaga gctcaagaat 300
ctacagttcg ttgatctcaa ggggaacaag ctcactggcc aaatcccaga tgagattggg 360
gactgcatct ccttaaaata tttggatttg tctggcaact tgctgtatgg agacatcccc 420
ttctccatct ccaagctcaa gcagcttgag gagctgattt tgaagaacaa ccagctcacg 480
ggacccatcc cttccacatt gtcccaaatt ccaaatctca agacattgga cctggcacag 540
aaccagctta caggcgatat cccaaggctc atatactgga atgaagttct gcaataccta  600
ggtttgaggg gtaactcact gactggaact ttgtcacctg acatgtgcca actgactggc  660
ctgtggtact ttgatgtaag gggaaacaat ctcacaggga ccattccaga gagcataggg  720
aactgcacca gctttgagat tctggacatt tcgtataacc aaatctctgg agaaatacct  780
tacaacatag gctttcttca agtagccaca ctgtcacttc aaggaaatag actgactggg  840
aaaattccag atgtgattgg cctgatgcaa gctcttgctg ttctagacct gagtgagaac  900
gagctggtag ggcccattcc ttctatactg ggcaatctat cctatactgg aaaactatat  960
ttacatggga acaaacttac tggagtcata ccgccggagc ttgggaacat gagtaaactt 1020
agctacctac aactgaatga taatgaattg gtgggcacaa ttccagcaga gcttggcaaa 1080
cttgaagagc tttttgaact aaatcttgcc aacaacaatc ttcaaggtcc tattcctgca 1140
aacatcagtt cttgcactgc tctaaacaaa ttcaatgttt atggcaataa gctaaatggt 1200
tctattcctg ctggtttcca gaagttggag agtctgactt acttgaacct atcttcaaac 1260
aatttcaaag gcaatattcc ttctgagctt ggtcacatca tcaacttgga cacattggat 1320
ctttcctaca atgaattctc tggaccagtt cctgctacca ttggtgatct agagcacctt 1380
cttgaactga atttgagtaa gaaccatctt gatgggccag ttcctgctga gtttggaaac 1440
ttgagaagcg tccaagtaat tgatatgtcc aacaacaact tatctggtag tctgcccgag 1500
gaacttggac aacttcaaaa ccttgatagc ctgattctta acaacaacaa tttggttggg 1560
gagatccctg ctcaattggc caactgcttc agcttaaata accttgcatt tcaggaattt 1620
gtcatacaac aatttatctg gacatgtccc gatggcaaag aacttctcga aattcccaat 1680
ggaaagcatc ttctaatttc tgattgcaac cagtacataa atcataaatg cagcttcttg 1740
ggtaatccat tactgcatgt ttactgccaa gattccagct gtggacactc tcatggacaa 1800
agagttaata tttcaaagac agcaattgct tgcattatct taggctttat catattgctc 1860
tgcgttctgc tgttggctat atataaaaca aatcaaccac agccacttgt caaaggatcc 1920
gataagccag tgcaaggacc tccaaagcta gttgttctcc agatggacat ggctatccat 1980
acttacgagg acatcatgag gctgacagag aatttgagcg agaaatacat cattggctat 2040
ggcgcctcaa gcactgtcta caaatgtgaa ctcaagagcg gcaaggccat tgctgtcaag 2100
cggctttaca gtcagtataa ccatagcctc cgagagtttg aaacagaact agagacaatt 2160
ggcagcatac ggcacaggaa tcttgttagc ctccatggct tctcgctatc tccacatgga 2220
aacttgctct tctatgatta catggaaaat ggttccttgt gggatcttct ccacggtcca 2280
tcaaagaaag tgaagctcaa ctgggacaca agactgagga tcgcggtcgg agctgcacaa 2340
gggctggcct atctccacca tgactgcaac cctcgcataa tccacagaga tgtcaagtcc 2400
tccaacatcc tgctcgacga gaacttcgaa gcgcacctct cagatttcgg catagccaaa 2460
tgtgtcccct ctgccaagtc ccatgcctcc acttatgtgc taggaaccat cggctacatt 2520
gatccggagt atgccaggac ttccaggctc aatgagaaat ctgatgtgta cagcttcggc 2580
atcgtccttc tggaattgct cacagggaag aaggccgtcg acaacgaatc gaacttgcat 2640
caattgatac tctccaaagc tgatgacaac acagtcatgg aggcagtgga ctcggaggtg 2700
tcagtgacgt gcacggacat gggactggtc aggaaggcct tccagctcgc ccttctgtgc 2760
accaagaggc acccttcaga ccggccgacc atgcacgagg ttgcaagggt gctgctctcc 2820
ctgctgccgg cctccgccat gacaacgccc aagacggtgg actactcccg gttgctggcg 2880
tcgacgacga cggcggccga catgcgaggg cacgacgtga ccgacatcgg cgacaacagc 2940
tcctccgacg agcagtggtt cgtcaggttc ggcgaggtca tatccaagca cacaatgtga 3000
<210>12
<211>999
<212>PRT
<213>水稻(Oryza sativa)
<400>12
Met Ala Ala Ala Arg Ala Pro Trp Leu Trp Trp Trp Val Val Val Val
 1               5                  10                  15
Val Gly Val Ala Val Ala Glu Ala Ala Ser Gly Gly Gly Gly Gly Gly
            20                  25                  30
Asp Gly Glu Gly Lys Ala Leu Met Gly Val Lys Ala Gly Phe Gly Asn
        35                  40                  45
Ala Ala Asn Ala Leu Val Asp Trp Asp Gly Gly Ala Asp His Cys Ala
    50                  55                  60
Trp Arg Gly Val Thr Cys Asp Asn Ala Ser Phe Ala Val Leu Ala Leu
65                  70                  75                  80
Asn Leu Ser Asn Leu Asn Leu Gly Gly Glu Ile Ser Pro Ala Ile Gly
                85                  90                  95
Glu Leu Lys Asn Leu Gln Phe Val Asp Leu Lys Gly Asn Lys Leu Thr
            100                 105                 110
Gly Gln Ile Pro Asp Glu Ile Gly Asp Cys Ile Ser Leu Lys Tyr Leu
        115                 120                 125
Asp Leu Ser Gly Asn Leu Leu Tyr Gly Asp Ile Pro Phe Ser Ile Ser
    130                 135                 140
Lys Leu Lys Gln Leu Glu Glu Leu Ile Leu Lys Asn Asn Gln Leu Thr
145                 150                 155                 160
Gly Pro Ile Pro Ser Thr Leu Ser Gln Ile Pro Asn Leu Lys Thr Leu
                165                 170                 175
Asp Leu Ala Gln Asn Gln Leu Thr Gly Asp Ile Pro Arg Leu Ile Tyr
            180                 185                 190
Trp Asn Glu Val Leu Gln Tyr Leu Gly Leu Arg Gly Asn Ser Leu Thr
        195                 200                 205
Gly Thr Leu Ser Pro Asp Met Cys Gln Leu Thr Gly Leu Trp Tyr Phe
    210                 215                 220
Asp Val Arg Gly Asn Asn Leu Thr Gly Thr Ile Pro Glu Ser Ile Gly
225                 230                 235                 240
Asn Cys Thr Ser Phe Glu Ile Leu Asp Ile Ser Tyr Asn Gln Ile Ser
                245                 250                 255
Gly Glu Ile Pro Tyr Asn Ile Gly Phe Leu Gln Val Ala Thr Leu Ser
            260                 265                 270
Leu Gln Gly Asn Arg Leu Thr Gly Lys Ile Pro Asp Val Ile Gly Leu
        275                 280                 285
Met Gln Ala Leu Ala Val Leu Asp Leu Ser Glu Asn Glu Leu Val Gly
    290                 295                 300
Pro Ile Pro Ser Ile Leu Gly Asn Leu Ser Tyr Thr Gly Lys Leu Tyr
305                 310                 315                 320
Leu His Gly Asn Lys Leu Thr Gly Val Ile Pro Pro Glu Leu Gly Asn
                325                 330                 335
Met Ser Lys Leu Ser Tyr Leu Gln Leu Asn Asp Asn Glu Leu Val Gly
            340                 345                 350
Thr Ile Pro Ala Glu Leu Gly Lys Leu Glu Glu Leu Phe Glu Leu Asn
        355                 360                 365
Leu Ala Asn Asn Asn Leu Gln Gly Pro Ile Pro Ala Asn Ile Ser Ser
    370                 375                 380
Cys Thr Ala Leu Asn Lys Phe Asn Val Tyr Gly Asn Lys Leu Asn Gly
385                 390                 395                 400
Ser Ile Pro Ala Gly Phe Gln Lys Leu Glu Ser Leu Thr Tyr Leu Asn
                405                 410                 415
Leu Ser Ser Asn Asn Phe Lys Gly Asn Ile Pro Ser Glu Leu Gly His
            420                 425                 430
Ile Ile Asn Leu Asp Thr Leu Asp Leu Ser Tyr Asn Glu Phe Ser Gly
        435                 440                 445
Pro Val Pro Ala Thr Ile Gly Asp Leu Glu His Leu Leu Glu Leu Asn
    450                 455                 460
Leu Ser Lys Asn His Leu Asp Gly Pro Val Pro Ala Glu Phe Gly Asn
465                 470                 475                 480
Leu Arg Ser Val Gln Val Ile Asp Met Ser Asn Asn Asn Leu Ser Gly
                485                 490                 495
Ser Leu Pro Glu Glu Leu Gly Gln Leu Gln Asn Leu Asp Ser Leu Ile
            500                 505                 510
Leu Asn Asn Asn Asn Leu Val Gly Glu Ile Pro Ala Gln Leu Ala Asn
        515                 520                 525
Cys Phe Ser Leu Asn Asn Leu Ala Phe Gln Glu Phe Val Ile Gln Gln
    530                 535                 540
Phe Ile Trp Thr Cys Pro Asp Gly Lys Glu Leu Leu Glu Ile Pro Asn
545                 550                 555                 560
Gly Lys His Leu Leu Ile Ser Asp Cys Asn Gln Tyr Ile Asn His Lys
                565                 570                 575
Cys Ser Phe Leu Gly Asn Pro Leu Leu His Val Tyr Cys Gln Asp Ser
            580                 585                 590
Ser Cys Gly His Ser His Gly Gln Arg Val Asn Ile Ser Lys Thr Ala
        595                 600                 605
Ile Ala Cys Ile Ile Leu Gly Phe Ile Ile Leu Leu Cys Val Leu Leu
    610                 615                 620
Leu Ala Ile Tyr Lys Thr Asn Gln Pro Gln Pro Leu Val Lys Gly Ser
625                 630                 635                 640
Asp Lys Pro Val Gln Gly Pro Pro Lys Leu Val Val Leu Gln Met Asp
                645                 650                 655
Met Ala Ile His Thr Tyr Glu Asp Ile Met Arg Leu Thr Glu Asn Leu
            660                 665                 670
Ser Glu Lys Tyr Ile Ile Gly Tyr Gly Ala Ser Ser Thr Val Tyr Lys
        675                 680                 685
Cys Glu Leu Lys Ser Gly Lys Ala Ile Ala Val Lys Arg Leu Tyr Ser
    690                 695                 700
Gln Tyr Asn His Ser Leu Arg Glu Phe Glu Thr Glu Leu Glu Thr Ile
705                 710                 715                 720
Gly Ser Ile Arg His Arg Asn Leu Val Ser Leu His Gly Phe Ser Leu
                725                 730                 735
Ser Pro His Gly Asn Leu Leu Phe Tyr Asp Tyr Met Glu Asn Gly Ser
            740                 745                 750
Leu Trp Asp Leu Leu His Gly Pro Ser Lys Lys Val Lys Leu Asn Trp
        755                 760                 765
Asp Thr Arg Leu Arg Ile Ala Val Gly Ala Ala Gln Gly Leu Ala Tyr
    770                 775                 780
Leu His His Asp Cys Asn Pro Arg Ile Ile His Arg Asp Val Lys Ser
785                 790                 795                 800
Ser Asn Ile Leu Leu Asp Glu Asn Phe Glu Ala His Leu Ser Asp Phe
                805                 810                 815
Gly Ile Ala Lys Cys Val Pro Ser Ala Lys Ser His Ala Ser Thr Tyr
            820                 825                 830
Val Leu Gly Thr Ile Gly Tyr Ile Asp Pro Glu Tyr Ala Arg Thr Ser
        835                 840                 845
Arg Leu Asn Glu Lys Ser Asp Val Tyr Ser Phe Gly Ile Val Leu Leu
    850                 855                 860
Glu Leu Leu Thr Gly Lys Lys Ala Val Asp Asn Glu Ser Asn Leu His
865                 870                 875                 880
Gln Leu Ile Leu Ser Lys Ala Asp Asp Asn Thr Val Met Glu Ala Val
                885                 890                 895
Asp Ser Glu Val Ser Val Thr Cys Thr Asp Met Gly Leu Val Arg Lys
            900                 905                 910
Ala Phe Gln Leu Ala Leu Leu Cys Thr Lys Arg His Pro Ser Asp Arg
        915                 920                 925
Pro Thr Met His Glu Val Ala Arg Val Leu Leu Ser Leu Leu Pro Ala
    930                 935                 940
Ser Ala Met Thr Thr Pro Lys Thr Val Asp Tyr Ser Arg Leu Leu Ala
945                 950                 955                 960
Ser Thr Thr Thr Ala Ala Asp Met Arg Gly His Asp Val Thr Asp Ile
                965                 970                 975
Gly Asp Asn Ser Ser Ser Asp Glu Gln Trp Phe Val Arg Phe Gly Glu
            980                 985                 990
Val Ile Ser Lys His Thr Met
        995
<210>13
<211>3317
<212>DNA
<213>两色蜀黍(Sorghum bicolor)
<400>13
cctactggat cgcctatcgc ccagccatac agctactcgc tgtcactgag aaccagcggc   60
gcaagtgcgc aaagccgagc gcgagaaccc acgaaaccaa ccaagctctg cccccattaa  120
ggcagggcag gcagaggagg caggctcgct gcagcacgct tcgcgctcca tcgtcgctgt  180
cctcttctcc ctgtaatgtc actcccccga tgcctgtccg cagctcagtg gccatgacga  240
cgacggccgc ccgtgctctc gtcgccctcc tcctcgtcgc cgtcgccgtc gccgacgatg  300
gggcgacgct ggtggagatc aagaagtcct tccgcaacgt cggcaacgta ctgtacgatt  360
gggccggcga cgactactgc tcctggcgcg gcgtcctgtg cgacaacgtc acattcgccg  420
tcgctgcgct caacctctct ggcctcaacc ttgagggcga gatctctcca gccgtcggca  480
gcctcaagag cctcgtctcc atcgatctga agtcaaatgg gctatccggg cagatccctg  540
atgagattgg tgattgttca tcacttagga cgctggactt ttctttcaac aacttggatg  600
gcgacatacc attctctata tcaaagctga agcacctgga gaacttgata ttgaagaaca  660
accagctgat tggtgcgatc ccatcaacat tgtcacagct cccaaatttg aagattttgg  720
atttggcaca aaacaaactg actggggaga taccaaggct tatctactgg aatgaggttc  780
ttcaatatct tgatgtgaag aacaatagct tgaccggggt gataccagac accattggga  840
actgtacaag ttttcaagtc ttggatttgt cttacaaccg ctttactgga ccaatcccat  900
tcaacattgg tttcctacaa gtggctacac tatccttgca agggaacaag ttcaccggtc  960
caattccttc agtaattggt cttatgcagg ctctcgctgt tctagatctg agttacaacc 1020
aattatctgg tcctatacca tcaatactag gcaacttgac atacactgag aagctgtaca 1080
tccaaggcaa taagttaact gggtcgatac caccagagtt aggaaatatg tcaacacttc 1140
attacctaga actgaacgat aatcaactta ctgggtcaat tccaccagag cttggaaggc 1200
taacaggctt gtttgacctg aaccttgcga ataaccacct ggaaggacca attcctgaca 1260
acctaagttc atgtgtgaat ctcaatagct tcaatgctta tggcaacaag ttaaatggga 1320
ccattcctcg ttcgttgcgg aaacttgaaa gcatgaccta tttaaatctg tcatcaaact 1380
tcataagtgg ctctattcct attgagttat caaggatcaa caatttggac acgctggatt 1440
tatcctgtaa catgatgact ggtccaattc catcatcaat tggcagccta gagcatctat 1500
tgagacttaa cttgagcaag aatggtctag ttggattcat ccccgcggag tttggtaatt 1560
tgaggagtgt catggagatt gatttatcct ataatcacct tggtggcctg attcctcaag 1620
aacttgaaat gctgcaaaac ctgatgttgc taaatgtgtc gtacaataat ttggctggtg 1680
ttgtccctgc tgacaacaac ttcacacggt tttcacctga cagcttttta ggtaatcctg 1740
gactctgtgg atactggctt ggttcgtcgt gtcgttccac tggccaccac gagaaaccgc 1800
ctatctcaaa ggctgccata attggtgttg ctgtgggtgg acttgttatc ctcttgatga 1860
tcttagtagc tgtttgcagg ccacatcgtc cacctgcttt taaagatgtc actgtaagca 1920
agccagtgag aaatgctccc cccaagctgg tgatccttca tatgaacatg gcccttcatg 1980
tatacgatga cataatgagg atgactgaga acttgagtga gaaatacatc attggatacg 2040
gggcgtcaag tacagtttat aaatgtgtcc taaagaattg caaaccggtg gcaataaaaa 2100
agctgtatgc ccactaccca cagagcctta aggaatttga aactgagctt gagactgttg 2160
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acctcctctt ttatgattat atggaatgtg gcagcttatg ggatgtttta catgaaggtt 2280
catccaagaa gaaaaaactt gactgggaga ctcgcctacg gattgctctt ggtgcagctc 2340
aaggccttgc ttaccttcac catgactgca gtccacggat aattcatcgg gatgtaaaat 2400
caaagaatat actccttgac aaagattatg aggcccatct tacagacttt ggaattgcta 2460
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ggcattgttc tgctggagct gctgactggc aagaagccag tggacaacga atcctatcga 2640
agacggcaag caacgaggtc atggataccg tggaccctga catcggggac acctgcaagg 2700
acctcggcga ggtgaagaag ctgttccagc tggcgctcct ttgcaccaag cggcaaccct 2760
cggaccgacc gacgatgcac gaggtggtgc gcgtcctgga ctgcctggtg aacccggacc 2820
cgccgccaaa gccgtcggcg caccagctgc cgcagccgtc gccagccgtg ccaagctaca 2880
tcaacgagta cgtcagcctg cggggcaccg gcgctctctc ctgcgccaac tcgaccagca 2940
cctcggacgc cgagctgttc ctcaagttcg gcgaggccat ctcgcagaac atggagtagg 3000
gaagagagag aggtctgggg agttgaagga tgcagggagt agtgggagta gctgactgac 3060
attttgcggg atgcaggagg agattaacat ggggaactca gtagggtgtt ggttaactgt 3120
aaaaaaagtc atgtgcctct agagcagcag tagagcttct tcctcatctt tctttttttt 3180
atcacccccc atttttcctt ggtggtctct aacttgttag gaggctgtat tggtcatctc 3240
tcacagttgt gtgcctgatg atcttttgtg tgacttttgc cgtgttggaa tcatgggagg 3300
tgactttctt gatctgc                                                3317
<210>14
<211>929
<212>PRT
<213>两色蜀黍(Sorghum bicolor)
<400>14
Met Pro Val Arg Ser Ser Val Ala Met Thr Thr Thr Ala Ala Arg Ala
 1               5                  10                  15
Leu Val Ala Leu Leu Leu Val Ala Val Ala Val Ala Asp Asp Gly Ala
            20                  25                  30
Thr Leu Val Glu Ile Lys Lys Ser Phe Arg Asn Val Gly Asn Val Leu
        35                  40                  45
Tyr Asp Trp Ala Gly Asp Asp Tyr Cys Ser Trp Arg Gly Val Leu Cys
    50                  55                  60
Asp Asn Val Thr Phe Ala Val Ala Ala Leu Asn Leu Ser Gly Leu Asn
65                  70                  75                  80
Leu Glu Gly Glu Ile Ser Pro Ala Val Gly Ser Leu Lys Ser Leu Val
                85                  90                  95
Ser Ile Asp Leu Lys Ser Asn Gly Leu Ser Gly Gln Ile Pro Asp Glu
            100                 105                 110
Ile Gly Asp Cys Ser Ser Leu Arg Thr Leu Asp Phe Ser Phe Asn Asn
        115                 120                 125
Leu Asp Gly Asp Ile Pro Phe Ser Ile Ser Lys Leu Lys His Leu Glu
    130                 135                 140
Asn Leu Ile Leu Lys Asn Asn Gln Leu Ile Gly Ala Ile Pro Ser Thr
145                 150                 155                 160
Leu Ser Gln Leu Pro Asn Leu Lys Ile Leu Asp Leu Ala Gln Asn Lys
                165                 170                 175
Leu Thr Gly Glu Ile Pro Arg Leu Ile Tyr Trp Asn Glu Val Leu Gln
            180                 185                 190
Tyr Leu Asp Val Lys Asn Asn Ser Leu Thr Gly Val Ile Pro Asp Thr
        195                 200                 205
Ile Gly Asn Cys Thr Ser Phe Gln Val Leu Asp Leu Ser Tyr Asn Arg
    210                 215                 220
Phe Thr Gly Pro Ile Pro Phe Asn Ile Gly Phe Leu Gln Val Ala Thr
225                 230                 235                 240
Leu Ser Leu Gln Gly Asn Lys Phe Thr Gly Pro Ile Pro Ser Val Ile
                245                 250                 255
Gly Leu Met Gln Ala Leu Ala Val Leu Asp Leu Ser Tyr Asn Gln Leu
            260                 265                 270
Ser Gly Pro Ile Pro Ser Ile Leu Gly Asn Leu Thr Tyr Thr Glu Lys
        275                 280                 285
Leu Tyr Ile Gln Gly Asn Lys Leu Thr Gly Ser Ile Pro Pro Glu Leu
    290                 295                 300
Gly Asn Met Ser Thr Leu His Tyr Leu Glu Leu Asn Asp Asn Gln Leu
305                 310                 315                 320
Thr Gly Ser Ile Pro Pro Glu Leu Gly Arg Leu Thr Gly Leu Phe Asp
                325                 330                 335
Leu Asn Leu Ala Asn Asn His Leu Glu Gly Pro Ile Pro Asp Asn Leu
            340                 345                 350
Ser Ser Cys Val Asn Leu Asn Ser Phe Asn Ala Tyr Gly Asn Lys Leu
        355                 360                 365
Asn Gly Thr Ile Pro Arg Ser Leu Arg Lys Leu Glu Ser Met Thr Tyr
    370                 375                 380
Leu Asn Leu Ser Ser Asn Phe Ile Ser Gly Ser Ile Pro Ile Glu Leu
385                 390                 395                 400
Ser Arg Ile Asn Asn Leu Asp Thr Leu Asp Leu Ser Cys Asn Met Met
                405                 410                 415
Thr Gly Pro Ile Pro Ser Ser Ile Gly Ser Leu Glu His Leu Leu Arg
            420                 425                 430
Leu Asn Leu Ser Lys Asn Gly Leu Val Gly Phe Ile Pro Ala Glu Phe
        435                 440                 445
Gly Asn Leu Arg Ser Val Met Glu Ile Asp Leu Ser Tyr Asn His Leu
    450                 455                 460
Gly Gly Leu Ile Pro Gln Glu Leu Glu Met Leu Gln Asn Leu Met Leu
465                 470                 475                 480
Leu Asn Val Ser Tyr Asn Asn Leu Ala Gly Val Val Pro Ala Asp Asn
                485                 490                 495
Asn Phe Thr Arg Phe Ser Pro Asp Ser Phe Leu Gly Asn Pro Gly Leu
            500                 505                 510
Cys Gly Tyr Trp Leu Gly Ser Ser Cys Arg Ser Thr Gly His His Glu
        515                 520                 525
Lys Pro Pro Ile Ser Lys Ala Ala Ile Ile Gly Val Ala Val Gly Gly
    530                 535                 540
Leu Val Ile Leu Leu Met Ile Leu Val Ala Val Cys Arg Pro His Arg
545                 550                 555                 560
Pro Pro Ala Phe Lys Asp Val Thr Val Ser Lys Pro Val Arg Asn Ala
                565                 570                 575
Pro Pro Lys Leu Val Ile Leu His Met Asn Met Ala Leu His Val Tyr
            580                 585                 590
Asp Asp Ile Met Arg Met Thr Glu Asn Leu Ser Glu Lys Tyr Ile Ile
        595                 600                 605
Gly Tyr Gly Ala Ser Ser Thr Val Tyr Lys Cys Val Leu Lys Asn Cys
    610                 615                 620
Lys Pro Val Ala Ile Lys Lys Leu Tyr Ala His Tyr Pro Gln Ser Leu
625                 630                 635                 640
Lys Glu Phe Glu Thr Glu Leu Glu Thr Val Gly Ser Ile Lys His Arg
                645                 650                 655
Asn Leu Val Ser Leu Gln Gly Tyr Ser Leu Ser Pro Val Gly Asn Leu
            660                 665                 670
Leu Phe Tyr Asp Tyr Met Glu Cys Gly Ser Leu Trp Asp Val Leu His
        675                 680                 685
Glu Gly Ser Ser Lys Lys Lys Lys Leu Asp Trp Glu Thr Arg Leu Arg
    690                 695                 700
Ile Ala Leu Gly Ala Ala Gln Gly Leu Ala Tyr Leu His His Asp Cys
705                 710                 715                 720
Ser Pro Arg Ile Ile His Arg Asp Val Lys Ser Lys Asn Ile Leu Leu
                725                 730                 735
Asp Lys Asp Tyr Glu Ala His Leu Thr Asp Phe Gly Ile Ala Lys Ser
            740                 745                 750
Leu Cys Val Ser Lys Thr His Thr Ser Thr Tyr Val Met Gly Thr Ile
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Gly Tyr Ile Asp Pro Glu Tyr Ala Arg Thr Ser Arg Leu Asn Glu Lys
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Ser Asp Val Tyr Arg Leu Trp His Cys Ser Ala Gly Ala Ala Asp Trp
785                 790                 795                 800
Gln Glu Ala Ser Gly Gln Arg Ile Leu Ser Lys Thr Ala Ser Asn Glu
                805                 810                 815
Val Met Asp Thr Val Asp Pro Asp Ile Gly Asp Thr Cys Lys Asp Leu
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Gly Glu Val Lys Lys Leu Phe Gln Leu Ala Leu Leu Cys Thr Lys Arg
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Gln Pro Ser Asp Arg Pro Thr Met His Glu Val Val Arg Val Leu Asp
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Cys Leu Val Asn Pro Asp Pro Pro Pro Lys Pro Ser Ala His Gln Leu
865                 870                 875                 880
Pro Gln Pro Ser Pro Ala Val Pro Ser Tyr Ile Asn Glu Tyr Val Ser
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Leu Arg Gly Thr Gly Ala Leu Ser Cys Ala Asn Ser Thr Ser Thr Ser
            900                 905                 910
Asp Ala Glu Leu Phe Leu Lys Phe Gly Glu Ala Ile Ser Gln Asn Met
        915                 920                 925
Glu
<210>15
<211>1514
<212>DNA
<213>两色蜀黍(Sorghum bicolor)
<400>15
atggcagcga gggcggcggc ggcggtggtg ctgcttattg cggctgtggt gtcggtgtcg   60
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<210>16
<211>504
<212>PRT
<213>两色蜀黍(Sorghum bicolor)
<400>16
Met Ala Ala Arg Ala Ala Ala Ala Val Val Leu Leu Ile Ala Ala Val
 1               5                  10                  15
Val Ser Val Ser Ala Gly Gly Gly Glu Gly Asp Gly Asp Gly Gln Thr
            20                  25                   30
Leu Met Ala Val Lys Ala Gly Phe Gly Asn Ala Ala Asn Ala Leu Ala
        35                  40                  45
Asp Trp Asp Gly Gly Arg Asp His Cys Ala Trp Arg Gly Val Ala Cys
    50                  55                  60
Asp Ala Ala Ser Phe Ala Val Val Gly Leu Asn Leu Ser Asn Leu Asn
65                  70                 75                  80
Leu Gly Gly Glu Ile Ser Pro Ala Ile Gly Gln Leu Lys Ser Leu Gln
                85                  90                  95
Phe Val Asp Leu Lys Leu Asn Lys Leu Thr Gly Gln Ile Pro Asp Glu
            100                 105                 110
Ile Gly Asp Cys Val Ser Leu Lys Tyr Leu Asp Leu Ser Gly Asn Leu
        115                 120                 125
Leu Tyr Gly Asp Ile Pro Phe Ser Ile Ser Lys Leu Lys Gln Leu Glu
    130                 135                 140
Asp Leu Ile Leu Lys Asn Asn Gln Leu Thr Gly Pro Ile Pro Ser Thr
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Leu Ser Gln Ile Pro Asn Leu Lys Thr Leu Asp Leu Ala Gln Asn Lys
                165                 170                 175
Leu Thr Gly Asp Ile Pro Arg Leu Ile Tyr Trp Asn Glu Val Leu Gln
            180                 185                 190
Tyr Leu Gly Leu Arg Gly Asn Ser Leu Thr Gly Thr Leu Ser Pro Asp
        195                 200                 205
Met Cys Gln Leu Thr Gly Leu Trp Tyr Phe Asp Val Arg Gly Asn Asn
    210                 215                 220
Leu Thr Gly Thr Ile Pro Glu Gly Ile Gly Asn Cys Thr Ser Phe Glu
225                 230                 235                 240
Ile Leu Asp Ile Ser Tyr Asn Gln Ile Ser Gly Glu Ile Pro Tyr Asn
                245                 250                 255
Ile Gly Tyr Leu Gln Val Ala Thr Leu Asp Leu Ser Glu Asn Glu Leu
            260                 265                 270
Val Gly Pro Ile Pro Pro Ile Leu Gly Asn Leu Ser Tyr Thr Gly Lys
        275                 280                 285
Leu Tyr Leu His Gly Asn Lys Leu Thr Gly His Ile Pro Pro Glu Leu
    290                 295                 300
Gly Asn Met Ser Lys Leu Ser Tyr Leu Gln Leu Asn Asp Asn Glu Leu
305                 310                 315                 320
Val Gly Thr Ile Pro Ala Glu Leu Gly Lys Leu Thr Glu Leu Phe Glu
                325                 330                 335
Leu Asn Leu Ala Asn Asn Asn Leu Glu Gly His Ile Pro Ala Asn Ile
            340                 345                 350
Ser Ser Cys Ser Ala Leu Asn Lys Phe Asn Val Tyr Gly Asn Arg Leu
        355                 360                 365
Asn Gly Ser Ile Pro Ala Gly Phe Gln Glu Leu Glu Ser Leu Thr Tyr
    370                 375                 380
Leu Asn Leu Ser Ser Asn Asn Phe Lys Gly Gln Ile Pro Ser Glu Leu
385                 390                 395                 400
Gly His Ile Val Asn Leu Asp Thr Leu Asp Leu Ser Tyr Asn Glu Phe
                405                 410                 415
Ser Gly Pro Val Pro Pro Thr Ile Gly Asp Leu Glu His Leu Leu Glu
            420                 425                 430
Leu Asn Leu Ser Lys Ash His Leu Thr Gly Ser Val Pro Ala Glu Phe
        435                 440                 445
Gly Asn Leu Arg Ser Val Gln Val Ile Asp Ile Ser Ser Asn Asn Leu
    450                 455                 460
Thr Gly Tyr Leu Pro Glu Glu Leu Gly Gln Leu Gln Asn Leu Asp Ser
465                 470                 475                 480
Leu Ile Leu Asn Asn Asn Asn Leu Val Gly Glu Ile Pro Ala Gln Leu
                485                 490                 495
Ala Asn Cys Phe Ser Leu Ile Thr
            500
<210>17
<211>752
<212>PRT
<213>两色蜀黍(Sorghum bicolor)
<400>17
Cys Thr Thr Cys Ala Ala Ala Thr Gly Gly Ala Cys Ala Thr Gly Gly
 1               5                  10                  15
Cys Thr Ala Cys Cys Cys Ala Thr Ala Cys Cys Thr Ala Thr Gly Ala
            20                  25                  30
Ala Gly Ala Cys Ala Thr Thr Ala Thr Gly Ala Gly Gly Thr Thr Gly
        35                  40                  45
Ala Cys Thr Gly Ala Gly Ala Ala Thr Thr Thr Gly Ala Gly Cys Gly
    50                  55                  60
Ala Gly Ala Ala Ala Thr Ala Cys Ala Thr Cys Ala Thr Thr Gly Gly
65                  70                  75                  80
Thr Thr Ala Thr Gly Gly Gly Gly Cys Ala Thr Cys Ala Ala Gly Thr
                85                  90                  95
Ala Cys Thr Gly Thr Gly Thr Ala Cys Ala Ala Ala Thr Gly Thr Gly
            100                 105                 110
Ala Thr Cys Thr Cys Ala Ala Gly Gly Gly Cys Gly Gly Cys Ala Ala
        115                 120                 125
Ala Gly Cys Cys Ala Thr Cys Gly Cys Thr Gly Thr Cys Ala Ala Ala
    130                 135                 140
Cys Gly Gly Cys Thr Thr Thr Ala Cys Ala Gly Thr Cys Ala Gly Thr
145                 150                 155                 160
Ala Thr Ala Ala Cys Cys Ala Cys Ala Gly Cys Cys Thr Cys Cys Gly
                165                 170                 175
Thr Gly Ala Gly Thr Thr Thr Gly Ala Gly Ala Cys Ala Gly Ala Ala
            180                 185                 190
Cys Thr Gly Gly Ala Gly Ala Cys Gly Ala Thr Cys Gly Gly Thr Ala
        195                 200                 205
Gly Cys Ala Thr Cys Cys Gly Ala Cys Ala Cys Ala Gly Gly Ala Ala
    210                 215                 220
Thr Cys Thr Cys Gly Thr Cys Ala Gly Cys Cys Thr Thr Cys Ala Thr
225                 230                 235                 240
Gly Gly Cys Thr Thr Cys Thr Cys Ala Cys Thr Cys Thr Cys Cys Cys
                245                 250                 255
Cys Thr Cys Ala Thr Gly Gly Ala Ala Ala Cys Cys Thr Gly Cys Thr
            260                 265                 270
Thr Thr Thr Cys Thr Ala Cys Gly Ala Thr Thr Ala Cys Ala Thr Gly
        275                 280                 285
Gly Ala Ala Ala Ala Thr Gly Gly Thr Thr Cys Cys Cys Thr Gly Thr
    290                 295                 300
Gly Gly Gly Ala Thr Cys Thr Thr Cys Thr Thr Cys Ala Thr Gly Gly
305                 310                 315                 320
Thr Cys Cys Ala Thr Cys Ala Ala Ala Gly Ala Ala Gly Gly Thr Gly
                325                 330                 335
Ala Ala Gly Cys Thr Thr Gly Ala Thr Thr Gly Gly Gly Ala Cys Ala
            340                 345                 350
Cys Ala Ala Gly Gly Cys Thr Thr Ala Ala Gly Ala Thr Thr Gly Cys
        355                 360                 365
Gly Gly Thr Ala Gly Gly Thr Gly Cys Thr Gly Cys Gly Cys Ala Ala
    370                 375                 380
Gly Gly Ala Cys Thr Gly Gly Cys Cys Thr Ala Thr Cys Thr Thr Cys
385                 390                 395                 400
Ala Cys Cys Ala Thr Gly Ala Cys Thr Gly Cys Ala Ala Cys Cys Cys
                405                 410                 415
Thr Cys Gly Cys Ala Thr Ala Ala Thr Cys Cys Ala Cys Ala Gly Gly
            420                 425                 430
Gly Ala Thr Gly Thr Cys Ala Ala Gly Thr Cys Cys Thr Cys Ala Ala
        435                 440                 445
Ala Cys Ala Thr Cys Cys Thr Gly Cys Thr Cys Gly Ala Cys Gly Ala
    450                 455                 460
Gly Ala Ala Cys Thr Thr Cys Gly Ala Ala Gly Cys Gly Cys Ala Cys
465                 470                 475                 480
Cys Thr Cys Thr Cys Thr Gly Ala Thr Thr Thr Cys Gly Gly Cys Ala
                485                 490                 495
Thr Cys Gly Cys Cys Ala Ala Ala Thr Gly Thr Gly Thr Cys Cys Cys
            500                 505                 510
Gly Gly Cys Thr Gly Cys Cys Ala Ala Gly Thr Cys Cys Cys Ala Thr
        515                 520                 525
Gly Cys Cys Thr Cys Cys Ala Cys Cys Thr Ala Cys Gly Thr Gly Cys
    530                 535                 540
Thr Thr Gly Gly Ala Ala Cys Cys Ala Thr Thr Gly Gly Cys Thr Ala
545                 550                 555                 560
Cys Ala Thr Thr Gly Ala Thr Cys Cys Ala Gly Ala Gly Thr Ala Thr
                565                 570                 575
Gly Cys Cys Cys Gly Cys Ala Cys Gly Thr Cys Gly Ala Gly Gly Cys
            580                 585                 590
Thr Cys Ala Ala Thr Gly Ala Gly Ala Ala Ala Thr Cys Gly Gly Ala
        595                 600                 605
Thr Gly Thr Cys Thr Ala Cys Ala Gly Cys Thr Thr Thr Gly Gly Cys
    610                 615                 620
Ala Thr Cys Gly Thr Cys Cys Thr Thr Cys Thr Gly Gly Ala Gly Cys
625                 630                 635                 640
Thr Gly Cys Thr Cys Ala Cys Cys Gly Gly Gly Ala Ala Gly Ala Ala
                645                 650                 655
Gly Gly Cys Thr Gly Thr Ala Gly Ala Cys Ala Ala Thr Gly Ala Ala
            660                 665                 670
Thr Cys Cys Ala Ala Cys Thr Thr Gly Cys Ala Cys Cys Ala Ala Thr
        675                 680                 685
Thr Gly Ala Thr Ala Cys Thr Cys Thr Cys Ala Ala Ala Ala Gly Cys
    690                 695                 700
Thr Gly Ala Cys Gly Ala Cys Ala Ala Cys Ala Cys Gly Gly Thr Gly
705                 710                 715                 720
Ala Thr Gly Gly Ala Gly Gly Cys Thr Gly Thr Gly Gly Ala Cys Thr
                725                 730                 735
Cys Gly Gly Ala Gly Gly Thr Gly Thr Cys Ala Gly Thr Gly Ala Cys
            740                 745                 750
<210>18
<211>250
<212>PRT
<213>两色蜀黍(Sorghum bicolor)
<400>18
Leu Gln Met Asp Met Ala Thr His Thr Tyr Glu Asp Ile Met Arg Leu
 1               5                  10                  15
Thr Glu Asn Leu Ser Glu Lys Tyr Ile Ile Gly Tyr Gly Ala Ser Ser
            20                  25                  30
Thr Val Tyr Lys Cys Asp Leu Lys Gly Gly Lys Ala Ile Ala Val Lys
        35                  40                  45
Arg Leu Tyr Ser Gln Tyr Asn His Ser Leu Arg Glu Phe Glu Thr Glu
    50                  55                  60
Leu Glu Thr Ile Gly Ser Ile Arg His Arg Asn Leu Val Ser Leu His
65                  70                  75                  80
Gly Phe Ser Leu Ser Pro His Gly Asn Leu Leu Phe Tyr Asp Tyr Met
                85                  90                  95
Glu Asn Gly Ser Leu Trp Asp Leu Leu His Gly Pro Ser Lys Lys Val
            100                 105                 110
Lys Leu Asp Trp Asp Thr Arg Leu Lys Ile Ala Val Gly Ala Ala Gln
        115                 120                 125
Gly Leu Ala Tyr Leu His His Asp Cys Asn Pro Arg Ile Ile His Arg
    130                 135                 140
Asp Val Lys Ser Ser Asn Ile Leu Leu Asp Glu Asn Phe Glu Ala His
145                 150                 155                 160
Leu Ser Asp Phe Gly Ile Ala Lys Cys Val Pro Ala Ala Lys Ser His
                165                 170                 175
Ala Ser Thr Tyr Val Leu Gly Thr Ile Gly Tyr Ile Asp Pro Glu Tyr
            180                 185                 190
Ala Arg Thr Ser Arg Leu Asn Glu Lys Ser Asp Val Tyr Ser Phe Gly
        195                 200                 205
Ile Val Leu Leu Glu Leu Leu Thr Gly Lys Lys Ala Val Asp Asn Glu
    210                 215                 220
Ser Asn Leu His Gln Leu Ile Leu Ser Lys Ala Asp Asp Asn Thr Val
225                 230                 235                 240
Met Glu Ala Val Asp Ser Glu Val Ser Val
                245                 250
<210>19
<211>1402
<212>DNA
<213>大豆(Glycine max)
<220>
<221>misc_feature
<222>1253
<223>n＝A，T，C或G
<400>19
cttagtctct ctctacttaa tgtgtcctat aacaaactat ttggtgttat ccccacgagt  60
aacaacttta ccaggtttcc ccctgacagt ttcattggaa accctggtct ttgtggtaat 120
tggctgaatt tgccatgcca tggtgctcgt ccttcagagc gagttacatt atctaaggct 180
gccattcttg gaattacttt gggtgccctt gtgattcttc ttatggtatt ggtggcagct 240
tgccgaccac acagcccctc tccttttcct gatggatcat ttgacaaacc aattaatttc 300
tcccctccaa agctagtgat tcttcatatg aatatggcac tacatgtgta tgaagatatc 360
atgaggatga ctgaaaacct aagtgagaag tatatcattg gatatggtgc atcaagtaca  420
gtttataaat gtgttcttaa gaattgtaag ccggtggcta tcaagaggat ctattctcac  480
tatccccaat gtattaaaga atttgaaact gaactcgaga ctgttggcag catcaagcac  540
cggaatttgg tcagtctcca aggctactcc ttgtccccat atggccatct cctgttttat  600
gactacatgg aaaatggcag tctatgggat cttcttcatg gacctaccaa gaagaaaaag  660
cttgactggg agctgcgtct aaaaatagca cttggagcag cacaagggct tgcttatcta  720
caccatgatt gctgtcctag aatcatccac agagatgtga aatcatctaa cattctattg  780
gatgcagact ttgagcctca tctcactgat tttggcattg ccaaaagtct ctgcccctca  840
aagtcccata cttctactta cataatgggc acaattggct atatagaccc tgagtatgct  900
agaacttcac gtctcactga gaagtctgat gtgtacagtt acggtattgt tttacttgag  960
ttgctaactg gaaggaaagc tgttgacaat gaatccaacc tccaccatct gattttgtcc 1020
aaggcagcaa ccaatgcagt gatggaaaca gttgatccag acattactgc cacatgcaag 1080
gacctaggag ctgtaaaaaa ggtttatcag cttgctctat tatgcacaaa gaggcagcca 1140
gctgataggc cgacaatgca cgaagtgaca cgtgtactcg gaagccttgt gctgtccaac 1200
accccaccaa agcaactagc tgcactacca cctgcttcag atccatctgc canagtgcca 1260
tgctacgtgg atgagtatgg caaacctcaa gactccacac ttggtgaaac tgcccctcaa 1320
tgagccacct aaatgctcaa ctctttctca agtttggaga agtaatctct tcaaacaatg 1380
aggtgaaaga gtgaagccgg ga                                          1402
<210>20
<211>440
<212>PRT
<213>大豆(Glycine max)
<220>
<221>变体
<222>418
<223>Xaa＝任意氨基酸
<400>20
Leu Ser Leu Ser Leu Leu Asn Val Ser Tyr Asn Lys Leu Phe Gly Val
 1               5                  10                  15
Ile Pro Thr Ser Asn Asn Phe Thr Arg Phe Pro Pro Asp Ser Phe Ile
            20                  25                  30
Gly Asn Pro Gly Leu Cys Gly Asn Trp Leu Asn Leu Pro Cys His Gly
        35                  40                  45
Ala Arg Pro Ser Glu Arg Val Thr Leu Ser Lys Ala Ala Ile Leu Gly
    50                  55                  60
Ile Thr Leu Gly Ala Leu Val Ile Leu Leu Met Val Leu Val Ala Ala
65                  70                  75                  80
Cys Arg Pro His Ser Pro Ser Pro Phe Pro Asp Gly Ser Phe Asp Lys
                85                  90                  95
Pro Ile Asn Phe Ser Pro Pro Lys Leu Val Ile Leu His Met Asn Met
            100                 105                 110
Ala Leu His Val Tyr Glu Asp Ile Met Arg Met Thr Glu Asn Leu Ser
        115                 120                 125
Glu Lys Tyr Ile Ile Gly Tyr Gly Ala Ser Ser Thr Val Tyr Lys Cys
    130                 135                 140
Val Leu Lys Asn Cys Lys Pro Val Ala Ile Lys Arg Ile Tyr Ser His
145                 150                 155                 160
Tyr Pro Gln Cys Ile Lys Glu Phe Glu Thr Glu Leu Glu Thr Val Gly
                165                 170                 175
Ser Ile Lys His Arg Asn Leu Val Ser Leu Gln Gly Tyr Ser Leu Ser
            180                 185                 190
Pro Tyr Gly His Leu Leu Phe Tyr Asp Tyr Met Glu Asn Gly Ser Leu
    195                 200                 205
Trp Asp Leu Leu His Gly Pro Thr Lys Lys Lys Lys Leu Asp Trp Glu
                    210                 215                 220
Leu Arg Leu Lys Ile Ala Leu Gly Ala Ala Gln Gly Leu Ala Tyr Leu
225                 230                 235                 240
His His Asp Cys Cys Pro Arg Ile Ile His Arg Asp Val Lys Ser Ser
                245                 250                 255
Asn Ile Leu Leu Asp Ala Asp Phe Glu Pro His Leu Thr Asp Phe Gly
            260                 265                 270
Ile Ala Lys Ser Leu Cys Pro Ser Lys Ser His Thr Ser Thr Tyr Ile
        275                 280                 285
Met Gly Thr Ile Gly Tyr Ile Asp Pro Glu Tyr Ala Arg Thr Ser Arg
    290                 295                 300
Leu Thr Glu Lys Ser Asp Val Tyr Ser Tyr Gly Ile Val Leu Leu Glu
305                 310                 315                 320
Leu Leu Thr Gly Arg Lys Ala Val Asp Asn Glu Ser Asn Leu His His
                325                 330                 335
Leu Ile Leu Ser Lys Ala Ala Thr Asn Ala Val Met Glu Thr Val Asp
            340                 345                 350
Pro Asp Ile Thr Ala Thr Cys Lys Asp Leu Gly Ala Val Lys Lys Val
        355                 360                 365
Tyr Gln Leu Ala Leu Leu Cys Thr Lys Arg Gln Pro Ala Asp Arg Pro
    370                 375                 380
Thr Met His Glu Val Thr Arg Val Leu Gly Ser Leu Val Leu Ser Asn
385                 390                 395                 400
Thr Pro Pro Lys Gln Leu Ala Ala Leu Pro Pro Ala Ser Asp Pro Ser
                405                 410                 415
Ala Xaa Val Pro Cys Tyr Val Asp Glu Tyr Gly Lys Pro Gln Asp Ser
            420                 425                 430
Thr Leu Gly Glu Thr Ala Pro Gln
        435                 440
<210>21
<211>492
<212>DNA
<213>大豆(Glycine max)
<400>21
gagtatgcta gaacttcgca tctcactgag aagtctgatg tgtacagtta tggtattgtt  60
ttactcgagt tgctaactgg aaggaaagct gttgacaatg aatccaacct ccaccatctt 120
attttgtcca aggcagcaac caatgctgtg atggaaacag ttgatcccga cattactgcc 180
acatgcaagg acctaggagc tgtaaaaaag gtttatcagc ttgctctatt atgcacaaag 240
aggcagccag ctgataggcc aacaatgcac gaagtgacac gtgtactcgg aagtctcgtg 300
ccatcaagca tcccaccaaa gcaactagct gacctaccac ctgcttcaaa tccatctgcc 360
aaagtgccat gctacgtgga tgagtatgca aacctcaaaa ccccacactt agtaaactgc 420
ccctcaatga gcacttcaga tgctcaactc ttcctcaagt ttggagaagt aatctctcaa 480
aacagtgagt ga                                                     492
<210>22
<211>163
<212>PRT
<213>大豆(Glycine max)
<400>22
Glu Tyr Ala Arg Thr Ser His Leu Thr Glu Lys Ser Asp Val Tyr Ser
 1               5                  10                  15
Tyr Gly Ile Val Leu Leu Glu Leu Leu Thr Gly Arg Lys Ala Val Asp
            20                  25                  30
Asn Glu Ser Asn Leu His His Leu Ile Leu Ser Lys Ala Ala Thr Asn
        35                  40                  45
Ala Val Met Glu Thr Val Asp Pro Asp Ile Thr Ala Thr Cys Lys Asp
    50                  55                  60
Leu Gly Ala Val Lys Lys Val Tyr Gln Leu Ala Leu Leu Cys Thr Lys
65                  70                  75                  80
Arg Gln Pro Ala Asp Arg Pro Thr Met His Glu Val Thr Arg Val Leu
                85                  90                  95
Gly Ser Leu Val Pro Ser Ser Ile Pro Pro Lys Gln Leu Ala Asp Leu
            100                 105                 110
Pro Pro Ala Ser Asn Pro Ser Ala Lys Val Pro Cys Tyr Val Asp Glu
        115                 120                 125
Tyr Ala Asn Leu Lys Thr Pro His Leu Val Asn Cys Pro Ser Met Ser
    130                 135                 140
Thr Ser Asp Ala Gln Leu Phe Leu Lys Phe Gly Glu Val Ile Ser Gln
145                 150                 155                 160
Asn Ser Glu
<210>23
<211>797
<212>DNA
<213>大豆(Glycine max)
<400>23
ggaaaatggc agtctatggg atcttctgca tggacctacc aagaagaaaa agcttgattg  60
ggatcttcgt ctaaaaatag cactaggatc agcccaaggg cttgcttatc tacaccatga 120
ttgcagtcca ctcatcattc acagggacgt gaaatcatct aatattttac tagacaaaga 180
ctttgagccc catctcgctg atttcggcat tgcaaaaagt ctatgcccat ctaagaccca 240
cacttcaact tacataatgg gcacaattgg ctacatagac cctgagtatg ctagaacttc 300
ccgcctcact gagaagtccg atgtgtatag ctatggtatc gtattgcttg agcttctaac 360
tgggaggaaa gctgttgaca acgaatcaaa cctccatcat ctgattttgt ccaagacagc 420
taatgatggc gtaatggaaa ccgttgatcc agatattact accacatgca gggacatggg 480
agcagtaaaa aaggtttttc agcttgctct tttatgcaca aagaagcaac cagtcgatag 540
gcctacaatg catgaagtga ctcgcgtctg ggaagccttg tgccatccat aaccctacca 600
aaacaaactg actcaacaca agtgctgcta cctgattctc agtcatctgc taaaatgcaa 660
tgctacaaag atgaatatgc aaatctcaaa actcctcact tggttaactg tccttccatg 720
agcacctctg atgcacaact cttcctcaaa tttggggaag taatatcaca aaatagtcac 780
tgaggatttt gataatc                                                797
<210>24
<211>196
<212>PRT
<213>大豆(Glycine max)
<400>24
Glu Asn Gly Ser Leu Trp Asp Leu Leu His Gly Pro Thr Lys Lys Lys
 1              5                   10                  15
Lys Leu Asp Trp Asp Leu Arg Leu Lys Ile Ala Leu Gly Ser Ala Gln
            20                  25                  30
Gly Leu Ala Tyr Leu His His Asp Cys Ser Pro Leu Ile Ile His Arg
        35                  40                  45
Asp Val Lys Ser Ser Asn Ile Leu Leu Asp Lys Asp Phe Glu Pro His
    50                  55                  60
Leu Ala Asp Phe Gly Ile Ala Lys Ser Leu Cys Pro Ser Lys Thr His
65                  70                  75                  80
Thr Ser Thr Tyr Ile Met Gly Thr Ile Gly Tyr Ile Asp Pro Glu Tyr
                85                  90                  95
Ala Arg Thr Ser Arg Leu Thr Glu Lys Ser Asp Val Tyr Ser Tyr Gly
            100                 105                 110
Ile Val Leu Leu Glu Leu Leu Thr Gly Arg Lys Ala Val Asp Asn Glu
        115                 120                 125
Ser Asn Leu His His Leu Ile Leu Ser Lys Thr Ala Asn Asp Gly Val
    130                 135                 140
Met Glu Thr Val Asp Pro Asp Ile Thr Thr Thr Cys Arg Asp Met Gly
145                 150                 155                 160
Ala Val Lys Lys Val Phe Gln Leu Ala Leu Leu Cys Thr Lys Lys Gln
                165                 170                 175
Pro Val Asp Arg Pro Thr Met His Glu Val Thr Arg Val Trp Glu Ala
            180                 185                 190
Leu Cys His Pro
        195
<210>25
<211>279
<212>DNA
<213>大豆(Glycine max)
<400>25
agtacagttt ataaatgtgt ccttaaaaat tgcaagccgg tggctatcaa gaagctctat  60
tcccactacc cacaatactt gaaagagttt gagactgagc ttgagacagt tggtagcgtt 120
aagcacagaa atctggtcag tctccaaggc tactctttgt caacgtacgg aaatcttctc 180
ttttatgact acatggaaaa tggcagtcta tgggatcttc tgcatggacc taccaagaag 240
aaaaagcttg attgggatct tcgtctaaaa atagcacta                        279
<210>26
<211>93
<212>PRT
<213>大豆(Glycine max)
<400>26
Ser Thr Val Tyr Lys Cys Val Leu Lys Asn Cys Lys Pro Val Ala Ile
 1               5                  10                  15
Lys Lys Leu Tyr Ser His Tyr Pro Gln Tyr Leu Lys Glu Phe Glu Thr
            20                  25                  30
Glu Leu Glu Thr Val Gly Ser Val Lys His Arg Asn Leu Val Ser Leu
        35                  40                  45
Gln Gly Tyr Ser Leu Ser Thr Tyr Gly Asn Leu Leu Phe Tyr Asp Tyr
    50                  55                  60
Met Glu Asn Gly Ser Leu Trp Asp Leu Leu His Gly Pro Thr Lys Lys
65                  70                  75                  80
Lys Lys Leu Asp Trp Asp Leu Arg Leu Lys Ile Ala Leu
                85                  90
<210>27
<211>2931
<212>DNA
<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)
<400>27
atggctctgt ttagagatat tgttcttctt gggtttctct tctgcttgag cttagtagct   60
actgtgactt cagaggaggg agcaacgttg ctggagatta agaagtcatt caaagatgtg  120
aacaatgttc tttatgactg gacaacttca ccttcttcgg attattgtgt ctggagaggt  180
gtgtcttgtg aaaatgtcac cttcaatgtt gttgctctta atttgtcaga tttgaatctt  240
gatggagaaa tctcacctgc tattggagat ctcaagagtc tcttgtcaat tgatctgcga  300
ggtaatcgct tgtctggaca aatccctgat gagattggtg actgttcttc tttgcaaaac  360
ttagacttat ccttcaatga attaagtggt gacataccgt tttcgatttc gaagttgaag  420
caacttgagc agctgattct gaagaataac caattgatag gaccgatccc ttcaacactt  480
tcacagattc caaacctgaa aattctggac ttggcacaga ataaactcag tggtgagata  540
ccaagactta tttactggaa tgaagttctt cagtatcttg ggttgcgagg aaacaactta  600
gtcggtaaca tttctccaga tttgtgtcaa ctgactggtc tttggtattt tgacgtaaga  660
aacaacagtt tgactggtag tatacctgag acgataggaa attgcactgc cttccaggtt  720
ttggacttgt cctacaatca gctaactggt gagatccctt ttgacatcgg cttcctgcaa  780
gttgcaacat tatcattgca aggcaatcaa ctctctggga agattccatc agtgattggt  840
ctcatgcaag cccttgcagt cttagatcta agtggcaact tgttgagtgg atctattcct  900
ccgattctcg gaaatcttac tttcaccgag aaattgtatt tgcacagtaa caagctgact  960
ggttcaattc cacctgagct tggaaacatg tcaaaactcc attacctgga actcaatgat 1020
aatcatctca cgggtcatat accaccagag cttgggaagc ttactgactt gtttgatctg 1080
aatgtggcca acaatgatct ggaaggacct atacctgatc atctgagctc ttgcacaaat 1140
ctaaacagct taaatgttca tgggaacaag tttagtggca ctataccccg agcatttcaa 1200
aagctagaaa gtatgactta ccttaatctg tccagcaaca atatcaaagg tccaatcccg 1260
gttgagctat ctcgtatcgg taacttagat acattggatc tttccaacaa caagataaat 1320
ggaatcattc cttcttccct tggtgatttg gagcatcttc tcaagatgaa cttgagtaga 1380
aatcatataa ctggtgtagt tccaggcgac tttggaaatc taagaagcat catggaaata 1440
gatctttcaa ataatgatat ctctggccca attccagaag agcttaacca attacagaac 1500
ataattttgc tgagactgga aaataataac ctgactggta atgttggttc attagccaac 1560
tgtctcagtc tcactgtatt gaatgtatct cataacaacc tcgtaggtga tatccctaag 1620
aacaataact tctcaagatt ttcaccagac agcttcattg gcaatcctgg tctttgcggt 1680
agttggctaa actcaccgtg tcatgattct cgtcgaactg tacgagtgtc aatctctaga 1740
gcagctattc ttggaatagc tattggggga cttgtgatcc ttctcatggt cttaatagca 1800
gcttgccgac cgcataatcc tcctcctttt cttgatggat cacttgacaa accagtaact 1860
tattcgacac cgaagctcgt catccttcat atgaacatgg cactccacgt ttacgaggat 1920
atcatgagaa tgacagagaa tctaagtgag aagtatatca ttgggcacgg agcatcaagc 1980
actgtataca aatgtgtttt gaagaattgt aaaccggttg cgattaagcg gctttactct 2040
cacaacccac agtcaatgaa acagtttgaa acagaactcg agatgctaag tagcatcaag 2100
cacagaaatc ttgtgagcct acaagcttat tccctctctc acttggggag tcttctgttc 2160
tatgactatt tggaaaatgg tagcctctgg gatcttcttc atggccctac gaagaaaaag 2220
actcttgatt gggacacacg gcttaagata gcatatggtg cagcacaagg tttagcttat 2280
ctacaccatg actgtagtcc aaggatcatt cacagagacg tgaagtcgtc caacattctc 2340
ttggacaaag acttagaggc tcgtttgaca gattttggaa tagcgaaaag cttgtgtgtg 2400
tcaaagtcac atacttcaac ttacgtgatg ggcacgatag gttacataga ccccgagtat 2460
gctcgcactt cacggctcac tgagaaatcc gatgtctaca gttatggaat agtccttctt 2520
gagttgttaa cccgaaggaa agccgttgat gacgaatcca atctccacca tctgataatg 2580
tcaaagacgg ggaacaatga agtgatggaa atggcagatc cagacatcac atcgacgtgt 2640
aaagatctcg gtgtggtgaa gaaagttttc caactggcac tcctatgcac caaaagacag 2700
ccgaatgatc gacccacaat gcaccaggtg actcgtgttc tcggcagttt tatgctatcg 2760
gaacaaccac ctgctgcgac tgacacgtca gcgacgctgg ctggttcgtg ctacgtcgat 2820
gagtatgcaa atctcaagac tcctcattct gtcaattgct cttccatgag tgcttctgat 2880
gctcaactgt ttcttcggtt tggacaagtt atttctcaga acagtgagta g          2931
<210>28
<211>2901
<212>DNA
<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)
<400>28
atgaaggaga agatgcagcg aatggtttta tctttagcaa tggtgggttt tatggttttt   60
ggtgttgctt cggctatgaa caacgaaggg aaagctctga tggcgataaa aggctctttc  120
agcaacttag tgaatatgct tttggattgg gacgatgttc acaacagtga cttgtgttct  180
tggcgaggtg ttttctgcga caacgttagc tactccgttg tctctctgaa tttgtccagt  240
ctgaatcttg gaggggagat atctccagct attggagacc tacggaattt gcaatcaata  300
gacttgcaag gtaataaact agcaggtcaa attccagatg agattggaaa ctgtgcttct  360
cttgtttatc tggatttgtc cgagaatctg ttatatggag acataccttt ctcaatctct  420
aaactcaagc agcttgaaac tctgaatctg aagaacaatc agctcacagg tcctgtacca  480
gcaaccttaa cccagattcc aaaccttaag agacttgatc ttgctggcaa tcatctaacg  540
ggtgagatat cgagattgct ttactggaat gaagttttgc agtatcttgg attacgaggg  600
aatatgttga ctggaacgtt atcttctgat atgtgtcagc taaccggttt gtggtacttt  660
gatgtgagag gaaataatct aactggaacc atcccggaga gcatcggaaa ttgcacaagc  720
tttcaaatcc tggacatatc ttataatcag ataacaggag agattcctta caatatcggc  780
ttcctccaag ttgctactct gtcacttcaa ggaaacagat tgacgggtag aattccagaa  840
gttattggtc taatgcaggc tcttgctgtt ttggatttga gtgacaatga gcttgttggt  900
cctatcccac cgatacttgg caatctctca tttaccggaa agttgtatct ccatggcaat  960
atgctcactg gtccaatccc ctctgagctt gggaatatgt cacgtctcag ctatttgcag 1020
ctaaacgaca ataaactagt gggaactatt ccacctgagc ttggaaagct ggagcaattg 1080
tttgaactga atcttgccaa caaccgttta gtagggccca taccatccaa cattagttca 1140
tgtgcagcct tgaatcaatt caatgttcat gggaacctct tgagtggatc tattccactg 1200
gcgtttcgca atctcgggag cttgacttat ctgaatcttt cgtcgaacaa tttcaaggga 1260
aaaataccag ttgagcttgg acatataatc aatcttgaca aactagatct gtctggcaat 1320
aacttctcag ggtctatacc attaacgctt ggcgatcttg aacaccttct catattaaat 1380
cttagcagaa accatcttag tggacaatta cctgcagagt ttgggaacct tcgaagcatt 1440
cagatgattg atgtatcatt caatctgctc tccggagtta ttccaactga acttggccaa 1500
ttgcagaatt taaactcttt aatattgaac aacaacaagc ttcatgggaa aattccagat 1560
cagcttacga actgcttcac tcttgtcaat ctgaatgtct ccttcaacaa tctctccggg 1620
atagtcccac caatgaaaaa cttctcacgt tttgctccag ccagctttgt tggaaatcca 1680
tatctttgtg gaaactgggt tggatctatt tgtggtcctt taccgaaatc tcgagtattc 1740
tccagaggtg ctttgatctg cattgttctt ggcgtcatca ctctcctatg tatgattttc 1800
cttgcagttt acaaatcaat gcagcagaag aagattctac aaggctcctc aaaacaagct 1860
gaagggttaa ccaagctagt gattctccac atggacatgg caattcatac atttgatgat 1920
atcatgagag tgactgagaa tcttaacgaa aagtttataa ttggatatgg tgcttctagc 1980
acggtataca aatgtgcatt aaaaagttcc cgacctattg ccattaagcg actctacaat 2040
cagtatccgc ataacttgcg ggaatttgag acagaacttg agaccattgg gagcattagg 2100
cacagaaaca tagtcagctt gcatggatat gccttgtctc ctactggcaa ccttcttttc 2160
tatgactaca tggaaaatgg atcactttgg gaccttcttc atgggtcatt gaagaaagtg 2220
aagcttgatt gggagacaag gttgaagata gcggttggag ctgcacaagg actagcctat 2280
cttcaccacg attgtactcc tcgaatcatt caccgtgaca tcaagtcatc gaacatactt 2340
cttgatgaga atttcgaagc acatttatct gatttcggga ttgctaagag cataccagct 2400
agcaaaaccc atgcctcgac ttatgttttg ggaacaattg gttatataga cccagagtat 2460
gctcgtactt cacgaatcaa tgagaaatcc gatatataca gcttcggtat tgttcttctt 2520
gagcttctca ctgggaagaa agcagtggat aacgaagcta acttgcatca actgatattg 2580
tcaaaggctg atgataatac tgtgatggaa gcagttgatc cagaggttac tgtgacttgt 2640
atggacttgg gacatatcag gaagacattt cagctggctc tcttatgcac aaagcgaaac 2700
cctttagaga gacccacaat gcttgaagtc tctagggttc tgctctctct tgtcccatct 2760
ctgcaagtag caaagaagct accttctctt gatcactcaa ccaaaaagct gcagcaagag 2820
aatgaagtta ggaatcctga tgcagaagca tctcaatggt ttgttcagtt ccgtgaagtc 2880
atctccaaaa gtagcatata a                                           2901
<210>29
<211>2985
<212>DNA
<213>玉米(Zea mays)
<400>29
atgcctgtgc gcagctcagt ggccatgacg acgacggccg cccgtgctct cgccgccctc   60
gtgctcgtca ccgccgccgc cgccgccgcc gccgtcgccg acgatggggc ggcgctggtg  120
gagatcaaga agtccttccg caacgtcggc aacgtactgt acgattgggc cggcgacgac  180
tactgctcct ggcgcggcgt cctgtgcgac aacgtcacgt tcgccgtcgc cgcgctcaac  240
ctctctggcc tcaaccttga gggtgagatc tctccagccg tcggcagcct caagagcctc  300
gtctccatcg acctcaagtc aaatggccta tccgggcaga tccctgatga gattggcgat  360
tgttcgtcac ttaggacgct ggacttttca ttcaacaact tggacggcga cataccattt  420
tcaatatcaa agctgaagca cctggagaac ttgatattga agaacaaccg gctgattggt  480
gcgatcccct caacattgtc acagctccca aatttgaaga ttctggactt ggcacaaaac  540
aaactgactg gggagatacc gaggcttatc tattggaacg aggttcttca atacttgggt  600
ttgcggggaa atcatttaga aggaagcctc tctcctgata tgtgccagct tactggcctt  660
tggtactttg atgtgaagaa caatagtttg actggggcga taccagacac cattgggaac  720
tgtacaagtt ttcaggtctt ggatttgtct tacaaccgct ttactggacc aatcccattc  780
aacattggtt tcctacaagt ggctacacta tccttgcaag ggaacaagtt cactggccca  840
attccttcag taattggcct tatgcaggct ctcgctgtcc tagatctgag ttacaaccaa  900
ttatctggtc ctataccatc tatactaggc aacttgacat acactgagaa gctgtacatg  960
caaggcaaca ggttaactgg atcgatacca ccagagctag gaaatatgtc aacacttcat 1020
tacctagaac tgaatgataa tcaacttact gggtcaattc caccagagct tggaaggcta 1080
acaggcttgt ttgacctgaa ccctgcgaat aaccaccttg aaggaccaat tcctgacaac 1140
ctaagttcat gtgtgaatct caatagcttc aatgcttatg gcaacaagtt aaatggaacc 1200
attcctcgtt cgctgcggaa acttgaaagc atgacctatt taaatctttc atcaaatttc 1260
ataagtggtt ctattcctat tgagctatca aggatcaaca atttggacac gttgggctta 1320
tcctgtaaca tgatgacggg tccaattcca tcatccattg gcaacctaga gcatctattg 1380
aggcttaact tgagcaagaa tgatctagtt ggattcatcc ctgcggagtt tggtaatttg 1440
ggaagtgtca tggagattga tttatcctat aatcatcttg gtggtctgat tcctcaagaa 1500
cttggaatgc tgcaaaacct gatgttgcta aaactggaaa acaacaatat aactggcgat 1560
gtctcttctc tgatgaactg cttcagcctc aatatcttaa atgtgtcata caataattta 1620
gctggtgctg tccctactga caacaacttc acacggtttt cacatgacag ctttttaggt 1680
aatcctggac tctgtggata ttggcttggt tcttcatgtc gttccactgg ccaccgagac 1740
aaaccgccaa tctcaaaggc tgccataatt ggtgttgctg tgggtggact tgttatcctc 1800
ctgatgatct tagtagctgt atgcaggcca caccatccac ctgcttttaa agatgccact 1860
gtaagcaagc cagtgagcaa tggtccaccc aagctgatga tccttcatat gaacatggct 1920
cttcatgtct ttgatgatat aatgaggatg actgagaact tgagtgagaa atacatcatt 1980
ggatacgggg catcaagtac agtttataaa tgtgttctaa agaattgcaa accagtggca 2040
ataaaaaagc tgtatgccca ctaccctcag agccttaagg aatttgaaac tgagctcgag 2100
actgttggta gcatcaaaca ccggaatcta gtcagccttc aagggtactc gttgtcacct 2160
gttgggaacc tcctctttta tgattatatg gagagtggca gcttatggga tgttttacat 2220
gaaggctcat ccaaggagaa caaacttgac tgggtgactc gcctacggat cgctcttggt 2280
gcagctcaag gcctcgctta ccttcaccat gactgcagcc cacgaataat tcaccgggac 2340
gtaaaatcaa agaatatact cctcgacaaa gattatgagg cccatcttac agacttcggc 2400
atcgctaaga gcttatgtgt ctcgaagact cacacgtcaa cctacgtcat gggcactatt 2460
ggttacattg atcccgagta cgcccgcacc tcccgcctca acgagaagtc tgatgtctac 2520
agctacggca tcgttctgct ggagctgctg accggcaaga agccagtgga caacgagtgc 2580
aatctccatc acttgatcct atcgaagacg gcgagcaacg aggtcatgga gacggtggac 2640
cccgacgtgg gagacacctg caaggacctg ggcgaggtga agaagctgtt ccagctggcg 2700
ctcctctgca ccaagcggca gccctcggac cggccgacga tgcacgaggt ggtgcgcgtc 2760
cttgactgcc tggtgaaccc ggagccgccg ccgcagccgc agcagcagca gcagaaggcg 2820
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ctgttcctca agttcggcga ggccatctcg cagaacatgg tgtag                 2985
<210>30
<211>2931
<212>DNA
<213>玉米(Zea mays)
<400>30
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acatacactg agaaattata cctgcaaggc aataggttaa ctggattgat accgccagag  900
cttggtaata tgtcgacact gcattacctg gaactgaacg acaatctgtt gactgggttc  960
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cttataggac ctatccctga gaatttaagt tcatgtgcaa atctcattag tttcaatgct 1080
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gccctctatg tatatgatga tataatgagg atgactgaaa acttgagcga aaaatacatt 1920
attggttatg gagcctcaag tacagtctac agatgcgacc tgaagaactg caagccaatt 1980
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catgcttcat cgaagaaaaa gaaactcgat tgggaggctc gcctcaagat tgctctcgga 2220
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<210>31
<211>2937
<212>DNA
<213>水稻(Oryza sativa)
<400>31
atgacgccgg cgccggcggc cgcctcctac cgcgctctcg tcgcgctcct gctcgtcgcc   60
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ccatcaacca ttgggagttt ggagcatcta ttaagactta acttgagcaa caatggtcta 1380
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ttaaatctca aaaacaacaa cataactggg gatgtctctt cactgatgaa ctgcttcagc 1560
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tccgatgctg agctgtttct caagtttggc gaggtcattt ctcagaacac agagtag    2937
<210>32
<211>3000
<212>DNA
<213>水稻(Oryza sativa)
<400>32
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gactgcatct ccttaaaata tttggatttg tctggcaact tgctgtatgg agacatcccc  420
ttctccatct ccaagctcaa gcagcttgag gagctgattt tgaagaacaa ccagctcacg  480
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<210>33
<211>2790
<212>DNA
<213>两色蜀黍(Sorghum bicolor)
<400>33
atgcctgtcc gcagctcagt ggccatgacg acgacggccg cccgtgctct cgtcgccctc   60
ctcctcgtcg ccgtcgccgt cgccgacgat ggggcgacgc tggtggagat caagaagtcc  120
ttccgcaacg tcggcaacgt actgtacgat tgggccggcg acgactactg ctcctggcgc  180
ggcgtcctgt gcgacaacgt cacattcgcc gtcgctgcgc tcaacctctc tggcctcaac  240
cttgagggcg agatctctcc agccgtcggc agcctcaaga gcctcgtctc catcgatctg  300
aagtcaaatg ggctatccgg gcagatccct gatgagattg gtgattgttc atcacttagg  360
acgctggact tttctttcaa caacttggat ggcgacatac cattctctat atcaaagctg  420
aagcacctgg agaacttgat attgaagaac aaccagctga ttggtgcgat cccatcaaca  480
ttgtcacagc tcccaaattt gaagattttg gatttggcac aaaacaaact gactggggag  540
ataccaaggc ttatctactg gaatgaggtt cttcaatatc ttgatgtgaa gaacaatagc  600
ttgaccgggg tgataccaga caccattggg aactgtacaa gttttcaagt cttggatttg  660
tcttacaacc gctttactgg accaatccca ttcaacattg gtttcctaca agtggctaca  720
ctatccttgc aagggaacaa gttcaccggt ccaattcctt cagtaattgg tcttatgcag  780
gctctcgctg ttctagatct gagttacaac caattatctg gtcctatacc atcaatacta  840
ggcaacttga catacactga gaagctgtac atccaaggca ataagttaac tgggtcgata  900
ccaccagagt taggaaatat gtcaacactt cattacctag aactgaacga taatcaactt  960
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aataaccacc tggaaggacc aattcctgac aacctaagtt catgtgtgaa tctcaatagc 1080
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gttggattca tccccgcgga gtttggtaat ttgaggagtg tcatggagat tgatttatcc 1380
tataatcacc ttggtggcct gattcctcaa gaacttgaaa tgctgcaaaa cctgatgttg 1440
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gtgatccttc atatgaacat ggcccttcat gtatacgatg acataatgag gatgactgag 1800
aacttgagtg agaaatacat cattggatac ggggcgtcaa gtacagttta taaatgtgtc 1860
ctaaagaatt gcaaaccggt ggcaataaaa aagctgtatg cccactaccc acagagcctt 1920
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cttcaagggt actcattatc acctgttggg aacctcctct tttatgatta tatggaatgt 2040
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actcgcctac ggattgctct tggtgcagct caaggccttg cttaccttca ccatgactgc 2160
agtccacgga taattcatcg ggatgtaaaa tcaaagaata tactccttga caaagattat 2220
gaggcccatc ttacagactt tggaattgct aagagcttat gtgtctcaaa aactcacaca 2280
tcaacctatg tcatgggaac tattggctac attgatcctg agtacgcccg cacttcccgt 2340
ctcaacgaaa agtctgatgt ctacaggcta tggcattgtt ctgctggagc tgctgactgg 2400
caagaagcca gtggacaacg aatcctatcg aagacggcaa gcaacgaggt catggatacc 2460
gtggaccctg acatcgggga cacctgcaag gacctcggcg aggtgaagaa gctgttccag 2520
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<210>34
<211>1514
<212>DNA
<213>两色蜀黍(Sorghum bicolor)
<400>34
atggcagcga gggcggcggc ggcggtggtg ctgcttattg cggctgtggt gtcggtgtcg   60
gcgggaggag gtgaagggga cggagacggg cagacgctga tggcggtcaa ggcggggttc  120
gggaacgcgg ccaacgcgct ggcggactgg gacggcggcc gcgaccactg cgcctggcgc  180
ggcgtcgcct gcgacgccgc ctctttcgcc gtcgtcggcc tgaacctgtc aaatctaaac  240
ctcggagggg agatctcgcc ggctataggg cagctcaaga gcctacagtt cgtggatctc  300
aagctgaaca agctcacagg ccaaatccca gatgagattg gggattgtgt ctccttaaaa  360
tatttggatt tgtctggaaa cttgctgtat ggagacatcc ccttctccat ctccaagctc  420
aaacagcttg aggacctgat tttgaagaac aaccaactca cgggacccat cccttccaca  480
ctgtcccaga ttccaaatct caagaccttg gatctggcgc agaacaagct caccggagac  540
attcccaggc tcatctactg gaatgaagta ctgcaatacc taggcttgag gggcaattca  600
ctgactggaa ctctgtcacc tgatatgtgc caactgactg gcctgtggta ttttgatgta  660
agggggaaca atctcacagg aacaattcca gagggcatag ggaactgcac tagctttgag  720
attctggata tttcatacaa ccaaatctct ggagaaatac cttacaacat aggttacctt  780
caagtagcca cacttgatct tagcgagaat gaacttgtgg gaccaattcc tccgatactt  840
ggcaacctgt cctacacagg caaactctat ttacatggca acaaactcac gggacatata  900
ccaccagaac tggggaacat gagtaaactt agctacctgc agctgaatga caatgaacta  960
gtgggcacaa tcccagctga gcttggcaaa ctcacagagt tatttgaatt gaatcttgcc 1020
aacaacaatc ttgagggtca tattcctgca aacatcagct cttgcagtgc actgaacaaa 1080
ttcaatgtgt atggcaatag actgaatggc tctatccctg ctggtttcca ggagttggag 1140
agtttgacat acctgaacct ttcttcaaac aatttcaaag gccagattcc ctctgagctt 1200
ggtcacatag tcaacttgga cacactagat ctttcctaca atgaattctc tggaccagtt 1260
cctcctacta ttggtgatct cgagcatctt cttgaattga atttgagtaa aaaccatctt 1320
actggatctg tgcctgctga atttggaaac ttgagaagtg tccaagtaat tgacatatcc 1380
agcaacaact tgactggtta tctccctgaa gaacttggac agctgcaaaa ccttgatagc 1440
ttgattctta acaacaacaa tttggttggg gagatccctg ctcagctggc taactgcttc 1500
agcttaatta cctt                                                   1514
<210>35
<211>752
<212>DNA
<213>两色蜀黍(Sorghum bicolor)
<400>35
cttcaaatgg acatggctac ccatacctat gaagacatta tgaggttgac tgagaatttg   60
agcgagaaat acatcattgg ttatggggca tcaagtactg tgtacaaatg tgatctcaag  120
ggcggcaaag ccatcgctgt caaacggctt tacagtcagt ataaccacag cctccgtgag  180
tttgagacag aactggagac gatcggtagc atccgacaca ggaatctcgt cagccttcat  240
ggcttctcac tctcccctca tggaaacctg cttttctacg attacatgga aaatggttcc  300
ctgtgggatc ttcttcatgg tccatcaaag aaggtgaagc ttgattggga cacaaggctt  360
aagattgcgg taggtgctgc gcaaggactg gcctatcttc accatgactg caaccctcgc  420
ataatccaca gggatgtcaa gtcctcaaac atcctgctcg acgagaactt cgaagcgcac  480
ctctctgatt tcggcatcgc caaatgtgtc ccggctgcca agtcccatgc ctccacctac  540
gtgcttggaa ccattggcta cattgatcca gagtatgccc gcacgtcgag gctcaatgag  600
aaatcggatg tctacagctt tggcatcgtc cttctggagc tgctcaccgg gaagaaggct  660
gtagacaatg aatccaactt gcaccaattg atactctcaa aagctgacga caacacggtg  720
atggaggctg tggactcgga ggtgtcagtg ac                                752
<210>36
<211>1323
<212>DNA
<213>大豆(Glycine max)
<220>
<221>misc_feature
<222>1253
<223>n＝A，T，C或G
<400>36
cttagtctct ctctacttaa tgtgtcctat aacaaactat ttggtgttat ccccacgagt   60
aacaacttta ccaggtttcc ccctgacagt ttcattggaa accctggtct ttgtggtaat  120
tggctgaatt tgccatgcca tggtgctcgt ccttcagagc gagttacatt atctaaggct  180
gccattcttg gaattacttt gggtgccctt gtgattcttc ttatggtatt ggtggcagct  240
tgccgaccac acagcccctc tccttttcct gatggatcat ttgacaaacc aattaatttc  300
tcccctccaa agctagtgat tcttcatatg aatatggcac tacatgtgta tgaagatatc  360
atgaggatga ctgaaaacct aagtgagaag tatatcattg gatatggtgc atcaagtaca  420
gtttataaat gtgttcttaa gaattgtaag ccggtggcta tcaagaggat ctattctcac  480
tatccccaat gtattaaaga atttgaaact gaactcgaga ctgttggcag catcaagcac  540
cggaatttgg tcagtctcca aggctactcc ttgtccccat atggccatct cctgttttat  600
gactacatgg aaaatggcag tctatgggat cttcttcatg gacctaccaa gaagaaaaag  660
cttgactggg agctgcgtct aaaaatagca cttggagcag cacaagggct tgcttatcta  720
caccatgatt gctgtcctag aatcatccac agagatgtga aatcatctaa cattctattg  780
gatgcagact ttgagcctca tctcactgat tttggcattg ccaaaagtct ctgcccctca  840
aagtcccata cttctactta cataatgggc acaattggct atatagaccc tgagtatgct  900
agaacttcac gtctcactga gaagtctgat gtgtacagtt acggtattgt tttacttgag  960
ttgctaactg gaaggaaagc tgttgacaat gaatccaacc tccaccatct gattttgtcc 1020
aaggcagcaa ccaatgcagt gatggaaaca gttgatccag acattactgc cacatgcaag 1080
gacctaggag ctgtaaaaaa ggtttatcag cttgctctat tatgcacaaa gaggcagcca 1140
gctgataggc cgacaatgca cgaagtgaca cgtgtactcg gaagccttgt gctgtccaac 1200
accccaccaa agcaactagc tgcactacca cctgcttcag atccatctgc canagtgcca 1260
tgctacgtgg atgagtatgg caaacctcaa gactccacac ttggtgaaac tgcccctcaa 1320
tga                                                               1323
<210>37
<211>492
<212>DNA
<213>大豆(Glycine max)
<400>37
gagtatgcta gaacttcgca tctcactgag aagtctgatg tgtacagtta tggtattgtt   60
ttactcgagt tgctaactgg aaggaaagct gttgacaatg aatccaacct ccaccatctt  120
attttgtcca aggcagcaac caatgctgtg atggaaacag ttgatcccga cattactgcc  180
acatgcaagg acctaggagc tgtaaaaaag gtttatcagc ttgctctatt atgcacaaag  240
aggcagccag ctgataggcc aacaatgcac gaagtgacac gtgtactcgg aagtctcgtg  300
ccatcaagca tcccaccaaa gcaactagct gacctaccac ctgcttcaaa tccatctgcc  360
aaagtgccat gctacgtgga tgagtatgca aacctcaaaa ccccacactt agtaaactgc  420
ccctcaatga gcacttcaga tgctcaactc ttcctcaagt ttggagaagt aatctctcaa  480
aacagtgagt ga                                                      492
<210>38
<211>591
<212>DNA
<213>大豆(Glycine max)
<400>38
gaaaatggca gtctatggga tcttctgcat ggacctacca agaagaaaaa gcttgattgg  60
gatcttcgtc taaaaatagc actaggatca gcccaagggc ttgcttatct acaccatgat 120
tgcagtccac tcatcattca cagggacgtg aaatcatcta atattttact agacaaagac 180
tttgagcccc atctcgctga tttcggcatt gcaaaaagtc tatgcccatc taagacccac 240
acttcaactt acataatggg cacaattggc tacatagacc ctgagtatgc tagaacttcc 300
cgcctcactg agaagtccga tgtgtatagc tatggtatcg tattgcttga gcttctaact 360
gggaggaaag ctgttgacaa cgaatcaaac ctccatcatc tgattttgtc caagacagct 420
aatgatggcg taatggaaac cgttgatcca gatattacta ccacatgcag ggacatggga 480
gcagtaaaaa aggtttttca gcttgctctt ttatgcacaa agaagcaacc agtcgatagg 540
cctacaatgc atgaagtgac tcgcgtctgg gaagccttgt gccatccata a          591
<210>39
<211>279
<212>DNA
<213>大豆(Glycine max)
<400>39
agtacagttt ataaatgtgt ccttaaaaat tgcaagccgg tggctatcaa gaagctctat  60
tcccactacc cacaatactt gaaagagttt gagactgagc ttgagacagt tggtagcgtt 120
aagcacagaa atctggtcag tctccaaggc tactctttgt caacgtacgg aaatcttctc 180
ttttatgact acatggaaaa tggcagtcta tgggatcttc tgcatggacc taccaagaag 240
aaaaagcttg at tgggatct tcgtctaaaa atagcacta                       279
App.Ref.：2290-PCT
4

Claims (20)

1.一种分离的多核苷酸，选自：
a.与选自SEQ ID NO：5、7、9、11、13、15、17、19、21、23和25的多核苷酸全长序列有至少70％序列同一性的多核苷酸，序列同一性用GAP算法默认参数计算得出；其中所述多核苷酸编码起器官大小调节物作用的多肽；
b.编码选自SEQ ID NO：6、8、10、12、14、16、18、20、22、24和26多肽的多核苷酸，和
c.选自SEQ ID NO：5、7、9、11、13、15、17、19、21、23和25的多核苷酸；和
d.与(a)、(b)或(c)的多核苷酸互补的多核苷酸。
2.一种重组表达盒，所述重组表达盒包含权利要求1的多核苷酸，其中所述多核苷酸按有义或反义方向与启动子有效连接。
3.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含权利要求2的表达盒。
4.一种转基因植物，所述植物包含权利要求2的重组表达盒。
5.权利要求4的转基因植物，其中所述植物是单子叶植物。
6.权利要求4的转基因植物，其中所述植物是双子叶植物。
7.权利要求4的转基因植物，其中所述植物选自：玉米、大豆、向日葵、高粱、油菜、小麦、苜蓿、棉花、水稻、大麦、粟、花生和可可。
8.一种转基因种子，所述种子得自权利要求4的转基因植物。
9.一种调节植物器官大小的方法，该方法包括：
a.将包含与启动子有效连接的权利要求1的多核苷酸的重组表达盒导入植物细胞；和
b.在植物细胞生长条件下培育植物；其中所述植物细胞中的器官大小受到调节。
10.权利要求9的方法，其中所述植物细胞选自以下植物：玉米、大豆、向日葵、高粱、油菜、小麦、苜蓿、棉花、水稻、大麦、粟、花生和可可。
11.一种调节植物的整株植物或器官大小的方法，该方法包括：
a.将包含与启动子有效连接的权利要求1的多核苷酸的重组表达盒导入植物细胞；
b.在植物细胞生长条件下培养植物细胞；和
c.由所述植物细胞再生出植物；其中所述植物的器官大小受到调节。
12.权利要求11的方法，其中所述植物选自：玉米、大豆、高粱、油菜、小麦、苜蓿、棉花、水稻、大麦、粟、花生和可可。
13.一种由转基因植物组织加工方法得到的产物，所述植物组织表达编码ERECTA基因的分离多核苷酸，该方法包括：
a.用重组表达盒转化植物细胞，所述表达盒包含与选自SEQ IDNO：5、7、9、11、13、15、17、19、21、23和25的多核苷酸全长序列有至少90％序列同一性的多核苷酸，所述多核苷酸与启动子有效连接；和
b.在植物细胞生长条件下培养转化的植物细胞；其中所述转化的植物细胞的生长受到调节；
c.使植物细胞在植物形成条件下生长从而在植物组织中表达所述多核苷酸；和
d.加工所述植物组织以获得产物。
14.权利要求13的产物，其中所述多核苷酸还编码选自SEQ IDNO：6、8、10、12、14、16、18、20、22、24和26的多肽。
15.权利要求13的转基因植物，其中所述植物是单子叶植物。
16.权利要求13的转基因植物，其中所述植物选自：玉米、大豆、向日葵、高粱、油菜、小麦、苜蓿、棉花、水稻、大麦和粟。
17.权利要求13的产物，其通过所述多核苷酸的过量表达而改善植物的柄强度。
18.权利要求13的产物，其通过增加生物量而提高产量。
19.权利要求13的产物，其为乙醇(ethanol)组分。
20.一种在干旱胁迫期间调节植物整株植物或器官大小的方法，该方法包括：
a.将包含与启动子有效连接的权利要求1的多核苷酸的重组表达盒导入植物细胞；
b.在植物细胞生长条件下培养植物细胞；和
c.在干旱胁迫条件下由所述植物细胞再生出植物；其中所述植物的植物生长受到调节。
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