CN114152700B - 一种茯苓标准汤剂质量检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种茯苓标准汤剂质量检测方法,包括对茯苓标准汤剂的干浸膏出膏率、性状、薄层鉴别、浸出物及特征图谱进行测定,其中,干浸膏出膏率测定采用煎煮法进行测定;薄层鉴别采用照薄层色谱法进行鉴别;浸出物采用热浸法测定;特征图谱测定采用液相色谱法测定。本发明的茯苓标准汤剂质量检测方法,通过多方面测量,来评定茯苓标准汤剂的质量,为产品的质量稳定奠定坚实的基础,能够建立茯苓汤剂可行的质量标准,实现茯苓标准汤剂质量的有效控制。
Description
技术领域
本发明涉及中药材质量控制技术领域,具体涉及一种茯苓标准汤剂质量检测方法。
背景技术
现代药物需要具有稳定均一、安全和有效的三大特性,中成药在这几个方面难以比拟西药,因此,更需要采用多种手段进行检测,保证检测结果的可靠性和稳定性。茯苓为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos(Schw.)Wolf的干燥菌核,多于7~9月采挖,挖出后除去泥沙,堆置“发汗”后,摊开晾至表面干燥,再“发汗”,反复数次至现皱纹、内部水分大部散失后,阴干,或将鲜茯苓按不同部位切制,阴干,主要用于水肿尿少,痰饮眩悸,脾虚食少,便溏泄泻,心神不安,惊悸失眠。目前,茯苓的检测方法主要为照薄层色谱法,然而仅采用现有的照薄层色谱法来检测茯苓汤剂是有缺陷的,无法达到中药配方颗粒质量控制要求。因此,建立一种用于药材质量控制的茯苓标准汤剂质量检测方法是十分必要的。
发明内容
本发明的目的就是要解决现有技术的不足,提供一种茯苓标准汤剂质量检测方法,以更好的控制茯苓汤剂的质量,表征药物质量,提高药物稳定性。
为达到上述目的,本发明的技术方案是这样实现的:
本发明提供一种茯苓标准汤剂质量检测方法,包括如下检测方法,
对茯苓标准汤剂的干浸膏出膏率、性状、薄层鉴别、浸出物、特征图谱进行测定,其中,干浸膏出膏率测定采用煎煮法进行测定;薄层鉴别采用照薄层色谱法进行鉴别;浸出物采用热浸法测定;特征图谱测定采用液相色谱法测定;
采用液相色谱法测定特征图谱包括:进行液相色谱仪分析,以茯苓对照药材制成的溶液作为参照物溶液b,以茯苓酸B对照品制成的溶液作为对照品溶液b,以茯苓酸A对照品制成的溶液作为对照品溶液d,以茯苓标准汤剂样品制成的溶液作为供试品溶液b,分别精密吸取参照物溶液b、对照品溶液b、对照品溶液d和供试品溶液b,分别注入液相色谱仪,测定,即得;其中,采用的色谱条件为,色谱柱:C 18(250mmx4.6mm,5um)(Shim-pack GISTC18-AQ);流动相:以乙腈为流动相A,以0.1%甲酸溶液为流动相B,按表a的规定进行梯度洗脱;
表a梯度洗脱程序
流速:1.0mL/min;柱温:30℃;进样量:10μL;检测波长:252nm。
在其中一实施例中,所述煎煮法包括:取茯苓饮片加水浸泡30-40min,煎煮两次,第一次煎煮时长为30-40min,第二次煎煮时长为25-30min,趁热进行固液分离,合并滤液,浓缩干燥,制得茯苓标准汤剂干膏粉。
在其中一实施例中,所述照薄层色谱法包括如下步骤:
(1)制备供试品溶液a:取茯苓标准汤剂样品3g,加乙醇50mL,低温超声处理30min,滤过,药渣挥干,加1mL甲醇,制得供试品溶液a;
(2)制备对照药材溶液a:取茯苓对照药材1g,加乙醇50mL,低温超声处理30min,滤过,药渣挥干,加1mL甲醇,制得对照药材溶液a;
(3)进行薄层色谱分析:薄层色谱条件为,薄层板:硅胶G薄层板;点样量:吸取20uL供试品溶液a与5uL对照药材溶液a;展开剂:体积比为20:5:0.5的甲苯-乙酸乙酯-甲酸溶液;显色剂:体积比为4:1的2%香草醛硫酸溶液-乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,置紫外灯下检视。
在其中一实施例中,所述照薄层色谱法中,所述紫外灯的发光波长为365nm。
在其中一实施例中,所述热浸法以乙醇为溶剂,采用醇溶性浸出物测定法项下的热浸法测定浸出物范围。
在其中一实施例中,采用液相色谱法测定特征图谱还包括如下步骤:
(1)制备参照物溶液b:取茯苓对照药材3g,加50%甲醇10ml,超声处理30min,放冷,摇匀,滤过,取续滤液,作为参照物溶液b;
(2)制备对照品溶液b:取茯苓酸B对照品适量,精密称定,加甲醇溶解,制得浓度为20ug/mL的对照品溶液b;
(3)制备对照品溶液d:取茯苓酸A对照品适量,精密称定,加甲醇溶解,制得浓度为20ug/mL的对照品溶液d;
(4)制备供试品溶液b:取茯苓标准汤剂样品3g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加入精密称定的50%甲醇10mL,密塞,称定重量,超声处理30min,放冷,再称定重量,用50%甲醇补足减失重量,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液b。
与现有技术相比,本发明的有益效果是:
对茯苓标准汤剂的干浸膏出膏率、性状、薄层鉴别、浸出物、特征图谱进行研究,通过多方面测量,来评定茯苓标准汤剂的质量,为产品的质量稳定奠定坚实的基础,能够建立茯苓汤剂可行的质量标准,实现茯苓标准汤剂质量的有效控制,并且,采用本申请的色谱条件进行液相分析,可以得到分离度更好更清晰的色谱图。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案,下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明一实施例中茯苓饮片15批次标准汤剂薄层图谱;其中,1组图谱为阴性对照样品薄层图谱,2组为茯苓对照药材薄层图谱,3~17组为批号210501T~Y210713T茯苓饮片标准汤剂薄层图谱。
图2为本发明提取方法考察中不同提取方法对比图;其中,S1为回流提取供试品溶液特征图谱;S2为超声提取供试品溶液特征图谱。
图3为本发明提取时间考察中不同提取时间对比图;其中,S1为超声提取20min供试品溶液特征图谱;S2为超声提取30min供试品溶液特征图谱;S3为超声提取40min供试品溶液特征图谱。
图4为本发明提取溶剂考察中不同提取溶剂对比图;其中,S1为10%甲醇提取制备的供试品溶液特征图谱;S2为50%乙醇提取制备的供试品溶液特征图谱;S3为50%甲醇提取制备的供试品溶液特征图谱。
图5为本发明样品取用量考察中不同溶剂量对比图;其中,S1为溶剂取用量为10ml的供试品溶液特征图谱;S2为溶剂取用量为15ml的供试品溶液特征图谱;S3为溶剂取用量为20ml的供试品溶液特征图谱。
图6为本发明专属性考察中空白溶剂对比图;其中,S1为对照品溶液特征图谱;S2为供试品溶液特征图谱;S3为空白溶剂(50%甲醇)特征图谱。
图7为本发明重复性试验共有峰叠加特征图谱;其中,S1为重复性6下的供试品溶液共有峰叠加特征图谱;S2为重复性5下的供试品溶液共有峰叠加特征图谱;S3为重复性4下的供试品溶液共有峰叠加特征图谱;S4为重复性3下的供试品溶液共有峰叠加特征图谱;S5为重复性2下的供试品溶液共有峰叠加特征图谱;S6为重复性1下的供试品溶液共有峰叠加特征图谱。
图8为本发明精密度试验共有峰叠加特征图谱;其中,S1为精密度6下的供试品溶液共有峰叠加特征图谱;S2为精密度5下的供试品溶液共有峰叠加特征图谱;S3为精密度4下的供试品溶液共有峰叠加特征图谱;S4为精密度3下的供试品溶液共有峰叠加特征图谱;S5为精密度2下的供试品溶液共有峰叠加特征图谱;S6为精密度1下的供试品溶液共有峰叠加特征图谱。
图9为本发明稳定性试验共有峰叠加特征图谱;其中,S1为于24h测定的供试品溶液共有峰叠加特征图谱;S2为于12h测定的供试品溶液共有峰叠加特征图谱;S3为于8h测定的供试品溶液共有峰叠加特征图谱;S4为于4h测定的供试品溶液共有峰叠加特征图谱;S5为于2h测定的供试品溶液共有峰叠加特征图谱;S6为于0h测定的供试品溶液共有峰叠加特征图谱。
图10为本发明标准汤剂特征图谱测定中茯苓酸B对照品图谱。
图11为本发明标准汤剂特征图谱测定中茯苓酸A对照品图谱。
图12为本发明标准汤剂特征图谱测定中猪苓酸C对照品图谱。
图13为本发明标准汤剂特征图谱测定中茯苓对照药材图谱。
图14为本发明标准汤剂特征图谱测定中15批茯苓中药材叠加图谱;其中,S1-S15分别表示1-15批茯苓中药材图谱。
图15为本发明标准汤剂特征图谱测定中15批茯苓中药材共有峰图谱。
图16为本发明标准汤剂特征图谱测定中15批茯苓饮片标准汤剂叠加图谱;其中,S1-S15分别表示1-15批茯苓饮片标准汤剂图谱。
图17为本发明标准汤剂特征图谱测定中15批茯苓饮片标准汤剂拟合图。
图18为茯苓酸B、茯苓酸A、猪苓酸C、去氢茯苓酸等对照品的溶液与茯苓饮片标准汤剂供试品溶液的叠加图谱;其中,S1为茯苓饮片标准汤剂供试品溶液图谱,S2为茯苓酸B对照品溶液图谱,S3为茯苓酸A对照品溶液图谱,S4为猪苓酸C对照品溶液图谱,S5为去氢茯苓酸对照品溶液图谱。
图19为本发明茯苓饮片标准汤剂含量测定中15批茯苓标准汤剂叠加图谱;其中,S1~S15分别表示15批次茯苓饮片标准汤剂图谱。(S1~S15分别对应的批次为Y211103PT、Y211104PT、Y211105PT、Y211106PT、Y211107PT、Y211108PT、Y211109PT、Y211110PT、Y211111PT、Y211112PT、Y211113PT、Y211114PT、Y211115PT、Y211116PT、Y211117PT)
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白,以下结合具体实施例,并参照附图,对本发明进一步详细说明。
本发明提供一种茯苓标准汤剂质量检测方法,包括如下检测方法,对茯苓标准汤剂的干浸膏出膏率、性状、薄层鉴别、浸出物、特征图谱进行测定,其中,干浸膏出膏率测定采用煎煮法进行测定;薄层鉴别采用照薄层色谱法进行鉴别;浸出物采用热浸法测定;特征图谱采用液相色谱法测定。
本实施例中:
制备茯苓饮片标准汤剂:参照《医疗机构中药煎药室管理规范》(国中医药管理局[2009]3号)中的固定前处理方法、煎煮次数、加水量、煎煮时间等相关参数进行煎煮,取15批次茯苓饮片加水至没过药材约4-5cm,浸泡30-40min,煎煮两次,第一次煎煮时长为30-40min,第二次煎煮时长为25-30min,趁热进行固液分离,合并滤液,浓缩干燥,制得15批次茯苓饮片标准汤剂干膏粉。
1.干浸膏出膏率测试
取15批次茯苓饮片,按上述制法制得15批次标准汤剂干膏粉,以干膏粉计算干浸膏得率(见表1),并计算平均得率为4.687%,按照标准汤剂出膏率允许范围(均值70%~130%)计算,出膏率允许范围为3.28%~6.09%,该结果表明,15批标准汤剂出膏率范围为3.3%~6.1%,为配方颗粒质量研究提供参考依据,暂时拟定茯苓干浸膏出膏率允许范围为3.4%~6.1%。
表1:茯苓饮片标准汤剂出膏率
上述结果表明,15批次标准汤剂干浸膏出膏率为3.9%~6.1%,均符合拟定限度范围3.4%~6.1%。
2.性状考察
根据15批次茯苓饮片标准汤剂的实物性状特征,描述为淡黄色至黄色的粉末,气微、微苦。
3.薄层鉴别
本产品为单味饮片茯苓的干燥提取物,参考《中国药典》茯苓“薄层鉴别”项下的方法,以及山东省茯苓配方颗粒标准公示稿,用茯苓对照药材作对照,建立了本品薄层鉴别方法,经15批次样品试验,供试品斑点清晰,阴性对照样品无干扰,故拟定为本品鉴别项。试验方法和结果如下:
试验方法:照薄层色谱法(中国药典2020年版四部通则0502)试验
供试品溶液制备:取本品3g,加乙醇50mL,低温超声处理30min,滤过,药渣挥干,加1mL甲醇,制得供试品溶液。
对照药材溶液制备:取茯苓对照药材1g,加乙醇50mL,低温超声处理30min,滤过,药渣挥干,加1mL甲醇,制得对照药材溶液。
薄层色谱条件为,薄层板:硅胶G薄层板;点样量:吸取20uL供试品溶液,吸取5uL对照药材溶液;展开剂:体积比为20:5:0.5的甲苯-乙酸乙酯-甲酸溶液;显色剂:体积比为4:1的2%香草醛硫酸溶液-乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,置发光波长为365nm的紫外灯下检视。
结果:供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,详见图1。
4.浸出物测定
取15批次标准汤剂,按照《湖南省中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求(试行)》的规定,以乙醇为溶剂,照醇溶性浸出物测定法(中国药典2020年版通则2201)项下的热浸法测定,结果详见表2。
表2:浸出物测定结果
上述结果表明,15批次标准汤剂浸出物均值为46.26%,参考标准限度允许范围(均值70%~130%)的下限,拟定本品醇溶性浸出物不得少于32%,15批次标准汤剂测定结果均符合拟定限度要求。
5.特征图谱测试
5.1液相色谱法
色谱条件:色谱柱:C 18(250mmx4.6mm,5um)(Shim-pack GIST C18-AQ);流动相:以乙腈为流动相A,以0.1%甲酸溶液为流动相B,按表3的规定进行梯度洗脱;流速:1.0mL/min;柱温:30℃;进样量:10μL;检测波长:252nm。
表3:梯度洗脱程序
(1)制备参照物溶液:取茯苓对照药材3g,加50%甲醇10ml,超声处理30min,放冷,摇匀,滤过,取续滤液,作为参照物溶液;
(2)制备茯苓酸B对照品溶液:取茯苓酸B对照品适量,精密称定,加甲醇溶解,制成浓度为20ug/mL的茯苓酸B对照品溶液;
(3)制备茯苓酸A对照品溶液:取茯苓酸A对照品适量,精密称定,加甲醇溶解,制得浓度为20ug/mL的茯苓酸A对照品溶液;
(4)制备供试品溶液:取本品3g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加入精密称定的50%甲醇10mL,密塞,称定重量,超声处理30min,放冷,再称定重量,用50%甲醇补足减失重量,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液。
测定法:分别精密吸取参照物溶液、对照品溶液及供试品溶液各10μL,注入液相色谱仪,测定,即得。
5.2方法学考察
提取方法的考察:分别以不同的提取方法制备供试品溶液,包括超声30min提取、回流30min提取,按上述5.1试验方法进行测定。结果表明,如图2所示,样品超声30min主峰总峰高最大,故选择样品提取方式为超声处理30分钟。
提取时间的考察:分别以不同的超声提取时间(20min、30min、40min)制备供试品溶液,按上述5.1试验方法进行测定。结果表明,如图3所示,不同提取时间的主峰个数一致,30min提取时间的主峰总峰高最大,故确定供试品提取时间为30min。
提取溶剂的考察:分别以不同提取溶剂制备供试品溶液,按5.1试验方法进行测定。结果表明,如图4所示,不同提取溶剂主峰个数一致,提取溶剂为50%甲醇时,主峰总峰高最大,确定以50%甲醇为提取溶剂。
样品取用量考察:分别以不同溶剂量(10ml、15ml、20ml)制备供试品溶液,按5.1试验方法进行测定。如图5所示,结果表明,不同溶剂量的主峰个数一致,当溶剂的量为10ml时,峰高最大,故确定溶剂的量为10ml。
综上所述,确定供试品溶液制备方法的主要参数如下:取茯苓标准汤剂样品约3g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇10mL,密塞,称定重量,超声30min,放冷,再称定重量,用50%甲醇补足减失重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
5.3特征图谱分析方法验证
专属性考察:取供试品用溶剂50%甲醇10μL,按5.1色谱条件进行测定,试验表明,如图6所示,空白溶剂无干扰。
重复性试验:取同批样品(批号:T210701)约3g,共6份,按5.1色谱条件进行测定,结果显示,6份供试品特征图谱中有4个共有峰,相对保留时间RSD小于0.02%(详见表4及图7),表明该方法重现性良好。
表4:重复性试验特征图谱相对保留时间
峰号 | S1 | S2 | S3 | S4 | S5 | S6 | RSD(%) |
1 | 0.529 | 0.529 | 0.529 | 0.529 | 0.529 | 0.530 | 0.02 |
2(S) | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 0.00 |
4 | 1.260 | 1.260 | 1.260 | 1.260 | 1.260 | 1.260 | 0.01 |
精密度试验:取同批样品(批号:T210701)约3g,按5.1色谱条件进行测定,连续进样6针测定,峰形、峰数基本一致,相对保留时间RSD小于0.03%(详见表5以及图8),表明仪器精密度良好。
表5:精密度试验特征图谱相对保留时间
峰号 | S1 | S2 | S3 | S4 | S5 | S6 | RSD(%) |
1 | 0.530 | 0.529 | 0.529 | 0.529 | 0.529 | 0.529 | 0.03 |
2(S) | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 0.00 |
4 | 1.260 | 1.260 | 1.260 | 1.260 | 1.260 | 1.260 | 0.01 |
稳定性试验:取同批样品约3g,按5.1色谱条件进行测定,分别于0h、2h、4h、8h、12h、24h进样测定,特征图谱的峰形、峰数基本稳定,相对保留时间RSD小于0.03%(详见表6及图9),表明供试品溶液在24小时内较稳定。
表6:稳定性试验特征图谱相对保留时间
峰号 | 0 | 2h | 4h | 8h | 12h | 24h | RSD(%) |
1 | 0.530 | 0.530 | 0.529 | 0.529 | 0.529 | 0.529 | 0.03 |
2(S) | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 0.00 |
4 | 1.260 | 1.260 | 1.260 | 1.260 | 1.260 | 1.260 | 0.01 |
5.4标准汤剂特征图谱表征分析
标准汤剂特征图谱测定
按照5.3拟定的特征图谱分析方法,测定15批茯苓标准汤剂及其制备使用的15批次中药饮片特征图谱,结果显示,标准汤剂及其制备使用的中药饮片特征色谱图中有4个共有峰,并应与对照药材参照物溶液色谱中的4个特征峰保留时间相对应,其中与茯苓酸B对照品溶液相对应的峰为峰2,共有峰特征图谱详见图10至图17。
特征色谱图相似度评价
采用“中药色谱指纹图相似度评价系统(2012版)”,对选定的4个共有特征峰进行相似度的评价,结果显示,15批茯苓饮片标准汤剂特征色谱图相似度均在0.9以上,表明本标准汤剂质量相对稳定。以茯苓酸B参照物峰相对应的峰(2)为S峰,计算共有峰与S峰的相对保留时间,其相对保留时间及范围详见表7。
表7:15批标准汤剂共有峰相对保留时间
综上所述,采用高效液相色谱法建立的标准汤剂特征图谱测定方法,按照《中国药典》2020年版四部“分析方法验证指导原则(通则9101)”对建立的方法进行了精密度、重复性、稳定性验证,均符合要求。采用“中药色谱指纹图相似度评价系统(2012版)”对15批标准汤剂样品的特征图谱进行相似度评价,标定了4个共有特征峰,其中峰2为茯苓酸B。以茯苓酸B对照品相对应的峰为S峰,峰3为茯苓酸A,计算另3个特征峰相对保留时间,以15批次样品峰相对保留时间均值拟定为规定值分别为:0.51(峰1)、1.26(峰4),考虑试验操作、仪器、试剂等多因素误差,其相对保留时间允许范围拟定为±10%。
6.含量测定
6.1试验方法
茯苓酸B、茯苓酸A、猪苓酸C、去氢茯苓酸是茯苓中的主要有效成分,故以茯苓酸B、茯苓酸A、猪苓酸C、去氢茯苓酸制备对照品溶液进行考察与测定,色谱条件如上述5.1特征图谱测试中的液相色谱法。
茯苓酸B对照品溶液的浓度为23.2693μg/ml,茯苓酸A对照品溶液的浓度为55.3162μg/ml,测定结果详见表8~表10、图18~图19。
表8:15批茯苓标准汤剂茯苓酸B测定结果
表9:15批茯苓标准汤剂茯苓酸A测定结果
表10:15批茯苓标准汤剂茯苓酸B、茯苓酸A总含量测定结果
实验结果表明:在茯苓中的多种活性成分均不溶于水,在茯苓标准汤剂中茯苓酸B、茯苓酸A含量最高,故拟定以茯苓酸B和茯苓酸A的总含量为含量测定的指标性成分,但对不同产地的15批药材的标准汤剂进行含量测定,大部分批次含量低于其万分之一且含量差异较大。茯苓配方颗粒经过标准汤剂研究,经过多次实验证明,以及诸多文献考察,确认茯苓中多种标志性成分不溶于水,含量很低,无法达到含量测定的要求,故暂不进行含量测定,待后期再进行深入研究。
本发明提供的茯苓标准汤剂质量检测方法,对茯苓标准汤剂的干浸膏出膏率、性状、薄层鉴别、浸出物、特征图谱进行研究,通过多方面测量,来评定茯苓标准汤剂的质量,为产品的质量稳定奠定坚实的基础,能够建立茯苓汤剂可行的质量标准,实现茯苓标准汤剂质量的有效控制,并且,采用本申请的色谱条件进行液相分析,可以得到分离度更好更清晰的色谱图。
所述领域技术人员应当理解:以上任何实施例的讨论仅为示例性的,并非旨在暗示本发明的范围(包括权利要求)被限于这些例子;在本发明的思路下,以上实施例或者不同实施例中的技术特征之间也可以进行组合,步骤可以以任意顺序实现,并存在如上所述的本发明的不同方面的许多其它变化,为了简明它们没有在细节中提供。
本发明的实施例旨在涵盖落入所附权利要求的宽泛范围之内的所有这样的替换、修改和变型。因此,凡在本发明的精神和原则之内,所做的任何省略、修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (3)
1.一种茯苓标准汤剂质量检测方法,其特征在于,包括如下检测方法,
对茯苓标准汤剂的干浸膏出膏率、性状、薄层鉴别、浸出物、特征图谱进行测定,其中,干浸膏出膏率测定采用煎煮法进行测定;薄层鉴别采用照薄层色谱法进行鉴别;浸出物采用热浸法测定;特征图谱测定采用液相色谱法测定;
采用液相色谱法测定特征图谱包括:进行液相色谱仪分析,以茯苓对照药材制成的溶液作为参照物溶液b,以茯苓酸B对照品制成的溶液作为对照品溶液b,以茯苓酸A对照品制成的溶液作为对照品溶液d,以茯苓标准汤剂样品制成的溶液作为供试品溶液b,分别精密吸取参照物溶液b、对照品溶液b、对照品溶液d和供试品溶液b,分别注入液相色谱仪,测定,即得;其中,采用的色谱条件为,色谱柱:C 18,柱长为250mm,内径为4.6mm,粒径为5um,产品型号为Shim-pack GIST C18-AQ;流动相:以乙腈为流动相A,以0.1%甲酸溶液为流动相B,按表a的规定进行梯度洗脱;
表a梯度洗脱程序
流速:1.0mL/min;柱温:30℃;进样量:10μL;检测波长:252nm;
采用液相色谱法测定特征图谱还包括如下步骤:
S11:制备参照物溶液b:取茯苓对照药材3g,加50%甲醇10ml,超声处理30min,放冷,摇匀,滤过,取续滤液,作为参照物溶液b;
S12:制备对照品溶液b:取茯苓酸B对照品适量,精密称定,加甲醇溶解,制得浓度为20ug/mL的对照品溶液b;
S13:制备对照品溶液d:取茯苓酸A对照品适量,精密称定,加甲醇溶解,制得浓度为20ug/mL的对照品溶液d;
S14:制备供试品溶液b:取茯苓标准汤剂样品3g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加入精密称定的50%甲醇10mL,密塞,称定重量,超声处理30min,放冷,再称定重量,用50%甲醇补足减失重量,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液b;
所述照薄层色谱法包括如下步骤:
S21:制备供试品溶液a:取茯苓标准汤剂样品3g,加乙醇50mL,低温超声处理30min,滤过,药渣挥干,加1mL甲醇,制得供试品溶液a;
S22:制备对照药材溶液a:取茯苓对照药材1g,加乙醇50mL,低温超声处理30min,滤过,药渣挥干,加1mL甲醇,制得对照药材溶液a;
S23:进行薄层色谱分析:薄层色谱条件为,薄层板:硅胶G薄层板;点样量:吸取20uL供试品溶液a与5uL对照药材溶液a;展开剂:体积比为20:5:0.5的甲苯-乙酸乙酯-甲酸溶液;显色剂:体积比为4:1的2%香草醛硫酸溶液-乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,置紫外灯下检视,所述紫外灯的发光波长为365nm。
2.如权利要求1所述的茯苓标准汤剂质量检测方法,其特征在于,所述煎煮法包括:取茯苓饮片加水浸泡30-40min,煎煮两次,第一次煎煮时长为30-40min,第二次煎煮时长为25-30min,趁热进行固液分离,合并滤液,浓缩干燥,制得茯苓标准汤剂干膏粉。
3.如权利要求1所述的茯苓标准汤剂质量检测方法,其特征在于,所述热浸法以乙醇为溶剂,采用醇溶性浸出物测定法项下的热浸法测定浸出物范围。
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张文娓 ; 闫丽莉 ; 陈忠新 ; .防己茯苓汤煎膏剂质量标准的建立.中医药信息.2012,(第06期),全文. * |
银杏叶标准汤质量评价研究及高效液相色谱指纹图谱的建立;陈萍;薛佩芸;梁馨月;杨锦;郭冬;;中国药业(第12期);全文 * |
防己茯苓汤煎膏剂质量标准的建立;张文娓;闫丽莉;陈忠新;;中医药信息(第06期);全文 * |
陈萍 ; 薛佩芸 ; 梁馨月 ; 杨锦 ; 郭冬 ; .银杏叶标准汤质量评价研究及高效液相色谱指纹图谱的建立.中国药业.2019,(第12期),全文. * |
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CN114152700A (zh) | 2022-03-08 |
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