CN114146120A - 一种预防及治疗萎缩性胃炎的组合物微胶囊及其制备方法 - Google Patents

一种预防及治疗萎缩性胃炎的组合物微胶囊及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明提出了一种预防及治疗萎缩性胃炎的组合物微胶囊及其制备方法，属于医药技术领域。包括以下步骤：S1.免疫调节益生元的制备；S2.益生菌种子液的培养；S3.山楂提取物的制备；S4.发酵培养基的制备；S5.益生菌发酵组合物的制备；S6.活性组合物的混合；S7.缓释微胶囊的制备。本发明将益生菌、益生菌发酵产物、益生元、活性组合物一同使用，可以发挥出更加理想的生理代谢调节功能和营养价值，同时具有口感良好、安全性强等优点，制得的预防及治疗萎缩性胃炎的组合物微胶囊缓释微胶囊进入人体后，可以缓慢释放活性成分，从而起到长效调节，延长反应效果的作用。

Description

一种预防及治疗萎缩性胃炎的组合物微胶囊及其制备方法
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种预防及治疗萎缩性胃炎的组合物微胶囊及其制备方法。
背景技术
慢性萎缩性胃炎(CAG)是在胃黏膜慢性炎症基础上，后期出现胃黏膜固有腺体萎缩和化生，继而出现上皮内瘤变的一种消化系统疾病，与胃癌的发病率呈正相关。在全球范围内 CAG 年发病率在 0~10.9%之间，随着年龄的不断增长， CAG 发病率迅速增加，且每增长 10 岁会伴随 14%的新发病率。目前多数医家认可慢性萎缩性胃炎有肝胃不和、脾胃虚弱、胃阴不足证、脾胃湿热、胃络血瘀 5 型，临床多表现为虚实兼存，寒热交错的病理现象。
健康人的胃肠道内寄居着种类繁多的微生物，这些微生物称为肠道菌群，其主要功能为维持宿主肠道微生态的稳态。人体的健康与肠道内的益生菌群结构息息相关。肠道菌群按一定的比例组合，各菌间互相制约、互相依存，在质和量上形成一种生态平衡，人体在正常情况下，菌群结构相对稳定，对宿主表现为不致病。一旦机体内外环境发生变化，其正常生理组合被破坏，肠道菌群结构比例失调，则可能会促进肿瘤的发生，而在某些情况下，特异的肠道共生菌及其代谢产物则能够抑制肿瘤的发生。
近年来，越来越多的研究发现，慢性萎缩性胃炎，甚至是胃肠肿瘤的发生、发展与肠道菌群的活动密切相关。因此，通过开发一种含有肠道益生菌类组合物，来预防和治疗萎缩性胃炎具有重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于提出一种预防及治疗萎缩性胃炎的组合物微胶囊及其制备方法，将益生菌、益生菌发酵产物、益生元、活性组合物一同使用，可以发挥出更加理想的生理代谢调节功能和营养价值，起到更好的抑制幽门螺杆菌的活性，促进白细胞活性，增强巨噬细胞活性使其产生抗菌素，刺激淋巴细胞不断分裂繁殖，有效地减少了可能带来的消化不良、肠道有益菌群减少等副作用，起到很好的组合预防和治疗慢性萎缩性胃炎的效果。
本发明的技术方案是这样实现的：
本发明提供一种预防及治疗萎缩性胃炎的组合物微胶囊的制备方法，包括以下步骤：
S1.免疫调节益生元的制备：将桑枝洗净，干燥，粉碎后，加入变性淀粉，混合均匀，得到粉料，加入水中，加入复合酶，调节pH值，微波加热反应后，灭酶，过滤，浓缩，得到免疫调节益生元；
S2.益生菌种子液的培养：将双歧杆菌和乳杆菌分别接种到高氏培养基中，有氧培养，分别培养成菌种种子液；
S3.山楂提取物的制备：将山楂洗净，切碎，干燥，分散至100目，加入水中微波加热提取，过滤，浓缩，干燥，得到山楂提取物，紫外线灭菌备用；
S4.发酵培养基的制备：将燕麦β-葡聚糖、碳源、氨基酸、维生素、无机盐和步骤S3制得的山楂提取物用无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值为6.8-7.2，紫外线灭菌备用；
S5.益生菌发酵组合物的制备：将步骤S2制得的菌种种子液接种到步骤S4制得的发酵培养基中进行发酵培养，得到益生菌发酵组合物；
S6.活性组合物的混合：将山药多糖、人参皂苷Rh2、灵芝孢子粉混合均匀，得到活性组合物；
S7.缓释微胶囊的制备：将步骤S1制得的免疫调节益生元、步骤S5制得的益生菌发酵组合物和步骤S6制得的活性组合物加入水中，加入乳化剂和海藻酸钠，搅拌混合均匀，得到水相；将维生素E加入鱼油中，得到油相；将水相和油相混合后，用SPG膜进行快速膜乳化，形成乳液，加入氯化钙溶液，常温固化，过滤，干燥，得到预防及治疗萎缩性胃炎的组合物微胶囊微胶囊。
作为本发明的进一步改进，步骤S1中所述桑枝和变性淀粉的质量比为5：（2-4）；所述复合酶为α-淀粉酶、β-淀粉酶的混合物，质量比为3：（1-2），调节pH值为5-6.4，所述微波加热至温度为35-45℃，反应时间为2-4h。
作为本发明的进一步改进，步骤S2中所述双歧杆菌和乳杆菌的质量比为5：（2-3）；所述双歧杆菌包括副干酪乳杆菌和动物双歧杆菌，质量比为2：（3-5）；所述乳杆菌包括鼠李糖乳杆菌和植物乳杆菌，质量比为1：（2-4）；所述有氧培养的条件为35-40℃，氧含量为25-35%，培养时间为18-24h；所述菌种种子液中含菌量为108-109cfu/mL。
作为本发明的进一步改进，步骤S3中所述微波加热至温度为80-100℃，提取1-3h，所述微波功率为1000-1500W。
作为本发明的进一步改进，步骤S4中所述碳源选自葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、果糖、水溶性淀粉中的一种或几种混合；所述氨基酸选自苯丙氨酸、丝氨酸、赖氨酸、苏氨酸、甘氨酸、缬氨酸、色氨酸、亮氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、甲氨酸、异亮氨酸中的一种或几种混合；所述维生素选自维生素C、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素A、维生素K、维生素B12、维生素D、维生素E中的一种或几种混合；所述无机盐选自氯化钠、氯化钾、氯化钙、硫酸镁、氯化铁、硫酸锌、硫酸铜、硫酸锰、氯化锌、氯化铜、氯化锰中的一种或几种混合；所述燕麦β-葡聚糖、碳源、氨基酸、维生素、无机盐、山楂提取物的质量比为（2-5）：10：（2-5）：（0.1-0.2）：（0.01-0.1）：（5-7）。
优选地，所述碳源为蔗糖；所述氨基酸为谷氨酸、丝氨酸，质量比为2：（1-2）；所述维生素为维生素B1、维生素B12和维生素C，质量比为1：（1-2）：3；所述无机盐为氯化钙、硫酸铁、硫酸锌、硫酸铜，质量比为5：（0.1-0.3）：（0.2-0.4）：（0.1-0.3）。
作为本发明的进一步改进，步骤S5中所述各种菌种种子液的接种量均为2-4%；所述发酵培养的条件为35-39℃，湿度为70-80%，培养时间为24-48h。
作为本发明的进一步改进，步骤S6中所述山药多糖、人参皂苷Rh2、灵芝孢子粉的质量比为5：（1-2）：（3-7）。
作为本发明的进一步改进，步骤S7中所述免疫调节益生元、益生菌发酵组合物和活性组合物的质量比为5：（7-12）：（2-4）；所述乳化剂选自硬脂酰乳酸钠/钙、双乙酰酒石酸单双甘油酯、蔗糖脂肪酸酯、蒸馏单甘酯中的至少一种；所述SPG膜的孔隙为5-10µm；所述氯化钙溶液的含量为3-7wt%。
本发明进一步保护一种上述的制备方法制得的预防及治疗萎缩性胃炎的组合物微胶囊。
本发明进一步保护一种上述的组合物在制备预防及治疗萎缩性胃炎的药物以及预防和辅助治疗胃肠癌肿瘤药物中的应用。
本发明具有如下有益效果：本发明发酵培养基中含有少量膳食纤维，如燕麦β-葡聚糖，益生菌经过发酵后，将该部分膳食纤维分解产生短链脂肪酸——丁酸，可以诱导Treg细胞扩增，促进抗炎细胞因子产生，抑制幽门螺杆菌的生长，抑制胃肠癌的发生；同时，益生菌发酵组合物中的维生素B1和维生素B12能够延长益生菌稳定期，使得其产生更多的有益物质；益生菌发酵组合物中的钙元素，对于不同益生菌混合时可以提高抗性，从而减少菌种混合时的不良反应，避免不良物质的产生；发酵培养基中添加的山楂提取物经过益生菌发酵后，能够降解和产生很多的小分子营养物质，从而有利于胃肠道功能，有助于预防和治疗慢性萎缩性胃炎，以及预防和辅助治疗胃肠道癌症；
益生元是一种不被消化或难以被消化的食物成分，这些成分通过选择性的剌激结肠内细菌的增殖和/或活性，从而对宿主的健康有益。本发明添加的益生元富含水溶性单糖组分，使得益生菌能够更加容易、快速的利用益生元，使得益生菌能够更加快速的进入稳定期，同时益生元可以为益生菌提供碳源，促进益生菌增殖，而且还具有较强的免疫刺激作用，可以增强巨噬细胞活性使其产生抗菌素，进而刺激淋巴细胞不断分裂繁殖，预防和治疗慢性萎缩性胃炎的效，进而有助于肿瘤的抑制。本发明通过复合酶酶解变性淀粉和桑枝，得到低聚糖，能够明显提高益生菌的增殖活性，不良产物少，环境污染少，反应条件温和，产率高；其中，桑枝的添加对于促进乳杆菌的增殖有明显效果，而变性淀粉的添加对于促进双歧杆菌的增殖有明显的效果，两者协同添加，能明显促进益生菌总量的增殖，具有协同增效的作用；
本发明通过组合双歧杆菌和乳杆菌，而双歧杆菌又包含副干酪乳杆菌和动物双歧杆菌，乳杆菌包括鼠李糖乳杆菌和植物乳杆菌，多种益生菌复合，能明显提高肠道有益菌群的丰度，产生多种有益物质，抑制有害菌群的生长，抑制和降低毒素的分泌，促进机体代谢，抑制炎症因子的产生以及炎症细胞的释放，从而有效预防和治疗慢性萎缩性胃炎，进一步降低肿瘤的发生概率；
活性组合物中含有山药多糖、人参皂苷Rh2、灵芝孢子粉，具有协同增效的作用，其中，山药多糖具有增强免疫、延缓衰老、抗肿瘤、调节血糖的作用，人参皂苷Rh2可提高自身免疫功能，增强抗病能力，灵芝孢子粉具有增强机体免疫力、保护胃黏膜等作用，加入活性组合物后，能起到更好的抑制幽门螺杆菌的生长，促进白细胞活性，增强巨噬细胞活性使其产生抗菌素，刺激淋巴细胞不断分裂繁殖，起到很好的组合预防及治疗萎缩性胃炎以及抗肿瘤的效果；
本发明将益生菌、益生菌发酵产物、益生元、活性组合物一同使用，可以发挥出更加理想的生理代谢调节功能和营养价值，起到更好的抑制幽门螺杆菌的活性，促进白细胞活性，增强巨噬细胞活性使其产生抗菌素，刺激淋巴细胞不断分裂繁殖，有效地减少了可能带来的消化不良、肠道有益菌群减少等副作用，起到很好的组合预防和治疗慢性萎缩性胃炎的效果，同时具有口感良好、安全性强等优点。本发明通过快速膜乳化制备水包油乳液，进一步通过氯化钙和海藻酸钠反应形成壳层，从而制得缓释微胶囊，制得的预防及治疗萎缩性胃炎的组合物微胶囊缓释微胶囊进入人体后，可以缓慢释放益生元、益生菌、活性组合物和益生菌发酵组合物，从而起到长效调节，延长反应效果的作用。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
桑枝，由安徽常富国药有限公司提供；山楂，由安徽省天和中药材开发有限公司提供；变性淀粉，CAS号：9049-76-7，由济南圣和化工有限公司提供，有效物质含量大于99%；α-淀粉酶，CAS号：9000-90-2，来源于米曲霉，货号：10065，酶活力：30U/mg；β-淀粉酶，CAS号：9000-91-3，来源于甘薯，货号：A7005，大于750units/mg protein，由默克化学提供；副干酪乳杆菌，为副干酪乳杆菌MP137，动物双歧杆菌，为动物双歧杆菌亚种CP-9；鼠李糖乳杆菌，为鼠李糖乳杆菌F1，由锦旗生物集团提供；植物乳杆菌，活菌含量大于1010cfu/g，由潍坊瑞辰生物科技有限公司提供；燕麦β-葡聚糖，CAS号：9004-54-0，纯度大于99%，由郑州裕和食品添加剂有限公司提供；山药多糖，纯度大于90%，由陕西斯诺特生物技术有限公司提供；人参皂苷Rh2，CAS号：78214-33-2，纯度大于96%，由成都仪睿生物科技有限公司提供；灵芝孢子粉，为破壁灵芝孢子粉，由安徽芝神堂药业有限公司提供；双乙酰酒石酸单双甘油酯，CAS号：100085-39-0，蔗糖脂肪酸酯，CAS号：37318-31-3，由山东沃睿生物工程有限公司提供；鱼油，CAS号：8016-13-5，由江苏唯思康食品科技发展有限公司提供。
实施例1
本实施例提供一种预防及治疗萎缩性胃炎的组合物微胶囊的制备方法，包括以下步骤：
S1.免疫调节益生元的制备：将5g桑枝洗净，干燥，粉碎后过100目筛网，加入2g变性淀粉，混合均匀，得到粉料，加入50mL水中，加入0.5g复合酶，调节pH值为5，1000W微波加热至温度为35℃反应2h后，105℃灭酶10min，过滤，浓缩，得到免疫调节益生元；复合酶为α-淀粉酶、β-淀粉酶的混合物，质量比为3：1；
S2.益生菌种子液的培养：将5g双歧杆菌和2g乳杆菌分别接种到高氏培养基中，有氧培养，培养的条件为35℃，氧含量为25%，培养时间为18h，分别培养成菌种种子液，含菌量为108cfu/mL；双歧杆菌包括副干酪乳杆菌和动物双歧杆菌，质量比为2：3；乳杆菌包括鼠李糖乳杆菌和植物乳杆菌，质量比为1：2；
S3.山楂提取物的制备：将10g山楂洗净，切碎，干燥，分散至100目，加入100mL水中，1000W微波加热至温度为80℃，提取1h，过滤，浓缩，80℃干燥5h，得到山楂提取物，紫外线灭菌备用；
S4.发酵培养基的制备：将2g燕麦β-葡聚糖、10g麦芽糖、2g氨基酸、0.1g维生素、0.01g无机盐和5g步骤S3制得的山楂提取物用100mL无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值为6.8，紫外线灭菌备用；氨基酸为谷氨酸、丝氨酸，质量比为2：1；维生素为维生素B1、维生素B12和维生素C，质量比为1：1：3；无机盐为氯化钙、硫酸铁、硫酸锌、硫酸铜，质量比为5：0.1：0.2：0.1；
S5.益生菌发酵组合物的制备：将步骤S2制得的菌种种子液接种到步骤S4制得的发酵培养基中进行发酵培养，各种菌种种子液的接种量均为2%，培养的条件为35℃，湿度为70%，培养时间为24h，得到益生菌发酵组合物；
S6.活性组合物的混合：将5g山药多糖、1g人参皂苷Rh2、3g灵芝孢子粉混合均匀，得到活性组合物；
S7.缓释微胶囊的制备：将5g步骤S1制得的免疫调节益生元、7g步骤S5制得的益生菌发酵组合物和2g步骤S6制得的活性组合物加入50mL水中，加入0.5g双乙酰酒石酸单双甘油酯和4g海藻酸钠，搅拌混合均匀，得到水相；将0.2g维生素E加入2g鱼油中，得到油相；将水相和油相混合后，用孔隙为5µm的SPG膜进行快速膜乳化，形成乳液，加入3wt%的氯化钙溶液，常温固化4h，过滤，45℃干燥3h，得到预防及治疗萎缩性胃炎的组合物微胶囊微胶囊。
实施例2
本实施例提供一种预防及治疗萎缩性胃炎的组合物微胶囊的制备方法，包括以下步骤：
S1.免疫调节益生元的制备：将5g桑枝洗净，干燥，粉碎后过100目筛网，加入4g变性淀粉，混合均匀，得到粉料，加入50mL水中，加入0.5g复合酶，调节pH值为6.4，1000W微波加热至温度为45℃反应4h后，105℃灭酶10min，过滤，浓缩，得到免疫调节益生元；复合酶为α-淀粉酶、β-淀粉酶的混合物，质量比为3：2；
S2.益生菌种子液的培养：将5g双歧杆菌和3g乳杆菌分别接种到高氏培养基中，有氧培养，培养的条件为40℃，氧含量为35%，培养时间为24h，分别培养成菌种种子液，含菌量为109cfu/mL；双歧杆菌包括副干酪乳杆菌和动物双歧杆菌，质量比为2：5；乳杆菌包括鼠李糖乳杆菌和植物乳杆菌，质量比为1：4；
S3.山楂提取物的制备：将10g山楂洗净，切碎，干燥，分散至100目，加入100mL水中，1500W微波加热至温度为100℃，提取3h，过滤，浓缩，80℃干燥5h，得到山楂提取物，紫外线灭菌备用；
S4.发酵培养基的制备：将5g 燕麦β-葡聚糖、10g蔗糖、5g氨基酸、0.2g维生素、0.1g无机盐和7g步骤S3制得的山楂提取物用100mL无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值为7.2，紫外线灭菌备用；氨基酸为谷氨酸、丝氨酸，质量比为2：2；维生素为维生素B1、维生素B12和维生素C，质量比为1：2：3；无机盐为氯化钙、硫酸铁、硫酸锌、硫酸铜，质量比为5：0.3：0.4：0.3；
S5.益生菌发酵组合物的制备：将步骤S2制得的菌种种子液接种到步骤S4制得的发酵培养基中进行发酵培养，各种菌种种子液的接种量均为4%，培养的条件为39℃，湿度为80%，培养时间为48h，得到益生菌发酵组合物；
S6.活性组合物的混合：将5g山药多糖、2g人参皂苷Rh2、7g灵芝孢子粉混合均匀，得到活性组合物；
S7.缓释微胶囊的制备：将5g步骤S1制得的免疫调节益生元、12g步骤S5制得的益生菌发酵组合物和4g步骤S6制得的活性组合物加入50mL水中，加入0.5g蔗糖脂肪酸酯和4g海藻酸钠，搅拌混合均匀，得到水相；将0.2g维生素E加入2g鱼油中，得到油相；将水相和油相混合后，用孔隙为10µm的SPG膜进行快速膜乳化，形成乳液，加入7wt%的氯化钙溶液，常温固化6h，过滤，45℃干燥3h，得到预防及治疗萎缩性胃炎的组合物微胶囊微胶囊。
实施例3
本实施例提供一种预防及治疗萎缩性胃炎的组合物微胶囊的制备方法，包括以下步骤：
S1.免疫调节益生元的制备：将5g桑枝洗净，干燥，粉碎后过100目筛网，加入3g变性淀粉，混合均匀，得到粉料，加入50mL水中，加入0.5g复合酶，调节pH值为6，1000W微波加热至温度为40℃反应3h后，105℃灭酶10min，过滤，浓缩，得到免疫调节益生元；复合酶为α-淀粉酶、β-淀粉酶的混合物，质量比为2：1；
S2.益生菌种子液的培养：将5g双歧杆菌和2.5g乳杆菌分别接种到高氏培养基中，有氧培养，培养的条件为37℃，氧含量为30%，培养时间为21h，分别培养成菌种种子液，含菌量为109cfu/mL；双歧杆菌包括副干酪乳杆菌和动物双歧杆菌，质量比为2：4；乳杆菌包括鼠李糖乳杆菌和植物乳杆菌，质量比为1：3；
S3.山楂提取物的制备：将10g山楂洗净，切碎，干燥，分散至100目，加入100mL水中，1250W微波加热至温度为90℃，提取2h，过滤，浓缩，80℃干燥5h，得到山楂提取物，紫外线灭菌备用；
S4.发酵培养基的制备：将3g燕麦β-葡聚糖、10g蔗糖、3g氨基酸、0.15g维生素、0.05g无机盐和6g步骤S3制得的山楂提取物用100mL无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值为7，紫外线灭菌备用；氨基酸为谷氨酸、丝氨酸，质量比为4：3；维生素为维生素B1、维生素B12和维生素C，质量比为1：2：3；无机盐为氯化钙、硫酸铁、硫酸锌、硫酸铜，质量比为5：0.2：0.3：0.2；
S5.益生菌发酵组合物的制备：将步骤S2制得的菌种种子液接种到步骤S4制得的发酵培养基中进行发酵培养，各种菌种种子液的接种量均为3%，培养的条件为37℃，湿度为75%，培养时间为36h，得到益生菌发酵组合物；
S6.活性组合物的混合：将5g山药多糖、1.5g人参皂苷Rh2、5g灵芝孢子粉混合均匀，得到活性组合物；
S7.缓释微胶囊的制备：将5g步骤S1制得的免疫调节益生元、9g步骤S5制得的益生菌发酵组合物和3g步骤S6制得的活性组合物加入50mL水中，加入0.5g蔗糖脂肪酸酯和4g海藻酸钠，搅拌混合均匀，得到水相；将0.2g维生素E加入2g鱼油中，得到油相；将水相和油相混合后，用孔隙为8µm的SPG膜进行快速膜乳化，形成乳液，加入5wt%的氯化钙溶液，常温固化5h，过滤，45℃干燥3h，得到预防及治疗萎缩性胃炎的组合物微胶囊微胶囊。
实施例4
与实施例3相比，复合酶仅为α-淀粉酶，其他条件均不改变。
实施例5
与实施例3相比，复合酶仅为β-淀粉酶，其他条件均不改变。
实施例6
与实施例3相比，无机盐中氯化钙由等量氯化钠替代，其他条件均不改变。无机盐为氯化钠、硫酸铁、硫酸锌、硫酸铜，质量比为5：0.2：0.3：0.2。
实施例7
与实施例3相比，维生素中未添加维生素B1，其他条件均不改变。
实施例8
与实施例3相比，维生素中未添加维生素B12，其他条件均不改变。
对比例1
与实施例3相比，步骤S1中未添加桑枝，其他条件均不改变。具体如下：
S1.免疫调节益生元的制备：将8g变性淀粉加入50mL水中，加入0.5g复合酶，调节pH值为6，1000W微波加热至温度为40℃反应3h后，105℃灭酶10min，过滤，浓缩，得到免疫调节益生元；复合酶为α-淀粉酶、β-淀粉酶的混合物，质量比为2：1。
对比例2
与实施例3相比，步骤S1中未添加变性淀粉，其他条件均不改变。具体如下：
S1.免疫调节益生元的制备：将8g桑枝洗净，干燥，粉碎后过100目筛网，加入50mL水中，加入0.5g复合酶，调节pH值为6，1000W微波加热至温度为40℃反应3h后，105℃灭酶10min，过滤，浓缩，得到免疫调节益生元；复合酶为α-淀粉酶、β-淀粉酶的混合物，质量比为2：1。
对比例3
与实施例3相比，步骤S2中未添加双歧杆菌，其他条件均不改变。具体如下：
S2.益生菌种子液的培养：将7.5g乳杆菌分别接种到高氏培养基中，有氧培养，培养的条件为37℃，氧含量为30%，培养时间为21h，分别培养成菌种种子液，含菌量为109cfu/mL；乳杆菌包括鼠李糖乳杆菌和植物乳杆菌，质量比为1：3。
对比例4
与实施例3相比，步骤S2中未添加乳杆菌，其他条件均不改变。具体如下：
S2.益生菌种子液的培养：将7.5g双歧杆菌分别接种到高氏培养基中，有氧培养，培养的条件为37℃，氧含量为30%，培养时间为21h，分别培养成菌种种子液，含菌量为109cfu/mL；双歧杆菌包括副干酪乳杆菌和动物双歧杆菌，质量比为2：4。
对比例5
与实施例3相比，步骤S4中未添加燕麦β-葡聚糖，其他条件均不改变。具体如下：
S4.发酵培养基的制备：将13g蔗糖、3g氨基酸、0.15g维生素、0.05g无机盐和6g步骤S3制得的山楂提取物用100mL无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值为7，紫外线灭菌备用；氨基酸为谷氨酸、丝氨酸，质量比为4：3；维生素为维生素B1、维生素B12和维生素C，质量比为1：2：3；无机盐为氯化钙、硫酸铁、硫酸锌、硫酸铜，质量比为5：0.2：0.3：0.2。
对比例6
与实施例3相比，步骤S4中维生素为维生素C，其他条件均不改变。具体如下：
S4.发酵培养基的制备：将3g燕麦β-葡聚糖、10g蔗糖、3g氨基酸、0.15g维生素C、0.05g无机盐和6g步骤S3制得的山楂提取物用100mL无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值为7，紫外线灭菌备用；氨基酸为谷氨酸、丝氨酸，质量比为4：3；无机盐为氯化钙、硫酸铁、硫酸锌、硫酸铜，质量比为5：0.2：0.3：0.2。
对比例7
与实施例3相比，步骤S6中未添加山药多糖，其他条件均不改变。具体如下：
S6.活性组合物的混合：将1.5g人参皂苷Rh2、10g灵芝孢子粉混合均匀，得到活性组合物。
对比例8
与实施例3相比，步骤S6中未添加灵芝孢子粉，其他条件均不改变。具体如下：
S6.活性组合物的混合：将1.5g人参皂苷Rh2、10g山药多糖混合均匀，得到活性组合物。
对比例9
与实施例3相比，步骤S7中仅仅将各组分简单混合，其他条件均不改变。具体如下：
S7.缓释微胶囊的制备：将5g步骤S1制得的免疫调节益生元、9g步骤S5制得的益生菌发酵组合物和3g步骤S6制得的活性组合物混合均匀，得到预防及治疗萎缩性胃炎的组合物微胶囊。
对比例10
与实施例3相比，未进行步骤S1，其他条均不改变。
包括以下步骤：
S1.益生菌种子液的培养：将5g双歧杆菌和2.5g乳杆菌分别接种到高氏培养基中，有氧培养，培养的条件为37℃，氧含量为30%，培养时间为21h，分别培养成菌种种子液，含菌量为109cfu/mL；双歧杆菌包括副干酪乳杆菌和动物双歧杆菌，质量比为2：4；乳杆菌包括鼠李糖乳杆菌和植物乳杆菌，质量比为1：3；
S2.山楂提取物的制备：将10g山楂洗净，切碎，干燥，分散至100目，加入100mL水中，1250W微波加热至温度为90℃，提取2h，过滤，浓缩，80℃干燥5h，得到山楂提取物，紫外线灭菌备用；
S3.发酵培养基的制备：将3g燕麦β-葡聚糖、10g蔗糖、3g氨基酸、0.15g维生素、0.05g无机盐和6g步骤S2制得的山楂提取物用100mL无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值为7，紫外线灭菌备用；氨基酸为谷氨酸、丝氨酸，质量比为4：3；维生素为维生素B1、维生素B12和维生素C，质量比为1：2：3；无机盐为氯化钙、硫酸铁、硫酸锌、硫酸铜，质量比为5：0.2：0.3：0.2；
S4.益生菌发酵组合物的制备：将步骤S1制得的菌种种子液接种到步骤S4制得的发酵培养基中进行发酵培养，各种菌种种子液的接种量均为3%，培养的条件为37℃，湿度为75%，培养时间为36h，得到益生菌发酵组合物；
S5.活性组合物的混合：将5g山药多糖、1.5g人参皂苷Rh2、5g灵芝孢子粉混合均匀，得到活性组合物；
S6.缓释微胶囊的制备：将12.75g步骤S4制得的益生菌发酵组合物和4.25g步骤S5制得的活性组合物加入50mL水中，加入0.5g蔗糖脂肪酸酯和4g海藻酸钠，搅拌混合均匀，得到水相；将0.2g维生素E加入2g鱼油中，得到油相；将水相和油相混合后，用孔隙为8µm的SPG膜进行快速膜乳化，形成乳液，加入5wt%的氯化钙溶液，常温固化5h，过滤，45℃干燥3h，得到预防及治疗萎缩性胃炎的组合物微胶囊微胶囊。
对比例11
与实施例3相比，未进行步骤S5，其他条件均不改变。
包括以下步骤：
S1.免疫调节益生元的制备：将5g桑枝洗净，干燥，粉碎后过100目筛网，加入3g变性淀粉，混合均匀，得到粉料，加入50mL水中，加入0.5g复合酶，调节pH值为6，1000W微波加热至温度为40℃反应3h后，105℃灭酶10min，过滤，浓缩，得到免疫调节益生元；复合酶为α-淀粉酶、β-淀粉酶的混合物，质量比为2：1；
S2.活性组合物的混合：将5g山药多糖、1.5g人参皂苷Rh2、5g灵芝孢子粉混合均匀，得到活性组合物；
S3.缓释微胶囊的制备：将10.6g步骤S1制得的免疫调节益生元和6.4g步骤S6制得的活性组合物加入50mL水中，加入0.5g蔗糖脂肪酸酯和4g海藻酸钠，搅拌混合均匀，得到水相；将0.2g维生素E加入2g鱼油中，得到油相；将水相和油相混合后，用孔隙为8µm的SPG膜进行快速膜乳化，形成乳液，加入5wt%的氯化钙溶液，常温固化5h，过滤，45℃干燥3h，得到预防及治疗萎缩性胃炎的组合物微胶囊微胶囊。
对比例12
与实施例3相比，未进行步骤S6，其他条件均不改变。
包括以下步骤：
S1.免疫调节益生元的制备：将5g桑枝洗净，干燥，粉碎后过100目筛网，加入3g变性淀粉，混合均匀，得到粉料，加入50mL水中，加入0.5g复合酶，调节pH值为6，1000W微波加热至温度为40℃反应3h后，105℃灭酶10min，过滤，浓缩，得到免疫调节益生元；复合酶为α-淀粉酶、β-淀粉酶的混合物，质量比为2：1；
S2.益生菌种子液的培养：将5g双歧杆菌和2.5g乳杆菌分别接种到高氏培养基中，有氧培养，培养的条件为37℃，氧含量为30%，培养时间为21h，分别培养成菌种种子液，含菌量为109cfu/mL；双歧杆菌包括副干酪乳杆菌和动物双歧杆菌，质量比为2：4；乳杆菌包括鼠李糖乳杆菌和植物乳杆菌，质量比为1：3；
S3.山楂提取物的制备：将10g山楂洗净，切碎，干燥，分散至100目，加入100mL水中，1250W微波加热至温度为90℃，提取2h，过滤，浓缩，80℃干燥5h，得到山楂提取物，紫外线灭菌备用；
S4.发酵培养基的制备：将3g燕麦β-葡聚糖、10g蔗糖、3g氨基酸、0.15g维生素、0.05g无机盐和6g步骤S3制得的山楂提取物用100mL无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值为7，紫外线灭菌备用；氨基酸为谷氨酸、丝氨酸，质量比为4：3；维生素为维生素B1、维生素B12和维生素C，质量比为1：2：3；无机盐为氯化钙、硫酸铁、硫酸锌、硫酸铜，质量比为5：0.2：0.3：0.2；
S5.益生菌发酵组合物的制备：将步骤S2制得的菌种种子液接种到步骤S4制得的发酵培养基中进行发酵培养，各种菌种种子液的接种量均为3%，培养的条件为37℃，湿度为75%，培养时间为36h，得到益生菌发酵组合物；
S6.缓释微胶囊的制备：将6.1g步骤S1制得的免疫调节益生元、10.9g步骤S5制得的益生菌发酵组合物加入50mL水中，加入0.5g蔗糖脂肪酸酯和4g海藻酸钠，搅拌混合均匀，得到水相；将0.2g维生素E加入2g鱼油中，得到油相；将水相和油相混合后，用孔隙为8µm的SPG膜进行快速膜乳化，形成乳液，加入5wt%的氯化钙溶液，常温固化5h，过滤，45℃干燥3h，得到预防及治疗萎缩性胃炎的组合物微胶囊微胶囊。
测试例1 营养成分测定
将实施例1-8和对比例1-12中制得的产品进行营养成分测定，结果见表1。
总酸含量（以乳酸计）：参照GB/T 12456-2008《食品中总酸的测定》测定；有机酸含量：参照GB 5009.157-2016《食品中有机酸的测定》，采用高效液相色谱法检测。
表1
Figure 181805DEST_PATH_IMAGE001
由上表可知，本发明制得的预防及治疗萎缩性胃炎的组合物微胶囊富含有机酸类营养物质，其中，丁酸可以诱导Treg细胞扩增，促进抗炎细胞因子产生，抑制胃肠癌的发生。
测试例2 缓释效果测试
将实施例1-8和对比例1-12制得的产品在在模拟胃肠液中的存活试验。将0.5g产品均匀分散于4.5mL在37℃下预热的人工模拟胃液，温育1h后，加入37℃下预热的人工模拟肠液，调节pH至7.4，再用磷酸盐缓冲液将体积定容至10L，并将该混合液置于37℃环境中，100r/min下温育4h。分别于60、120、240min时取样，进行益生菌群细胞计数。按照以下公式计算存活率：
存活率(%)=Nt/N0×100%
式中，Nt为在体外人工模拟胃液或人工模拟肠液中孵育一定时间后存活的益生菌浓度(cfu/g)，N0为人工模拟胃液或人工模拟肠液中添加的益生菌原始浓度(CFU/g)。
按照以下公式计算释放率：
释放率(%)=（Wt-W0）/W0×100%
式中，Wt为微胶囊起始重量；W0为微胶囊在体外模拟人工模拟胃液(SGI)和人工模拟肠液(SJI)中孵育一定时间后重量。
结果见表2。
表2
Figure 178580DEST_PATH_IMAGE002
由上表可知，本发明制得的预防及治疗萎缩性胃炎的组合物微胶囊在胃肠道中使得菌群具有较高的存活率，缓释效果佳。
测试例3 对胃黏膜组织部分蛋白表达水平的影响
小鼠模型建立：0.1%氨水溶液和 20 mmoL/L脱氧胆酸钠溶液每日交替饮用，采用2日足食，1日禁食的方法，以及每日夹尾刺激1h，束缚3h，造模16周。经过上述造模干预，造模组大鼠出现毛发蓬乱，毛色枯黄无光泽，扎堆蜷卧，懒动，无精打采；病理检测胃黏膜腺体萎缩，判断为造模成功。
动物分组及给药：将大鼠随机分为正常组8只，造模组180只。将造模成功的176只大鼠随机分为模型组，维酶素组：给予维酶素混悬液0.6g/20g，实施例1-8组，对比例1-12组：相应的产品30g/kg（0.6g/20g），每组8只。正常组和模型组给予等质量的生理盐水灌胃，每日1次，连续干预4周。
实验方法：采用Western blot法检测胃组织相关蛋白表达，实验结束后，将大鼠的胃组织用提前预冷的RIPA裂解液进行提取蛋白，SDS-PACE电泳，转移蛋白至PVDF膜上；室温封闭20min，PBS缓冲液冲洗3次，每次15min；Shh一抗（1：1000），Ptch1一抗（1：2000），Gli1一抗（1：4000，GAPDH一抗（1：20000）4℃孵育过夜，PBS冲洗3次，每次15min；二抗（1：5000）室温孵育1.5h，PBS冲洗3次，每次15min；避光显影。使用Image Lab软件进行灰度值分析，结果见表3。
表3对大鼠胃黏膜组织 Shh， Ptch1， Gli1 mRNA 表达水平的影响（
Figure 375206DEST_PATH_IMAGE003
+s，n=8）
Figure 208164DEST_PATH_IMAGE004
注释：*为与模型组相比，P<0.05；△为与正常组相比，P<0.05。
由上表可知，本发明实施例1-3制得的预防及治疗萎缩性胃炎的组合物微胶囊能显著降低大鼠胃黏膜组织Shh，Ptch1，Gli1蛋白表达水平（P<0.05）。
测试例4 抗肿瘤活性
测试对象：实施例1-8和对比例1-12制得的产品。
1、细胞株
MTT法：用含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔1000-10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200uL，加相应浓度的药物，培养3-5天，每孔加MTT溶液(5mg/ml用PBS配制，pH＝7.4)20uL。继续孵育4h，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加150uL DMSO，振荡10min，使结晶物充分融解。选择490nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。
并根据细胞抑制率计算出化合物(13)对不同肿瘤细胞株的半抑制浓度(IC50值)，结果见表4。
表4
Figure 7493DEST_PATH_IMAGE005
2、小鼠试验
小鼠模型建立：复苏的小鼠大肠癌细胞瘤株CT-26，用含10%标准小牛血清(Hyclone)的1640(Hyclone)全培养基常规传代培养。将对数生长期的细胞用0.25%胰蛋白酶消化，吹打成细胞悬液，1000r/min离心5min弃上清液，加生理盐水调整为适宜浓度1×107个/mL，接种于BALB/c小鼠右前腋下，每只小鼠接种0.2mL。
动物分组及给药：将220只小鼠正常喂养3d后接种，48h后按雌雄随机分为22组隔日灌胃，即空白组：生理盐水0.6mL/20g，实施例1-8组，对比例1-12组：相应的产品30g/kg（0.6g/20g）；化疗组：卡培他滨组205.5mg/kg(0.6mL/20g)。在接种后每两天观察小鼠生活状况，并记录小鼠体质量变化，待瘤体长出后隔日测量肿瘤长短径，15d后停药48h处死动物，剥离肿瘤组织，测量肿瘤体积（mm2）。
肿瘤体积=长径×短径2/2
肿瘤抑制率=（空白组肿瘤体积-该组肿瘤体积）/空白组肿瘤体积×100%
结果见表5。
表5
Figure 609507DEST_PATH_IMAGE006
由上表可知，本发明制得的预防及治疗萎缩性胃炎的组合物微胶囊具有良好的抑制胃肠道肿瘤的效果。
实施例4、5与实施例3相比，复合酶仅为α-淀粉酶或β-淀粉酶，其营养物质有机酸含量下降，对大鼠胃黏膜组织蛋白表达水平下降，抗肿瘤效果下降，这是因为，复合酶的作用可以促进益生菌快速生长，从而分泌出大量的营养物质，这些营养物质以及益生菌可以促进机体代谢调节，本发明添加的益生元富含水溶性单糖组分，使得益生菌能够更加容易、快速的利用益生元，使得益生菌能够更加快速的进入稳定期，同时益生元可以为益生菌提供碳源，促进益生菌增殖，抑制有害幽门螺杆菌的生长，而且还具有较强的免疫刺激作用，可以增强巨噬细胞活性使其产生抗菌素，进而刺激淋巴细胞不断分裂繁殖，从而有助于萎缩性胃炎的预防和治疗，以及肿瘤的抑制。
实施例6与实施例3相比，无机盐中氯化钙由等量氯化钠替代，其营养物质有机酸含量稍有下降，菌群存活率下降，而幽门螺杆菌的抑制受到下降，对大鼠胃黏膜组织蛋白表达水平和抗肿瘤效果稍有下降，因为益生菌发酵组合物中的钙元素，对于不同益生菌混合时可以提高抗性，从而减少菌种混合时的不良反应，以及在胃肠道环境中提高抗性，提高存活率，避免不良物质的产生。
实施例7、8与实施例3相比，维生素中未添加维生素B1或B12，其营养物质有机酸含量稍有下降，对大鼠胃黏膜组织蛋白表达水平和抗肿瘤效果稍有下降，对比例6与实施例3相比，步骤S4中维生素为仅为维生素C，其营养物质有机酸含量明显下降，对大鼠胃黏膜组织蛋白表达水平和抗肿瘤效果明显下降，未添加维生素B1和B12，益生菌发酵组合物中的维生素B1和维生素B12能够延长益生菌稳定期，使得其产生更多的有益物质，抑制有害幽门螺杆菌的生长，提高胃黏膜的保护及抗肿瘤效果。
对比例1、2与实施例3相比，步骤S1中未添加桑枝或变性淀粉，其营养物质有机酸含量下降，对大鼠胃黏膜组织蛋白表达水平和抗肿瘤效果下降，本发明通过复合酶酶解变性淀粉和桑枝，得到低聚糖，能够明显提高益生菌的增殖活性，抑制有害幽门螺杆菌的生长，不良产物少，环境污染少，反应条件温和，产率高；其中，桑枝的添加对于促进乳杆菌的增殖有明显效果，而变性淀粉的添加对于促进双歧杆菌的增殖有明显的效果，两者协同添加，能明显促进益生菌总量的增殖，具有协同增效的作用。
对比例3、4与实施例3相比，步骤S2中未添加双歧杆菌或乳杆菌，其营养物质有机酸含量下降，对大鼠胃黏膜组织蛋白表达水平和抗肿瘤效果下降，本发明通过组合双歧杆菌和乳杆菌，而双歧杆菌又包含副干酪乳杆菌和动物双歧杆菌，乳杆菌包括鼠李糖乳杆菌和植物乳杆菌，多种益生菌复合，能明显提高肠道益生菌菌群的丰度，产生多种有益物质，抑制有害幽门螺杆菌的生长，抑制和降低毒素的分泌，促进机体代谢，抑制炎症因子的产生以及炎症细胞的释放，从而有效降低肿瘤的发生概率，起到很好的预防及治疗萎缩性胃炎以及抗肿瘤的效果。
对比例5与实施例3相比，步骤S4中未添加燕麦β-葡聚糖，其丁酸含量明显下降，对大鼠胃黏膜组织蛋白表达水平和体内抗肿瘤效果下降，本发明发酵培养基中含有少量膳食纤维，如燕麦β-葡聚糖，益生菌经过发酵后，将该部分膳食纤维分解产生短链脂肪酸——丁酸，可以诱导Treg细胞扩增，促进抗炎细胞因子产生，抑制有害幽门螺杆菌的生长，抑制胃肠癌的发生。
对比例7、8与实施例3相比，步骤S6中未添加山药多糖或灵芝孢子粉；其对大鼠胃黏膜组织蛋白表达水平和抗肿瘤效果明显下降，活性组合物中含有山药多糖、人参皂苷Rh2、灵芝孢子粉，具有协同增效的作用，其中，山药多糖具有增强免疫、延缓衰老、抗肿瘤、调节血糖的作用，灵芝孢子粉具有增强机体免疫力、抑制肿瘤、保护胃黏膜等作用，加入活性组合物后，能起到更好的抑制幽门螺杆菌的活性，抑制肿瘤细胞生长，促进白细胞活性，增强巨噬细胞活性使其产生抗菌素，刺激淋巴细胞不断分裂繁殖，起到很好的组合预防及治疗萎缩性胃炎以及抗肿瘤的效果。
对比例9与实施例3相比，步骤S7中仅仅将各组分简单混合；其存活率在60min时仅为1.2%，释放率在60min时已经达到了98.5%，没有起到缓释效果。本发明通过快速膜乳化制备水包油乳液，进一步通过氯化钙和海藻酸钠反应形成壳层，从而制得缓释微胶囊，制得的预防及治疗萎缩性胃炎的组合物微胶囊缓释微胶囊进入人体后，可以缓慢释放益生元、益生菌、活性组合物和益生菌发酵组合物，从而起到长效调节，延长反应效果的作用。
对比例10与实施例3相比，未进行步骤S1；其营养物质有机酸含量下降，对大鼠胃黏膜组织蛋白表达水平和抗肿瘤效果下降，本发明添加的益生元富含水溶性单糖组分，使得益生菌能够更加容易、快速的利用益生元，使得益生菌能够更加快速的进入稳定期，同时益生元可以为益生菌提供碳源，促进益生菌增殖，而且还具有较强的免疫刺激作用，可以增强巨噬细胞活性使其产生抗菌素，抑制幽门螺杆菌的活性，进而刺激淋巴细胞不断分裂繁殖，从而有助于预防及治疗萎缩性胃炎以及肿瘤的抑制。
对比例11与实施例3相比，未进行步骤S5；其营养物质有机酸含量大幅度下降，丁酸含量为0，对大鼠胃黏膜组织蛋白表达水平和抗肿瘤效果大幅度下降，本发明发酵培养基中含有少量膳食纤维，如燕麦β-葡聚糖，益生菌经过发酵后，将该部分膳食纤维分解产生短链脂肪酸——丁酸，可以诱导Treg细胞扩增，促进抗炎细胞因子产生，抑制幽门螺杆菌的活性，抑制胃肠癌的发生，通过组合双歧杆菌和乳杆菌，而双歧杆菌又包含副干酪乳杆菌和动物双歧杆菌，乳杆菌包括鼠李糖乳杆菌和植物乳杆菌，多种益生菌复合，能明显提高肠道益生菌群的丰度，产生多种有益物质，抑制有害幽门螺杆菌的生长，抑制和降低毒素的分泌，促进机体代谢，抑制炎症因子的产生以及炎症细胞的释放，从而有效降低肿瘤的发生概率，起到很好的预防及治疗萎缩性胃炎以及辅助治疗肿瘤的效果。
对比例12与实施例3相比，未进行步骤S6；对大鼠胃黏膜组织蛋白表达水平和抗肿瘤效果下降，活性组合物中含有山药多糖、人参皂苷Rh2、灵芝孢子粉，加入活性组合物后，抑制有害幽门螺杆菌的生长，更好的抑制肿瘤细胞生长，促进白细胞活性，增强巨噬细胞活性使其产生抗菌素，刺激淋巴细胞不断分裂繁殖，起到很好的组合预防及治疗萎缩性胃炎和抗肿瘤的效果。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种预防及治疗萎缩性胃炎的组合物微胶囊的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.免疫调节益生元的制备：将桑枝洗净，干燥，粉碎后，加入变性淀粉，混合均匀，得到粉料，加入水中，加入复合酶，调节pH值，微波加热反应后，灭酶，过滤，浓缩，得到免疫调节益生元；
S2.益生菌种子液的培养：将双歧杆菌和乳杆菌分别接种到高氏培养基中，有氧培养，分别培养成菌种种子液；
S3.山楂提取物的制备：将山楂洗净，切碎，干燥，分散至100目，加入水中微波加热提取，过滤，浓缩，干燥，得到山楂提取物，紫外线灭菌备用；
S4.发酵培养基的制备：将燕麦β-葡聚糖、碳源、氨基酸、维生素、无机盐和步骤S3制得的山楂提取物用无菌水溶解，用PBS溶液调节培养基pH值为6.8-7.2，紫外线灭菌备用；
S5.益生菌发酵组合物的制备：将步骤S2制得的菌种种子液接种到步骤S4制得的发酵培养基中进行发酵培养，得到益生菌发酵组合物；
S6.活性组合物的混合：将山药多糖、人参皂苷Rh2、灵芝孢子粉混合均匀，得到活性组合物；
S7.缓释微胶囊的制备：将步骤S1制得的免疫调节益生元、步骤S5制得的益生菌发酵组合物和步骤S6制得的活性组合物加入水中，加入乳化剂和海藻酸钠，搅拌混合均匀，得到水相；将维生素E加入鱼油中，得到油相；将水相和油相混合后，用SPG膜进行快速膜乳化，形成乳液，加入氯化钙溶液，常温固化，过滤，干燥，得到预防及治疗萎缩性胃炎的组合物微胶囊微胶囊。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S1中所述桑枝和变性淀粉的质量比为5：（2-4）；所述复合酶为α-淀粉酶、β-淀粉酶的混合物，质量比为3：（1-2），调节pH值为5-6.4，所述微波加热至温度为35-45℃，反应时间为2-4h。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S2中所述双歧杆菌和乳杆菌的质量比为5：（2-3）；所述双歧杆菌包括副干酪乳杆菌和动物双歧杆菌，质量比为2：（3-5）；所述乳杆菌包括鼠李糖乳杆菌和植物乳杆菌，质量比为1：（2-4）；所述有氧培养的条件为35-40℃，氧含量为25-35%，培养时间为18-24h；所述菌种种子液中含菌量为108-109cfu/mL。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S3中所述微波加热至温度为80-100℃，提取1-3h，所述微波功率为1000-1500W。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S4中所述碳源选自葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、果糖、水溶性淀粉中的一种或几种混合；所述氨基酸选自苯丙氨酸、丝氨酸、赖氨酸、苏氨酸、甘氨酸、缬氨酸、色氨酸、亮氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、甲氨酸、异亮氨酸中的一种或几种混合；所述维生素选自维生素C、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素A、维生素K、维生素B12、维生素D、维生素E中的一种或几种混合；所述无机盐选自氯化钠、氯化钾、氯化钙、硫酸镁、氯化铁、硫酸锌、硫酸铜、硫酸锰、氯化锌、氯化铜、氯化锰中的一种或几种混合；所述燕麦β-葡聚糖、碳源、氨基酸、维生素、无机盐、山楂提取物的质量比为（2-5）：10：（2-5）：（0.1-0.2）：（0.01-0.1）：（5-7），优选地，所述碳源为蔗糖；所述氨基酸为谷氨酸、丝氨酸，质量比为2：（1-2）；所述维生素为维生素B1、维生素B12和维生素C，质量比为1：（1-2）：3；所述无机盐为氯化钙、硫酸铁、硫酸锌、硫酸铜，质量比为5：（0.1-0.3）：（0.2-0.4）：（0.1-0.3）。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S5中所述各种菌种种子液的接种量均为2-4%；所述发酵培养的条件为35-39℃，湿度为70-80%，培养时间为24-48h。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S6中所述山药多糖、人参皂苷Rh2、灵芝孢子粉的质量比为5：（1-2）：（3-7）。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S7中所述免疫调节益生元、益生菌发酵组合物和活性组合物的质量比为5：（7-12）：（2-4）；所述乳化剂选自硬脂酰乳酸钠/钙、双乙酰酒石酸单双甘油酯、蔗糖脂肪酸酯、蒸馏单甘酯中的至少一种；所述SPG膜的孔隙为5-10µm；所述氯化钙溶液的含量为3-7wt%。
9.一种如权利要求1-8任一项所述的制备方法制得的预防及治疗萎缩性胃炎的组合物微胶囊。
10.一种如权利要求9所述的预防及治疗萎缩性胃炎的组合物微胶囊在制备预防及治疗萎缩性胃炎的药物以及预防和辅助治疗胃肠癌肿瘤药物中的应用。
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