CN114133429B

CN114133429B - 一种杀灭肿瘤细胞的多肽及其应用

Info

Publication number: CN114133429B
Application number: CN202111398411.7A
Authority: CN
Inventors: 冷宁; 苏宏健; 李晓鹏; 关伟萍; 田辉; 杨文龙; 王丽莉; 吴霜
Original assignee: Harbin Jixianglong Biological Technology Co ltd
Current assignee: Harbin Jixianglong Biological Technology Co ltd
Priority date: 2021-11-22
Filing date: 2021-11-22
Publication date: 2022-06-24
Anticipated expiration: 2041-11-22
Also published as: CN114133429A

Abstract

本发明公开一种杀灭肿瘤细胞的多肽及其应用，属于分子生物学技术领域。为了提供一种浓度依赖靶向性强和稳定性强的多肽。本发明提供一种多肽的序列结构为：a+n(b)+a，a＝KKLL其中的任意一个氨基酸或多个氨基酸，b＝KKLL，n＝1‑10的整数。用于杀灭肿瘤细胞的多肽药物的分子量越大，药效越强，药物分子量越小，药效越小。肿瘤治疗中，可应用于杀灭肿瘤细胞特殊给药方式的药物或特殊给药设备治疗方案中。

Description

一种杀灭肿瘤细胞的多肽及其应用

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种杀灭肿瘤细胞的多肽及其应用。

背景技术

世界卫生组织国际癌症研究机构(IARC)发布了2020年全球最新癌症负担数据。预估了全球185个国家36种癌症类型的最新发病率、死亡率情况，以及癌症发展趋势。这项最新预估数据显示，2020年全球新发癌症病例1929万例，其中男性1006万例，女性923万例；2020年全球癌症死亡病例996万例，其中男性553万例，女性443万例。全球乳腺癌新发病例高达226万例，超过了肺癌的220万例，乳腺癌取代肺癌，成为全球第一大癌。2020年中国新发癌症病例457万例，其中男性248万例，女性209万例，2020年中国癌症死亡病例300万例，其中男性182万例，女性118万例。

癌症新发人数前十的国家分别是：中国457万，美国228万，印度132万，日本103万，德国63万，巴西59万，俄罗斯59万，法国47万，英国46万，意大利42万。2020年全球新发癌症病例1929万例，其中中国新发癌症457万人，占全球23.7％，由于中国是世界第一人口大国，癌症新发人数远超世界其他国家。

目前肿瘤的治疗方法有很多，最主要的是以下几种：(一)手术治疗；(二)化药治疗；(三)放射治疗；(四)靶向疗法；(五)免疫疗法；(六)疫苗等。(七)介入治疗手术、化疗和放疗，并称为癌症的3大治疗手段。

大部分手术治疗需选择在癌症发病早期或中期，应用收到局限，并且术后生存质量大幅下降。癌症患者大多数免疫力下降严重，通过免疫力与疫苗途径治疗癌症的疗效不稳定。放射治疗副作用巨大，患者治疗后生存质量降到最低，身体情况极差。化药治疗、靶向疗法、介入治疗中一般用药核心多为基础化药(紫杉醇、多柔比星、吉西他滨、顺铂类药物等。)，药物进入人体后不能自然降解，需要长时间通过尿液、粪便、肾脏等代谢出体外，药物在肿瘤组织起效时间远远小于药物分布在体内全身发生副作用的时间。

例如化药注射液说明书中标注：紫杉醇清除时间：120小时(5天)，平均71％通过粪便排出，14％通过尿液排出；多柔比星清除时间：7天内粪便与胆汁排出40％-50％药物，肾脏排出量较少，5天内尿液排出5-10％药物；吉西他滨清除时间：7天后99％经尿液排出，1％经粪便排出；奥沙利铂清除时间：大多数在2天内清除，但第5天时有54％随尿液排出，不到3％随粪便排出。此类化疗药物全部都存在治疗中发生耐药性情况报道。

近日，ADC、PDC药物研究、开发非常广泛。药物通过亲和力较高的受体结构靶向进入肿瘤细胞，药物中Linker结构在肿瘤细胞中特定条件下断开释放有效载荷，杀灭肿瘤细胞。由于有效载荷结构多使用紫杉醇、吉西他滨等药效比较好的化疗药物，但靶向杀灭肿瘤细胞后，由于在人体驻留时间较长，化疗药物还是会扩散到全身。虽然靶向药物用量有所减少，但患者承受的副作用仍然存在。

现有主要治疗药物中缺乏一种既药效明确，也可以在人体内适当时间自然降解的药物，对肿瘤组织强力杀伤后，对人体产生的副作用小，几乎不产生影响。

发明内容

本发明的目的是为了有效的杀灭肿瘤，提供一种浓度依赖靶向性强和稳定性强的多肽。

本发明提供了一种杀灭肿瘤细胞的多肽，所述多肽的序列结构为：a+n(b)+a，

a＝KKLL其中的任意一个氨基酸或多个氨基酸，b＝KKLL，n＝1-10的整数。

进一步地限定，所述K可由R或H取代，L可由A或V或I取代。

进一步地限定，所述a为KK、LL、KLL、KKL或KL。

进一步地限定，所述多肽的氨基酸系列为KLLKKLLKKL LKKLLKK。

进一步地限定，所述多肽的氨基酸系列为KLLKKLLKKL LK。

进一步地限定，所述多肽的氨基酸系列为KLLKKLLK。

本发明提供了一种编码上述的杀灭肿瘤细胞的基因。

本发明提供了一种重组载体，所述重组载体携带上述的编码基因。

本发明提供了一种重组微生物细胞，所述重组细胞携带上述的编码基因或者表达上述的杀灭肿瘤细胞的多肽。

本发明提供上述的多肽在制备杀灭肿瘤细胞的产品和PDC药物中的应用。

有益效果：本发明为一种多肽药物结构组合，药物可自然形成α螺旋，立体结构上形成双排电子吸引，与细胞膜接触时可吸附在细胞膜上，造成短暂的细胞膜破损。达到一定数量时，细胞膜不能完成自我修复造成细胞质外流，细胞死亡。使用介入治疗的方式，把多肽药物直接输送到肿瘤组织内部，杀灭肿瘤细胞。药物杀灭肿瘤细胞后，自然降解成为氨基酸或多肽片段，不再有α螺旋三级结构，失去药效，对人体几乎无副作用。解决了目前癌症药物副作用大、耐药性的问题。

本发明多肽组合可由公式序列得到相关结构。药物的分子量越大，药效越强。药物分子量越小，药效越小。肿瘤治疗中，可应用于杀灭肿瘤细胞特殊给药方式的药物或特殊给药设备治疗方案中。治疗方案中对于杀灭肿瘤细胞的药物有多重需求，例如药效、半衰期、代谢时间、分子量等。可根据需求使用本发明的多肽公式序列来得到需要的具体多肽结构。

浓度依赖靶向性：根据本发明实施例中当药物浓度接近2.5μg/ml浓度时，药物失去药效。当肿瘤部位的多肽药物被代谢出肿瘤组织时药物浓度大幅下降，应低于此浓度。因此，药物结构选择适当、浓度适当的情况下，药物靶向作用于肿瘤组织中的肿瘤细胞，靶向杀灭肿瘤细胞，对人体几乎没有副作用。

耐药性：化疗药物全部都有报道耐药性情况。使用多肽药物杀灭肿瘤细胞，由于多肽杀灭肿瘤细胞属于物理性吸附后破壁，所以不会产生耐药性，可多次、反复给药治疗，药效稳定。

附图说明

图1为表示CTP1在day0-3时间中(横坐标)，H高浓组，M中浓组，L低浓组作用下四种肿瘤细胞的活性对比。纵坐标为(CCK8法)紫外吸收值。

图2为表示CTP12在day0-3时间中(横坐标)，H高浓组，M中浓组，L低浓组作用下四种肿瘤细胞的活性对比。纵坐标为(CCK8法)紫外吸收值。

图3为表示CTP3在day0-3时间中(横坐标)，H高浓组，M中浓组，L低浓组作用下四种肿瘤细胞的活性对比。纵坐标为(CCK8法)紫外吸收值。

图4为表示CTP4在day0-3时间中(横坐标)，H高浓组，M中浓组，L低浓组作用下四种肿瘤细胞的活性对比。纵坐标为(CCK8法)紫外吸收值。

图5为表示CTP5在day0-3时间中(横坐标)，H高浓组，M中浓组，L低浓组作用下四种肿瘤细胞的活性对比。纵坐标为(CCK8法)紫外吸收值。

图6为表示CTP4在day0-3时间中(横坐标)，H高浓组，M中浓组，L低浓组作用下四种肿瘤细胞的活性对比。纵坐标为(CCK8法)紫外吸收值。

图7为表示紫杉醇在day0-3时间中(横坐标)，临床用药浓组作用下四种肿瘤细胞的活性对比。纵坐标为(CCK8法)紫外吸收值。

图8为表示奥沙利铂在day0-3时间中(横坐标)，临床用药浓组作用下四种肿瘤细胞的活性对比。纵坐标为(CCK8法)紫外吸收值。

图9为表示吉西他滨在day0-3时间中(横坐标)，临床用药浓组作用下四种肿瘤细胞的活性对比。纵坐标为(CCK8法)紫外吸收值。

图10为表示CTP1-6、紫杉醇、奥沙利铂、吉西他滨在day0-3时间中(横坐标)，CTP药物在40μg/mL浓度作用下、三种化疗药物在临床用药浓组作用下对A549_H肿瘤细胞的活性对比。纵坐标为(CCK8法)紫外吸收值。

图11为表示CTP1-6、紫杉醇、奥沙利铂、吉西他滨在day0-3时间中(横坐标)，CTP药物在40μg/mL浓度作用下、三种化疗药物在临床用药浓组作用下对BxPC-3_H肿瘤细胞的活性对比。

图12为表示CTP1-6、紫杉醇、奥沙利铂、吉西他滨在day0-3时间中(横坐标)，CTP药物在40μg/mL浓度作用下、三种化疗药物在临床用药浓组作用下对MIA PaCa-2_H肿瘤细胞的活性对比。

图13为表示CTP1-6、紫杉醇、奥沙利铂、吉西他滨在day0-3时间中(横坐标)，CTP药物在40μg/mL浓度作用下、三种化疗药物在临床用药浓组作用下对PANC-1_H肿瘤细胞的活性对比。

图14为表示CTP1-6、紫杉醇、奥沙利铂、吉西他滨在day0-3时间中(横坐标)，CTP药物在10μg/mL浓度作用下、三种化疗药物在临床用药浓组作用下对A549_M肿瘤细胞的活性对比。

图15为表示CTP1-6、紫杉醇、奥沙利铂、吉西他滨在day0-3时间中(横坐标)，CTP药物在10μg/mL浓度作用下、三种化疗药物在临床用药浓组作用下对BxPC-3_M肿瘤细胞的活性对比。

图16为表示CTP1-6、紫杉醇、奥沙利铂、吉西他滨在day0-3时间中(横坐标)，CTP药物在10μg/mL浓度作用下、三种化疗药物在临床用药浓组作用下对MIA PaCa-2_M肿瘤细胞的活性对比。

图17为表示CTP1-6、紫杉醇、奥沙利铂、吉西他滨在day0-3时间中(横坐标)，CTP药物在10μg/mL浓度作用下、三种化疗药物在临床用药浓组作用下对PANC-1_M肿瘤细胞的活性对比。

图18为表示CTP1-6、紫杉醇、奥沙利铂、吉西他滨在day0-3时间中(横坐标)，CTP药物在2.5μg/mL浓度作用下、三种化疗药物在临床用药浓组作用下对A549_L肿瘤细胞的活性对比。

图19为表示CTP1-6、紫杉醇、奥沙利铂、吉西他滨在day0-3时间中(横坐标)，CTP药物在2.5μg/mL浓度作用下、三种化疗药物在临床用药浓组作用下对BxPC-3_L肿瘤细胞的活性对比。

图20为表示CTP1-6、紫杉醇、奥沙利铂、吉西他滨在day0-3时间中(横坐标)，CTP药物在2.5μg/mL浓度作用下、三种化疗药物在临床用药浓组作用下对MIA PaCa-2_L肿瘤细胞的活性对比。

图21为表示CTP1-6、紫杉醇、奥沙利铂、吉西他滨在day0-3时间中(横坐标)，CTP药物在2.5μg/mL浓度作用下、三种化疗药物在临床用药浓组作用下对PANC-1_L肿瘤细胞的活性对比。

图22为表示CTP3在day0-3时间中(横坐标)，H高浓组，M中浓组，L低浓组作用下四种肿瘤细胞的活性对比。纵坐标为(CCK8法)紫外吸收值。

图23为表示CTP7在day0-3时间中(横坐标)，H高浓组，M中浓组，L低浓组作用下四种肿瘤细胞的活性对比。纵坐标为(CCK8法)紫外吸收值。

图24为表示CTP8在day0-3时间中(横坐标)，H高浓组，M中浓组，L低浓组作用下四种肿瘤细胞的活性对比。纵坐标为(CCK8法)紫外吸收值。

图25为表示紫杉醇在day0-3时间中(横坐标)，临床用药浓组作用下四种肿瘤细胞的活性对比。纵坐标为(CCK8法)紫外吸收值。

图26为表示奥沙利铂在day0-3时间中(横坐标)，临床用药浓组作用下四种肿瘤细胞的活性对比。纵坐标为(CCK8法)紫外吸收值。

图27为表示吉西他滨在day0-3时间中(横坐标)，临床用药浓组作用下四种肿瘤细胞的活性对比。纵坐标为(CCK8法)紫外吸收值。

图28为表示CTP3、7、8，紫杉醇、奥沙利铂、吉西他滨在day0-3时间中(横坐标)，CTP药物在40μg/mL浓度作用下、三种化疗药物在临床用药浓组作用下对A549_H肿瘤细胞的活性对比。纵坐标为(CCK8法)紫外吸收值。

图29为表示CTP3、7、8，紫杉醇、奥沙利铂、吉西他滨在day0-3时间中(横坐标)，CTP药物在40μg/mL浓度作用下、三种化疗药物在临床用药浓组作用下对BxPC-3_H肿瘤细胞的活性对比。

图30为表示CTP3、7、8，紫杉醇、奥沙利铂、吉西他滨在day0-3时间中(横坐标)，CTP药物在40μg/mL浓度作用下、三种化疗药物在临床用药浓组作用下对PANC-1_H肿瘤细胞的活性对比。

图31为表示CTP3、7、8，紫杉醇、奥沙利铂、吉西他滨在day0-3时间中(横坐标)，CTP药物在40μg/mL浓度作用下、三种化疗药物在临床用药浓组作用下对MIA PaCa-2_H肿瘤细胞的活性对比。

图32为表示CTP3、7、8，紫杉醇、奥沙利铂、吉西他滨在day0-3时间中(横坐标)，CTP药物在10μg/mL浓度作用下、三种化疗药物在临床用药浓组作用下对A549_M肿瘤细胞的活性对比。

图33为表示CTP3、7、8，紫杉醇、奥沙利铂、吉西他滨在day0-3时间中(横坐标)，CTP药物在10μg/mL浓度作用下、三种化疗药物在临床用药浓组作用下对BxPC-3_M肿瘤细胞的活性对比。

图34为表示CTP3、7、8，紫杉醇、奥沙利铂、吉西他滨在day0-3时间中(横坐标)，CTP药物在10μg/mL浓度作用下、三种化疗药物在临床用药浓组作用下对PANC-1_M肿瘤细胞的活性对比。

图35为表示CTP3、7、8，紫杉醇、奥沙利铂、吉西他滨在day0-3时间中(横坐标)，CTP药物在10μg/mL浓度作用下、三种化疗药物在临床用药浓组作用下对MIA PaCa-2_M肿瘤细胞的活性对比。

图36为表示CTP3、7、8，紫杉醇、奥沙利铂、吉西他滨在day0-3时间中(横坐标)，CTP药物在2.5μg/mL浓度作用下、三种化疗药物在临床用药浓组作用下对A549_L肿瘤细胞的活性对比。

图37为表示CTP3、7、8，紫杉醇、奥沙利铂、吉西他滨在day0-3时间中(横坐标)，CTP药物在2.5μg/mL浓度作用下、三种化疗药物在临床用药浓组作用下对BxPC-3_L肿瘤细胞的活性对比。

图38为表示CTP3、7、8，紫杉醇、奥沙利铂、吉西他滨在day0-3时间中(横坐标)，CTP药物在2.5μg/mL浓度作用下、三种化疗药物在临床用药浓组作用下对PANC-1_L肿瘤细胞的活性对比。

图39为表示CTP3、7、8，紫杉醇、奥沙利铂、吉西他滨在day0-3时间中(横坐标)，CTP药物在2.5μg/mL浓度作用下、三种化疗药物在临床用药浓组作用下对MIA PaCa-2_L肿瘤细胞的活性对比。

具体实施例

BxPC-3、PANC-1、MIA PaCa、A549细胞后面带有L、M、H说明的是多肽给药的浓度。

实施例1.一种杀灭肿瘤细胞的多肽的合成方法

一、一种抗细菌多肽的合成方法

1.以FMOC合成法为基础，采用固相合成法，以酰胺类树脂为固相载体(交联度11％，0.97mmol/g)，FMOC保护的特殊氨基酸，HOBT/DIC偶联剂、10％哌啶/DMF(体积分数)有机碱，按照3倍合成规模的氨基酸投料，按照序列依次连接KLLKK LLKKL LKKLL KK。

2.以苯酚：TA:EDT:水:TIS:三氟乙酸＝5:5:5:4:1:80(体积比)为剪切剂，搅拌避光反应。反应结束后抽滤，滤液沉淀，再次抽滤，滤饼为目的肽。

3.合成的多肽粗产物通过制备型反相高效液相色谱(50mm内径制备柱)进行分离纯化，填料采用C18，5μm粒径、

孔径型号，A流动相使用乙腈，B流动相使用1‰TFA水，梯度洗脱，由A:B-5％：95％变为A:B-50％：50％，运行时间90分钟。

4.分段收集最高峰顶处流出液，标准为液相纯度90％以上，合格收集液合并，减压蒸馏，最终浓度为5mg/ml，最终制得冻干粉为抗细菌肽化合物。

其氨基酸序列为CTP3：KLLKK LLKKL LKKLL KK(SEQ ID NO.1)，经质谱检测线性肽分子量大小2076 Da。

二、按照上述的合成方法以此合成CTP1：KLLKL LKKLL KLLK(SEQ ID NO.2)，CTP2：GIWKK WIKKW LNVLK NLF(SEQ ID NO.3)，CTP4：KKLLK LLKKL LKKLL KK(SEQ ID NO.4)，CTP5：WLWKK WLKKW LNVFK NFF(SEQ ID NO.5)，CTP6：LWKKW LKKWLNLLKN LL(SEQ IDNO.6)，CTP7：KLLKK LLKKL LK(1465 Da)n＝2(SEQ ID NO.7)，CTP8：KLLKK LLK(982 Da)n＝1(SEQ ID NO.8)。

利用以下实验验证实验效果：

一、1.高细胞毒性多肽杀灭肿瘤细胞药效体外实验数据

(1)实验组：高细胞毒性多肽系列药物设置三个浓度，分别为H、M、L按照表1所示的含量。(CTP1：KLLKL LKKLL KLLK，CTP2：GIWKK WIKKW LNVLK NLF，CTP3：KLLKK LLKKL LKKLLKK，CTP4：KKLLK LLKKL LKKLL KK，CTP5：WLWKK WLKKW LNVFK NFF，CTP6：LWKKW LKKWLNLLKN LL)

表1

组别	浓度μg/mL
		H	40
M	10
		L	2.5

(2)对照组：Taxol(紫杉醇)、Oxaliplatin(奥沙利铂)、Gemcitabine(吉西他滨)仅设置一个浓度。

依据药品说明书得到用药浓度，与细胞培养液中给药浓度相同。(如表2所示)

表2

(3)实验所用细胞系如表3所示：

表3

A549：	人非小细胞肺癌细胞
		BxPC-3：	人原位胰腺腺癌细胞(胰体癌原发肿瘤)
MIA PaCa-2：	人胰腺癌细胞(胰体尾癌原发肿瘤)
		PANC-1：	人胰腺癌细胞(胰头癌原发肿瘤)

(4)实验过程：肿瘤细胞在培养基中培养至一定浓度，加入药物达到既定浓度，测定细胞活性。

(5)检测方法：CCK8法

(6)实验组与对照组对4种肿瘤细胞的抑制药效数据结果：

第一组以药物组为横坐标，吸收值为纵坐标，做day0、day1、day2、day3柱形图如图1-9所示，结果如表4所示。

表4

注意：药效较好：好○；药效微弱：差△；无药效：无□

第二组以day0、day1、day2、day3为横坐标，吸收值为纵坐标，做药物组折线图如图图10-21所示：

多肽药物高浓组与对照药物在抑制4种肿瘤细胞中的数据结果如图10-13所示：多肽药物在高浓度下，三天药效普遍要比奥沙利铂与吉西他滨强，与紫杉醇药效相近。随第一天起效速度方面有所差异，但第二天与第三天紫杉醇的药效显现出最佳效果，比所有多肽药物要好。

多肽药物中浓组与对照药物在抑制4种肿瘤细胞中的数据结果如图14-17所示：对照组药物普遍比实验组多肽抑制肿瘤细胞效果好，在药效上CTP3在这4种肿瘤细胞实验中显示出广谱，较好药效，也是最稳定的多肽药物。

多肽药物低浓组与对照药物在抑制4种肿瘤细胞中的数据结果如图18-21所示：多肽在低浓度时普遍失去作用，说明了6组多肽药物全部为浓度依赖药物，并且CTP3有效浓度高于2.5μg/ml、低于或等于10μg/mL。

结果：(1)CTP3是本发明所声明的序列公式中的药物结构，与其他有相似结构的多肽对比，药效显著、广谱、起效快、稳定，在用药量上比其他多肽用药量更少，完全体现了本发明公式序列的重要性。如CTP1，在序列上只有一个氨基酸序列不一致，但药效却有非常大的差距。

(2)紫杉醇是抗肿瘤方面报道最多、效果最好的化学药物之一。CTP3在10μg/mL浓度下比紫杉醇浓度小5倍以上，在4种肿瘤细胞的抑制药效方面第一天中非常相近，并且可以快速降解，也体现出了在治疗中本发明的序列公式的多肽药物结构比化疗药物用量少、降解快、副作用小等，优势明显。CTP3与奥沙利铂、吉西他滨对比优势更加明显。

(3)CTP3也明显示出了浓度依赖属性，在治疗过程中肿瘤组织代谢出的微量多肽药物对人体几乎无副作用。

二、实验组与对照组对4种肿瘤细胞的抑制药效数据结果：(CTP3：KLLKK LLKKLLKKLL KK，CTP7：KLLKK LLKKL LK，CTP8：KLLKK LLK(SEQ ID NO.8))

(1)第一组以药物组为横坐标，吸收值为纵坐标，做day0、day1、day2、day3柱形如图22-39所示，结果如表5所示。

表5

(2)第二组以day0、day1、day2、day3为横坐标，吸收值为纵坐标，做药物组折线图如图22-39所示。

多肽药物高浓组与对照药物在抑制4种肿瘤细胞中的数据如图22-27所示：CTP3、CTP7在杀灭BxPC-3肿瘤细胞与PANC-1肿瘤细胞中宇紫杉醇药效一致，其他药物药效排序为吉西他滨，奥沙利铂，CTP8。在杀灭A549肿瘤细胞与MIA PaCa-2肿瘤细胞中CTP3与紫杉醇药效一致，其他药物药效排序为CTP7，吉西他滨，奥沙利铂，CTP8。

多肽药物中浓组与对照药物在抑制4种肿瘤细胞中的数据如图8所示：杀灭BxPC-3、PANC-1肿瘤细胞中，CTP3与紫杉醇药效几乎一致。其他两个肿瘤细胞中，药效略微弱于紫杉醇。其他药物药效排序为CTP7，吉西他滨，奥沙利铂，CTP8。

多肽药物低浓组与对照药物在抑制4种肿瘤细胞中的数据显示(图36-39)：多肽在低浓度时普遍失去作用。

结果：(1)肽药物的药效排序为CTP3>CTP7>CTP8。可以看出在本发明多肽公式序列的结构中，分子量越大，吸附能力越强，降解时间越长，起效浓度越小。

(2)CTP7药效略微低于CTP3，在降解速度上高于CTP3。在中浓度杀灭肿瘤细胞数据中可以看到，CTP7在第一天的药效是最好的，但第二天、第三天药效大幅度减弱。而CTP3在三天中较为稳定。这也是由于CTP7降解速度高于CTP3出现的数据结果。

(3)由于CTP8的分子量较小，综合考量，其应用有效浓度较大，高于40μg/mL，而且降解速度高于CTP7，数据推断其降解时间小于1天。故CTP8普遍没有药效。

实施例2.制备PDC的应用

本发明多肽主要应用于介入治疗、靶向给药两个方面。

介入治疗：给药导管由肿瘤组织临近动脉血管插入，导管口临近肿瘤组织。多次给药，或持续给药可杀灭肿瘤组织。

靶向给药：在PDC药物的研究中，由本发明的多肽结构代替化疗药物作为有效载荷来杀灭肿瘤细胞，治疗完成后多肽自然降解。由于浓度依赖，没有富集到肿瘤组织的药物浓度很低，不产生药效，几乎对人体没有影响，副作用几乎没有。

SEQUENCE LISTING

<110> 哈尔滨吉象隆生物技术有限公司

<120> 一种杀灭肿瘤细胞的多肽及其应用

<160> 8

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工合成

<400> 1

Lys Leu Leu Lys Lys Leu Leu Lys Lys Leu Leu Lys Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys

<210> 2

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工合成

<400> 2

Lys Leu Leu Lys Leu Leu Lys Lys Leu Leu Lys Leu Leu Lys

1 5 10

<210> 3

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工合成

<400> 3

Gly Ile Trp Lys Lys Trp Ile Lys Lys Trp Leu Asn Val Leu Lys Asn

1 5 10 15

Leu Phe

<210> 4

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工合成

<400> 4

Lys Lys Leu Leu Lys Leu Leu Lys Lys Leu Leu Lys Lys Leu Leu Lys

1 5 10 15

Lys

<210> 5

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工合成

<400> 5

Trp Leu Trp Lys Lys Trp Leu Lys Lys Trp Leu Asn Val Phe Lys Asn

1 5 10 15

Phe Phe

<210> 6

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工合成

<400> 6

Leu Trp Lys Lys Trp Leu Lys Lys Trp Leu Asn Leu Leu Lys Asn Leu

1 5 10 15

Leu

<210> 7

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工合成

<400> 7

Lys Leu Leu Lys Lys Leu Leu Lys Lys Leu Leu Lys

1 5 10

<210> 8

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工合成

<400> 8

Lys Leu Leu Lys Lys Leu Leu Lys

1 5

Claims

1.一种杀灭肿瘤细胞的多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列为KLLKKLLKKLLKKLLKK。

2.编码权利要求1所述的杀灭肿瘤细胞的多肽的基因。

3.一种重组载体，其特征在于，所述重组载体携带权利要求2所述的编码基因。

4.一种重组微生物细胞，其特征在于，所述重组细胞携带权利要求2所述的编码基因或者表达权利要求1所述的杀灭肿瘤细胞的多肽。

5.权利要求1所述的多肽在制备杀灭肿瘤细胞的产品和多肽偶联药物中的应用，其特征在于，所述肿瘤细胞为人胰腺癌细胞和人非小细胞肺癌细胞。