CN114129601B

CN114129601B - 格氏乳杆菌lgv03在制备预防或治疗hpv感染药物中的应用

Info

Publication number: CN114129601B
Application number: CN202111581266.6A
Authority: CN
Inventors: 邱峰; 张子康; 操龙斌; 黄佩香; 张琳; 郑介婷
Original assignee: Seventh Affiliated Hospital Of Southern Medical University Third People's Hospital Of Nanhai District Foshan City
Current assignee: Seventh Affiliated Hospital Of Southern Medical University Third People's Hospital Of Nanhai District Foshan City
Priority date: 2021-12-22
Filing date: 2021-12-22
Publication date: 2024-03-08
Anticipated expiration: 2041-12-22
Also published as: CN114129601A

Abstract

本发明公开了格氏乳杆菌LGV03在制备预防或治疗HPV感染药物中的应用，属于微生物技术领域。本发明公开的格氏乳杆菌LGV03的菌悬液，表现良好的使先天免疫系统对潜在病原体保持警觉，并在病原体感染时具有促进FN‑α和IFN‑β分泌来诱导免疫反应和缓解炎症反应的作用能，具备应用于体内预防或治疗HPV感染的潜能本发明公开的格氏乳杆菌LGV03在预防或治疗HPV感染方面有巨大的潜在应用前景。

Description

格氏乳杆菌LGV03在制备预防或治疗HPV感染药物中的应用

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，更具体的说是涉及格氏乳杆菌LGV03在制备预防或治疗HPV感染药物中的应用。

背景技术

宫颈癌是全球女性中第二大常见癌症，而人乳头瘤病毒(HPV)感染是发生这种疾病的主要危险因素。HPV是一种普遍存在的感染人类皮肤和粘膜的病毒，已报告了396种不同的亚型。在生殖器感染中发现的HPV类型分为主要与良性生殖器疣相关的低风险类型和与生殖器癌相关的高风险类型。大多数女性生殖道HPV感染是无症状，宿主免疫系统能够清除该病毒，是暂时性的；然而，少数女性无法清除这种病毒，是由于HPV病毒破坏了宿主的防御机制，导致持续感染，这是癌症发展的关键因素。这表明，对于大多数被HPV感染的个体，宿主防御机制在消除最初的HPV感染方面非常有效。

HPV专门感染人类上皮细胞，更具体地说，感染基底角质形成细胞。作为HPV的主要靶点，角质形成细胞在HPV感染的起始过程中发挥着重要作用，并随后成为促进有效适应性免疫反应的纽带，先天免疫防御系统的一部分，被认为是免疫哨兵。女性生殖道中的角质形成细胞表达多种Toll样受体(TLR)，位于细胞表面(TLR-1、TLR-2、TLR-4、TLR-5和TLR-6)或内体(TLR-3和TLR-9)。TLR是识别病原体相关分子模式(PAMP)的免疫受体家族，它们的激活启动免疫因子(IFN-α、IFN-β等)的产生，诱导先天性和适应性免疫反应，清除病毒。I型干扰素，主要是IFN-α和IFN-β，具有抗病毒、抗增殖、抗血管生成和免疫刺激特性，并充当先天免疫和适应性免疫之间的桥梁。HPV感染会下调IFN-α、IFN-β表达，损害角质形成细胞的免疫报警功能，使HPV持续感染。

尽管市场已有3种预防性HPV疫苗(2价Cervari、4价Gardasil、9价疫苗Gardasil)销售，然而由于缺乏筛查计划或预防性疫苗无法消除已感染的HPV，HPV的感染及其相关疾病仍然是全球的负担。随着科学对生殖道微生物日益深入的研究，生殖道微生物与生殖道健康的关系越来越受到人们的关注，特别是生殖道微生物与HPV感染的关系。已有研究表明，其他粘膜部位类似，生殖道微生物在负责HPV清除的免疫反应方面发挥着重要作用。因此，对生殖道微生物菌群进行干预可能会提供一种预防和治疗HPV感染的新策略。

许多研究表明，益生菌可以有效调节健康和疾病中的生殖道免疫系统。然而当前国际益生菌专利申请集中于美、日、俄传统研发强国，而我国缺乏拥有自主知识产权的功能性菌株。国内生产企业所用益生菌菌种长期依赖进口，而且国外菌株未必适合我国居民生殖道生理状况。另外，益生菌的功能缺乏有力的科学研究证据，严重影响了益生菌及其制品的推广。基于此，针对菌种资源的功能深入挖掘，筛选出拥有自主知识产权、具有特定功能性质、适合中国人群生理特性的新型益生菌菌株，对提高我国益生菌生产企业的核心竞争力，促进我国益生菌制品发展尤为重要。

因此，提供格氏乳杆菌LGV03在制备预防或治疗HPV感染药物中的应用是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了格氏乳杆菌LGV03在制备预防或治疗HPV感染药物中的应用。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

格氏乳杆菌LGV03在制备预防或治疗HPV感染药物中的应用，所述格氏乳杆菌LGV03的保藏编号为CGMCC No.22010(参见专利号202110523517.9)。

进一步，所述格氏乳杆菌LGV03为菌悬液。

进一步，所述格氏乳杆菌LGV03在制备显著促进病毒类似物Poly(I:C)刺激Ect1/E6E7细胞的IFN-α、IFN-β表达制剂中的应用。

进一步，所述格氏乳杆菌LGV03在制备显著抑制Poly(I:C)诱导Ect1/E6E7细胞的IL-6、IL-8、IL-1β表达制剂中的应用。

进一步，所述格氏乳杆菌LGV03在制备显著抑制斑马鱼异种移植模型中Ect1/E6E7细胞生长制剂中的应用。

进一步，所述格氏乳杆菌LGV03在制备未显著诱导斑马鱼体内ROS和NO的产生制剂中的应用。

本发明所述格氏乳杆菌LGV03既能显著促进Poly(I:C)刺激Ect1/E6E7细胞的IFN-α、IFN-β表达，又能显著抑制Poly(I:C)诱导Ect1/E6E7细胞的IL-6、IL-8、IL-1β表达，同时在斑马鱼异种移植模型中能够显著抑制Ect1/E6E7细胞生长，以及未能显著诱导斑马鱼体内ROS和NO的产生，即未诱导炎症反应，表现良好的使先天免疫系统对潜在病原体保持警觉，并在病原体感染时具有促进FN-α和IFN-β分泌来诱导免疫反应和缓解炎症反应的潜能。

本发明所述在体外既能显著促进Poly(I:C)刺激Ect1/E6E7细胞的IFN-α、IFN-β表达，又能显著抑制Poly(I:C)诱导Ect1/E6E7细胞的IL-6、IL-8、IL-1β表达，同时在斑马鱼异种移植模型中能够显著抑制Ect1/E6E7细胞生长，以及即未诱导炎症反应的菌株，为菌株的菌悬液(菌体)。

经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了格氏乳杆菌LGV03在制备预防或治疗HPV感染药物中的应用，格氏乳杆菌LGV03是从健康女性生殖道分泌物中分离筛选得到的，在体外既能显著促进Poly(I:C)刺激Ect1/E6E7细胞的IFN-α、IFN-β表达，又能显著抑制Poly(I:C)诱导Ect1/E6E7细胞的IL-6、IL-8、IL-1β表达，同时在斑马鱼异种移植模型中能够显著抑制Ect1/E6E7细胞生长，以及未能显著诱导斑马鱼体内ROS和NO的产生，表现良好的使先天免疫系统对潜在病原体保持警觉，并在病原体感染时具有促进FN-α和IFN-β分泌来诱导免疫反应和缓解炎症反应的作用，具备应用于体内预防或治疗HPV感染的潜能，此为利用格氏乳杆菌LGV03开发预防或治疗HPV感染的益生菌制剂提供理论参考和指导依据。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。

图1附图为本发明格氏乳杆菌LGV03对人正常宫颈上皮细胞Ect1/E6E7生长的影响；

图2附图为本发明格氏乳杆菌LGV03对人宫颈癌上皮细胞CaSki生长的影响；

图3附图为本发明格氏乳杆菌LGV03在人正常宫颈上皮细胞Ect1/E6E7中的抗病毒活性分析；

图4附图为本发明格氏乳杆菌LGV03对斑马鱼异种移植模型中Ect1/E6E7细胞生长的影响；

图5附图为本发明格氏乳杆菌LGV03对斑马鱼异种移植模型中Ect1/E6E7细胞荧光强度的影响；

图6附图为本发明格氏乳杆菌LGV03对斑马鱼异种移植模型中Ect1/E6E7细胞荧光面积的影响；

图7附图为本发明格氏乳杆菌LGV03对斑马鱼ROS水平影响的直观图；

图8附图为本发明格氏乳杆菌LGV03对斑马鱼ROS影响的统计图；

图9附图为本发明格氏乳杆菌LGV03对斑马鱼NO水平影响的直观图；

图10附图为本发明格氏乳杆菌LGV03对斑马鱼NO影响的统计图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1格氏乳杆菌LGV03菌悬液(菌体)的制备

将格氏乳杆菌LGV03活化培养后接种于MRS液体培养基中，37℃培养16h后，以4000×g离心10min收集菌体沉淀，菌体沉淀经PBS两次洗涤后，分别用RPMI 1640培养基和DMEM培养基重悬并调节浓度为1×10⁷CFU/mL得到菌悬液(菌体)。上述菌悬液(菌体)用于实施例2、3、4。

将格氏乳杆菌LGV03活化培养后接种于MRS液体培养基中，37℃培养16h后，以4000×g离心10min收集菌体沉淀，菌体沉淀经PBS两次洗涤后，用PBS重悬并调节浓度为1×10⁶CFU/mL和1×10⁷CFU/mL得到菌悬液(菌体)。上述菌悬液(菌体)用于实施例5、6。

实施例2格氏乳杆菌LGV03对人宫颈癌上皮细胞CaSki和人正常宫颈上皮细胞Ect1/E6E7生长的影响

人宫颈癌上皮细胞CaSki(美国典型培养物保藏中心：CRL-2614)购自中国科学院细胞库。人正常宫颈上皮细胞Ect1/E6E7(美国典型培养物保藏中心：CRL-2614)购自上海百利生物科技有限公司。Ect1/E6E7细胞在补充有10％胎牛血清(FBS，Gibco，Grand Island，NY，USA)的Dulbecco's Modified Eagle培养基(DMEM，Sangon Biotech，Shanghai，China)中培养。CaSki细胞在含有10％胎牛血清的RPMI 1640培养基(Gibco,Grand Island,NY,USA)中培养。两种细胞都在37℃、5％CO₂的培养箱中培养。

通过台盼蓝排斥试验测定细胞活力。将Ect1/E6E7和CaSki细胞分别接种在24孔板中(1×10⁵个细胞/孔)，置于含5％CO₂，温度为37℃细胞培养箱内孵育过夜，然后将培养基更换为含格氏乳杆菌LGV03的培养基，浓度为1×10⁷CFU/mL，不含格氏乳杆菌LGV03的培养基为空白对照组，37℃孵育0、24、48和72h。孵育后，将细胞悬液与0.4％台盼蓝溶液(武汉普诺赛生命科技有限公司)混合，孵育5min，最后在倒置生物显微镜(ICX41,Soptop)下观察细胞，在血细胞计数器上计数活细胞。该分析设置6个复孔。

细胞存活率＝(活细胞/总细胞计数)×100％

采用SPSS 19.0软件统计处理数据，实验数据均用数据表示，用T检验分析：*P<0.05。

结果见图1和图2；由图1可知，1×10⁷CFU/mL格氏乳杆菌LGV03分别处理Ect1/E6E7细胞24h、48h、72h后，细胞存活率分别为95.42±1.29％、95.50±1.43％、93.83±1.02％，与空白对照组(24h:95.67±0.95％、48h：96.33±0.75％、72h：94.33±1.2％)相比均没有显著性差异(P>0.05)。由图2可知，1×10⁷CFU/mL格氏乳杆菌LGV03分别处理CaSki细胞24h、48h、72h后，细胞存活率分别为95.33±1.29％、93.67±1.39％、94.17±1.76％，与空白对照组(24h:95.58±1.17％、48h：94.17±1.26％、72h：94.83±1.12％)相比均没有显著性差异(P>0.05)。上述结果表明格氏乳杆菌LGV03在1×10⁷CFU/mL浓度下未影响Ect1/E6E7和CaSki细胞生长。因此，在本发明中以该测试浓度进行评估格氏乳杆菌LGV03抗病毒活性的实验。

实施例3格氏乳杆菌LGV03对宫颈上皮细胞免疫反应的影响

Ect1/E6E7和CaSki细胞分别接种于6孔板(1×10⁶个细胞/孔)，置于含5％CO₂，温度为37℃细胞培养箱内孵育过夜。然后将培养基更换为含格氏乳杆菌LGV03的培养基，浓度为1×10⁷CFU/mL，不含格氏乳杆菌LGV03的培养基为空白对照组，37℃孵育48h后，收集上清液。设置3个复孔。使用人细胞因子/趋化因子磁珠Luminex试剂盒(45-plex，Lot:242751-002，Invitrogen)在Luminex 200(Luminex Corporat)上检测上清液中的细胞因子/趋化因子。使用Luminex Xponent 3.1软件拟合标准曲线对数据进行分析。

采用SPSS 19.0软件统计处理数据，实验数据均用数据表示，采用T检验分析：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，****P<0.0001。

格氏乳杆菌LGV03对Ect1/E6E7和CaSki细胞分泌免疫细胞因子/趋化因子的影响结果见表1。

表1格氏乳杆菌LGV03对Ect1/E6E7和CaSki细胞分泌免疫细胞因子/趋化因子的影响

由表1可知，与空白对照组(IL-6：9.48±0.43pg/mL、IL-8：108.38±1.92pg/mL、IFN-α：1.46±0.08pg/mL)相比，格氏乳杆菌LGV03均显著促进Ect1/E6E7细胞分泌IL-6(86.46±1.5pg/mL)、IL-8(953.76±82.29pg/mL)和IFN-α(8.73±0.14pg/mL)(P<0.0001)。另外，格氏乳杆菌LGV03处理CaSki细胞48h后，IL-6、IL-8、IFN-α分泌量分别为5316.11±301.17pg/mL、3346.20±171.56pg/mL、9.43±0.77pg/mL，与空白对照组(IL-6：669.99±51.62pg/mL、IL-8：530.04±9.24pg/mL、IFN-α：1.67±0.22pg/mL)相比差异性显著(P<0.0001)。总体而言，Luminex测定的结果显示格氏乳杆菌LGV03均显著促进Ect1/E6E7和CaSki细胞分泌免疫细胞因子或/趋化因子。因此，格氏乳杆菌LGV03具有调节宫颈上皮细胞免疫反应的潜能。

实施例4格氏乳杆菌LGV03在人正常宫颈上皮细胞Ect1/E6E7中的抗病毒活性分析

将Ect1/E6E7细胞以1×10⁵个细胞/孔的密度接种在6孔板中。置于含5％CO₂，温度为37℃细胞培养箱内孵育过夜。然后空白对照组和Poly(I:C)组均将培养基更换不含格氏乳杆菌LGV03的培养基，菌悬液组将培养基更换为含格氏乳杆菌LGV03的培养基，浓度为1×10⁷CFU/mL，37℃孵育48h。用新鲜培养基洗涤3次细胞以清除格氏乳杆菌LGV03，随后空白对照组加入新鲜培养基，Poly(I:C)组和菌悬液组加入10μg/mL Poly(I:C)(Sigma Aldrich，USA国)，刺激12h。细胞被收集用于提取总RNA。通过qRT-PCR定量IFN-α、IFN-β、IL-6、IL-8、MCP-1、IL-1βmRNA表达水平并使用ΔΔCt方法使用GAPDH作为校准基因计算每个样品的cDNA相对数量。各基因引物序列见表2。

表2引物序列

采用SPSS 19.0软件统计处理数据，实验数据均用数据表示。Poly(I:C)组用于空白对照组和格氏乳杆菌LGV03组的比较。采用单因素方差分析(one-wayANOVA)和多重比较(Duncan)，p<0.05被认为是显著性差异的，并用不同的上标字母表示。

结果见图3；由图3可知，与空白对照组(IFN-α:0.28±0.03、IFN-β：0.45±0.09、IL-6：0.26±0.04、IL-8：0.34±0.05、IL-1β：0.28±0.03、MCP-1：0.27±0.04)相比，病毒类似物Poly(I:C)均显著诱导Ect1/E6E7细胞的IFN-α(1.00±0.05)、IFN-β(1.00±0.04)、IL-6(1.00±0.06)、IL-8(1.00±0.05)、IL-1β(1.00±0.07)、MCP-1(1.00±0.06)表达，说明本次Poly(I:C)刺激有效。

与Poly(I:C)组(IFN-α：1.00±0.05、IFN-β：1.00±0.04)相比，格氏乳杆菌LGV03均显著促进Poly(I:C)刺激Ect1/E6E7细胞的IFN-α(1.68±0.24)、IFN-β(1.89±0.30)表达。另外，与Poly(I:C)组(IL-6：1.00±0.06、IL-8：1.00±0.05、IL-1β：1.00±0.07)相比，格氏乳杆菌LGV03均显著抑制Poly(I:C)诱导Ect1/E6E7细胞的IL-6(0.62±0.10)、IL-8(0.77±0.07)、IL-1β(0.36±0.04)表达。因此，上述结果表明，格氏乳杆菌LGV03使先天免疫系统对潜在病原体保持警觉，并在病原体感染时具有促进IFN-α和IFN-β分泌来诱导免疫反应和缓解炎症反应的作用。

实施例5格氏乳杆菌LGV03对斑马鱼异种移植模型中Ect1/E6E7细胞生长的影响

用2μg/mL红色荧光染料DiI标记Ect1/E6E7细胞(红色)，在37℃避光孵育20min。随后，用微量注射器将10-50nL(1×10⁷cells/mL)的悬浮细胞植入48hpf(hours post-fertilization)转基因斑马鱼(fil1:EGFP)的卵黄囊中心。将斑马鱼转移到48孔板(1条斑马鱼/孔)中，每孔加2mL格氏乳杆菌LGV03溶液，浓度分别为1×10⁶CFU/mL，1×10⁷CFU/mL，空白对照组加入PBS，28℃孵育72h，每24h更换新鲜的格氏乳杆菌LGV03溶液，每组5条斑马鱼。用荧光显微镜(Leica,Germany)观察格氏乳杆菌LGV03对Ect1/E6E7细胞的影响。

采用SPSS 19.0软件统计处理数据，实验数据均用数据表示，用单因素方差分析。与空白对照组相比：**P<0.01，***P<0.001，****P<0.0001。

结果见图4、5和6；由图4、图5和图6可知，孵育72h后，与空白对照组相比，格氏乳杆菌LGV03组斑马鱼体内红色荧光强度和面积均减少，表明格氏乳杆菌LGV03组斑马鱼体内Ect1/E6E7细胞减少；同时，与空白对照组(荧光强度：404.20±70.86；荧光面积：4798.80±527.61)相比，1×10⁶CFU/mL和1×10⁷CFU/mL格氏乳杆菌LGV03组的荧光强度(151.00±17.51、96.80±12.75)和荧光面积(1498.80±133.80、1317.20±146.49)均显著减少(**P<0.01)。另外，1×10⁷CFU/mL格氏乳杆菌LGV03在体外对Ect1/E6E7细胞生长没有影响。因此，上述结果表明格氏乳杆菌LGV03在体内是通过提高免疫反应抑制Ect1/E6E7细胞生长。

实施例6格氏乳杆菌LGV03对斑马鱼体内ROS和NO水平的影响

脂多糖(LPS)、2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)和4-氨基-5-甲基氨基-2',7'-二氟荧光素二乙酸酯均购自Sigma-Aldrich公司。

挑选发育至4dpf(dayspostfertilization)的健康野生型AB系斑马鱼置于6孔细胞培养板中，每孔15条鱼。实验设置空白对照组(Control)、模型组(脂多糖LPS)、格氏乳杆菌LGV03组(1×10⁶CFU/mL，1×10⁷CFU/mL)，每组15条鱼。空白对照组加入PBS，模型组加入LPS溶液(5μg/mL)，格氏乳杆菌LGV03组分别加入1×10⁶CFU/mL，1×10⁷CFU/mL，每孔5mL；28℃孵育24h后，弃上述溶液，用PBS将上述斑马鱼洗涤3次；斑马鱼分别用DCF-DA(20μg/mL)或DAF-FMDA(5μM)溶液处理，每孔3mL，28℃避光孵育1h后，用PBS将上述斑马鱼洗涤3次，置于荧光显微镜(Leica,Germany)下观察斑马鱼体内荧光强度并拍照记录。使用Image J软件对斑马鱼体内荧光强度(S)进行定量统计分析。斑马鱼体内ROS水平计算如下：

采用SPSS 19.0软件统计处理数据，实验数据均用数据表示，单因素方差分析(one-wayANOVA)和多重比较(Duncan)，p<0.05被认为是显著性差异的，并用不同的上标字母表示。

结果见图7、8、9和10；由图7、图8、图9和图10可知，斑马鱼体内绿色荧光的强弱反映ROS和NO水平的高低；与空白对照组相比，模型组(LPS)斑马鱼体内绿色荧光强度增强，表明模型组斑马鱼体内ROS和NO水平升高；同时，与空白对照组(ROS：100.00±5.90％；NO：100.00±6.39％)相比，模型组(LPS)斑马鱼体内ROS水平(142.59±8.60％)和NO(139.01±5.19％)显著升高，表明LPS可诱导炎症反应，说明本次LPS刺激有效。

1×10⁶CFU/mL和1×10⁷CFU/mL格氏乳杆菌LGV03组的斑马鱼体内绿色荧光强度较弱，与空白对照组相似。同时，1×10⁶CFU/mL和1×10⁷CFU/mL格氏乳杆菌LGV03组的斑马鱼体内ROS水平分别为115.22±7.26％和110.78±6.38％，以及NO水平分别为114.68±6.28％和116.68±4.38％，与空白对照组(ROS：100.00±5.90％；NO：100.00±6.39％)相比均无显著性差异，表明格氏乳杆菌LGV03在斑马鱼体内未诱导产生炎症反应。

上述结果表明格氏乳杆菌LGV03既能显著促进Poly(I:C)刺激Ect1/E6E7细胞的IFN-α、IFN-β表达，又能显著抑制Poly(I:C)诱导Ect1/E6E7细胞的IL-6、IL-8、IL-1β表达，同时在斑马鱼异种移植模型中能够显著抑制Ect1/E6E7细胞生长，以及未能显著诱导斑马鱼体内ROS和NO的产生，即未诱导炎症反应，表现良好的使先天免疫系统对潜在病原体保持警觉，并在病原体感染时具有促进FN-α和IFN-β分泌来诱导免疫反应和缓解炎症反应的潜能。

对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

序列表

<110> 南方医科大学第七附属医院（佛山市南海区第三人民医院）

<120> 格氏乳杆菌LGV03在制备预防或治疗HPV感染药物中的应用

<160> 14

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 19

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 1

atttcctctt ggtcttctg 19

<210> 2

<211> 18

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

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ggtccttagc cactcctt 18

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

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ggcaggcagt atcactcatt 20

<210> 4

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<212> DNA

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cccaaggcca caggtattt 19

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<211> 22

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

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ttgccttgac cctgaagccc cc 22

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ggcacatcag gtacgatcca ggc 23

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<212> DNA

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aaactgaagc tcgcactcgc 20

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attcttgggt tgttgagtga gt 22

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gagcaatgct tggacagcag 20

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gaggttgtgg atgtgcagga 20

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agttacactg cctttgcc 18

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tctgctcgga ccaccatc 18

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<212> DNA

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aaggtcggag tcaacggatt t 21

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<211> 22

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 14

accagagtta aaagcagccc tg 22

Claims

1.格氏乳杆菌LGV03在制备预防或治疗HPV感染药物中的应用，其特征在于，所述格氏乳杆菌LGV03的保藏编号为CGMCC No.22010。

2.根据权利要求1所述的格氏乳杆菌LGV03在制备预防或治疗HPV感染药物中的应用，其特征在于，所述格氏乳杆菌LGV03为菌悬液。

3.根据权利要求1所述的格氏乳杆菌LGV03在制备预防或治疗HPV感染药物中的应用，其特征在于，所述格氏乳杆菌LGV03在制备显著促进病毒类似物Poly(I:C)刺激Ect1/E6E7细胞的IFN-α、IFN-β表达制剂中的应用。

4.根据权利要求1所述的格氏乳杆菌LGV03在制备预防或治疗HPV感染药物中的应用，其特征在于，所述格氏乳杆菌LGV03在制备显著抑制Poly(I:C)诱导Ect1/E6E7细胞的IL-6、IL-8、IL-1β表达制剂中的应用。

5.根据权利要求1所述的格氏乳杆菌LGV03在制备预防或治疗HPV感染药物中的应用，其特征在于，所述格氏乳杆菌LGV03在制备显著抑制斑马鱼异种移植模型中Ect1/E6E7细胞生长制剂中的应用。

6.根据权利要求1所述的格氏乳杆菌LGV03在制备预防或治疗HPV感染药物中的应用，其特征在于，所述格氏乳杆菌LGV03在制备未显著诱导斑马鱼体内ROS和NO的产生制剂中的应用。