CN116098924A - 鼠李糖乳杆菌nx-2在制备缓解病毒性肺炎药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了鼠李糖乳杆菌NX‑2在制备缓解病毒性肺炎药物中的应用，属于微生物技术领域。本发明公开的鼠李糖乳杆菌NX‑2是从健康婴幼儿粪便中分离筛选得到的，鼠李糖乳杆菌NX‑2能够抑制Poly(I:C)诱导中性粒细胞往鱼鳔处聚集，在缓解病毒性肺炎方面有巨大的潜在应用前景。

Description

鼠李糖乳杆菌NX-2在制备缓解病毒性肺炎药物中的应用
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，更具体的说是涉及鼠李糖乳杆菌NX-2在制备缓解病毒性肺炎药物中的应用。
背景技术
病毒性肺炎(viral pneumonia)是指由病毒所引起的肺炎，由上呼吸道病毒感染、向下蔓延所致的肺部炎症。病毒性肺炎的症状包括发烧、无痰之咳嗽和系统性征候(如肌痛、头痛)，不同的病毒导致不同的症状。该病一年四季均可发生，但大多见于冬春季节，可暴发或散发流行。病毒性肺炎的发生与病毒的毒力、感染途径以及宿主的年龄、免疫功能状态等有关。
病毒性肺炎以对症支持治疗为主。药物可使用利巴韦林、奥司他韦等进行抗病毒治疗。如合并细菌感染，应及时选用敏感的抗生素。目前还没有关于利用益生菌对病毒性肺炎进行治疗的相关报道。
因此，提供鼠李糖乳杆菌NX-2在制备缓解病毒性肺炎药物中的应用是本领域技术人员亟需解决的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了鼠李糖乳杆菌NX-2在制备缓解病毒性肺炎药物中的应用。
斑马鱼的鳔从器官进化、组织结构以及生物学等多个层面都类似于哺乳动物的肺泡。通过注射给予聚肌苷酸-聚胞苷酸--poly(I:C)建立斑马鱼病毒性肺炎模型。poly(I:C)的双链RNA结构非常类似于病毒或病毒复制过程中形成的双链RNA，所以poly(i:c)类似某些病毒，具有很强的干扰素诱生作用。通过使用转基因中性粒细胞绿色荧光斑马鱼，在荧光显微镜下可以直接观察斑马鱼中性粒细胞，使用实时荧光定量PCR仪可获得基因表达水平。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
鼠李糖乳杆菌NX-2在制备缓解病毒性肺炎药物中的应用，所述鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)NX-2的保藏编号为CGMCC No.20110(参见专利号202010699218.6)。
进一步，所述的鼠李糖乳杆菌NX-2在制备抑制Poly(I:C)诱导中性粒细胞往鱼鳔处聚集药物中的应用。
进一步，所述鼠李糖乳杆菌NX-2为菌悬液。
经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了鼠李糖乳杆菌NX-2在制备缓解病毒性肺炎药物中的应用，鼠李糖乳杆菌NX-2是从健康婴幼儿粪便中分离筛选得到的，鼠李糖乳杆菌NX-2能够抑制Poly(I:C)诱导中性粒细胞往鱼鳔处聚集，此为利用鼠李糖乳杆菌NX-2开发缓解病毒性肺炎药物提供理论参考和指导依据。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1附图为本发明鼠李糖乳杆菌NX-2抑制Poly(I:C)诱导中性粒细胞往鱼鳔处聚集直观图；
其中，A：正常组；B：模型组；C：阳性对照组；D：1×104CFU/mL鼠李糖乳杆菌7469；E：1×105CFU/mL鼠李糖乳杆菌7469；F：1×106CFU/mL鼠李糖乳杆菌7469；G：1×104CFU/mL鼠李糖乳杆菌NX-2；H：1×105CFU/mL鼠李糖乳杆菌NX-2；I：1×106CFU/mL鼠李糖乳杆菌NX-2；
图2附图为本发明鼠李糖乳杆菌NX-2抑制Poly(I:C)诱导中性粒细胞往鱼鳔处聚集统计图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
斑马鱼为Tg(mpx：EGFP)中心粒细胞绿色荧光斑马鱼和AB系斑马鱼。
聚肌苷酸-聚胞苷酸Poly(I:C)(MedChemExpress)；吲哚美辛(MedChemExpress)；鼠李糖乳杆菌7469(ATCC 7469)购自北京百欧博伟生物技术有限公司。
实施例1鼠李糖乳杆菌NX-2菌悬液(菌体)的制备
将鼠李糖乳杆菌NX-2活化培养后接种于MRS液体培养基中，37℃培养24h后，4℃，6000r/min离心10min，得到菌体沉淀；菌体沉淀经PBS两次洗涤后，将菌体用PBS重新悬浮，调整细胞浓度为1×104CFU/mL、1×105CFU/mL、1×106CFU/mL得到菌悬液(菌体)。
实施例2鼠李糖乳杆菌7469菌悬液(菌体)的制备
将鼠李糖乳杆菌7469活化培养后接种于MRS液体培养基中，37℃培养24h后，4℃，6000r/min离心10min，得到菌体沉淀；菌体沉淀经PBS两次洗涤后，将菌体用PBS重新悬浮，调整细胞浓度为1×104CFU/mL、1×105CFU/mL、1×106CFU/mL得到菌悬液(菌体)。
实施例3鼠李糖乳杆菌NX-2对Poly(I:C)诱导中性粒细胞往鱼鳔处聚集的影响
挑选健康Tg(mpx：EGFP)斑马鱼(3dpf)置于6孔细胞培养板(涉及9组，采用两块6孔细胞培养板)中，每组1个孔，每孔15条(一个孔15条鱼，统计每条鱼的鱼鳔处中性粒细胞数)，正常组和模型组均加入5mL PBS；阳性对照组加入5mL 60μM吲哚美辛溶液；鼠李糖乳杆菌NX-2干预组分别加入1×104CFU/mL、1×105CFU/mL、1×106CFU/mL鼠李糖乳杆菌NX-2，每孔5mL；鼠李糖乳杆菌7469干预组分别加入1×104CFU/mL、1×105CFU/mL、1×106CFU/mL鼠李糖乳杆菌7469，每孔5mL；置于生化培养箱28℃孵育，24h后更换新溶液；孵育48h后，正常组显微注射2nL PBS，模型组、阳性对照组、鼠李糖乳杆菌NX-2干预组(1×104CFU/mL、1×105CFU/mL、1×106CFU/mL)、鼠李糖乳杆菌7469干预组(1×104CFU/mL、1×105CFU/mL、1×106CFU/mL)均显微注射2nL Poly(I:C)溶液(100mg/mL)；每组鱼分别转移至相应溶液孔中，28℃孵育4h后，置于荧光显微镜下观察斑马鱼鱼鳔处中性粒细胞聚集情况并拍照记录。
采用SPSS 19.0软件统计处理数据，实验数据均用x±SEM数据表示，用T-检验分析，与正常组相比：###p<0.005，与模型组相比：&&&p<0.001；用单因素方差分析，与模型组相比：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005。
鼠李糖乳杆菌NX-2抑制Poly(I:C)诱导中性粒细胞往鱼鳔处聚集的实验结果如图1和图2所示。
由图1和图2可知，正常组的斑马鱼鱼鳔处有少量中性粒细胞聚集(13.07±1.14个)，而模型组的斑马鱼鱼鳔处有大量中性粒细胞聚集。同时模型组斑马鱼鱼鳔处的中性粒细胞数为29.73±1.13个，与正常组(13.07±1.14个)相比较差异性显著(P<0.005)，说明本次Poly(I:C)诱导斑马鱼病毒性炎症模型建立成功。
由图1和图2可知，阳性对照组(吲哚美辛)的斑马鱼鱼鳔处仅有少量中性粒细胞聚集。同时阳性对照组(吲哚美辛)斑马鱼鱼鳔处的中性粒细胞数为15.60±1.02个，与模型组(29.73±1.13个)相比较差异性显著(P<0.005)。因此，吲哚美辛具缓解病毒性肺炎的作用，与临床结果一致。鼠李糖乳杆菌7469浓度为1×106CFU/mL时，斑马鱼鱼鳔处的中性粒细胞数为24.53±0.91个，与模型组(29.73±1.13个)相比较差异性显著(P<0.05)。另外，鼠李糖乳杆菌NX-2组的斑马鱼鱼鳔处也仅有少量中性粒细胞聚集，与阳性对照组(吲哚美辛)相似；同时鼠李糖乳杆菌NX-2浓度为1×104CFU/mL、1×105CFU/mL和1×106CFU/mL时，斑马鱼鱼鳔处的中性粒细胞数分别为22.93±0.92个、19.27±1.12个、17.13±1.02个，与模型组(29.73±1.13个)相比较差异性显著(P<0.01)。因此，上述结果表明，在相同的浓度时，鼠李糖乳杆菌NX-2对Poly(I:C)诱导中性粒细胞往鱼鳔处聚集的抑制作用强于鼠李糖乳杆菌7469，具有缓解病毒性肺炎的潜能。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (4)

1.鼠李糖乳杆菌NX-2在制备缓解病毒性肺炎药物中的应用，其特征在于，所述鼠李糖乳杆菌NX-2的保藏编号为CGMCC No.20110。
2.根据权利要求1所述的鼠李糖乳杆菌NX-2在制备缓解病毒性肺炎药物中的应用，其特征在于，所述鼠李糖乳杆菌NX-2为菌悬液。
3.权利要求1中所述的鼠李糖乳杆菌NX-2在制备抑制Poly(I:C)诱导中性粒细胞往鱼鳔处聚集药物中的应用。
4.根据权利要求3所述的鼠李糖乳杆菌NX-2在制备抑制Poly(I:C)诱导中性粒细胞往鱼鳔处聚集药物中的应用，其特征在于，所述鼠李糖乳杆菌NX-2为菌悬液。
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CN116747246A (zh) * 2023-06-16 2023-09-15 广东南芯医疗科技有限公司 鼠李糖乳杆菌nx-2在制备抗氧化和抗衰老产品中的应用

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