CN116492377A - 嗜酸乳杆菌la-03在制备预防或治疗肠道炎症药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了嗜酸乳杆菌LA‑03在制备预防或治疗肠道炎症药物中的应用，属于微生物技术领域。本发明公开的嗜酸乳杆菌LA‑03在制备预防或治疗肠道炎症药物中的应用，嗜酸乳杆菌LA‑03能够抑制DSS诱导中性粒细胞往斑马鱼肠道处聚集，此为利用嗜酸乳杆菌LA‑03开发预防或治疗肠道炎症药物提供理论参考和指导依据。

Description

嗜酸乳杆菌LA-03在制备预防或治疗肠道炎症药物中的应用

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，更具体的说是涉及嗜酸乳杆菌LA-03在制备预防或治疗肠道炎症药物中的应用。

背景技术

肠炎是一种比较常见的消化系统疾病，它的发病与暴饮暴食，生活习惯或者是免疫力低下等因素有关。通常患者可表现为腹痛、腹泻以及恶心呕吐等症状，需要及时治疗，否则会导致便血、脱肛、穿孔等严重情况的发生。

肠炎传统的治疗方法可分为现代医学治疗和中药治疗方法。益生菌作为肠道内源性和免疫性防御屏障，能够拮抗致病菌，具有安全、可控、有效、副作用小的特点，是治疗肠炎的理想方法。当前国际益生菌专利申请集中于美、日、俄传统研发强国，而且国外菌株未必适合我国居民胃肠道生理状况。另外，益生菌的功能缺乏有力的科学研究证据，严重影响了益生菌及其制品的推广。基于此，针对菌种资源的功能深入挖掘，筛选出拥有自主知识产权、具有特定功能性质、适合中国人群生理特性的新型益生菌菌株，对提高我国益生菌生产企业的核心竞争力，促进我国益生菌制品发展尤为重要。

因此，提供嗜酸乳杆菌LA-03在制备预防或治疗肠道炎症药物中的应用是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了嗜酸乳杆菌LA-03在制备预防或治疗肠道炎症药物中的应用。

炎症是免疫系统对组织损伤和感染的一种反应，主要特点就是白细胞(粒细胞、巨噬细胞)会聚集在感染组织周围。斑马鱼的免疫系统非常类似于哺乳动物，创伤发生时，中性粒细胞、巨噬细胞对创伤性炎症几乎同时作出应答，中性粒细胞迁移速度快，先募集到损伤部位，随后巨噬细胞才到达。数小时后，炎症开始消退，巨噬细胞和中性粒细胞离开损伤部位。用葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导斑马鱼肠道炎症，促使斑马鱼中性粒细胞发生免疫应答。

采用转基因中性粒细胞荧光鱼(呈绿色)，可在荧光显微镜在观察到DSS诱导斑马鱼肠道中性粒细胞数量比正常斑马鱼明显增加。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

嗜酸乳杆菌LA-03在制备预防或治疗肠道炎症药物中的应用，所述嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)LA-03的保藏编号为CGMCCNo.22239(参见专利号202111249043.X)。

进一步，所述的嗜酸乳杆菌LA-03在制备抑制DSS诱导中性粒细胞往斑马鱼肠道处聚集药物中的应用。

进一步，所述嗜酸乳杆菌LA-03为菌悬液。

经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了嗜酸乳杆菌LA-03在制备预防或治疗肠道炎症药物中的应用，嗜酸乳杆菌LA-03是从广东省广州市农家自然发酵泡菜液中分离筛选得到的，嗜酸乳杆菌LA-03能够抑制DSS诱导中性粒细胞往斑马鱼肠道处聚集，此为利用嗜酸乳杆菌LA-03开发预防或治疗肠道炎症药物提供理论参考和指导依据。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。

图1为本发明嗜酸乳杆菌LA-03抑制DSS诱导中性粒细胞往斑马鱼肠道聚集直观图；

其中，A：正常组；B：模型组；C：阳性对照组；D：嗜酸乳杆菌4356；E：嗜酸乳杆菌LA-03；

图2为本发明嗜酸乳杆菌LA-03抑制DSS诱导中性粒细胞往斑马鱼肠道聚集统计图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

斑马鱼为Tg(mpx：EGFP)中心粒细胞绿色荧光斑马鱼和AB系斑马鱼。

葡聚糖硫酸钠(DSS)(MedChemExpress)；美莎拉嗪(MedChemExpress)；嗜酸乳杆菌4356(ATCC4356)购自北京百欧博伟生物技术有限公司。

实施例1嗜酸乳杆菌LA-03菌悬液(菌体)的制备

将嗜酸乳杆菌LA-03活化培养后接种于MRS液体培养基中，37℃培养24h后，4℃，6000r/min离心10min，得到菌体沉淀；菌体沉淀经PBS两次洗涤后，将菌体用PBS重新悬浮，调整细胞浓度为1×10⁶CFU/mL得到菌悬液(菌体)。

实施例2嗜酸乳杆菌4356菌悬液(菌体)的制备

将嗜酸乳杆菌4356活化培养后接种于MRS液体培养基中，37℃培养24h后，4℃，6000r/min离心10min，得到菌体沉淀；菌体沉淀经PBS两次洗涤后，将菌体用PBS重新悬浮，调整细胞浓度为1×10⁶CFU/mL得到菌悬液(菌体)。

实施例3嗜酸乳杆菌LA-03对DSS诱导中性粒细胞往斑马鱼肠道处聚集的影响

挑选健康Tg(mpx：EGFP)斑马鱼(3dpf)置于6孔细胞培养板中，每组1个孔，每孔15条(一个孔15条鱼，统计每条鱼的肠道处中性粒细胞数)，正常组加入5mLPBS，模型组、阳性对照组(美沙拉嗪)、嗜酸乳杆菌4356干预组(1×10⁶CFU/mL)、嗜酸乳杆菌LA-03干预组(1×10⁶CFU/mL)均加入5mL0.5％DSS溶液(w/w)，置于生化培养箱28℃孵育72h后，用PBS洗涤每组斑马鱼3遍，然后正常组和模型组加入5mLPBS；阳性对照组加入5mL50μg/mL美沙拉嗪溶液；嗜酸乳杆菌4356干预组加入1×10⁶CFU/mL嗜酸乳杆菌4356，每孔5mL；嗜酸乳杆菌LA-03干预组加入1×10⁶CFU/mL嗜酸乳杆菌LA-03，每孔5mL，置于生化培养箱28℃继续孵育48h后，置于荧光显微镜下观察斑马鱼肠道处中性粒细胞聚集情况并拍照记录。

采用SPSS19.0软件统计处理数据，实验数据均用x±SEM数据表示，用T-检验分析，与正常组相比：^####p<0.001，与模型组相比：***P<0.001。

嗜酸乳杆菌LA-03抑制DSS诱导中性粒细胞往斑马鱼肠道处聚集的实验结果如图1和图2所示。

由图1和图2可知，正常组的斑马鱼肠道处有少量中性粒细胞聚集(15.86±1.50个)，而模型组的斑马鱼肠道处有大量中性粒细胞聚集。同时模型组斑马鱼肠道处的中性粒细胞数为35.20±2.73个，与正常组(15.86±1.50个)相比较差异性显著(P<0.001)，说明本次DSS诱导斑马鱼肠道炎症模型建立成功。

由图1和图2可知，阳性对照组(美莎拉嗪)的斑马鱼体斑鱼肠道处仅有少量中性粒细胞聚集。同时阳性对照组(美莎拉嗪)斑马鱼肠道处的中性粒细胞数为20.81±2.02个，与模型组(35.20±2.73个)相比较差异性显著(P<0.005)。因此，美莎拉嗪具缓解肠道炎症的作用，与临床结果一致，表明本次缓解肠道炎症功效评价的试验有效。嗜酸乳杆菌4356干预组(1×10⁶CFU/mL)的斑马鱼肠道处有大量中性粒细胞聚集，与模型组相似；同时嗜酸乳杆菌4356干预组(1×10⁶CFU/mL)斑马鱼肠道处的中性粒细胞数为31.93±2.44个，与模型组(35.20±2.73个)相比无显著性差异(P>0.05)。另外，嗜酸乳杆菌LA-03组的斑马鱼肠道处也仅有少量中性粒细胞聚集，与阳性对照组(美沙拉嗪)相似；同时嗜酸乳杆菌LA-03干预组(1×10⁶CFU/mL)斑马鱼肠道处的中性粒细胞数为22.13±1.87个，与模型组(35.20±2.73个)相比较差异性显著(P<0.005)。因此，上述结果表明，在相同的浓度时，嗜酸乳杆菌LA-03对DSS诱导中性粒细胞往斑马鱼肠道处聚集的抑制作用强于嗜酸乳杆菌4356，表现出良好的缓解肠道炎症的潜能。

对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (4)

1.嗜酸乳杆菌LA-03在制备预防或治疗肠道炎症药物中的应用，其特征在于，所述嗜酸乳杆菌LA-03的保藏编号为CGMCCNo.22239。

2.根据权利要求1所述的嗜酸乳杆菌LA-03在制备预防或治疗肠道炎症药物中的应用，其特征在于，所述嗜酸乳杆菌LA-03为菌悬液。

3.权利要求1中所述的嗜酸乳杆菌LA-03在制备抑制DSS诱导中性粒细胞往斑马鱼肠道处聚集药物中的应用。

4.根据权利要求3所述的嗜酸乳杆菌LA-03在制备抑制DSS诱导中性粒细胞往斑马鱼肠道处聚集药物中的应用，其特征在于，所述嗜酸乳杆菌LA-03为菌悬液。