CN111296842A - 一种具有抗敏作用的益生菌组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种具有抗敏作用的益生菌组合物，其包括：干酪乳杆菌，卷曲乳杆菌和蛋氨酸锌。作为优选，所述组合物可以做成压片糖果，袋装粉剂，胶囊。作为优选，所述干酪乳杆菌为干酪乳杆菌CGMCC 1.8727。作为优选，所述卷曲乳杆菌为卷曲乳杆菌CGMCC No.6364。

Description

一种具有抗敏作用的益生菌组合物

技术领域

本发明涉及一种抗敏作用的益生菌组合物，属于微生物技术领域。

背景技术

正常的情况下，当外来物质进入人体后大都面临两种命运，如果被机体识别为有用或无害物质，则这些物质将与人体和谐相处，最终将被吸收、利用或被自然排出。如这些物质被识别为有害物质时，机体的免疫系统则立即做出反应，将其驱除或消灭，这就是免疫应答发挥的保护作用。免疫应答是人的防卫体系重要的功能之一，但是如果这种应答超出了正常范围，即免疫系统对无害物质进行攻击时，这种情况称为变态反应。变态反应是一种疾病，因为无端的攻击也会损害正常的身体组织，甚至免疫系统居然有时对机体本身的组织进行攻击和破坏，对人体的健康非常不利。

有关过敏疾病的增加，与环境的变化有密切的关系。人体肠道中的益生菌会刺激免疫系统作用，但如果在日常生活中食品所含抗生素或类固醇的含量太高的话，都会导致肠道内的益生菌降低，因而无法有效地刺激免疫细胞中辅助型Th1型细胞的生成，而辅助型Th1型细胞的生成与辅助型Th2细胞与过敏性疾病的发生有着密切的联系。因此，如果能利用保健食品刺激免疫系统，激发可以调节过敏免疫反应的Th1型免疫反应来平衡过敏所引起的Th2型免疫反应，将可达到改善过敏体质的效果。在人类应用微生物的历史上，乳酸菌的应用起源相当早。从早期乳制品的加工上发现，食用以乳酸菌发酵的食品有助于改善人类肠胃道疾病的发生率以及延长平均寿命。一般食用含乳酸菌的产品公具有调整肠道的健康效果，虽然有数以万计的乳酸菌菌株存在于自然界，但仅有少数乳酸菌菌株具有抗过敏的特质并能够通过人体胃酸和胆盐的影响，乳酸菌是一类发酵碳水化合物产乳酸的细菌总称，常为革兰阳性，厌氧或兼性厌氧，不产生芽孢。现有技术有人揭露了特定的乳酸菌进入机体后，有助于恢复机体的TH1/TH2细胞平衡，从而实现过敏性疾病的防治作用。现有技术已经发现有多种乳酸菌具有潜在的抗敏效果，但是普通乳杆菌无法对荨麻疹等过敏引起的皮肤瘙痒问题起到作用。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有抗敏作用的益生菌组合物，可显著缓解如荨麻疹等过敏引起的皮肤瘙痒效果显著。

本发明用到的干酪乳杆菌CGMCC 1.8727，购自中国普通微生物菌种保藏中心。

中国专利2013100043553一株卷曲乳杆菌，该菌株为卷曲乳杆菌(Lactobacilluscrispatus)的菌株，其特征在于，该菌株的保藏号为CGMCC No.6364。在该专利中，卷曲乳杆菌CGMCC No.6364可实现对多种致病菌的拮抗作用，还具有更高的对阴道上皮细胞的粘附能力以及更高的产乳酸能力，因而本发明的菌株能够较好地满足实际的临床应用需求。本发明用到的卷曲乳杆菌CGMCC No.6364由赠送获得。

锌是动物机体所必需的微量元素之一，是多种金属酶和胰岛素的组成成分。它因在体内具有广泛的生理生化功能而被称为“生命元素”。蛋氨酸锌又名蛋氨酸螯合锌、蛋氨酸有机锌，它是由蛋氨酸与无机硫酸锌、氧化锌通过化学合成反应以1：1或2：1的摩尔比在一定的温度、压力、反应时间等作用下生产而成的一种有机锌类物质。

本发明团队在研究和实践过程中，发现联合口服干酪乳杆菌CGMCC 1.8727，卷曲乳杆菌CGMCC No.6364和蛋氨酸锌可以有效抗敏，尤其是可显著缓解如荨麻疹等过敏引起的皮肤瘙痒效果显著。尤其是，蛋氨酸锌具有显著增强菌剂改善皮肤瘙痒的作用，并且有意思的是，如果换成其他锌制剂，如葡萄糖酸锌，并不会有上述促进作用。推测可能的原因在于蛋氨酸锌会对上述菌株的一种或两种起到某些促进或者开启生理活性的作用，其效果并非由补锌带来的。

本发明所需要解决的技术问题可以通过以下技术方案来实现。

一种具有抗敏作用的益生菌组合物，其包括：

干酪乳杆菌，卷曲乳杆菌和蛋氨酸锌。

作为优选，所述组合物可以做成压片糖果，袋装粉剂，胶囊。

作为优选，所述干酪乳杆菌为干酪乳杆菌CGMCC 1.8727。

作为优选，所述卷曲乳杆菌为卷曲乳杆菌CGMCC No.6364。

本发明选择OVA造模过敏小鼠，具体为分为OVA阳性对照组和干预组，于实验开始后第7d、第14d、第21d对各组小鼠进行腹腔OVA混悬液注射，所述OVA混悬液成分为：200ug/ml OVA+20mg/ml AL(OH)₃，每只小鼠每次注射0.1ml OVA混悬液，空白对照组小鼠不进行腹腔注射。灌胃前采用尾部动脉法收集小鼠血液，处死各组小鼠后立即采集小鼠血，使用ELISA试剂盒测定试验前后血清总IgE浓度。

本发明选用右旋糖酐致造模小鼠全身皮肤瘙痒模型，具体位置：小鼠注射尾iv40mg/kg右旋糖酐40注射液，即刻观察并记录各组小鼠30min内出现的瘙痒次数及首次开始瘙痒时间，即瘙痒阈值。

本发明的优点：

(1)本发明的菌株均为可食用菌株，安全性高，乳杆菌本身就具有很多生理功效，是有名的益生菌。

(2)本发明通过大量菌株的研究，发现特定的菌株和蛋氨酸锌合用具有非常显著的抗敏效果。

(3)蛋氨酸锌本身也具有多种生理功能，适当补充还具有补锌作用。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例，所述实施例仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。

本发明的具体实施例如以下说明。

实施例1

1、活化菌种：

干酪乳杆菌CGMCC 1.8727：取一环干酪乳杆菌接种到MRS固体培养基中划线，37℃厌氧培养24h。挑取平板中单菌落接种至MRS液体培养基中活化，厌氧培养成10⁸cfu/ml干酪乳杆菌CGMCC 1.8727种子液。

卷曲乳杆菌CGMCC No.636：活化菌种方法同上。最后配置成10⁸cfu/ml卷曲乳杆菌卷曲种子液。

2、配置液体

蛋氨酸锌溶液(溶解于pH为6.0的乳酸溶液)，浓度为0.2mg/ml。

葡萄糖酸锌溶液，浓度为0.2mg/ml。

3、将90只KM雌性小鼠，体质量22-25g，随机分为9组(10只/组)正常喂养，各组之间小鼠体重无统计学差异。9组分别为空白对照组、OVA阳性对照组、干酪干预组、卷曲干预组、干酪+蛋氨酸锌干预组、卷曲+蛋氨酸锌干预组、干酪+卷曲干预组、干酪+卷曲+蛋氨酸锌干预组、干酪+卷曲+葡萄糖酸锌干预组，具体如下：

空白对照组：每只小鼠每次给予0.22ml生理盐水灌胃；

OVA阳性对照组：同空白组；

干酪干预组：每只小鼠每次分别给予0.2ml 10⁸cfu/ml的干酪菌液+0.2ml生理盐水灌胃；

卷曲干预组：每只小鼠每次分别给予0.2ml 10⁸cfu/ml的卷曲菌液+0.2ml生理盐水灌胃；

干酪+蛋氨酸锌干预组：每只小鼠每次分别给予0.2ml 10⁸cfu/ml的干酪菌液+0.2ml蛋氨酸锌溶液灌胃；

卷曲+蛋氨酸锌干预组：每只小鼠每次分别给予0.2ml 10⁸cfu/ml的卷曲菌液+0.2ml蛋氨酸锌溶液灌胃；

干酪+卷曲干预组：每只小鼠每次分别给予0.1ml 10⁸cfu/ml的干酪+0.1ml10⁸cfu/ml的卷曲菌液+0.2ml生理盐水灌胃；

干酪+卷曲+蛋氨酸锌干预组：每只小鼠每次分别给予0.1ml干酪菌液+0.1ml10⁸cfu/ml的卷曲菌液+0.2ml蛋氨酸锌溶液灌胃；

干酪+卷曲+葡萄糖酸锌干预组：每只小鼠每次分别给予0.1ml干酪菌液+0.1ml10⁸cfu/ml的卷曲菌液+0.2ml葡萄糖酸锌溶液灌胃。

每天灌胃1次，分别于实验开始后第7d、第14d、第21d对OVA阳性对照组和各菌株干预组小鼠进行腹腔OVA混悬液注射(200ug/ml OVA+20mg/ml AL(OH)₃)，每只小鼠每次注射0.1mL配制好的OVA混悬液，空白对照组小鼠不进行腹腔注射。最后1次腹腔OVA注射7d后处死。

灌胃前采用尾部动脉法收集小鼠血液。处死各组小鼠后立即采集小鼠血，使用ELISA试剂盒测定试验前后血清总IgE浓度。

统计学处理：使用SPSS16.0,进行统计学分析，计量资料的结果表示为均值±标准差,采用组间t检验。

表1不同组别小鼠治疗后的lgE的检测

	试验前IgE(ng/mL)	试验后IgE(ng/mL)
			空白组	2.04±0.45	2.85±0.34
阳性对照组	1.83±0.18	60.05±5.63
			干酪干预组	1.25±0.22	54.03±7.13<sup>1</sup>
卷曲干预组	1.95±0.36	57.25±5.34<sup>1</sup>
			干酪+蛋氨酸锌干预组	1.24±0.15	52.03±6.11<sup>1</sup>
卷曲+蛋氨酸锌干预组	0.99±0.12	52.77±4.23<sup>1</sup>
			干酪+卷曲干预组	1.21±0.17	42.89±5.31<sup>1,2</sup>
干酪+卷曲+蛋氨酸锌干预组	1.99±0.32	12.36±2.43<sup>1，2</sup>
			干酪+卷曲+葡萄糖酸锌干预组	2.13±0.37	41.75±6.23<sup>1，2</sup>

注：t检验,l：P<0.05(与空白组比较)；2：P<0.05(和阳性对照组比较)；

可见试验前各组小鼠的IgE水平均较低或未检出，实验结束时，除空白组外，其他各干预组的IgE水平明显高于空白组，差异有统计学差异(P<0.05)、干酪+卷曲干预组和干酪+卷曲+蛋氨酸锌干预组IgE水平较阳性对照组和其他干预组低，差异有统计学差异(P<0.05)，而且干酪+卷曲+蛋氨酸锌干预组IgE水平明显低于干酪+卷曲干预组。说明干酪乳杆菌CGMCC 1.8727和卷曲乳杆菌CGMCC No.6364本身具有微弱的抗敏效果，合用后具有较好的抗敏效果，加入蛋氨酸锌后，抗敏效果更好，会显著下调IgE，有明显的抗过敏的作用。但是换成葡萄糖酸锌则没有这个促进作用。

实施例2

活化菌种和配置液体操作同实施例1。

将90只KM雌性小鼠，体质量20-25g，随机分为9组(每组10只)正常喂养，各组之间小鼠体重无统计学差异。9组分别为空白对照组、阳性对照组、干酪干预组、卷曲干预组、干酪+蛋氨酸锌干预组、卷曲+蛋氨酸锌干预组、干酪+卷曲干预组、干酪+卷曲+蛋氨酸锌干预组、干酪+卷曲+葡萄糖酸锌干预组。

具体处理如下：

空白对照组：每只小鼠每次给予0.22ml生理盐水灌胃；

阳性对照组：给予地塞米松(2.5mg/kg/日)灌胃；

干酪干预组、卷曲干预组、干酪+卷曲干预组、干酪+蛋氨酸锌干预组、卷曲+蛋氨酸锌干预组、干酪+卷曲+蛋氨酸锌干预组、干酪+卷曲+葡萄糖酸锌干预组：给与灌胃方式同实施例1。

每天灌胃1次连续10天，第10天灌胃后1h，各组动物尾iv 40mg/kg右旋糖酐40注射液。即刻观察并记录各组小鼠30min内出现的瘙痒次数及首次开始瘙痒时间，即瘙痒阈值。

统计学处理同实施例1。

表2右旋糖酐致不同组别小鼠全身皮肤瘙痒的影响。

注：t检验,l：P<0.05(与空白组比较)；2：P<0.05(和阳性对照组比较)

观察瘙痒次数和瘙痒阈值发现，干酪干预组、卷曲干预组、干酪+蛋氨酸锌干预组、卷曲+蛋氨酸锌干预组、干酪+卷曲+葡萄糖酸锌干预组对于空白组无明显统计学差异，而相对于阳性对照组有明显统计学差异(P<0.05)，而干酪+卷曲干预组和干酪+卷曲+蛋氨酸锌干预组相对于其他干预组和空白组均有统计学差异(P<0.05)，而且干酪+卷曲+蛋氨酸锌干预组瘙痒次数明显低于干酪+卷曲干预组，其瘙痒阈值明显高于干酪+卷曲干预组。说明联合干酪+卷曲使用有拮抗右旋糖酐致不同组别小鼠全身皮肤瘙痒的作用，而单独使用效果欠佳，两者具有显著的协同作用。加入蛋氨酸锌后，拮抗右旋糖酐致不同组别小鼠全身皮肤瘙痒效果更好。但是换成葡萄糖酸锌则没有这个促进作用。

综上所述，本发明团队在研究和实践过程中，发联合口服干酪乳杆菌CGMCC1.8727，卷曲乳杆菌CGMCC No.6364和蛋氨酸锌可以有效抗敏，尤其是可显著缓解如荨麻疹等过敏引起的皮肤瘙痒效果显著。尤其是，蛋氨酸锌具有显著增强菌剂改善皮肤瘙痒的作用，并且有意思的是，如果换成其他锌制剂，如葡萄糖酸锌，并不会有上述促进作用。推测可能的原因在于蛋氨酸锌会对上述菌株的一种或两种起到某些促进或者开启生理活性的作用，其效果并非由补锌带来的。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。

Claims (6)

1.一种具有抗敏作用的益生菌组合物，其包括：

干酪乳杆菌，卷曲乳杆菌和蛋氨酸锌。

2.权利要求1所述的具有抗敏作用的益生菌组合物，其特征在于：

所述组合物可以做成压片糖果，袋装粉剂，胶囊。

3.权利要求1或2所述的具有抗敏作用的益生菌组合物，其特征在于：

所述干酪乳杆菌为干酪乳杆菌CGMCC 1.8727。

4.权利要求1-3任一项所述的具有抗敏作用的益生菌组合物，其特征在于：

所述卷曲乳杆菌为卷曲乳杆菌CGMCC No.6364。

5.权利要求1-4任一项所述的具有抗敏作用的益生菌组合物，其特征在于：

所述干酪乳杆菌，卷曲乳杆菌的数量比为1:1。

6.权利要求1-5任一项所述的益生菌组合物在制备食品上的应用。