CN114129561B - 青蒿素类药物在制备防治肿瘤切除术后复发及转移的药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种青蒿素类药物在制备防治肿瘤切除术后复发及转移的药物中的应用,属于生物医药技术领域。本发明通过建立肿瘤手术切除根治术后的应用环境,研究青蒿素类药物对肿瘤切除术后辅助治疗的效果,结果显示,青蒿素及其衍生物可以抑制黑色素瘤、乳腺癌、肺癌等肿瘤切除根治术后的肿瘤复发与转移,并延长个体的生存时间。因此,青蒿素类药物在黑色素瘤、乳腺癌、肺癌等肿瘤的肿瘤切除根治术后具有显著疗效,并有着巨大的临床应用的研发价值。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域,具体涉及一种青蒿素类药物在制备防治肿瘤切除术后复发及转移的药物中的应用。
背景技术
肿瘤,尤其是恶性肿瘤,是威胁人类健康和生命的首要重大疾病,是现代医学正面临着的棘手难题。针对大多数早中期实体肿瘤的治疗主要是采用手术切除、或手术再辅以放射治疗和化疗,而晚期肿瘤则多采取姑息性的放射治疗和化疗。然而,尽管通过肿瘤手术根治术治疗,恶性肿瘤术后引起复发与转移的概率仍然居高不下,这是一些肿瘤手术切除根治术后病人预后不佳的主要原因之一。
肿瘤手术切除后的复发与转移是恶性肿瘤患者术后死亡的主要原因。如黑色素瘤是一种恶性程度较高的肿瘤,其主要治疗手段是手术切除,但尽管经历了手术治疗,仍有超过5%的病人会发生早期复发及转移,约21%的患者会在术后1年内发生复发及转移,其整体中位生存时间小于10个月;再如肺癌是一种非常复杂的肿瘤,30~75%的肺癌患者在手术后会发生肿瘤复发或转移,80~90%的肺癌患者死亡是由术后复发及转移引起的;还如乳腺癌也会发生手术切除后的转移,而10~35%的乳腺癌患者会发生术后复发。因此,寻求一种更有效的肿瘤切除术后辅助治疗的药物防治肿瘤的复发和转移,是当前临床的迫切要求。
青蒿素,是从传统中药黄花蒿茎叶中提取的一种有效成分,临床上已被应用于疟疾的治疗,应用历史已有几十年,其安全性已经得到了充分验证。虽然近来的研究表明,青蒿素类药物在体外细胞实验及部分动物实验中具有抑制多种肿瘤的效果。但是,青蒿素类药物在防治肿瘤切除根治术后的复发及转移中的应用则未见报道。
发明内容
为了克服现有技术的缺陷,本发明的目的在于提供一种青蒿素类药物在制备防治肿瘤切除术后复发及转移的药物中的应用。
为了实现上述发明目的,本发明提供以下技术方案:
本发明提供了一种青蒿素类药物在制备防治肿瘤切除术后复发及转移的药物中的应用,所述的肿瘤包括黑色素瘤、乳腺癌或肺癌。
优选地,所述青蒿素类药物为具有青蒿素母核结构的倍半萜内酯类化合物或其衍生物。
优选地,所述青蒿素类药物包括青蒿素、双氢青蒿素或青蒿琥酯。
优选地,所述青蒿素类药物的给药浓度为0.1~200mg/kg。
优选地,所述青蒿素类药物的给药方式包括口服、静脉注射、肌肉注射或腹腔注射。
优选地,所述的青蒿素类药物包括有效成分以及药物学上可接受的载体,所述的有效成分为青蒿素或其衍生物。
与现有技术相比,本发明的技术方案的有益效果为:
本发明公开的青蒿素类药物在制备防治肿瘤切除术后复发及转移药物中的应用,通过构建皮下肿瘤切除术后的动物模型,以模拟一种肿瘤手术切除根治术后的应用环境,验证青蒿素类药物对肿瘤切除术后辅助治疗的效果:青蒿素及其衍生物显著抑制黑色素瘤、乳腺癌、肺癌等肿瘤切除根治术后的肿瘤复发与转移,并延长个体的生存时间。因此,青蒿素类药物在黑色素瘤、乳腺癌、肺癌等肿瘤肿瘤切除根治术后疗效显著,本发明为青蒿素类药物抗肿瘤治疗提供了新的适用领域及科学依据,对青蒿素类药物的临床应用具有重要的指导意义。
附图说明
图1为皮下黑色素瘤肿瘤术后模型建立的示意图,图1中的A为皮下黑色素瘤种植后、手术前的示意图,图1中的B为皮下黑色素瘤切除手术后示意图;
图2为青蒿素对黑色素瘤术后复发的影响,图2中的A为青蒿素低、中、高剂量组对皮下黑素色瘤肿瘤模型术后3周时的复发情况,图2中的B为青蒿素低、中、高剂量组对皮下黑素色瘤肿瘤模型术后3周时的复发肿瘤大小的统计图,图2中的C为随着时间延长,青蒿素低、中、高剂量组对皮下黑素色瘤肿瘤模型术后的复发率;
图3为青蒿素对黑色素瘤术后转移的影响,图3中的A为青蒿素低、中、高剂量组对皮下黑素色瘤肿瘤模型术后的肺转移情况,图3中的B为青蒿素低、中、高剂量组对皮下黑素色瘤肿瘤模型术后的肺转移比例的统计;
图4为随着时间延长,青蒿素低、中、高剂量组对皮下黑素色瘤肿瘤模型术后的裸鼠存活个数的比例统计;
图5为青蒿素对乳腺癌及肺癌术后复发的影响,图5中的A为青蒿素对皮下乳腺癌肿瘤模型术后3周时的复发情况,图5中的B为随着时间延长,青蒿素对皮下乳腺癌肿瘤模型术后复发肿瘤大小的统计图,图5中的C为青蒿素对皮下肺癌肿瘤模型术后4月时的复发情况,图5中的D为随着时间延长,青蒿素对皮下肺癌肿瘤模型术后复发肿瘤大小的统计图;
图6为青蒿素对乳腺癌及肺癌术后转移的影响,图6中的A为青蒿素对皮下乳腺癌肿瘤模型术后的肺转移比例的统计,图6中的B为青蒿素对皮下肺癌肿瘤模型术后的肺转移比例的统计;
图7为青蒿素对乳腺癌及肺癌术后裸鼠生存时间的影响,图7中的A为随着时间延长,青蒿素对皮下乳腺癌肿瘤模型术后的裸鼠存活个数的比例统计,图7中的B为随着时间延长,青蒿素对皮下肺癌肿瘤模型术后的裸鼠存活个数的比例统计;
图8为双氢青蒿素或青蒿琥酯对黑素色瘤肿瘤模型术后复发、转移与裸鼠生存时间的影响,图8中的A为双氢青蒿素或青蒿琥酯对皮下黑素色瘤肿瘤模型术后3周时的复发情况,图8中的B为双氢青蒿素或青蒿琥酯对皮下黑素色瘤肿瘤模型术后3周时复发的肿瘤大小的统计图,图8中的C为双氢青蒿素或青蒿琥酯对皮下黑素色瘤肿瘤模型术后的肺转移比例的统计;图8中的D为随着时间延长,双氢青蒿素或青蒿琥酯对皮下黑素色瘤肿瘤模型术后的裸鼠存活个数的比例统计。
具体实施方式
本发明提供了一种青蒿素类药物在制备防治肿瘤切除术后复发及转移的药物中的应用,所述的肿瘤包括黑色素瘤、乳腺癌或肺癌。
在本发明中,所述黑色素瘤的细胞优选为B16,所述乳腺癌的细胞优选为MB231,所述肺癌的细胞优选为A549。本发明对B16、MB231或A549细胞的来源没有限定,采用本领域技术人员熟知的市售B16、MB231或A549细胞即可。
在本发明中,青蒿素类药物优选为具有青蒿素母核结构的倍半萜内酯类化合物或其衍生物。所述青蒿素类药物优选包括青蒿素、双氢青蒿素或青蒿琥酯。本发明对青蒿素、双氢青蒿素或青蒿琥酯的来源没有限定,采用本领域技术人员熟知的市售青蒿素、双氢青蒿素或青蒿琥酯即可。
在本发明中,所述青蒿素类药物的给药浓度优选为0.1~200mg/kg,更优选为1~125mg/kg。所述青蒿素类药物的给药方式优选包括口服、静脉注射、肌肉注射或腹腔注射,更优选为腹腔注射。
在本发明中,所述青蒿素类药物包括有效成分以及药物学上可接受的载体。所述的有效成分优选为青蒿素或其衍生物,更优选为青蒿素、双氢青蒿素或青蒿琥酯。所述的药物学上可接受的载体优选包括赋形剂、缩合剂、崩解剂、润滑剂、防腐剂、稀释剂、甜味剂、粘合剂、着色剂、助溶剂、释放剂和表面活性剂中的一种或几种;所述药物的剂型优选包括片剂、颗粒剂、丸剂、栓剂、胶囊剂、注射剂、糖浆剂、混悬剂、贴剂或乳膏剂。
在本发明中,若无特殊说明,所有的原料组分均为本领域技术人员熟知的市售商品。
下面将结合本发明中的实施例,对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例1
1、黑素色瘤手术切除术后小鼠动物模型的建立
1)动物选择
选取4~6周龄,体重20-25g的balb/c裸鼠作为建立小鼠模型的对象。
所述的裸鼠购自美国Jackson实验室,为无特定病原体动物(SPF级),饲养在屏障系统中,饲养温度25±2℃,12小时光照12h黑暗,给予充足的食物和水源;
2)皮下种植瘤模型的建立
将B16细胞接种于含10%胎牛血清的DMEM培养基中,置于37℃含5%二氧化碳的培养箱中常规培养,然后通过常规消化、离心、收集肿瘤细胞悬液,PBS重悬后,得到B16细胞悬液,最后,用1mL注射器将肿瘤细胞悬液注入裸鼠双侧臀背部的皮下,注射量为106个细胞/100μL;
3)皮下种植瘤模型建立后,待皮下肿瘤长径达1.4~1.6cm后,则进行手术切除肿瘤,通常B16皮下肿瘤生长到长径1.4~1.6cm需1~2周;
4)手术切除皮下肿瘤
用酒精对裸鼠进行体表消毒,采用腹腔浸润麻醉的方式,按裸鼠每10g注射100μL4%水合氯醛进行麻醉,待小鼠进入全麻状态后,固定裸鼠于手术桌上,充分暴露术野,切开皮肤,沿着肿瘤边缘进行分离,手术过程时不要破坏肿瘤包膜,最后整块切除肿瘤,同时切除与肿瘤组织粘连紧密的皮肤;
5)缝合
用无菌医用丝线进行简单间断缝合,在伤口处进行碘伏消毒,若有裸鼠在围手术期内即术前至术后1天死亡,则予以剔除。
2、青蒿素药物对黑色素瘤手术切除术后裸鼠的治疗方案
待黑色素瘤手术切除术后裸鼠全部苏醒后随机分为5组,每组6只,采用腹腔注射的方式进行给药,二甲基亚砜溶剂为阴性对照组(每天给药1次,注射量与青蒿素类药物组体积相同),顺铂为阳性对照组(每天给药1次,每次剂量为2mg/kg),青蒿素药物治疗组分为低、中、高剂量组:低剂量组为13.3mg/kg(每天给药1次,每次剂量为13.3mg/kg),中剂量组为40mg/kg(每天给药1次,每次剂量为40mg/kg),高剂量组为40mg/kg×3次(每天给药3次,每次剂量为40mg/kg),其中每只裸鼠注射容量为100μL,连续给药30天,在皮下黑色素瘤术后模型中,阴性对照组在36天内全部死亡,其他各组继续随访至术后第38天。
上述药物的均采用二甲基亚砜溶剂进行常规配制。
试验期间每天记录裸鼠体重,肿瘤体积及活动情况,在裸鼠死亡后,记录其死亡时间,结束随访后,处死裸鼠,并及时进行死亡或处死后的裸鼠解剖,迅速分离肿瘤、肝脏、肺,观察是否发生肺、肝、腋窝淋巴结等处的转移。
皮下肿瘤术后模型建立的效果,以皮下黑素色瘤术后模型为例(见图1),图1中的A为皮下黑色素瘤种植后、手术前的示意图,图1中的B为皮下黑色素瘤切除手术后示意图;在完整切除皮下肿瘤后,裸鼠能健康存活。
图2的结果表明青蒿素抑制黑色素瘤的复发。由图2中的A、图2中的B可知,与阴性对照组相比,青蒿素抑制了术后黑色素瘤的复发,具有浓度依赖性,通过中、高剂量青蒿素治疗,复发黑色素瘤的长径显著小于阴性对照组;图2中的C为随着时间延长,青蒿素对皮下黑色素瘤术后复发率的影响,结果表明,阴性对照组在14天内全部复发,而青蒿素中、高剂量组的复发率显著低于阴性对照组,出现复发的时间也比阴性对照组晚。
图3结果表明青蒿素显著抑制术后黑色素瘤的转移。由图3中的A的结果表明,与阴性对照组相比,青蒿素抑制了术后黑色素瘤的转移,且具有浓度依赖性;图3中的B可知,在皮下黑色素瘤术后模型的阴性对照组中,术后发生肺转移的比例为50%,而在青蒿素高剂量组中,术后发生肺转移的比例为16.7%,差异有统计学意义。
图4结果表明青蒿素显著延长黑色素瘤切除术后的裸鼠的生存时间。
实施例2
1、乳腺癌或肺癌手术切除术后小鼠动物模型的建立与实施例1的不同之处为:步骤2)中将A549或MB231细胞分别接种于含10%胎牛血清的DMEM培养基中,置于37℃含5%二氧化碳的培养箱中常规培养,然后通过常规消化、离心、收集肿瘤细胞悬液,PBS重悬后,分别得到A549或MB231细胞悬液,最后,用1mL注射器将肿瘤细胞悬液注入裸鼠双侧臀背部的皮下,注射量为106个细胞/100μL;步骤3)中皮下种植瘤模型建立后,待皮下肿瘤长径达1.4~1.6cm后,则进行手术切除肿瘤,A549及MB231皮下肿瘤生长到长径1.4~1.6cm需要3~4周。其他的处理步骤与实施例1相同。
2、青蒿素药物对乳腺癌或肺癌手术切除术后裸鼠的治疗方案
待乳腺癌或肺癌手术切除术后裸鼠全部苏醒后随机分为2组,每组6只,采用腹腔注射的方式进行给药,二甲基亚砜溶剂为阴性对照组(每天给药1次,注射量与青蒿素类药物组体积相同),青蒿素药物组(每天给药1次,每次剂量为60mg/kg),其中每只裸鼠注射容量为100μL,连续给药30天,在皮下乳腺癌术后模型中,各组随访至术后150天;在皮下肺癌术后模型中,各组随访至术后180天。
上述药物的均采用二甲基亚砜溶剂进行常规配制。
试验期间每天记录裸鼠体重,肿瘤体积及活动情况,在裸鼠死亡后,记录其死亡时间,结束随访后,处死裸鼠,并及时进行死亡或处死后的裸鼠解剖,迅速分离肿瘤、肝脏、肺,观察是否发生肺、肝、腋窝淋巴结等处的转移。
图5的结果表明青蒿素抑制乳腺癌及肺癌肿瘤的复发。由图5中的A可知,与阴性对照组相比,青蒿素抑制了术后乳腺癌的复发;由图5中的B可知,青蒿素组的术后乳腺癌复发肿瘤长径显著小于阴性对照组,且随着时间延长,青蒿素组对抑制术后乳腺癌复发效果越显著,由图5中的C可知,与阴性对照组相比,青蒿素抑制了术后肺癌的复发;由图5中的D可知,青蒿素组的术后肺癌复发肿瘤长径显著小于阴性对照组,且随着时间延长,青蒿素组对抑制术后肺癌复发效果越显著。
图6结果表明青蒿素显著抑制术后乳腺癌和肺癌的转移。图6中的A可知,在皮下乳腺癌术后模型的阴性对照组中,术后发生肺转移的比例为66.7%,而在青蒿素组中,术后发生肺转移的比例为33.3%,差异有统计学意义;图6中的B可知,在皮下肺癌术后模型的阴性对照组中,术后发生肺转移的比例为66.7%,而在青蒿素组中,术后发生肺转移的比例为16.7%,差异有统计学意义。
图7结果表明青蒿素显著延长乳腺癌、肺癌切除术后的裸鼠的生存时间(见图7中的A、图7中的B)。
实施例3
1、黑素色瘤手术切除术后小鼠动物模型的建立同实施例1。
2、双氢青蒿素或青蒿琥酯药物对黑色素瘤手术切除术后裸鼠的治疗方案
待黑色素瘤手术切除术后裸鼠全部苏醒后随机分为3组,每组5只,采用腹腔注射的方式进行给药,二甲基亚砜溶剂为阴性对照组(每天给药1次,注射量与青蒿素类药物组体积相同),双氢青蒿素药物组(每天给药1次,每次剂量为50mg/kg),青蒿琥酯药物组(每天给药1次,每次剂量为50mg/kg),其中每只裸鼠注射容量为100μL,连续给药30天,在皮下黑色素瘤术后模型中,阴性对照组在36天内全部死亡,其他各组继续随访至术后第60天。
上述药物的均采用二甲基亚砜溶剂进行常规配制。
试验期间每天记录裸鼠体重,肿瘤体积及活动情况,在裸鼠死亡后,记录其死亡时间,结束随访后,处死裸鼠,并及时进行死亡或处死后的裸鼠解剖,迅速分离肿瘤、肝脏、肺,观察是否发生肺、肝、腋窝淋巴结等处的转移。
图8结果表明双氢青蒿素或青蒿琥酯能够显著黑素色瘤肿瘤模型术后肿瘤复发与转移,延长裸鼠生存时间。图8中的A结果可知,与阴性对照组相比,双氢青蒿素或青蒿琥酯抑制了术后黑色素瘤的复发;图8中的B结果可知,通过双氢青蒿素或青蒿琥酯治疗后,术后黑色素瘤复发肿瘤长径显著小于阴性对照组,其中阴性对照组平均瘤体长径为2.9cm,双氢青蒿素组平均瘤体长径是1.2cm,青蒿琥酯组平均瘤体长径为0.6cm,故双氢青蒿素及青蒿琥酯均能显著抑制肿瘤原位复发,其中青蒿琥酯的抑制肿瘤复发的效果更好;图8中的C的结果表明,随访60天后,阴性对照组肺转移的发生率为60%,双氢青蒿素组肺转移率为40%,青蒿琥酯组肺转移率为20%,可见,双氢青蒿素及青蒿琥酯均能显著抑制肿瘤切除术后的肿瘤远处转移;图8中的D的结果表明,对照组裸鼠在术后36天便全部死亡,36天内双氢青蒿素组有2只裸鼠死亡,青蒿琥酯组有1只裸鼠死亡,可见,双氢青蒿素及青蒿琥酯组的裸鼠的术后生存时间显著长于阴性对照组。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (4)
1.一种青蒿素类药物在制备防治肿瘤切除术后复发及转移的药物中的应用,其特征在于,所述的肿瘤为黑色素瘤;
所述青蒿素类药物为青蒿素或双氢青蒿素。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述青蒿素类药物的给药浓度为0.1~200mg/kg。
3.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述青蒿素类药物的给药方式包括口服、静脉注射、肌肉注射或腹腔注射。
4.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述的青蒿素类药物包括有效成分以及药物学上可接受的载体,所述有效成分为青蒿素或双氢青蒿素。
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GR01 | Patent grant | ||
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