CN107157985A - 补骨脂素在制备抗辐射药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明实施例首先提供了补骨脂素在制备抗辐射药物中的应用，其中补骨脂素可以通过修复辐射损伤的细胞实现抗辐射。本发明还提供了一种抗辐射药物组合物，其包含补骨脂素和药学上可接受的载体或赋形剂。本发明还提供了一种抗辐射药物组合物，其含有包含补骨脂素的植物提取物和药学上可接受的载体或赋形剂。

Description

补骨脂素在制备抗辐射药物中的应用

技术领域

本发明涉及抗辐射医药技术领域，特别是涉及补骨脂素在制备抗辐射药物中的应用。

背景技术

当今社会，随着国民经济的飞速发展和科学技术的不断提高，辐射在各个领域得到广泛的应用，如核能与核技术在农业、医疗卫生和科学研究等领域都得到了广泛的应用。因而辐射与人们的日常工作和生活关系也越来越密切。但辐射在广泛应用的同时也带来了一系列不容忽视的危害，如：核电辐射、医疗领域的X光射线以及核事故等。

癌症是当今医疗领域的一大难题，2014年世界卫生组织在《世界癌症报告》中指出，未来20年，每年的新发癌症病例将达到2200万例。放射治疗在肿瘤治疗中占据着非常重要的地位，在我国，每年约有70％的肿瘤患者接受放射治疗。但放射治疗选择性弱，放射线在照射肿瘤细胞的同时也会对正常组织造成损伤，甚至是严重的毒副作用。临床上，常因正常组织耐受剂量的限制导致治疗的失败，从而严重影响肿瘤病人的治疗效果。因此，研究和开发毒性低、药效高的抗辐射药物是医药工作者亟需解决的问题。

补骨脂素是从中药补骨脂(Psoralea corylifolia L.)中发现的一种香豆素类天然产物，无色针状结晶(乙醇)，熔点189～190℃，溶于乙醇、氯仿，微溶于水、乙醚和石油醚。具有光敏和抗癌等作用。本发明涉及的是补骨脂素及其含有它的药物组合物在抗辐射中应用。

发明内容

发明人通过对补骨脂素的研究，意外的发现补骨脂素能够修复因受辐射而损伤的细胞，具有抗辐射作用；并基于此完成了本发明。

本发明首先提供了补骨脂素在制备抗辐射药物中的应用，其中补骨脂素的结构式如下：

可选的，补骨脂素通过修复辐射损伤的细胞实现抗辐射。

可选的，所述药物给予有需要的对象的每日剂量以补骨脂素计为0.01-1000mg/kg体重，优选为0.1-100mg/kg体重，更优选为1-100mg/kg体重，再优选为20mg/kg体重。

可选的，所述补骨脂素是以补骨脂素单体的形式提供的，或者是以包含补骨脂素的植物提取物的形式提供的。

可选的，所述补骨脂素是以包含补骨脂素的补骨脂提取物的形式提供的。需要说明的是，补骨脂提取物的提取方式现有技术中多有报道，本文在此不进行赘述，本领域技术人员可以通过现有的任意方式获取补骨脂提取物。

本发明还提供了一种抗辐射药物组合物，其包含补骨脂素和药学上可接受的载体或赋形剂。

可选的，基于所述药物组合物的总重量，所述补骨脂素的含量为1-99％，优选为20-80％，更优选为40-60％。

可选的，所述药学上可接受的载体或赋形剂选自溶剂、稀释剂、分散剂、助悬剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂、乳化剂、防腐剂、粘合剂、润滑剂、稳定剂、水合剂、乳化加速剂、缓冲剂、吸收剂、着色剂、香味剂、甜味剂、离子交换剂、脱模剂、涂布剂、矫味剂、和抗氧化剂。

可选的，所述药物组合物配制为散剂、片剂、胶囊剂、丸剂、滴丸剂、注射剂、乳剂、混悬剂或酊剂中的任意一种剂型。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。

本发明还提供了一种抗辐射药物组合物，其含有包含补骨脂素的植物提取物和药学上可接受的载体或赋形剂。可选的，植物提取物为补骨脂提取物。

本文中，“药学上可接受的”表示当以通常用药剂量使用时没有实质的毒性作用，从而可被政府或与其相当的国际组织批准或者已被批准用于动物，更特别地用于人，或者被登录在药典上。

本发明药物组合物中可用的“药学上可接受的载体或赋形剂”可以是药物制剂领域中任何常规的载体，特定载体的选择将取决于用于治疗特定患者的给药方式或疾病类型和状态。用于特定给药模式的合适药物组合物的制备方法完全在药物领域技术人员的知识范围内。

如本文使用的，术语“药物组合物”具有其一般含义。此外，本发明的“药物组合物”还可以以保健品、功能性食品、食品、食品添加剂等形式存在或提供。可采用制药领域特别是制剂领域中的常规技术，通过药品生产中常用的提取分离纯化手段得到本发明的药物组合物的原料的有效成分，任选地与一种或更多种药学可接受的载体或赋形剂混合，然后形成所需的剂型，来制备本发明的药物组合物。根据本发明的药物组合物，其为可以适用于口服给药、胃肠外给药或局部给药、外用给药的药物制剂，尤其适用于口服给药。用于口服施用的剂型可包括例如片剂、丸剂、硬或软胶囊剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、糖浆剂、散剂、粉剂、细粒剂、颗粒剂、小丸剂、酏剂等，并不限于此。除了活性成分外，这些制剂还可包含稀释剂(例如乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、纤维素和甘氨酸)、润滑剂(例如二氧化硅、滑石、硬脂酸或其镁盐、钙盐和聚乙二醇)。片剂还可包含粘合剂，例如硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、黄芪胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和聚乙烯吡咯烷。必要时，其还可包含药用添加剂，例如崩解剂(如淀粉、琼脂、海藻酸或其钠盐)、吸收剂、着色剂、香味剂、甜味剂等。片剂可根据常用的混合、造粒或包衣的方法制备。

综上，补骨脂素能够修复因受辐射而损伤的细胞，具有抗辐射作用，可以用于制备抗辐射药物。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为补骨脂素对HBL-100细胞的毒性作用(与对照组比，**p<0.01，***p<0.001)。

图2为补骨脂素对MCF-7细胞的毒性作用(与对照组比，***p<0.001)。

图3为补骨脂素对HBL-100细胞的辐射防护作用(与对照组比，***p<0.001)。

图4为补骨脂素对MCF-7细胞的辐射防护作用。

图5为补骨脂素对受辐射小鼠生存期的影响。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1 提取补骨脂素及其表征

补骨脂素的分离：中药补骨脂药材(15kg)，干燥，粉碎，加入10倍量的70％乙醇渗漉提取，每次提取24-36h，共提取3次，合并提取液，减压浓缩至流浸膏，取约150g样品与适量100-200目硅胶拌样，经硅胶柱层析石油醚-乙酸乙酯洗脱，得到9:1及8:2洗脱部分，将8:2洗脱部分经石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，在100:20部分洗脱部分得到馏分馏分3，该馏分通过硅胶柱色谱继续分离纯化，得到化合物补骨脂素21.3g。

补骨脂素的表征：白色针晶(甲醇)，硅胶GF₂₅₄检视，在紫外光(365nm)照射下显较强的蓝色荧光，提示该化合物可能为香豆素类化合物。ESI-MS m/z:187.31[M+H]⁺。其¹H-NMR,¹³C-NMR见表1.

表1.¹H-NMR,¹³C-NMR补骨脂素的核磁共振谱数据(δin ppm,J in Hz)

实施例2 补骨脂素的体外细胞毒性实验

2.1细胞培养

HBL-100细胞(ATCC)在RPMI-1640培养基(含10％胎牛血清，100U/mL青霉素和0.1mg/mL链霉素)中，MCF-7细胞(ATCC)在DMEM/High Gluose培养基(含10％胎牛血清，100U/mL青霉素和0.1mg/mL链霉素)中，于37℃,5％CO₂，饱和湿度的培养箱中培养，当细胞贴壁生长至密度达到70～80％时，按1/2的比例传代，传代时用0.25％的胰蛋白酶于培养箱中消化1～2min，取对数生长期状态良好的细胞进行实验。

2.2细胞毒性实验

用CCK-8法测试受试药物(补骨脂素)对HBL-100、MCF-7细胞存活率的影响。

(1)细胞接种：取对数生长期状态良好的细胞，经0.25％的胰蛋白酶消化后配制成细胞悬液，以7×10³个/孔，100μL的细胞悬液均匀地接种于96孔板中(实验孔周边以无菌PBS填充)，于培养箱中培养。

(2)药物处理：接种12h待细胞贴壁后，取出96孔板，分别加入100μL含相应浓度的补骨脂素(6.25、12.5、25、50、100μmol/L)溶液(均以含有10％胎牛血清的培养基配制)，于培养箱中继续培养。

药物处理方案：实验分为实验组(含有细胞的培养基、药物，照射)；对照组(含有细胞的培养基，照射)；空白组(含有细胞的培养基，未照射)。

(3)显色：加药处理48h后，向每孔加入100μL含有10％CCK-8的培基溶液，于培养箱中孵育3h。

(4)检测：使用酶标仪于波长450nm处测OD值。

(5)计算：细胞存活率＝(OD_实验组-OD_空白组)/(OD_对照组-OD_空白组)×100％。

2.3实验结果

补骨脂素的体外细胞毒性实验结果如图1及图2所示；从图1及图2中可以看出，补骨脂素在100μmol/L浓度下，对MCF-7具有弱的细胞毒活性，对HBL-100未显示有细胞毒活性。

实施例3 补骨脂素的细胞抗辐射实验

3.1细胞抗辐射实验

在实施例2下2.2确定补骨脂素组与对照组细胞存活率不呈显著性差异条件下，分别选择100μmol/L、50μmol/L测试其对HBL-100、MCF-7细胞的辐射损伤修复作用。实验分为空白组(不辐照、不给药)、对照组(辐照、不给药)、和补骨脂素组(即实验组，辐照、给药)。

取实施例2下2.1所培养的对数生长期状态良好的细胞，经0.25％胰蛋白酶消化后配制成细胞悬液，以7×10³个/孔，100μL的细胞悬液均匀地接种于96孔板中(实验孔周边以无菌PBS填充)；于培养箱中培养12h后，取出96孔板，分别加入100μL不同浓度的药物溶液(均以含有10％胎牛血清的培养基配制)；于培养箱中继续培养24h后，对照组和实验组同时给予¹³⁷Csγ射线一次性照射，辐射剂量率为1.00Gy/min，总照射剂量为8Gy；照射24h后，以CCK-8法显色；3h后于酶标仪波长450nm处测OD值。细胞存活率计算方法同实施例2中的2.2。

3.2数据处理

使用GraphPad Prism 5软件对数据进行作图分析，实验组同对照组间数据比较进行显著性差异检验，P<0.05认为差异有统计学意义。

3.3实验结果

补骨脂素的细胞抗辐射实验结果如图3及图4所示；从图3及图4中可以看出，补骨脂素分别在100μmol/L、50μmol/L浓度下对HBL-100、MCF-7细胞的辐射损伤具有修复作用。

实施例4 补骨脂素的体内抗辐射实验

小鼠(品系：C57BL/6)适应性喂养7天后，随机分为6组，空白组除了灌胃生理盐水以外，不作任何处理；模型组小鼠被灌胃生理盐水并接受辐射；实验组(补骨脂素组)分为3组，分别是补骨脂素低剂量组(10mg/kg/d)、补骨脂素中剂量组(20mg/kg/d)、补骨脂素高剂量组(60mg/kg/d)；阳性药对照组静脉注射60mg/kg氨磷汀，给药后立即照射，给药一次，照射后不再给药。动物随机分组，每组10只，照射前4h给药一次，采用7.2Gy单次全身照射，照射后立即补充给药一次，之后，每24h给药一次，连续给药7天，记录小鼠30天的存活情况，结果表明补骨脂素中剂量组对小鼠辐射具有较好的保护作用，见图5。

以上对本发明所提供的补骨脂素在制备抗辐射药物中的应用进行了详细介绍。本文中应用了具体实施例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其中心思想。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护。

Claims (10)

1.补骨脂素在制备抗辐射药物中的应用。

2.如权利要求1所述的应用，其中补骨脂素通过修复辐射损伤的细胞实现抗辐射。

3.如权利要求1所述的用途，其中所述药物给予有需要的对象的每日剂量以补骨脂素计为0.01-1000mg/kg体重，优选为0.1-100mg/kg体重，更优选为1-100mg/kg体重，再优选为20mg/kg体重。

4.如权利要求1所述的用途，其中所述补骨脂素是以补骨脂素单体的形式提供的，或者是以包含补骨脂素的植物提取物的形式提供的。

5.如权利要求1所述的用途，其中所述补骨脂素是以包含补骨脂素的补骨脂提取物的形式提供的。

6.一种抗辐射药物组合物，其包含补骨脂素和药学上可接受的载体或赋形剂。

7.如权利要求6所述的药物组合物，其中基于所述药物组合物的总重量，所述补骨脂素的含量为1-99％，优选为20-80％，更优选为40-60％。

8.如权利要求6所述的药物组合物，其中所述药学上可接受的载体或赋形剂选自溶剂、稀释剂、分散剂、助悬剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂、乳化剂、防腐剂、粘合剂、润滑剂、稳定剂、水合剂、乳化加速剂、缓冲剂、吸收剂、着色剂、香味剂、甜味剂、离子交换剂、脱模剂、涂布剂、矫味剂、和抗氧化剂。

9.如权利要求8所述的药物组合物，其中所述药物组合物配制为散剂、片剂、胶囊剂、丸剂、滴丸剂、注射剂、乳剂、混悬剂或酊剂中的任意一种剂型。

10.一种抗辐射药物组合物，其含有包含补骨脂素的植物提取物和药学上可接受的载体或赋形剂。