CN112546086A - 一种治疗人结肠癌的药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种治疗人结肠癌的药物组合物，按重量份数，包括：西咪替丁35‑50份，甘草提取物130‑180份。所述甘草提取物的主要成分为甘草黄酮类化合物。所述甘草黄酮类化合物包括甘草素、异甘草素、甘草苷、异甘草苷、甘草酸、甘草查尔酮A或甘草查尔酮B的至少一种。这种治疗人结肠癌的药物组合物，通过将西咪替丁与甘草提取物进行复配，创新性地用于治疗人结肠癌等，体外细胞试验和动物试验证明其安全有效。

Description

一种治疗人结肠癌的药物组合物

技术领域

本发明涉及中西药复配治疗肿瘤的技术领域，尤其是涉及一种治疗人结肠癌的药物组合物。

背景技术

癌症又称之为恶性肿瘤，是由于机体控制细胞正常生长增殖机制失常而引发的疾病。而结肠癌是常见的发生于结肠部位的消化道恶性肿瘤，好发于直肠与乙状结肠交界处，以40～50岁年龄组发病率最高，男女之比为2～3：1，发病率占胃肠道肿瘤的第3位。

目前，人结肠癌治疗的方法主要是药物治疗、手术治疗和放射治疗。药物治疗(化疗)作为肿瘤治疗的三大传统手段之一，在人结肠癌治疗中起着重要的作用，但是化疗药物存在有选择性低、毒副作用大、多药耐药等缺陷，很大程度上限制了化疗药物的使用。

西咪替丁是用于治疗胃或十二指肠溃疡的有效药物，近年来有研究表明西米替丁具有抗肿瘤作用，其抗肿瘤作用机制是支持细胞免疫，包括阻断组胺的免疫抑制作用。

公开号为CN103385877A的中国专利，提供了一种紫杉醇和西咪替丁的药物组合物，其包括紫杉醇注射剂和含有西咪替丁的注射剂，将紫杉醇联合西咪替丁使用，可预防发生过敏反应。但该药物组合物中的活性成分作用机制没有进行配合，联合用药效果不佳。

因此，如何开发毒副作用小、药效高的治疗人结肠癌的药物是本领域急需解决的技术难题。

发明内容

为了解决现有技术存在的上述问题，本发明提供了一种治疗人结肠癌的药物组合物，通过将西咪替丁与甘草提取物进行复配，创新性地用于治疗人结肠癌等其他肿瘤，体外细胞试验和动物试验证明其安全有效。

为了实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：

一种治疗人结肠癌的药物组合物，按重量份数，包括：

西咪替丁35-50份，甘草提取物130-180份。

作为本发明的技术方案的进一步描述，按重量份数，包括：

西咪替丁40份，甘草提取物160份。

作为本发明的技术方案的进一步描述，所述药物组合物为胶囊剂，在每粒胶囊中，含西咪替丁40mg，甘草提取物160mg。

西咪替丁与甘草提取物组成的复方制剂，其含量可以是西咪替丁35-50份和甘草提取物130-180份；在实际应用的胶囊剂，其由两部分组成，分别是每粒胶囊中，含西咪替丁40mg，甘草提取物160mg。这实际为惠州市九惠制药股份有限公司名下的上市销售药品——复方西咪替丁胶囊。该复方西咪替丁胶囊在国家食品药品监督管理局批准适应症是：主要用于治疗胃或十二指肠球部溃疡，也可用于消化性溃疡愈后的维持治疗。

复方西咪替丁胶囊用于治疗胃或十二指肠球部溃疡的临床应用已经二十多年，并充分证明其安全性；现发明人通过扩展其临床适应症，通过甘草提取物与西咪替丁联合用药，并将其应用于治疗人结肠癌，在原有的用药剂量下也具有良好的抗癌疗效。

甘草提取物可诱导肿瘤细胞凋亡，影响肿瘤细胞内相关凋亡蛋白Bcl-2和Bax蛋白的表达实现，而西咪替丁则是支持细胞免疫，包括阻断组胺的免疫抑制作用，抑制抑制性T细胞活性，增加肿瘤浸润淋巴细胞的数量，以及增强外周血淋巴细胞的活性。

作为本发明的技术方案的进一步描述，所述甘草提取物的主要成分为甘草黄酮类化合物。

甘草提取物是从中药甘草中采用各种方法和溶剂提取得到的以黄酮类化合物为主要成分的活性物质。

作为本发明的技术方案的进一步描述，所述甘草黄酮类化合物包括甘草素、异甘草素、甘草苷、异甘草苷、甘草酸、甘草查尔酮A或甘草查尔酮B的至少一种。

甘草具有抗病毒、抗菌、抗溃疡、抗氧化和抗肿瘤的作用，而从甘草中提取得到的甘草黄酮类化合物，其抗肿瘤的基础物质主要为甘草素、异甘草素、甘草苷、异甘草苷、甘草酸、甘草查尔酮A和甘草查尔酮B，这些成分通过诱导肿瘤细胞分化抑制肿瘤细胞侵袭和增殖。同时，甘草黄酮类化合物抑制细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK1)启动子表达，使CDK1的基因表达下调，导致细胞周期阻滞而抑制增殖。甘草黄酮类化合物还能诱生干扰素，显著提高天然杀伤细胞和巨噬细胞的吞噬能力，从而激活荷瘤动物的免疫功能。也能诱生CD₄ ⁺T细胞，抑制肿瘤相关辅助型T₂细胞产生辅助型T₂细胞素，阻止肿瘤细胞转移。

在上述成分中，甘草查尔酮A和甘草查尔酮B还可通过抑制炎症介质、促炎细胞因子或提高免疫调节作用，以达到抗炎和抗肿瘤作用。在异甘草素、甘草苷和异甘草苷中，苷结构中的酚羟基和蛋白质之间的关系密切，其通过与肿瘤细胞特定表达的蛋白质结合，使得肿瘤细胞活性降低甚至失去。

基于上述的技术方案，本发明取得的技术效果为：

(1)本发明提供的治疗人结肠癌的药物组合物，通过将西咪替丁与甘草提取物进行复配，创新性地用于治疗人结肠癌等其他肿瘤，体外细胞试验和动物试验证明其安全有效。

(2)本发明的药物组合物，甘草提取物可诱导肿瘤细胞凋亡，影响肿瘤细胞内相关凋亡蛋白Bcl-2和Bax蛋白的表达，而西咪替丁则是支持细胞免疫，增加肿瘤浸润淋巴细胞的数量，以及增强外周血淋巴细胞的活性；二者复配

使用，共同发挥治疗人结肠癌的作用。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面将结合具体的实施例对本发明进行更全面的描述。本发明给出了的较佳实施方式。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式。相反地，提供这些实施方式的目的是使对本发明的公开内容理解的更加透彻全面。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施方式的目的，不是旨在于限制本发明。

实施例1

一种治疗人结肠癌的复方西咪替丁胶囊，在每粒胶囊中，含西咪替丁40mg，甘草提取物160mg。甘草提取物的主要成分为甘草黄酮类化合物。所述甘草黄酮类化合物包括甘草素、异甘草素、甘草苷、异甘草苷、甘草酸、甘草查尔酮A和甘草查尔酮B。

实施例2

一种治疗人结肠癌的复方西咪替丁胶囊，在每粒胶囊中，含西咪替丁35mg，甘草提取物170mg。甘草提取物的主要成分为甘草黄酮类化合物。所述甘草黄酮类化合物包括甘草素、异甘草素、甘草苷、甘草酸、甘草查尔酮A和甘草查尔酮B。

实施例3

一种治疗人结肠癌的复方西咪替丁胶囊，在每粒胶囊中，含西咪替丁50mg，甘草提取物180mg。甘草提取物的主要成分为甘草黄酮类化合物。所述甘草黄酮类化合物包括甘草素、异甘草素、甘草苷、甘草酸、甘草查尔酮A和甘草查尔酮B。

实施例4

一种治疗人结肠癌的复方西咪替丁胶囊，在每粒胶囊中，含西咪替丁35mg，甘草提取物175mg。甘草提取物的主要成分为甘草黄酮类化合物。所述甘草黄酮类化合物包括甘草素、异甘草素、甘草苷、甘草酸和甘草查尔酮B。

实施例5复方西咪替丁胶囊对人结肠癌细胞HT29的增殖抑制作用影响试验

(1)实验药物：取实施例1的复方西咪替丁胶囊，分别配制为以甘草提取物计，浓度8mg/mL、16mg/mL和32mg/mL的用药组，作为：

A：复方西咪替丁胶囊低剂量组(8mg/mL)、

B：复方西咪替丁胶囊中剂量组(16mg/mL)，

C：复方西咪替丁胶囊高剂量组(32mg/mL)，

将单方的西咪替丁和甘草提取物，配制为浓度16mg/ml，作为：

D：西咪替丁对照组；

E：甘草黄酮对照组；

以及，取生理盐水作为：

F：空白对照组。

(2)实验步骤：采用MTT法，当HT29细胞生长至对数期，用胰酶消化细胞，按照5×10³个/孔接种于96孔板，100μL/孔，细胞贴壁后，加入上述的A～F组实验药物，继续培养24h，弃去旧培养液，加入含有MTT(0.5mg/mL)的新鲜培养液，37℃培养箱继续孵育4h，移弃细胞上清液，PBS清洗细胞2次，加入二甲基亚砜150μL/孔，避光震荡10min，使用酶标仪测定570nm处的吸光度。

(3)实验原理：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒并沉积在细胞中，而死细胞无此功能，二甲基亚砜能溶解细胞中的甲瓒，用酶标仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。

(4)实验药物对HT29细胞的增殖抑制作用按如下公式计算：

细胞增殖抑制率(％)＝(1-A_实验药物/A_空白对照)×100％

(5)采用MTT法检测对细胞活力的影响见表1：不同实验药物对人结肠癌细胞HT29的增殖抑制作用测试结果。

表1不同实验药物对人结肠癌细胞HT29的增殖抑制作用测试结果

由表1可知，单方的西咪替丁对照组和单方的甘草黄酮对照组，其对结肠癌细胞HT29的增殖抑制率分别为11％和9.5％这样，其抑制效果比复方西咪替丁胶囊低剂量组的抑制效果还差一些。而采用实施例1的复方西咪替丁胶囊在中剂量组和高剂量组对人结肠癌细胞HT29均具有显著的抑制作用。

实施例6复方西咪替丁胶囊对人结肠癌细胞HT29的凋亡作用影响试验

(1)实验药物：

取实施例1的复方西咪替丁胶囊，分别配制为以甘草提取物计，浓度为8mg/mL、16mg/mL、24mg/ml和32mg/mL的复方西咪替丁胶囊用药组(联合用药组)；

取甘草黄酮提取物，分别配制为8mg/mL、16mg/mL、24mg/ml和32mg/mL的甘草黄酮用药组；

取西咪替丁，分别配制为2mg/mL、4mg/mL、6mg/ml和8mg/mL的西咪替丁用药组。

取生理盐水，作为空白对照组。

取RPMI1640培养液，作为正常对照组。

(2)实验步骤：按200μL/孔将单细胞悬液(1×10⁴个/mL)分别接种于96孔培养板24h后，分别加入不同浓度的复方西咪替丁胶囊用药组，甘草黄酮用药组和西咪替丁用药组，每一孔浓度设6个复孔。此外，将等量的RPMI1640培养液加入正常对照组和空白对照组，培养至20h。在

此基础上，加入20μLMTT(5mg/mL)溶液进行4h的继续培养，并将DMSO150μL加入到每孔，于避光室温条件下进行为期10min的充分振荡，对于每孔光吸收值(OD值)用490nm波长酶标仪测定，并用(1-实验组OD值/对照组OD值)×100％为其抑制率的具体算法。

(3)TUNEL法检测细胞凋亡

选择药物浓度为IC20-30实验，结合不用药的空白对照组、单用药组(甘草黄酮用药组和西咪替丁用药组)、联合用药组(复方西咪替丁胶囊用药组)，药物作用时间为24h，对HT29细胞用25mL培养瓶内培养，细胞涂片于PBS漂洗两遍后进行，细胞在渗透液中孵育5min，滴加TUNEL反应混合物、转化剂-POD，进行为期30min的孵育，滴加DAB底物溶液，室温5-10min，后续脱水、封片等，测定其OD值和q值，结果见表2。

表2不同实验药物对人结肠癌细胞HT29的凋亡作用测试结果

由表2可知，对于人结肠癌细胞HT29的增殖抑制和促进凋亡，单独使用西咪替丁用药组、单独使用甘草黄酮用药组，以及复方西咪替丁胶囊用药组都具备了抑制作用；且相比于对两种药物组的单独使用，在对人结肠癌细胞HT29增殖的抑制方面，复方西咪替丁胶囊用药组的抑制和促进凋亡效果更好，经统计分析细胞凋亡率显著上升(P<0.01)。

即，对于人结肠癌HT29细胞增殖，复方西咪替丁胶囊具有较好的抑制作用，联合应用西咪替丁与甘草黄酮具有协同效应，二者共同发挥对人结肠癌HT29细胞增殖抑制和凋亡促进的作用。

实施例7复方西咪替丁胶囊对小鼠结肠癌的疗效试验

(1)人结肠癌的小鼠种植瘤模型的建立

取动物皮下传代的小鼠结肠癌C26瘤组织，以生理盐水按1：3的比例稀释制成悬液，按0.2ml/只接种于6周龄、180g左右的BALB/c小鼠腋窝皮下。接种后一周后，小鼠背部肿瘤结节长到200立方毫米左右时开始分组，即按照肿瘤体积大小均匀分配小鼠至六组，每组分6只小鼠。

(2)实验药物：取实施例1的复方西咪替丁胶囊，分别配制为以甘草提取物计，浓度8mg/mL、16mg/mL和32mg/mL的用药组，作为：

A：复方西咪替丁胶囊低剂量组(8mg/mL)、

B：复方西咪替丁胶囊中剂量组(16mg/mL)，

C：复方西咪替丁胶囊高剂量组(32mg/mL)，

将单方的西咪替丁和甘草提取物，配制为浓度为4mg/ml和16mg/ml，作为：

D：西咪替丁组，4mg/ml；

E：甘草黄酮组，16mg/mL；

以及，取生理盐水作为：

F：空白对照组。

(3)实验动物的治疗研究

对已经分好组的小鼠按A～F组实验药物，以0.75mg/kg进行灌胃给药，之后自由饮水。当空白对照组小鼠的肿瘤体积达到1500立方毫米左右时，终止实验。取下皮下肿瘤并称重，且测量各组动物的肿瘤体积，并按肿瘤体积计算抑瘤率。结果见表3。

表3不同实验药物对小鼠结肠癌的测试结果

*P＜0.01，与空白对照组相比，**P＜0.01，与西咪替丁组相比，与甘草黄酮组相比。

由表3可知，复方西咪替丁胶囊低剂量组、中剂量组和高剂量组均可抑制负瘤小鼠的肿瘤的增长，且与单用西咪替丁和单用甘草黄酮相比较，具有显著差异p小于0.01，可见复方西咪替丁胶囊具有体外抗肿瘤生长的效果。

以上内容仅仅为本发明的结构所作的举例和说明，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些显而易见的替换形式均属于本发明的保护范围。

Claims (5)

1.一种治疗人结肠癌的药物组合物，其特征在于，按重量份数，包括：

西咪替丁35-50份，甘草提取物130-180份。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，按重量份数，包括：

西咪替丁40份，甘草提取物160份。

3.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物为胶囊剂，在每粒胶囊中，含西咪替丁40mg，甘草提取物160mg。

4.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述甘草提取物的主要成分为甘草黄酮类化合物。

5.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，所述甘草黄酮类化合物包括甘草素、异甘草素、甘草苷、异甘草苷、甘草酸、甘草查尔酮A或甘草查尔酮B的至少一种。