CN114113575A - 标记复合物及其制备方法与应用 - Google Patents

标记复合物及其制备方法与应用 Download PDF

Info

Publication number
CN114113575A
CN114113575A CN202010892407.5A CN202010892407A CN114113575A CN 114113575 A CN114113575 A CN 114113575A CN 202010892407 A CN202010892407 A CN 202010892407A CN 114113575 A CN114113575 A CN 114113575A
Authority
CN
China
Prior art keywords
antigen
days
virus
virus antigen
treating
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202010892407.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN114113575B (zh
Inventor
龚航
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Fapon Biotech Inc
Guangdong Fapon Biotech Co Ltd
Original Assignee
Fapon Biotech Inc
Guangdong Fapon Biotech Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Fapon Biotech Inc, Guangdong Fapon Biotech Co Ltd filed Critical Fapon Biotech Inc
Priority to CN202010892407.5A priority Critical patent/CN114113575B/zh
Publication of CN114113575A publication Critical patent/CN114113575A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN114113575B publication Critical patent/CN114113575B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
    • G01N33/535—Production of labelled immunochemicals with enzyme label or co-enzymes, co-factors, enzyme inhibitors or enzyme substrates
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56983—Viruses
    • G01N33/56988—HIV or HTLV
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/571—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses for venereal disease, e.g. syphilis, gonorrhoea
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/576—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for hepatitis
    • G01N33/5767—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for hepatitis non-A, non-B hepatitis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
    • G01N2333/08—RNA viruses
    • G01N2333/15—Retroviridae, e.g. bovine leukaemia virus, feline leukaemia virus, feline leukaemia virus, human T-cell leukaemia-lymphoma virus
    • G01N2333/155—Lentiviridae, e.g. visna-maedi virus, equine infectious virus, FIV, SIV
    • G01N2333/16—HIV-1, HIV-2
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
    • G01N2333/08—RNA viruses
    • G01N2333/18—Togaviridae; Flaviviridae
    • G01N2333/183—Flaviviridae, e.g. pestivirus, mucosal disease virus, bovine viral diarrhoea virus, classical swine fever virus (hog cholera virus) or border disease virus
    • G01N2333/186—Hepatitis C; Hepatitis NANB
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
    • G01N2333/20—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Spirochaetales (O), e.g. Treponema, Leptospira
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本发明涉及体外诊断试剂领域，具体而言，提供了一种标记复合物及其制备方法与应用。本发明提供的标记复合物制备方法，是先对目标蛋白实行预处理，将标记物与预处理过的目标蛋白进行偶联，从而得到标记复合物。该方法可以显著改善标记复合物的稳定性。

Description

标记复合物及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及体外诊断试剂领域，具体而言，涉及一种标记复合物及其制备方法与应用。
背景技术
免疫学检测主要是利用抗原和抗体的特异性反应进行检测的一种手段。其中，化学发光免疫分析方法是将高灵敏的化学发光检测与高特异性的免疫反应相结合，用于检测各种半抗原，抗原，抗体，酶，激素，脂肪酸，药物和维生素等的分析技术，以标记方法的不同分为两种：化学发光标记免疫分析法和化学发光酶免疫分析法。常用于标记的化学发光物质有吖啶酯类化合物和鲁米诺类化合物等；常用于标记的酶标记物有碱性磷酸酶(ALP)和辣根过氧化酶(HRP)等，利用这些标记物对目标蛋白进行标记，可以形成标记复合物，该标记复合物可用于与目标蛋白特异性结合的物质的检测。
然而，现有技术中标记复合物却存在如下缺点：由于目标蛋白自身结构的原因，经过标记的形成的标记复合物存在稳定性较差的问题。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种标记复合物的制备方法。
本发明的第二目的在于提供一种标记复合物。
本发明的第三目的在于提供标记复合物的应用。
本发明的第四目的在于提供一种化学发光免疫检测试剂盒。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
一种标记复合物的制备方法，将标记物与预处理过的目标蛋白进行偶联，得到标记复合物；所述预处理包括：35-60℃热处理0.5-45天。
进一步地，所述预处理包括如下(a)-(g)中任一种方案：(a)37-56℃热处理0.5-45天；(b)35-40℃热处理2-45天；(c)40-50℃处理1-30天，不包括40℃；(d)50-60℃处理0.5-10天，不包括50℃；(e)37℃处理2-45天；(f)45℃处理1-30天；(g)56℃处理0.5-10天；
可选的，将标记物与预处理过的目标蛋白进行偶联后，还包括热处理的步骤，得到标记复合物；所述热处理包括：35-60℃热处理0.5-30天；
可选的，所述热处理包括如下(A)-(G)中任一种方案：(A)37-56℃热处理0.5-30天；(B)35-40℃热处理2-30天；(C)40-50℃处理1-20天，不包括40℃；(D)50-60℃处理0.5-10天，不包括50℃；(E)37℃处理2-30天；(F)45℃处理1-20天；(G)56℃处理0.5-10天。
进一步地，将标记物与预处理过的目标蛋白通过桥连蛋白进行偶联，得到标记复合物；
可选的，桥连蛋白包括鸡卵清蛋白、明胶、钥孔血蓝蛋白、牛血清蛋白、人血清白蛋白、兔血清白蛋白、多聚赖氨酸或人工合成的无功能线性多肽；
可选的，将标记物与预处理过的目标蛋白通过特异性结合对进行偶联，得到标记复合物；
可选的，特异性结合对包括生物素及其衍生物和抗生物素蛋白及其衍生物，非目标蛋白的抗原和抗体，碳水化合物和凝集素，效应物和受体分子，或者，地高辛和地高辛配基。
进一步地，标记物包括鲁米诺、碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶、吖啶酯、吖啶磺酰胺或三联吡啶钌或以上任一种标记物的衍生物。
进一步地，目标蛋白包括抗原或抗体。
进一步地，抗原或抗体选自感染性疾病相关抗原或抗体、心肌标志物相关抗原或抗体、或肿瘤相关标志物相关抗原或抗体。
进一步地，所述感染性疾病包括病毒感染疾病、细菌感染疾病、真菌感染疾病、衣原体感染疾病、支原体感染疾病或寄生虫感染疾病；
可选的，感染性疾病相关抗原包括艾滋病毒抗原、甲型肝炎病毒抗原、乙型肝炎病毒抗原、丙型肝炎病毒抗原、丁型肝炎病毒抗原、戊型肝炎病毒抗原、庚型肝炎病毒抗原、风疹病毒抗原、人巨细胞病毒抗原、单纯疱疹病毒1型抗原、单纯疱疹病毒2型抗原、狂犬病毒抗原、人类T淋巴细胞白血病病毒抗原、登革热病毒抗原、人乳头瘤病毒抗原、西尼罗河病毒抗原、森林脑炎病毒抗原、麻疹病毒抗原、流感病毒抗原、副流感病毒抗原、水痘病毒抗原、艾柯病毒型抗原、柯萨奇病毒抗原、乙型脑炎病毒抗原、柯萨奇病毒抗原、EB病毒抗原、腮腺炎病毒抗原、梅毒螺旋体抗原、包柔氏螺旋体抗原、沙眼衣原体抗原、肺炎衣原体抗原、鹦鹉热衣原体抗原、解脲脲原体抗原、肺炎支原体抗原、结核分枝杆菌抗原、幽门螺旋杆菌抗原、淋球菌抗原、疟原虫抗原、枯氏锥虫抗原或弓形虫抗原；
可选的，所述心肌标志物相关抗原包括肌钙蛋白、肌红蛋白、肌酸激酶同工酶、N末端脑钠肽前体、心脏型脂肪酸结合蛋白、D-二聚体、脂蛋白相关磷脂酶A2、髓过氧化物酶或生长刺激表达基因2蛋白；
可选的，所述肿瘤相关标志物相关抗原包括：胃泌素释放肽前体、糖类抗原、细胞角质蛋白19、附睾蛋白4、甲胎蛋白、癌胚抗原、前列腺特异性抗原、鳞状细胞癌抗原或人前列腺特异性基因1。
上述制备方法制备得到的标记复合物。
上述标记复合物在免疫检测或制备免疫检测产品中的应用。
一种免疫检测试剂盒，包括上述标记复合物。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明提供的标记复合物的制备方法，是先对目标蛋白实行预处理，即35-60℃热处理0.5-45天后，将标记物与预处理过的目标蛋白进行偶联，从而得到标记复合物，该制备方法显著改善标记复合物的稳定性。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为实施例5中预处理37℃ 2-45天工艺得到的标记复合物在37℃加速6天后的稳定性改变情况；
图2为实施例5中预处理45℃ 1-30天工艺得到的标记复合物在37℃加速6天后的稳定性改变情况；
图3为实施例5中预处理56℃ 0.5-10天工艺得到的标记复合物在37℃加速6天后的稳定性改变情况。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。
除非另有说明，本文中所用的专业与科学术语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法或材料也可应用于本发明中。
本发明提供标记复合物制备方法，是先对目标蛋白实行预处理，即35-60℃热处理0.5-45天后，将标记物与预处理过的目标蛋白进行偶联，从而得到标记复合物。发明人意外发现，如果先将目标蛋白在35-60℃处理0.5-45天，可以显著改善标记复合物的稳定性。在一些实施方式中，预处理条件例如为37-56℃处理0.5-45天；例如为35-40℃热处理2-45天；例如为40-50℃处理1-30天，不包括40℃；例如为50-60℃处理0.5-10天，不包括50℃；例如为37℃处理2-45天；例如为45℃处理1-30天；例如为56℃处理0.5-10天。需要说明的是，预处理的温度可以但不限于为35℃、37℃、40℃、42℃、45℃、48℃、50℃、52℃、54℃、56℃、58℃或60℃；预处理的时间可以但不限于为0.5天、0.8天、1天、1.5天、2天、5天、10天、15天、20天、25天、30天、35天、40天或45天。此外，本申请中标记物与目标蛋白的偶联工艺可以为本领域常用的方法，标记物和目标蛋白也可以为本领域常用的标记物和蛋白，在此不作特定的限定，不同之处仅在于偶联前对目标蛋白进行预处理。具体地，标记物可以为鲁米诺、碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶、吖啶酯、吖啶磺酰胺、三联吡啶钌或以上任意一种标记物的衍生物等等；目标蛋白可以为抗原或抗体；标记物与目标蛋白之间可通过直接标记或间接标记形式实现偶联。
在优选地实施方式中，为了进一步提高标记复合物的稳定性，可以在上述方法的将标记物与预处理过的目标蛋白进行偶联后，再添加热处理的步骤。标记物与预处理过的目标蛋白偶联得到的标记物-目标蛋白复合物在35-60℃热处理0.5-30天，最终得到标记复合物。其中，热处理的条件可以为37-56℃热处理0.5-30天；可以为35-40℃热处理2-30天；可以为40-50℃热处理1-20天，不包括40℃；可以为50-60℃热处理0.5-10天，不包括50℃；可以为37℃热处理2-30天；可以为45℃热处理1-20天；也可以为56℃处理0.5-10天。需要说明的是，热处理的温度可以但不限于为35℃、37℃、40℃、42℃、45℃、48℃、50℃、52℃、54℃、56℃、58℃或60℃；热处理的时间可以但不限于为0.5天、0.8天、1天、1.5天、2天、5天、10天、15天、20天、25天或30天。
本发明提供的标记复合物的制备方法既适用于直接标记的标记复合物，也适用于间接标记的标记复合物。在一些实施方式中，标记复合物中标记物与目标蛋白直接偶联，获得标记复合物的结构为标记物-目标蛋白。
在一些实施方式中，标记复合物中标记物与目标蛋白可以通过间接标记的形式实现偶联，例如将标记物与预处理过的目标蛋白通过桥连蛋白进行偶联，获得标记复合物的结构为标记物-桥连蛋白-目标蛋白。在一些实施方式中，桥连蛋白可以为鸡卵清蛋白、明胶、钥孔血蓝蛋白、牛血清蛋白、人血清白蛋白、兔血清白蛋白、多聚赖氨酸或人工合成的无功能线性多肽。
在一些实施方式中，标记复合物中标记物与目标蛋白可以通过间接标记的形式实现偶联，例如将标记物与预处理过的目标蛋白通过特异性结合对进行偶联，特异性结合对例如生物素及其衍生物和抗生物素蛋白及其衍生物，非目标蛋白的抗原和抗体，碳水化合物和凝集素，效应物和受体分子，或者，地高辛和地高辛配基等，但不限于此。在一些实施方式中，例如利用生物素-亲和素进行间接标记，获得标记复合物的结构为标记物-亲和素-生物素-目标蛋白；在一些实施方式中，例如利用非目标蛋白的抗原和抗体，例如GST和抗GST抗体、TRX和TRX抗体、CKS和CKS抗体等；获得例如标记复合物的结构为标记物-GST抗体-GST-目标蛋白。需要说明的是，直接标记和间接标记工艺采用的偶联方法可采用本领域常规方法，例如过碘酸钠法、二甲基甲酰胺法、碳二亚胺(EDC)和羟基琥珀酰亚胺(NHS)缩合法等，不限于此，在此不作特定限定。
在一些实施方式中，标记物包括鲁米诺、碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶、吖啶酯、吖啶磺酰胺、三联吡啶钌或以上任意一种标记物的衍生物。鲁米诺的衍生物例如可以为异鲁米诺、N-(4-氨基丁基)-N-乙基异鲁米诺等等。
在一些实施方式中，目标蛋白包括抗原或抗体。优选地，抗原或抗体选自感染性疾病相关抗原或抗体、心肌标志物相关抗原或抗体、或肿瘤相关标志物相关抗原或抗体。
可选的，感染性疾病包括病毒感染疾病、细菌感染疾病、真菌感染疾病、衣原体感染疾病、支原体感染疾病或寄生虫感染疾病。
可选的，感染性疾病相关抗原包括艾滋病毒抗原、甲型肝炎病毒抗原、乙型肝炎病毒抗原、丙型肝炎病毒抗原、丁型肝炎病毒抗原、戊型肝炎病毒抗原、庚型肝炎病毒抗原、风疹病毒抗原、人巨细胞病毒抗原、单纯疱疹病毒1型抗原、单纯疱疹病毒2型抗原、狂犬病毒抗原、人类T淋巴细胞白血病病毒抗原、登革热病毒抗原、人乳头瘤病毒抗原、西尼罗河病毒抗原、森林脑炎病毒抗原、麻疹病毒抗原、流感病毒抗原、副流感病毒抗原、水痘病毒抗原、艾柯病毒型抗原、柯萨奇病毒抗原、乙型脑炎病毒抗原、柯萨奇病毒抗原、EB病毒抗原、腮腺炎病毒抗原、梅毒螺旋体抗原、包柔氏螺旋体抗原、沙眼衣原体抗原、肺炎衣原体抗原、鹦鹉热衣原体抗原、解脲脲原体抗原、肺炎支原体抗原、结核分枝杆菌抗原、幽门螺旋杆菌抗原、淋球菌抗原、疟原虫抗原、枯氏锥虫抗原或弓形虫抗原。
可选的，心肌标志物相关抗原包括肌钙蛋白、肌红蛋白、肌酸激酶同工酶、N末端脑钠肽前体、心脏型脂肪酸结合蛋白、D-二聚体、脂蛋白相关磷脂酶A2、髓过氧化物酶或生长刺激表达基因2蛋白。
可选的，肿瘤相关标志物相关抗原包括：胃泌素释放肽前体、糖类抗原、细胞角质蛋白19、附睾蛋白4、甲胎蛋白、癌胚抗原、前列腺特异性抗原、鳞状细胞癌抗原或人前列腺特异性基因1。
本发明还保护上述制备方法制备得到的标记复合物。该标记复合物的稳定性较现有技术均得到了显著的改善，从而延长了免疫检测试剂的有效期，扩大了其应用范围。该标记复合物可应用于各种场景的免疫检测或制备免疫检测产品。例如，化学发光免疫检测试剂盒、酶联免疫检测试剂盒。
下面通过具体的实施例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例仅仅是用于更详细地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。
实施例1 TP(梅毒螺旋体)蛋白直接标记AE(吖啶酯)
方案1(简称1#，下同)
1)将TP-Ag(梅毒抗原)稀释至1mg/ml；
2)将TP-Ag 1mg/ml×1.0ml置于透析液(1×PBS，pH7.2)透析过夜；
3)将透析的抗原取出置于离心管内，加入溶解好的16.7μL AE，室温混合旋转15min；
4)再加入3.34μL的甘氨酸终止反应；
5)将上述步骤4的混合液置于透析液(1×PBS，pH7.2)透析过夜；
6)透析完成后加入对半体积的甘油，混匀后于-20℃保存。
方案2(简称2#，下同)
1)将TP-Ag稀释至1mg/ml，放入37℃烘箱中，放置3天；
2)将TP-Ag 1mg/ml×1.0置于透析液(1×PBS pH7.2)透析过夜；
3)将透析的抗原取出置于离心管内，加入溶解好的16.7μL AE，室温混合旋转15min；
4)再加入3.34μL的甘氨酸终止反应；
5)将上述步骤4的混合液置于透析液(1×PBS pH7.2)透析过夜；
6)透析完成后加入对半体积的甘油，混匀后于-20℃保存。
方案3(简称3#，下同)
1)将TP-Ag稀释至1mg/ml；
2)将TP-Ag 1mg/ml×1.0置于透析液(1*PBS pH7.2)透析过夜；
3)将透析的抗原取出置于离心管内，加入溶解好的16.7μL AE，室温混合旋转15min；
4)再加入3.34μL的甘氨酸终止反应；
5)将上述步骤4的混合液置于透析液(1×PBS pH7.2)透析过夜；
6)将上述步骤5的标记物取出，于37℃放置3天；
7)将考核完成的标记物加入对半体积的甘油，混匀后于-20℃保存。
方案4(简称4#，下同)
1)将TP-Ag稀释至1mg/ml，放入37℃烘箱中，放置3天；
2)将TP-Ag 1mg/ml×1.0置于透析液(1*PBS pH7.2)透析过夜；
3)将透析的抗原取出置于离心管内，加入溶解好的16.7μL AE，室温混合旋转15min；
4)再加入3.34μL的甘氨酸终止反应；
5)将上述步骤4的混合液置于透析液(1×PBS pH7.2)透析过夜；
6)将上述步骤5的标记物取出，于37℃放置3天；
7)将考核完成的标记物加入对半体积的甘油，混匀后于-20℃保存。
将以上方案制备的吖啶酯-TP抗原标记复合物同时取出，分别稀释至0.1μg/ml，分装至EP管中，每管4mL。同一吖啶酯-TP抗原标记复合物分别在4℃存放6天、37℃3天、37℃6天进行热稳定性加速考核测试，以现配为对照，测试检测活性。其中，阳性质控为两批含梅毒抗体的灭活标本，利用双抗原夹心法进行检测，采用生物素标记TP抗原1(简称TP-Ag1-Bio)，吖啶酯标记TP抗原2(简称TP-Ag2-AE，即上述方案标记的抗原)，用链霉亲和素标记磁珠，反应过程为将标本、TP-Ag1-Bio和TP-Ag2-AE于发光板孔内37℃混合反应一段时间，此时孔内会形成双抗原夹心体系，然后在孔内加入链霉亲和素磁珠，37℃反应一段时间，此时双抗原夹心体系生物素端与链霉亲和素结合，后用磁板吸附，用1×PBST溶液洗涤磁珠，之后加入AE激发液，用ThermoFisher的化学发光分析仪读取发光值。
具体结果如下，直接标记工艺中，吖啶酯-TP抗原标记复合物稳定性结果为：4#＞2#＞3#＞1#。
Figure BDA0002654622880000101
实施例2TP蛋白间接标记AE
方案1
1)将TP-Ag稀释至1mg/ml；
2)将TP-Ag 1mg/ml×1.0ml置于透析液(pH9.51的20mM CB)透析过夜；
3)将BSA用高碘酸钠法活化后，按质量比1:1与抗原在4℃偶联28h，然后用NaBH4终止后取出；
4)将透析的抗原取出置于离心管内，加入溶解好的16.7μL AE，室温混合旋转15min；
5)再加入3.34μL的甘氨酸终止反应；
6)将上述步骤5的混合液置于透析液(1×PBS pH7.2)透析过夜；
7)透析完成后加入对半体积的甘油，混匀后于-20℃保存。
方案2
1)将TP-Ag稀释至1mg/ml，放入54℃烘箱中，放置18h；
2)将TP-Ag 1mg/ml×1.0置于透析液(pH9.51的20mM CB)透析过夜；
3)将BSA用高碘酸钠法活化后，按质量比1:1与抗原在4℃偶联28h，然后用NaBH4终止后取出；
4)将透析的抗原取出置于离心管内，加入溶解好的16.7μL AE，室温混合旋转15min；
5)再加入3.34μL的甘氨酸终止反应；
6)将上述步骤5的混合液置于透析液(1×PBS pH7.2)透析过夜；
7)透析完成后加入对半体积的甘油，混匀后于-20℃保存。
方案3
1)将TP-Ag稀释至1mg/ml；
2)将TP-Ag 1mg/ml×1.0置于透析液(pH9.51的20mM CB)透析过夜；
3)将BSA用高碘酸钠法活化后，按质量比1:1与抗原在4℃偶联28h，然后用NaBH4终止后取出；
4)将透析的抗原取出置于离心管内，加入溶解好的16.7μL AE，室温混合旋转15min；
5)再加入3.34μL的甘氨酸终止反应；
6)将上述步骤5的混合液置于透析液(1×PBS pH7.2)透析过夜；
7)将上述步骤6的标记物取出，于54℃放置18h；
8)将考核完成的标记物加入对半体积的甘油，混匀后于-20℃保存。
方案4
1)将TP-Ag稀释至1mg/ml，放入54℃烘箱中，放置18h；
2)将TP-Ag 1mg/ml×1.0置于透析液(pH9.51的20mM CB)透析过夜；
3)将BSA用高碘酸钠法活化后，按质量比1:1与抗原在4℃偶联28h，然后用NaBH4终止后取出；
4)将透析的抗原取出置于离心管内，加入溶解好的16.7μL AE，室温混合旋转15min；
5)再加入3.34μL的甘氨酸终止反应；
6)将上述步骤5的混合液置于透析液(1×PBS pH7.2)透析过夜；
7)将上述步骤6的标记物取出，于54℃放置18h；
8)将考核完成的标记物加入对半体积的甘油，混匀后于-20℃保存。
参照实施例1中的评价方法对以上4种标记复合物稳定性进行检测，结果如下表所示：
Figure BDA0002654622880000121
Figure BDA0002654622880000131
实施例3HIV(艾滋病)蛋白标记AE
方案1
1)将HIV-Ag(艾滋抗原)稀释至1mg/ml；
2)将HIV-Ag 1mg/ml×1.0置于透析液(1×PBS pH7.2)透析过夜；
3)将透析的抗原取出置于离心管内，加入溶解好的16.7μL AE，室温混合旋转15min；
4)再加入3.34μL的甘氨酸终止反应；
5)将上述步骤4的混合液置于透析液(1×PBS pH7.2)透析过夜；
6)透析完成后加入对半体积的甘油，混匀后于-20℃保存。
方案2
1)将HIV-Ag稀释至1mg/ml，放入45℃烘箱中，放置1.5天；
2)将HIV-Ag 1mg/ml×1.0置于透析液(1×PBS pH7.2)透析过夜；
3)将透析的抗原取出置于离心管内，加入溶解好的16.7μL AE，室温混合旋转15min；
4)再加入3.34μL的甘氨酸终止反应；
5)将上述步骤4的混合液置于透析液(1×PBS pH7.2)透析过夜；
6)透析完成后加入对半体积的甘油，混匀后于-20℃保存。
方案3
1)将HIV-Ag稀释至1mg/ml；
2)将HIV-Ag 1mg/ml×1.0置于透析液(1×PBS pH7.2)透析过夜；
3)将透析的抗原取出置于离心管内，加入溶解好的16.7μL AE，室温混合旋转15min；
4)再加入3.34μL的甘氨酸终止反应；
5)将上述步骤4的混合液置于透析液(1×PBS pH7.2)透析过夜；
6)将上述步骤5的标记物取出，于50℃放置1天；
7)将考核完成的标记物加入对半体积的甘油，混匀后于-20℃保存。
方案4
1)将HIV-Ag稀释至1mg/ml，放入45℃烘箱中，放置1.5天；
2)将HIV-Ag 1mg/ml×1.0置于透析液(1×PBS pH7.2)透析过夜；
3)将透析的抗原取出置于离心管内，加入溶解好的16.7μL AE，室温混合旋转15min；
4)再加入3.34μL的甘氨酸终止反应；
5)将上述步骤4的混合液置于透析液(1×PBS pH7.2)透析过夜；
6)将上述步骤5的标记物取出，于50℃放置1天；
7)将考核完成的标记物加入对半体积的甘油，混匀后于-20℃保存。
参照实施例1中的评价方法对以上4种标记复合物稳定性进行检测，其中，阳性质控为两批含艾滋抗体的灭活标本，利用双抗原夹心法进行检测，采用生物素标记HIV抗原1(简称HIV-Ag1-Bio)，吖啶酯标记HIV抗原2(简称HIV-Ag2-AE，即上述方案标记的抗原)，用链霉亲和素标记磁珠，反应过程为将标本、HIV-Ag1-Bio和HIV-Ag2-AE于发光板孔内37℃混合反应一段时间，此时孔内会形成双抗原夹心体系，然后在孔内加入链霉亲和素磁珠，37℃反应一段时间，此时双抗原夹心体系生物素端与链霉亲和素结合，后用磁板吸附，用1×PBST溶液洗涤磁珠，之后加入AE激发液，用ThermoFisher的化学发光分析仪读取发光值。
结果如下表所示：
Figure BDA0002654622880000151
Figure BDA0002654622880000161
实施例4HCV(丙肝)蛋白标记HRP
方案1
1)将HCV-Ag(丙肝抗原)稀释至1mg/ml；
2)将HCV-Ag用透析液(pH 9.51碳酸盐缓冲液)透析过夜；
3)称取10mg HRP溶解于1ml超纯水中，再缓慢滴加1ml超纯水新鲜配制的5mg/mlNaIO4；
4)室温下避光轻柔搅拌40分钟后加入20％乙二醇溶液0.05ml，室温下避光搅拌40分钟；
5)加入透析后的HCV-Ag；
6)次日，向混合物中滴加0.1ml的4mg/ml NaBH4，混匀，4℃静置2小时；
7)PBS缓冲液(150mM，pH7.4)中4℃过夜透析；
8)透析完成后加入对半体积的甘油，混匀后于-20℃保存。
方案2
1)将HCV-Ag稀释至1mg/ml；放入40℃烘箱中，放置2天；
2)将HCV-Ag用透析液(pH 9.51碳酸盐缓冲液)透析过夜；
3)称取10mg HRP溶解于1ml超纯水中，再缓慢滴加1ml超纯水新鲜配制的5mg/mlNaIO4；
4)室温下避光轻柔搅拌40分钟后加入20％乙二醇溶液0.05ml，室温下避光搅拌40分钟；
5)加入透析后的HCV-Ag；
6)次日，向混合物中滴加0.1ml的4mg/ml NaBH4，混匀，4℃静置2小时；
7)PBS缓冲液(150mM，pH7.4)中4℃过夜透析；
8)透析完成后加入对半体积的甘油，混匀后于-20℃保存。
方案3
1)将HCV-Ag稀释至1mg/ml；
2)将HCV-Ag用透析液(pH 9.51碳酸盐缓冲液)透析过夜；
3)称取10mg HRP溶解于1ml超纯水中，再缓慢滴加1ml超纯水新鲜配制的5mg/mlNaIO4；
4)室温下避光轻柔搅拌40分钟后加入20％乙二醇溶液0.05ml，室温下避光搅拌40分钟；
5)加入透析后的HCV-Ag；
6)次日，向混合物中滴加0.1ml的4mg/ml NaBH4，混匀，4℃静置2小时；
7)PBS缓冲液(150mM，pH7.4)中4℃过夜透析；
8)将上述步骤7的标记物取出，于56℃放置20h
9)考核后的标记物加入对半体积的甘油，混匀后于-20℃保存。
方案4
1)将HCV-Ag稀释至1mg/ml，放入40℃烘箱中，放置2天；
2)将HCV-Ag用透析液(pH 9.51碳酸盐缓冲液)透析过夜；
3)称取10mg HRP溶解于1ml超纯水中，再缓慢滴加1ml超纯水新鲜配制的5mg/mlNaIO4；
4)室温下避光轻柔搅拌40分钟后加入20％乙二醇溶液0.05ml，室温下避光搅拌40分钟；
5)加入透析后的HCV-Ag；
6)次日，向混合物中滴加0.1ml的4mg/ml NaBH4，混匀，4℃静置2小时；
7)PBS缓冲液(150mM，pH7.4)中4℃过夜透析；
8)将上述步骤7的标记物取出，于56℃放置20h；
9)考核后的标记物加入对半体积的甘油，混匀后于-20℃保存。
参照实施例1中的评价方法对稳定性进行检测，其中，阳性质控为两批含丙肝抗体的灭活标本，利用双抗原夹心法进行检测，采用生物素标记HCV抗原1(简称HCV-Ag1-Bio)，HRP标记TP抗原2(简称HCV-Ag2-HRP，即上述方案标记的抗原)，用链霉亲和素标记磁珠，反应过程为将标本、HCV-Ag1-Bio和HCV-Ag2-HRP于发光板孔内37℃混合反应一段时间，此时孔内会形成双抗原夹心体系，然后在孔内加入链霉亲和素磁珠，37℃反应一段时间，此时双抗原夹心体系生物素端与链霉亲和素结合，后用磁板吸附，用1×PBST溶液洗涤磁珠，之后加入HRP化学发光底物，用ThermoFisher的化学发光分析仪读取发光值。
结果如下表所示：
Figure BDA0002654622880000181
Figure BDA0002654622880000191
实施例5标记前热处理时长对标记复合物稳定性的影响
以实施例2中方案2的实验内容为基础，检测不同温度(37℃、45℃、56℃)、不同时长(37℃2-45天，45℃1-30天，56℃0.5-10天)的标记前热处理后得到的标记复合物，分别在37℃保存6天后，与现配对照组的稳定性对比改变情况，结果如下图1、图2和图3所示。
实施例6标记后热处理时长对标记复合物稳定性的影响
以实施例2中方案4的实验内容为基础，检测不同温度(37℃、45℃、56℃)、不同时长(37℃2-30天，45℃1-20天，56℃0.5-10天)的标记后热处理后得到的标记复合物，分别在37℃保存6天后，与现配对照组的稳定性对比改变情况，结果如下表所示：
Figure BDA0002654622880000201
尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。

Claims (10)

1.一种标记复合物的制备方法，其特征在于，将标记物与预处理过的目标蛋白进行偶联，得到标记复合物；所述预处理包括：35-60℃热处理0.5-45天。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述预处理包括如下(a)-(g)中任一种方案：(a)37-56℃热处理0.5-45天；(b)35-40℃热处理2-45天；(c)40-50℃处理1-30天，不包括40℃；(d)50-60℃处理0.5-10天，不包括50℃；(e)37℃处理2-45天；(f)45℃处理1-30天；(g)56℃处理0.5-10天；
可选的，将标记物与预处理过的目标蛋白进行偶联后，还包括热处理的步骤，得到标记复合物；
所述热处理包括：35-60℃热处理0.5-30天；
可选的，所述热处理包括如下(A)-(G)中任一种方案：(A)37-56℃热处理0.5-30天；(B)35-40℃热处理2-30天；(C)40-50℃处理1-20天，不包括40℃；(D)50-60℃处理0.5-10天，不包括50℃；(E)37℃处理2-30天；(F)45℃处理1-20天；(G)56℃处理0.5-10天。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，将标记物与预处理过的目标蛋白通过桥连蛋白进行偶联，得到标记复合物；
可选的，桥连蛋白包括鸡卵清蛋白、明胶、钥孔血蓝蛋白、牛血清蛋白、人血清白蛋白、兔血清白蛋白、多聚赖氨酸或人工合成的无功能线性多肽；
可选的，将标记物与预处理过的目标蛋白通过特异性结合对进行偶联，得到标记复合物；
可选的，特异性结合对包括生物素及其衍生物和抗生物素蛋白及其衍生物，非目标蛋白的抗原和抗体，碳水化合物和凝集素，效应物和受体分子，或者，地高辛和地高辛配基。
4.根据权利要求1-3任一项所述的制备方法，其特征在于，标记物包括鲁米诺、碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶、吖啶酯、吖啶磺酰胺、三联吡啶钌或以上任一种标记物的衍生物。
5.根据权利要求1-3任一项所述的制备方法，其特征在于，目标蛋白包括抗原或抗体。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，抗原或抗体选自感染性疾病相关抗原或抗体、心肌标志物相关抗原或抗体、或肿瘤相关标志物相关抗原或抗体。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，感染性疾病相关抗原包括艾滋病毒抗原、甲型肝炎病毒抗原、乙型肝炎病毒抗原、丙型肝炎病毒抗原、丁型肝炎病毒抗原、戊型肝炎病毒抗原、庚型肝炎病毒抗原、风疹病毒抗原、人巨细胞病毒抗原、单纯疱疹病毒1型抗原、单纯疱疹病毒2型抗原、狂犬病毒抗原、人类T淋巴细胞白血病病毒抗原、登革热病毒抗原、人乳头瘤病毒抗原、西尼罗河病毒抗原、森林脑炎病毒抗原、麻疹病毒抗原、流感病毒抗原、副流感病毒抗原、水痘病毒抗原、艾柯病毒型抗原、柯萨奇病毒抗原、乙型脑炎病毒抗原、柯萨奇病毒抗原、EB病毒抗原、腮腺炎病毒抗原、梅毒螺旋体抗原、包柔氏螺旋体抗原、沙眼衣原体抗原、肺炎衣原体抗原、鹦鹉热衣原体抗原、解脲脲原体抗原、肺炎支原体抗原、结核分枝杆菌抗原、幽门螺旋杆菌抗原、淋球菌抗原、疟原虫抗原、枯氏锥虫抗原或弓形虫抗原。
8.权利要求1-7任一项所述的制备方法制备得到的标记复合物。
9.权利要求8所述的标记复合物在免疫检测或制备免疫检测产品中的应用。
10.一种免疫检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求8所述的标记复合物。
CN202010892407.5A 2020-08-28 2020-08-28 标记复合物及其制备方法与应用 Active CN114113575B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010892407.5A CN114113575B (zh) 2020-08-28 2020-08-28 标记复合物及其制备方法与应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010892407.5A CN114113575B (zh) 2020-08-28 2020-08-28 标记复合物及其制备方法与应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN114113575A true CN114113575A (zh) 2022-03-01
CN114113575B CN114113575B (zh) 2023-06-02

Family

ID=80359753

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010892407.5A Active CN114113575B (zh) 2020-08-28 2020-08-28 标记复合物及其制备方法与应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114113575B (zh)

Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4581524A (en) * 1983-04-26 1986-04-08 Minnesota Mining And Manufacturing Company Flexible ferromagnetic marker for the detection of objects having markers secured thereto
US5643722A (en) * 1994-05-11 1997-07-01 Trustees Of Boston University Methods for the detection and isolation of proteins
JP2001013137A (ja) * 1999-07-02 2001-01-19 Internatl Reagents Corp 精度管理用物質及び調製法
US20030059785A1 (en) * 1994-05-11 2003-03-27 The Trustees Of Boston University Detection of markers in nascent proteins
JP3903198B2 (ja) * 1996-08-16 2007-04-11 Ａｓｐｉｏｎ株式会社 ウイルス検出方法およびウイルス検査用キット
CN102695716A (zh) * 2009-07-14 2012-09-26 独立行政法人产业技术综合研究所 肝病病情指标糖链标记物
CN103874923A (zh) * 2011-08-26 2014-06-18 阿斯图特医药公司 用于肾损伤和肾衰竭的诊断及预后的方法和组合物
CN105556289A (zh) * 2013-10-02 2016-05-04 古河电气工业株式会社 靶标物质的检测方法
CN108700584A (zh) * 2017-01-20 2018-10-23 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 标记复合物及其制备方法、试剂盒、应用和检测系统

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4581524A (en) * 1983-04-26 1986-04-08 Minnesota Mining And Manufacturing Company Flexible ferromagnetic marker for the detection of objects having markers secured thereto
US5643722A (en) * 1994-05-11 1997-07-01 Trustees Of Boston University Methods for the detection and isolation of proteins
US20030059785A1 (en) * 1994-05-11 2003-03-27 The Trustees Of Boston University Detection of markers in nascent proteins
JP3903198B2 (ja) * 1996-08-16 2007-04-11 Ａｓｐｉｏｎ株式会社 ウイルス検出方法およびウイルス検査用キット
JP2001013137A (ja) * 1999-07-02 2001-01-19 Internatl Reagents Corp 精度管理用物質及び調製法
CN102695716A (zh) * 2009-07-14 2012-09-26 独立行政法人产业技术综合研究所 肝病病情指标糖链标记物
CN103874923A (zh) * 2011-08-26 2014-06-18 阿斯图特医药公司 用于肾损伤和肾衰竭的诊断及预后的方法和组合物
CN105556289A (zh) * 2013-10-02 2016-05-04 古河电气工业株式会社 靶标物质的检测方法
CN108700584A (zh) * 2017-01-20 2018-10-23 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 标记复合物及其制备方法、试剂盒、应用和检测系统

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
于康震;卢景良;: "应用放射性标记技术鉴定单克隆抗体及其特异性抗原", 中国预防兽医学报 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN114113575B (zh) 2023-06-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP2021778B1 (en) Nonseparation assay methods
AU614294B2 (en) Process for immunochromatography with colloidal particles
AU2007249527B2 (en) Nonseparation assay methods
US6303325B1 (en) Method for detecting analytes
NL7907939A (nl) Gecombineerde heterogene specifieke bindingsproeven.
JPH0814579B2 (ja) 特異的結合性物質の測定法及び試薬
CN108333344A (zh) 高灵敏度的化学发光免疫分析试剂盒及其制备方法和应用
CN110596404A (zh) 一种il-6生物素-链霉亲和素免疫层析检测卡
CN113848330B (zh) 一种同型半胱氨酸和维生素b12的检测方法、检测试纸条及其应用
CN113419059B (zh) 用于化学发光免疫分析方法的封闭剂
CN114113575A (zh) 标记复合物及其制备方法与应用
WO2020108583A1 (zh) 一种基于桥联抗体偶联荧光微球的荧光检测器件及荧光检测方法
JPH0827284B2 (ja) 免疫学的に検出可能の物質を測定する方法および試薬
JPH07151759A (ja) 反応物を捕捉するための試薬およびその中間体並びに捕捉方法
CN113970635A (zh) 一种免疫层析试纸及其制备方法和应用
CN112924666A (zh) 固体支持物包被产物及其制备方法、应用和产品
JPH03170058A (ja) イムノアッセイ用試薬複合体
EP2281194B1 (en) Molecular assembly comprising gold and a linker for detection of biochemical entities
EP0903582B1 (en) Ligand binding surfaces
Ngo Enzyme mediated immunoassay: an overview
CN108414736B (zh) 一种利用化学发光增强子修饰的抗体检测目标物的方法
JPH0346565A (ja) 磁性体を利用した酵素免疫測定法
JPH10206427A (ja) 免疫測定法
CN117871851A (zh) 一种检测中药中噻虫嗪含量的免疫分析方法及免疫试剂盒
CA2034922A1 (en) Method for the immunological determination of ligands

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant