CN114099655A - 一种预防或治疗癌症的疫苗系统及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种预防或治疗癌症的疫苗系统，包括递送粒子及其负载的细胞组分，递送粒子为纳米粒子或微米粒子，细胞组分为来源于一种或一种以上癌细胞和/或肿瘤组织的全细胞组分中的水溶性组分或水溶性组分形成的混合物，或来源于一种或一种以上癌细胞和/或肿瘤组织的全细胞组分中的非水溶性组分或非水溶性组分形成的混合物，本发明的疫苗系统可用于癌症的预防和治疗。

Description

一种预防或治疗癌症的疫苗系统及其应用
技术领域
本发明涉及免疫治疗技术领域，尤其涉及一种预防或治疗癌症的疫苗系统及其应用。
背景技术
免疫是指机体免疫系统识别自身与异己物质，并通过免疫应答排除抗原性异物，以维持机体生理平衡的功能。近些年来免疫技术发展很快，尤其是癌症的免疫治疗领域。癌症疫苗在癌症免疫治疗和预防的重要方法之一。开发癌症疫苗的基础是选择合适的癌症抗原来激活人体免疫系统对异常突变的癌细胞的识别，而癌症细胞或者癌症肿瘤组织本身是最好的癌症抗原的来源。如王丹丹等(MUC-1癌症疫苗治疗非小细胞肺癌的研究进展[J].癌症进展,2016,14(5):419-422.DOI:10.11877/j.issn.1672-1535.2016.14.05.06.)对于靶向黏蛋白-1(MUC-1)抗原表位的疫苗进行临床研究，采用该疫苗治疗非小细胞肺癌(NSCLC)。还有科学家曾采用新技术从癌症病人的肿瘤细胞分析鉴别癌症特异性的或癌症相关的抗原多肽，然后体外人工合成以制备癌症疫苗用于癌症的治疗。该技术在癌症病人的临床试验中表现出了一定的疗效，但是该类方法费时费力，花费巨大。而且所采用的方法都是从肿瘤组织中的一小部分癌细胞中提取分析癌细胞与正常细胞的差异进而寻找有差异的多肽，但是肿瘤组织中不同部位的癌细胞和各个癌细胞异质性都很大，因而该类方法和技术只能找到有限的几种的抗原多肽，从而极大的限制了该类方法的应用。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供了一种负载一种或多种癌症细胞和/或肿瘤组织的全细胞组分中的水溶性组分或非水溶性组分的微米或纳米疫苗系统，简化了癌症疫苗的制备过程，且仍具有较优的治疗效果。
本发明的一种预防或治疗癌症的疫苗系统，包括递送粒子及其负载的细胞组分，所述递送粒子为纳米粒子或微米粒子，所述细胞组分为来源于一种或一种以上癌细胞和/或肿瘤组织的全细胞组分中的水溶性组分或水溶性组分形成的混合物，或来源于一种或一种以上癌细胞和/或肿瘤组织的全细胞组分中的非水溶性组分或非水溶性组分形成的混合物。优选地，在表面修饰有靶头的递送粒子内部或表面负载来源于一种或一种以上癌细胞和/或肿瘤组织的全细胞组分中的水溶性组分或水溶性组分形成的混合物，或来源于一种或一种以上癌细胞和/或肿瘤组织的全细胞组分中的非水溶性组分或非水溶性组分形成的混合物。
目前已有方法将癌细胞全细胞组分作为疫苗用于预防和治疗癌症，但同时负载水溶性组分和非水溶性组分的工作量巨大、步骤繁琐，因此本发明将癌细胞或癌症组织的全细胞组分中的水溶性组分或者非水溶性组分作为疫苗用于预防和治疗癌症的疫苗的来源是很有前景的方法。更重要的是，本发明中，表面含有靶头的递送粒子负载水溶性组分所组成的疫苗系统用于预防或治疗癌症时，达到的效果优于负载水溶性组分和非水溶性组分的递送粒子，大大优化了水溶性组分的治疗效果，同时更适合于临床施用，与同时负载水溶性和非水溶性组分相比，治疗时疼痛感明显减少，且操作更加便捷。
进一步地，靶头为可靶向特定细胞的小分子化合物、抗体、多肽、糖类、脂类、核酸。本发明的实施例中列举了甘露糖和DEC205抗体作为靶头构成的疫苗系统，在实际应用中还可以采用包括但不限于CD32抗体、CD11c抗体、CD103抗体、CD44抗体、CD40抗体。
进一步地，靶头靶向树突状细胞、巨噬细胞、B细胞、T细胞、NK细胞、NKT细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞或嗜碱性粒细胞，这些细胞大多存在于淋巴结、胸腺、脾脏或骨髓中。
进一步地，将含有与癌症相关抗原的细胞或组织在-20℃～-273℃下冷冻，加水或不含增溶剂的水溶液后反复冻融裂解细胞，上清液为水溶性组分，沉淀中经增溶后可溶的部分为非水溶性组分。
进一步地，增溶所用的增溶剂选自尿素、盐酸胍、脱氧胆酸钠、十二烷基硫酸钠(SDS)、甘油、蛋白质降解酶、白蛋白、卵磷脂、0.1-2000mg/mL的无机盐、Triton、吐温、醋酸、胆固醇、氨基酸、糖苷、胆碱、BrijTM-35、八乙二醇单月桂醚(Octaethylene glycolmonododecyl ether)、3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐(CHAPS)、洋地黄皂苷(Digitonin)、月桂基二甲胺氧化物(lauryldimethylamine oxide)、
Figure BDA0003357813830000031
CA-630、二甲基亚砜(DMSO)、乙腈、乙醇、甲醇、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、异丙醇、二氯甲烷、丙醇和乙酸乙酯中的一种或多种。当然，本领域技术人员可以采用其他增溶剂或其他手段使非水溶性组分变为可溶。
进一步地，递送粒子的内部或表面负载免疫增强剂，包括但不限于微生物来源的免疫增强剂、人或动物免疫系统的产物、固有免疫激动剂、适应性免疫激动剂、化学合成药物、真菌多糖类、中药及其他类中的至少一类；所述免疫增强佐剂包括但不限于模式识别受体激动剂、卡介苗(BCG)、卡介苗细胞壁骨架、卡介苗甲醇提取残余物、卡介苗胞壁酰二肽、草分枝杆菌、多抗甲素、矿物油、病毒样颗粒、免疫增强的再造流感病毒小体、霍乱肠毒素、皂苷及其衍生物、Resiquimod、胸腺素、新生牛肝活性肽、米喹莫特、多糖、姜黄素、免疫佐剂CpG、免疫佐剂poly(I:C)、mRNA、免疫佐剂polyICLC、短小棒状杆菌苗、溶血性链球菌制剂、辅酶Q10、左旋咪唑、聚胞苷酸、白细胞介素、干扰素、聚肌苷酸、聚腺苷酸、明矾、锰佐剂、锌佐剂、钙佐剂、硅佐剂、羊毛脂、植物油、内毒素、脂质体佐剂、GM-CSF、MF59、双链RNA、双链DNA、铝佐剂、CAF01、人参、黄芪的有效成分中的至少一种。
进一步地，水溶性组分或水溶性组分形成的混合物、非水溶性组分或非水溶性组分形成的混合物负载于递送粒子的内部和/或表面。
进一步地，递送粒子由有机合成高分子材料、天然高分子材料或无机材料制备得到。有机合成高分子材料为聚乳酸-羟基乙酸共聚物PLGA、聚乳酸PLA、聚乙醇酸PGA、聚乙二醇PEG、聚己内酯PCL、泊洛沙姆Poloxamer、聚乙烯醇PVA、聚乙烯吡咯烷酮PVP、聚醚酰亚胺PEI、聚三亚甲基碳酸酯PTMC、聚酸酐、聚对二氧六环酮PDON、聚对二氧环己酮PPDO、聚甲基丙烯酸甲酯PMMA、聚氨基酸、合成多肽或合成脂质；天然高分子材料为卵磷脂、胆固醇、海藻酸钠、白蛋白、胶原蛋白、明胶、细胞膜(包括全细胞膜组分或部分细胞膜组分)、外泌体、多肽、淀粉或糖类；无机材料为三氧化二铁、四氧化三铁、碳酸钙或磷酸钙等无明显生物毒性的材料。
进一步地，递送粒子为球形、椭球形、桶形、多角形、棒状、片状、线形、蠕虫形、方形、三角形、蝶形或圆盘形。
进一步地，纳米级粒子的粒径为1nm-1000nm，微米级粒子的粒径为1μm-1000μm。此粒径范围保证疫苗能被抗原提呈细胞吞噬，而为了提高吞噬效率，粒径大小要在适宜的范围内，优选地，纳米级粒子粒径大小为30nm-1000nm，最优选为100nm-600nm；优选地，微米级粒子粒径大小为1μm-10μm，最优选为1μm-5μm。
进一步地，递送粒子可不带电、带负电或带正电。
进一步地，递送粒子可按照已开发的制备方法制备，包括但不仅限于溶剂挥发法、透析法、挤出法和热熔法。在本发明的一些实施例中，递送粒子采用溶剂挥发法中的复乳法制备得到，具体步骤如下：
(1)将第一预定体积的含有第一预定浓度的水相溶液加入第二预定体积的含有第二预定浓度的有机相溶液中；水相溶液为含有癌细胞或肿瘤细胞裂解液的溶液(含有或不含有免疫增强剂)，裂解液中含有水溶性组分或溶于增溶剂中的原非水溶性组分；有机相溶液为有机合成高分子材料、天然高分子材料或无机材料溶解于有机溶剂中得到的溶液；
(2)将步骤(1)得到的混合液进行纳米化或微米化；
(3)将步骤(2)得到的混合物加入第三预定体积的含有第三预定浓度乳化剂水溶液中并进行纳米化或微米化；
(4)将步骤(3)得到的液体加入第四预定体积的第四预定浓度的乳化剂水溶液中，并进行搅拌直至满足预定搅拌条件；
(5)将步骤(4)得到的混合液离心或超滤后，取沉淀物或超滤产物并与水溶性组分或者溶于增溶剂中的原非水溶性组分混合后即得纳米疫苗或微米疫苗。
或在步骤(1)-(4)之后进行以下步骤S1-S3：
S1、在步骤(5)离心后，将沉淀物重悬于第五预定浓度的含有冻干保护剂的水溶液中或者PBS(或生理盐水)中；
S2、将S1得到的混悬液进行冷冻干燥处理后，将冻干物质备用；
S3、将S1中得到的混悬液或S2得到的冻干物质，与水溶性组分或者溶于增溶剂的原非水溶性组分混合后即得纳米疫苗或微米疫苗。
其中，
在步骤(1)中，第一预定浓度要求蛋白质多肽浓度大于0.01ng/mL，优选1mg/mL-100mg/mL，因为当蛋白质多肽浓度大于0.01ng/mL时，才能负载足够癌症抗原以激活相关免疫反应。免疫佐剂在初始水相中的浓度为大于0.001pg/mL，优选0.01mg/mL-20mg/mL。
在步骤(1)中，有机溶剂可选用DMSO、乙腈、乙醇、氯仿、甲醇、DMF、异丙醇、二氯甲烷、丙醇、乙酸乙酯等，优选二氯甲烷。
在步骤(1)中，第二预定浓度为0.5mg/mL-5000mg/mL，优选为100mg/mL。有机合成高分子材料优选为PLGA，其具有一定的免疫调节功能，适合作为疫苗制备时的辅料。
在步骤(1)中，第一预定体积和第二预定体积之比为1:1.1-5000，优选为1:10。
在步骤(2)或(3)中，通过超声、搅拌、均质处理或者微流控进行纳米化或微米化，时间、速度、压力能控制制备的递送粒子大小。超声处理时，超声功率为50W～500W，时间大于0.1秒，比如2～200秒；搅拌为机械搅拌或者磁力搅拌时，搅拌速度大于50rpm，搅拌时间大于等于1分钟，比如搅拌速度为50rpm～500rpm，搅拌时间为60～6000秒；均质处理时使用高压/超高压均质机或高剪切均质机，压力大于20psi，比如20psi～100psi，使用高剪切均质机时转速大于100rpm，比如1000rpm～5000rpm；微流控流速大于0.01mL/min，比如0.1mL/min-100mL/min。
在步骤(3)或(4)中，乳化剂水溶液为聚乙烯醇(PVA)水溶液，第三预定浓度为10-50mg/mL，优选为20mg/mL。第四预定浓度为1-20mg/mL，优选为5mg/mL。第三预定体积根据其与第二预定体积的比例进行调整。在本发明中，第二预定体积与第三预定体积之比为1:1.1-1000，优选为2:5。第三预定体积与第四预定体积之比为1:1.5-2000，优选为1:10。预定搅拌条件为直至有机溶剂挥发完成。
在步骤S1中，冻干保护剂优选为海藻糖。第五预定浓度为质量百分比1-15％，为了在后续进行冷冻干燥中不影响冻干效果。
本发明还要求保护上述疫苗系统在制备预防或治疗癌症的药物中的应用。
进一步地，疫苗系统中至少有一种癌细胞或肿瘤组织与药物预防或治疗的疾病类型相同，在用作癌症疫苗进行预防和治疗癌症时，本发明所述的疫苗可以在癌症发生前或癌症发生后或手术切除肿瘤组织后多次给药以激活免疫系统，从而延缓癌症的进展、治疗癌症或者预防癌症的复发。
借由上述方案，本发明至少具有以下优点：
本发明提供了一种利用纳米级或微米级的粒子递送细胞水溶性组分或非水溶性组分的疫苗系统，以及用于制备预防和治疗癌症的疫苗中的应用。
上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例并配合详细附图说明如后。
附图说明
为了使本发明的内容更容易被清楚的理解，下面根据本发明的具体实施例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明。
图1-9为实施例1-9中采用纳米疫苗或微米疫苗预防或治疗癌症的实验结果；其中，a,纳米疫苗或微米疫苗预防或治疗癌症时的肿瘤生长速度实验结果(n≥8)；b,纳米疫苗或微米疫苗预防或治疗其他癌症时的小鼠生存期实验结果(n≥8)，每个数据点为平均值±标准误差(mean±SEM)；a图中肿瘤生长抑制实验的显著性差异采用ANOVA法分析，b图中显著性差异采用Kaplan-Meier和log-rank test分析；**表示疫苗组与PBS空白对照组相比p＜0.005，有显著性差异；##代表疫苗组与空白纳米粒+游离裂解物组分对照组相比p＜0.005，有显著性差异；***表示疫苗组与PBS空白对照组相比p＜0.0005，有显著性差异；###代表疫苗组与空白纳米粒+细胞裂解物对照组相比p＜0.0005，有显著性差异。￥￥￥表示疫苗组与多肽纳米粒组相比p＜0.0005，有显著性差异；&代表疫苗组与无佐剂疫苗组相比p＜0.05，有显著性差异；★代表靶向疫苗(只负载水溶性组分)组与无靶头疫苗(负载水溶性和非水溶性组分)组相比p＜0.05，有显著性差异。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好地理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。
实施例1黑色素瘤肿瘤组织全细胞组分中的水溶性组分负载于纳米粒子内部和表面用于黑色素瘤的预防
本实施例以小鼠黑色素瘤为癌症模型来说明如何制备负载有黑色素瘤肿瘤组织全细胞组分中水溶性组分的纳米疫苗，并应用该疫苗预防黑色素瘤。
本实施例中，以B16F10小鼠黑色素瘤为癌症模型。首先裂解B16F10黑色素瘤肿瘤组织并收集水溶性组分。然后，以有机高分子材料PLGA为纳米粒骨架材料，以Polyinosinic-polycytidylic acid(poly(I:C))为免疫佐剂采用溶剂挥发法制备负载有肿瘤组织的水溶性组分的纳米疫苗。然后采用该纳米疫苗来预防黑色素瘤。
(1)肿瘤组织的裂解及水溶性组分的收集
在每只C57BL/6小鼠背部皮下接种1.5×105个B16-F10细胞，在肿瘤长到体积分别为约1000mm3时处死小鼠并摘取肿瘤组织。将肿瘤组织切块后研磨，通过细胞过滤网加入适量纯水并反复冻融5次，并可伴有超声以破坏裂解细胞。待细胞裂解后，将裂解物以大于1000g的转速离心5分钟并取上清液即为可溶于纯水的水溶性组分。在对照纳米疫苗中，本实施例采用负载等比例水溶性多肽B16-M20(Tubb3,FRRKAFLHWYTGEAMDEMEFTEAESNM)，B16-M24(Dag1,TAVITPPTTTTKKARVSTPKPATPSTD)和B16-M27(REGVELCPGNKYEMRRHGTTHSLVIHD)。
(2)纳米疫苗的制备
本实施例中纳米疫苗及作为对照的空白纳米粒以及负载多种多肽的纳米粒采用溶剂挥发法中的复乳法制备，所采用的纳米粒子制备材料PLGA分子量为24KDa-38KDa，所采用的免疫佐剂为poly(I:C)且poly(I:C)只分布于纳米粒子内部。制备方法如前所述。负载全细胞组分中水溶性组分的纳米疫苗平均粒径为310nm左右，纳米疫苗表面电位为-6mV左右；每1mg PLGA纳米粒子约负载170μg蛋白质或多肽组分，每1mgPLGA纳米粒内外所使用的poly(I:C)免疫佐剂共约为0.02mg。空白纳米粒粒径为250nm左右，空白纳米粒制备时分别采用含有等量poly(I:C)的纯水或8M尿素代替相对应的水溶性组分。负载多肽的纳米粒制备方法同制备负载全细胞组分的制备方法，所使用的poly(I:C)的量也相同，多肽纳米粒粒径约为305nm,每1mg PLGA纳米粒子约负载160μg多肽组分。
(3)纳米疫苗用于癌症的预防
本研究对照组分别是PBS组和空白纳米粒+游离水溶性组分组。选取6-8周的雌性C57BL/6为模型小鼠制备黑色素瘤荷瘤小鼠。
纳米疫苗组给药方案如下：在接种黑色素瘤之前第49天、第42天、第35天、第28天和第14天分别皮下注射400μL负载水溶性成分的4mg PLGA纳米疫苗。在第0天给每只小鼠背部右下方皮下接种1.5×105个B16F10细胞。
PBS对照组方案如下：在接种黑色素瘤之前第49天、42天、35天、28天和14天分别皮下注射400μL PBS。在第0天给每只小鼠背部右下方皮下接种1.5×105个B16F10细胞。空白纳米粒+细胞裂解物对照组：在接种黑色素瘤之前第49天、42天、35天、28天和14天分别皮下注射400μL空白纳米粒和与疫苗负载的等量的游离水溶性组分。空白纳米粒和游离水溶性组分注射在不同部位。在第0天给每只小鼠背部右下方皮下接种1.5×105个B16F10细胞。
多肽纳米粒组给药方案如下：在接种黑色素瘤之前第49天、第42天、第35天、第28天和第14天分别皮下注射200μL内部和表面都负载水溶性多肽成分的2mg PLGA纳米粒子。在第0天给每只小鼠背部右下方皮下接种1.5×105个B16F10细胞。
在实验中，从第3天开始每3天记录一次小鼠肿瘤体积的大小。肿瘤体积采用公式v＝0.52×a×b2计算，其中v为肿瘤体积，a为肿瘤长度，b为肿瘤宽度。出于动物实验伦理，在小鼠生存期试验中当小鼠肿瘤体积超过2000mm3即视为小鼠死亡并将小鼠安乐死。
(4)实验结果
如图1所示，负载B16F10肿瘤组织全细胞组分中水溶性组分的疫苗处理组小鼠的肿瘤在接种后50％消失；而作为对照的，负载水溶性多肽的纳米粒子组小鼠的肿瘤在接种后只有13％左右消失。而PBS对照组和空白纳米粒对照组小鼠的肿瘤都长大。这说明与几种水溶性多肽抗原相比，肿瘤组织水溶性组分中多样性的抗原有利于刺激产生免疫反应。综上所述，本发明所述的负载多种肿瘤组织的水溶性组分的纳米疫苗对黑色素瘤具有良好的预防效果。
实施例2黑色素瘤和结肠癌癌细胞水溶性组分负载于微米粒子内部和表面用于黑色素瘤的预防
本实施例以小鼠黑色素瘤为癌症模型来说明如何制备负载有黑色素瘤和结肠癌细胞组分中水溶性部分的微米疫苗，并应用该疫苗预防黑色素瘤。
本实施例中，首先裂解B16F10黑色素瘤和MC38结肠癌细胞以制备水溶性组分组分。然后，以有机高分子材料PLGA为微米粒子骨架材料，以CpG为免疫佐剂采用溶剂挥发法制备负载有全细胞的水溶性组分的微米疫苗。然后采用该微米疫苗来预防黑色素瘤。
(1)癌细胞的裂解及各组分的收集
收集一定量的B16F10细胞或MC38细胞，去除培养基后采用-20℃到-273℃冷冻，加一定量超纯水后反复冻融3次以上，并可伴有超声以破坏裂解细胞。待细胞裂解后，将裂解物以3000g的转速离心5min取上清液即为LLC肺癌细胞中可溶于纯水的水溶性组分。上述所得来源于两种癌细胞裂解物的水溶性组分按1:1混合即为制备微米疫苗的抗原来源。
(2)微米疫苗的制备
本实施例中制备微米疫苗及作为对照的空白微米粒采用溶剂挥发法中的复乳法，所采用的微米粒子制备材料为有机高分子材料PLGA分子量为38KDa-54KDa，所采用的免疫佐剂为CPG且CPG既分布于微米粒子内部也负载于微米粒子表面。制备方法如前所述。在微米粒子表面负载细胞组分和免疫佐剂后所得微米疫苗粒径为1.80μm左右，微米粒子平均表面电位为-5mV左右。每1mg PLGA微米粒子负载220μg蛋白质或多肽组分，每1mg PLGA微米粒内外所使用的CPG免疫佐剂为0.02mg且内外各半。空白微米粒粒径为1.70μm左右，空白微米粒制备时分别采用含有等量CPG的纯水代替相对应的水溶性组分。
(3)微米疫苗用于癌症的预防
选取6-8周的雌性C57BL/6制备黑色素瘤荷瘤小鼠。微米疫苗组方案如下：在接种黑色素瘤之前第28天、第21天、第14天和第7天分别皮下注射400μL负载癌水溶性成分的4mgPLGA微米疫苗。在第0天给每只小鼠背部右下方皮下接种1.5×105个B16F10细胞。PBS空白对照组方案如下：在接种黑色素瘤之前第28天、第21天、第14天和第7天分别皮下注射400μLPBS。在第0天给每只小鼠背部右下方皮下接种1.5×105个B16F10细胞。空白微米粒+细胞裂解物对照组：在接种黑色素瘤之前第28天、第21天、第14天和第7天分别皮下注射400μL空白微米粒子和与疫苗中等量的水溶性组分。在第0天给每只小鼠背部右下方皮下接种1.5×105个B16F10细胞。
在实验中，从第3天开始每3天记录一次小鼠肿瘤体积的大小。肿瘤体积采用公式v＝0.52×a×b2计算，其中v为肿瘤体积，a为肿瘤长度，b为肿瘤宽度。由于动物实验伦理，在小鼠生存期试验中当小鼠肿瘤体积超过2000mm3即视为小鼠死亡并将小鼠安乐死。
(4)实验结果
如图2所示，与PBS空白对照组相比，空白微米粒+水溶性组分对照组相比，微米疫苗给药组中小鼠肿瘤体积生长速度均明显变慢且小鼠生存期均明显延长。而且，微米疫苗给药组中小鼠有部分小鼠肿瘤接种后完全消失。由此可见，本发明所述的负载黑色素瘤和结肠癌细胞水溶性组分的微米疫苗对黑色素瘤具有预防效果。
实施例3黑色素瘤肿瘤组织全细胞组分中的非水溶性组分负载于纳米粒子内部和表面用于黑色素瘤的预防
本实施例以小鼠黑色素瘤为癌症模型来说明如何制备负载有黑色素瘤肿瘤组织全细胞组分中非水溶性组分的纳米疫苗，并应用该疫苗预防黑色素瘤。
本实施例中，以B16F10小鼠黑色素瘤细胞为癌症模型。首先裂解B16F10黑色素瘤肿瘤组织并以8M尿素增溶原非水溶性组分。然后，以有机高分子材料PLGA为纳米粒骨架材料，以poly(I:C)为免疫佐剂制备负载有肿瘤组织的非水溶性组分的纳米疫苗。然后采用该纳米疫苗预防黑色素瘤。
(1)肿瘤组织的裂解及各组分的收集
在每只C57BL/6小鼠背部皮下接种1.5×105个B16-F10细胞，在肿瘤长到体积分别为约1000mm3时处死小鼠并摘取肿瘤组织。将肿瘤组织切块后研磨，通过细胞过滤网加入适量纯水并反复冻融5次，并可伴有超声以破坏裂解细胞。待细胞裂解后，将裂解物以1000g的转速离心5分钟，将上清液去掉并在沉淀部分中加入8M尿素溶解沉淀部分即可将不溶于纯水的非水溶性组分转化为在8M尿素水溶液中可溶。即为制备疫苗的原料来源。在对照纳米疫苗中，本实施例采用负载8M尿素增溶的水不溶性多肽B16-M05(Eef2,FVVKAYLPVNESFAFTADLRSNTGGQA),B16-M46(Actn4,NHSGLVTFQAFIDVMSRETTDTDTADQ),和TRP2:180-188(SVYDFFVWL)。
(2)纳米疫苗的制备
本实施例中纳米疫苗及作为对照的空白纳米粒以及负载多种多肽的纳米粒采用溶剂挥发法中的复乳法制备，所采用的纳米粒子制备材料PLGA分子量为24KDa-38KDa，所采用的免疫佐剂为poly(I:C)且poly(I:C)既分布于纳米粒子内部也负载于纳米粒子表面。制备方法如前所述。负载全细胞组分中非水溶性组分的纳米疫苗平均粒径为310nm左右，纳米疫苗表面电位为-6mV左右；每1mg PLGA纳米粒子约负载170μg蛋白质或多肽组分，每1mgPLGA纳米粒内外所使用的poly(I:C)免疫佐剂共约为0.02mg且内外各半。空白纳米粒粒径为260nm左右，空白纳米粒制备时采用含有等量poly(I:C)的8M尿素代替相对应非水溶性组分。负载多肽的纳米粒制备方法同制备负载非水溶性组分的制备方法，所使用的poly(I:C)的量也相同，多肽纳米粒粒径约为320nm,每1mg PLGA纳米粒子约负载160μg多肽组分。
(3)纳米疫苗用于癌症的预防
本研究对照组分别是PBS组和空白纳米粒+游离非水溶性组分组。选取6-8周的雌性C57BL/6为模型小鼠制备黑色素瘤荷瘤小鼠。
纳米疫苗组给药方案如下：在接种黑色素瘤之前第49天、第42天、第35天、第28天和第14天分别皮下注射400μL负载裂解物中非水溶性成分的4mg PLGA纳米疫苗。在第0天给每只小鼠背部右下方皮下接种1.5×105个B16F10细胞。
PBS对照组方案如下：在接种黑色素瘤之前第49天、42天、35天、28天和14天分别皮下注射400μL PBS。在第0天给每只小鼠背部右下方皮下接种1.5×105个B16F10细胞。空白纳米粒+游离非水溶性组分对照组：在接种黑色素瘤之前第49天、42天、35天、28天和14天分别皮下注射400μL空白纳米粒和与疫苗负载的等量的游离非水溶性组分。空白纳米粒和游离非水溶性组分注射在不同部位。在第0天给每只小鼠背部右下方皮下接种1.5×105个B16F10细胞。
多肽纳米粒组给药方案如下：在接种黑色素瘤之前第49天、第42天、第35天、第28天和第14天分别皮下注射400μL内部和表面都负载溶于8M尿素中原非水溶性成分的4mgPLGA纳米粒子。在第0天给每只小鼠背部右下方皮下接种1.5×105个B16F10细胞。
在实验中，从第3天开始每3天记录一次小鼠肿瘤体积的大小。肿瘤体积采用公式v＝0.52×a×b2计算，其中v为肿瘤体积，a为肿瘤长度，b为肿瘤宽度。出于动物实验伦理，在小鼠生存期试验中当小鼠肿瘤体积超过2000mm3即视为小鼠死亡并将小鼠安乐死。
(4)实验结果
如图3所示，负载B16F10肿瘤组织全细胞组分中非水溶性组分的疫苗处理组小鼠的肿瘤在接种后40％消失；作为对照的，负载非水溶性多肽的纳米粒子组小鼠的肿瘤在接种后只有13％左右消失。而PBS对照组和空白纳米粒对照组小鼠的肿瘤都长大。综上所述，本发明所述的负载肿瘤组织的非水溶性组分的纳米疫苗对黑色素瘤具有良好的预防效果。
实施例4肺癌肿瘤组织和肝癌肿瘤组织裂解组分中非水溶性负载于微米粒子内部和表面用于肝癌的预防
本实施例以如何制备负载有肝癌和肺癌肿瘤组织裂解物组分中非水溶性组分的微米疫苗，并应用该疫苗预防肝癌。
本实施例中，将小鼠肝癌和肺癌肿瘤组织裂解物中分非水溶性组分按1:2的比例负载于纳米粒子内部和表面以制备微米疫苗。首先取得小鼠肺癌和肝癌肿瘤组织并将其裂解以制备瘤块组织的溶于6M盐酸胍中的原非水溶性组分。然后，以PLGA为微米粒骨架材料，以poly(I:C)为免疫佐剂制备微米疫苗。然后采用该微米疫苗来预防Hepa 1-6肝癌荷瘤小鼠体内的肿瘤。
(1)肿瘤组织的裂解及各组分的收集
在每只C57BL/6小鼠腋下皮下接种2×106个Hepa 1-6细胞或者2×106个LLC肺癌细胞，在各只小鼠所接种肿瘤长到体积分别为约1000mm3时处死小鼠并摘取肿瘤组织。后续处理方法同实施例3，只不过采用6M盐酸胍溶解非水溶性组分。
(2)微米疫苗的制备
方法同实施例2。不过，在本实施例中负载的是肝癌和肺癌肿瘤组织裂解物中分非水溶性组分1:2的混合物。
(3)微米疫苗用于癌症的预防
选取6-8周的雌性C57BL/6制备Hepa 1-6肝癌荷瘤小鼠。
在接种肝癌细胞之前第49天、第42天、第35天、第28天和第14天分别皮下注射400μL负载非水溶性成分的4mg PLGA微米疫苗；在第0天给每只小鼠右腋下皮下接种2×106个Hepa 1-6肝癌细胞。PBS空白对照组方案如下：在接种肝癌细胞之前第49天、第42天、第35天、第28天和第14天分别皮下注射400μL PBS；在第0天给每只小鼠右腋下皮下接种2×106个Hepa 1-6肝癌细胞。空白微米粒+游离非水溶性组分对照组：在接种肝癌细胞之前第49天、第42天、第35天、第28天和第14天分别皮下注射400μL空白微米粒和与疫苗所负载的等量的游离非水溶性组分；空白微米粒和游离细胞裂解物注射在不同部位；在第0天给每只小鼠右腋下皮下接种2×106个Hepa 1-6肝癌细胞。在实验中，从第3天开始每3天记录一次小鼠肿瘤体积的大小。肿瘤体积采用公式v＝0.52×a×b2计算，其中v为肿瘤体积，a为肿瘤长度，b为肿瘤宽度。出于动物实验伦理，在小鼠生存期试验中当小鼠肿瘤体积超过2000mm3即视为小鼠死亡并将小鼠安乐死。
(4)实验结果
如图4所示，PBS对照组以及空白微米粒+游离非水溶性组分对照组小鼠的肝癌肿瘤生长均较快。微米疫苗给药组小鼠在接种肿瘤后40％肿瘤消失。而且，含有佐剂的微米疫苗治疗效果好于无佐剂的微米疫苗。由此可见，本发明所述的负载肺癌肿瘤组织和肝癌肿瘤组织裂解物中非水溶性组分的微米疫苗对肝癌具有预防效果。
实施例5胰腺癌肿瘤组织裂解组分中的水溶性组分负载于纳米粒子内部和表面用于胰腺癌的治疗
本实施例以小鼠胰腺癌为癌症模型来说明如何制备负载有胰腺癌肿瘤组织裂解物中水溶性组分的纳米疫苗，并应用该疫苗治疗胰腺癌。
本实施例中，将小鼠Pan02胰腺癌肿瘤组织中的水溶性组分负载于纳米粒子内部和表面以制备纳米疫苗。首先取得小鼠胰腺癌肿瘤组织并将其裂解以制备水溶性组分。以PLGA为纳米粒子骨架材料，以poly(I:C)为免疫佐剂采用溶剂挥发法制备纳米疫苗。然后采用该纳米疫苗来治疗Pan02胰腺癌荷瘤小鼠体内的肿瘤。
(1)肿瘤组织的裂解及各组分的收集
在每只C57BL/6小鼠腋下皮下接种接种1×106个Pan02胰腺癌细胞，在各只小鼠所接种肿瘤长到体积分别为约1000mm3时处死小鼠并摘取肿瘤组织。癌细胞的裂解方法及各组分的收集方法同上。
(2)纳米疫苗的制备
本实施例中制备纳米疫苗制备方法同上。
(3)纳米疫苗用于癌症的预防
选取6-8周的雌性C57BL/6制备胰腺癌瘤小鼠。在第0天给每只小鼠背部右下方皮下接种1×106个个Pan02细胞。疫苗组在第4天、第7天、第10天、第15天和第20天分别皮下注射400μL的4mg PLGA纳米疫苗。PBS空白对照组在第4天、第7天、第10天、第15天和第20天分别皮下注射400μL PBS。空白纳米粒+水溶性组分对照组在第4天、第7天、第10天、第15天和第20天分别皮下注射400μL空白纳米粒和与疫苗所负载的等量的游离水溶性组分。在实验中，从第3天起每3天记录一次小鼠肿瘤体积的大小。肿瘤体积采用公式v＝0.52×a×b2计算，其中v为肿瘤体积，a为肿瘤长度，b为肿瘤宽度。出于动物实验伦理，在小鼠生存期试验中当小鼠肿瘤体积超过2000mm3即视为小鼠死亡并将小鼠安乐死。
(4)实验结果
如图5所示，与对照组相比，纳米疫苗组肿瘤生长速度明显变慢且小鼠生存期明显延长。而且，有部分小鼠肿瘤接种后消失。由此可见，本发明所述的负载胰腺癌肿瘤组织裂解物中水溶性组分的纳米疫苗对胰腺癌具有治疗效果。
实施例6肺癌肿瘤组织水溶性组分负载于甘露糖修饰的微米粒子内部用于肺癌的预防
本实施例以小鼠肺癌为癌症模型来说明如何制备负载有肺癌肿瘤组织全细胞组分中水溶性组分的微米疫苗，并应用该疫苗预防肺癌。在实际应用时具体剂型，佐剂，给药时间、给药次数、给药方案可根据情况调整。
本实施例中，首先取得小鼠肺癌的肿瘤组织并将其裂解以制备水溶性组分。然后，以PLGA和甘露糖修饰的PLGA为微米粒骨架材料，以CpG为免疫佐剂采用溶剂挥发法制备微米疫苗。该微米疫苗具有靶向树突状细胞的能力。
(1)肿瘤组织的裂解及各组分的收集
在每只C57BL/6小鼠腋下皮下接种2×106个LLC肺癌细胞，在小鼠所接种肿瘤长到1000mm3时处死小鼠并摘取肿瘤组织。其他处理方法同上。
(2)微米疫苗的制备
本实施例中制微米疫苗及作为对照的空微米粒采用溶剂挥发法中的复乳法，所采用微米粒子制备材料PLGA(50:50)分子量为38KDa-54KDa，所采用的甘露糖修饰的PLGA(50:50)分子量为38KDa-54KDa。未修饰PLGA，甘露糖修饰的PLGA的质量比为8:2。所采用的免疫佐剂为CpG且CpG分布于微米粒子内部。制备方法如前所述微米粒子平均粒径为1.90μm左右，平均表面电位为-8mV左右。每1mg PLGA纳米粒子负载75μg蛋白质或多肽组分,每1mgPLGA微米粒内所使用的CpG免疫佐剂为0.06mg。空白微米粒粒径为1.85μm左右，空白微米粒制备时分别采用含有等量CpG的纯水代替相对应的水溶性组分。
(3)靶向树突状细胞的微米疫苗用于癌症的预防
选取6-8周的雌性C57BL/6为模型小鼠制备肺癌荷瘤小鼠。疫苗组在肿瘤接种前第35天、第28天、第21天、第14天和第7天分别皮下注射400μL负载水溶性成分的4mg纳米疫苗。PBS空白对照组在肿瘤接种前第35天、第28天、第21天、第14天和第7天分别皮下注射400μLPBS。空白纳米粒+游离水溶性组分对照组在肿瘤接种前第35天、第28天、第21天、第14天和第7天分别皮下注射400μL空白纳米粒和与疫苗所负载的等量的游离水溶性组分。在第0天给每只小鼠背部右下方皮下接种2×106个个LLC肺癌细胞。在实验中，从第3天起每3天记录一次小鼠肿瘤体积的大小。肿瘤体积采用公式v＝0.52×a×b2计算，其中v为肿瘤体积，a为肿瘤长度，b为肿瘤宽度。出于动物实验伦理，在小鼠生存期试验中当小鼠肿瘤体积超过2000mm3即视为小鼠死亡并将小鼠安乐死。
(4)实验结果
如图6所示，与PBS对照组和空白微米粒+游离水溶性组分对照组相比，微米疫苗组小鼠肿瘤生长速度明显变慢且小鼠生存期明显延长。这说明本发明所述的负载肺癌肿瘤组织中水溶性组分主动靶向微米疫苗对肺癌具有预防效果。
实施例7肝癌肿瘤组织全细胞组分中水溶性组分负载于纳米粒子内部和表面并以卡介苗(BCG)为免疫佐剂的纳米疫苗用于肝癌的预防
本实施例以小鼠肝癌为癌症模型并以BCG中的水溶性组分为免疫佐剂来说明如何制备负载有肝癌肿瘤全细胞组分中水溶性组分的纳米疫苗并应用该疫苗预防肝癌。
本实施例中，首先裂解肝癌肿瘤组织并收集水溶性组分然后，以PLGA为纳米粒子骨架材料，以BCG为免疫佐剂采用溶剂挥发法制备纳米疫苗。
(1)肿瘤组织的裂解及各组分的收集
该实施例中肿瘤组织的裂解及裂解物收集同上。
(2)BCG的裂解及各组分的收集
该实施例中BCG的裂解及裂解物收集和增溶方法同实施例1中癌细胞的裂解方法，只是将癌细胞换成BCG。
(3)纳米疫苗的制备
本实施例中纳米疫苗的制备方法实施例1。但是在该实施例中，纳米疫苗负载的免疫佐剂由poly(I:C)换成了BCG中的水溶性组分。
(4)纳米疫苗用于肝癌的预防
选取雌性C57BL/6为模型小鼠制备肝癌荷瘤小鼠。疫苗组在肿瘤接种前第35天、第28天、第21天、第14天和第7天分别皮下注射400μL负载水溶性成分的4mg PLGA纳米疫苗。PBS空白对照组在肿瘤接种前第35天、第28天、第21天、第14天和第7天分别皮下注射400μLPBS。空白纳米粒+游离水溶性组分对照组在肿瘤接种前第35天、第28天、第21天、第14天和第7天分别皮下注射400μL空白纳米粒和与疫苗所负载的等量的游离水溶性组分。在第0天给每只小鼠背部右下方皮下接种2×106个Hepa1-6肝癌细胞。在实验中，从第3天起每3天记录一次小鼠肿瘤体积的大小。肿瘤体积采用公式v＝0.52×a×b2计算，其中v为肿瘤体积，a为肿瘤长度，b为肿瘤宽度。出于动物实验伦理，在小鼠生存期试验中当小鼠肿瘤体积超过2000mm3即视为小鼠死亡并将小鼠安乐死。
(4)实验结果
如图7所示，与对照组相比，以BCG为佐剂的纳米疫苗给药组肿瘤生长速度明显变慢且小鼠生存期明显延长。由此可见，本发明所述负载肝癌肿瘤组织全细胞组分中水溶性组分的纳米疫苗可以预防肝癌。
实施例8肺癌癌细胞水溶性组分负载于DEC205抗体修饰的纳米粒子内部用于肺癌的预防
本实施例以小鼠肺癌为癌症模型来说明如何制备负载有肺癌癌细胞全细胞组分中水溶性组分的纳米疫苗，并应用该疫苗预防肺癌。在实际应用时具体剂型，佐剂，给药时间、给药次数、给药方案可根据情况调整。
本实施例中，首先将小鼠LLC肺癌细胞裂解以制备水溶性组分。然后，以PLGA和DEC205抗体修饰的PLGA为纳米粒骨架材料，以CpG为免疫佐剂采用溶剂挥发法制备纳米疫苗。该纳米疫苗具有靶向树突状细胞的能力。
(1)肿瘤细胞的裂解及各组分的收集
LLC肺癌细胞的收集、裂解和水溶性组分的收集等处理方法同上。
(2)纳米疫苗的制备
本实施例中纳米疫苗及作为对照的空纳米粒采用溶剂挥发法中的复乳法制备，所采用纳米粒子制备材料PLGA(50:50)分子量为24KDa-38KDa，所采用的DEC205抗体修饰的PLGA(50:50)分子量为24KDa-38KDa。未修饰PLGA与DEC205抗体修饰的PLGA的质量比为8:2。所采用的免疫佐剂为MnCl2且MnCl2分布于纳米粒子内部。制备方法如前所述纳米粒子平均粒径为300nm左右。每1mg PLGA纳米粒子负载55μg蛋白质或多肽组分,每1mg PLGA纳米粒内所使用的MnCl2免疫佐剂为0.06mg。空白纳米粒粒径为280nm左右，空白纳米粒制备时分别采用含有等量MnCl2的纯水代替相对应的水溶性组分。
(3)靶向树突状细胞的纳米疫苗用于癌症的预防
选取6-8周的雌性C57BL/6为模型小鼠制备肺癌荷瘤小鼠。疫苗组在肿瘤接种前第35天、第28天、第21天、第14天和第7天分别皮下注射400μL负载水溶性成分的4mg纳米疫苗。PBS空白对照组在肿瘤接种前第35天、第28天、第21天、第14天和第7天分别皮下注射400μLPBS。空白纳米粒+游离水溶性组分对照组在肿瘤接种前第35天、第28天、第21天、第14天和第7天分别皮下注射400μL空白纳米粒和与疫苗所负载的等量的游离水溶性组分。在第0天给每只小鼠背部右下方皮下接种2×106个个LLC肺癌细胞。在实验中，从第3天起每3天记录一次小鼠肿瘤体积的大小。肿瘤体积采用公式v＝0.52×a×b2计算，其中v为肿瘤体积，a为肿瘤长度，b为肿瘤宽度。出于动物实验伦理，在小鼠生存期试验中当小鼠肿瘤体积超过2000mm3即视为小鼠死亡并将小鼠安乐死。
(4)实验结果
如图8所示，与PBS对照组和空白纳米粒+游离水溶性组分对照组相比，纳米疫苗组小鼠肿瘤生长速度明显变慢且小鼠生存期明显延长。这说明本发明所述的负载肺癌癌细胞中水溶性组分主动靶向纳米疫苗对肺癌具有预防效果。
实施例9结肠癌肿瘤组织和癌细胞水溶性组分负载于DEC205抗体修饰的纳米粒子内部用于结肠癌的预防
本实施例以小鼠结肠癌为癌症模型来说明如何制备负载有结肠癌肿瘤组织和癌细胞全细胞组分中水溶性组分的纳米疫苗，并应用该疫苗预防结肠癌。在实际应用时具体剂型，佐剂，给药时间、给药次数、给药方案可根据情况调整。
本实施例中，首先取得小鼠结肠癌的肿瘤组织和培养的癌细胞并将其裂解以制备水溶性组分混合物和非水溶性组分混合物。然后，以PLGA和DEC205抗体修饰的PLGA为纳米粒骨架材料，以CpG为免疫佐剂采用溶剂挥发法制备纳米疫苗。该纳米疫苗具有靶向树突状细胞的能力。
(1)肿瘤组织的裂解及各组分的收集
在每只C57BL/6小鼠腋下皮下接种2×106个MC38结肠癌细胞，在小鼠所接种肿瘤长到1000mm3时处死小鼠并摘取肿瘤组织，肿瘤组织裂解方法同上，肿瘤组织采用超纯水裂解后在5000g离心5分钟，收集上清液即为水溶性组分，采用8M尿素溶解沉淀部分即为原非水溶性组分。细胞培养得到的MC38细胞收集方法为离心后弃去培养基上清，并用PBS洗涤离心两遍，离心收集的细胞加入超纯水后在-20℃反复冻融5遍以上裂解癌细胞，超纯水裂解后在5000g离心5分钟，收集上清液即为水溶性组分，采用8M尿素溶解沉淀部分即为原非水溶性组分。将肿瘤组织的水溶性组分和癌细胞的水溶性组分按1:1的质量比混合即为用于制备纳米疫苗的水溶性组分混合物；将肿瘤组织的非水溶性组分和癌细胞的非水溶性组分按1:1的质量比混合即为用于制备纳米疫苗的非水溶性组分混合物。
(2)纳米疫苗的制备
本实施例中的纳米疫苗及作为对照的空纳米粒和对照纳米疫苗采用溶剂挥发法中的复乳法，各种纳米粒制备方法如前所述。实验中所采用纳米粒子制备材料PLGA(50:50)分子量为24KDa-38KDa，所采用的DEC205抗体修饰的PLGA(50:50)分子量为24KDa-38KDa。未修饰PLGA与DEC205抗体修饰的PLGA的质量比为8:2。靶向纳米疫苗内部只负载肿瘤组织和癌细胞水溶性组分混合物；所采用的免疫佐剂为CpG且CpG分布于纳米粒子内部；纳米疫苗平均粒径为290nm左右；每1mg PLGA纳米粒子负载50μg蛋白质或多肽组分；每1mg PLGA纳米粒内所使用的CpG免疫佐剂为0.04mg。无靶头的纳米疫苗内部负载肿瘤组织和癌细胞水溶性组分混合物或非水溶性组分的混合物；所采用的免疫佐剂为CpG且CpG分布于纳米粒子内部；纳米疫苗平均粒径为290nm左右；每1mg PLGA纳米粒子负载50μg蛋白质或多肽组分；每1mg PLGA纳米粒内所使用的CpG免疫佐剂为0.04mg。空白纳米粒粒径为270nm左右，空白纳米粒制备时分别采用含有等量CpG的溶液代替相对应的组分。
(3)靶向树突状细胞的纳米疫苗用于癌症的预防
选取6-8周的雌性C57BL/6为模型小鼠制备结肠癌荷瘤小鼠。纳米疫苗组在肿瘤接种前第35天、第28天、第21天、第14天和第7天分别皮下注射400μL内部负载水溶性成分的4mg纳米疫苗。PBS空白对照组在肿瘤接种前第35天、第28天、第21天、第14天和第7天分别皮下注射400μL PBS。空白纳米粒+游离水溶性组分对照组在肿瘤接种前第35天、第28天、第21天、第14天和第7天分别皮下注射400μL空白纳米粒和与疫苗所负载的等量的游离水溶性组分。对照纳米疫苗组在肿瘤接种前第35天、第28天、第21天、第14天和第7天分别皮下注射200μL内部负载水溶性成分的2mg纳米疫苗和200μL内部负载非水溶性成分的2mg纳米疫苗。在第0天给每只小鼠背部右下方皮下接种2×106个MC38结肠癌细胞。在实验中，从第3天起每3天记录一次小鼠肿瘤体积的大小。肿瘤体积采用公式v＝0.52×a×b2计算，其中v为肿瘤体积，a为肿瘤长度，b为肿瘤宽度。出于动物实验伦理，在小鼠生存期试验中当小鼠肿瘤体积超过2000mm3即视为小鼠死亡并将小鼠安乐死。
(4)实验结果
如图所示，与PBS对照组和空白纳米粒+游离水溶性组分对照组相比，对照纳米疫苗组小鼠和DEC205抗体靶向修饰纳米疫苗组小鼠肿瘤生长速度明显变慢且小鼠生存期明显延长。而且，DEC205抗体靶向修饰纳米疫苗组小鼠的生存期比对照纳米疫苗组要好。这说明本发明所述的负载结肠癌肿瘤组织和癌细胞中水溶性组分的主动靶向纳米疫苗对结肠癌具有良好的预防效果。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.一种预防或治疗癌症的疫苗系统，其特征在于：所述疫苗系统包括递送粒子及其负载的细胞组分，所述递送粒子为纳米粒子或微米粒子，所述细胞组分为来源于一种或一种以上癌细胞和/或肿瘤组织的全细胞组分中的水溶性组分或水溶性组分形成的混合物，或来源于一种或一种以上癌细胞和/或肿瘤组织的全细胞组分中的非水溶性组分或非水溶性组分形成的混合物。
2.根据权利要求1所述的疫苗系统，其特征在于：疫苗系统包括表面修饰有靶头的递送粒子及其负载的细胞组分，所述递送粒子为纳米粒子或微米粒子，所述细胞组分为来源于一种或一种以上癌细胞和/或肿瘤组织的全细胞组分中的水溶性组分或水溶性组分形成的混合物，或来源于一种或一种以上癌细胞和/或肿瘤组织的全细胞组分中的非水溶性组分或非水溶性组分形成的混合物。
3.根据权利要求2所述的疫苗系统，其特征在于：所述靶头为可靶向特定细胞的小分子化合物、抗体、多肽、糖类、脂类或核酸。
4.根据权利要求2所述的疫苗系统，其特征在于：所述靶头为甘露糖DEC205抗体、CD32抗体、CD11c抗体、CD103抗体、CD44抗体或CD40抗体。
5.根据权利要求2所述的疫苗系统，其特征在于：所述靶头靶向树突状细胞、巨噬细胞、B细胞、T细胞、NK细胞、NKT细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞或嗜碱性粒细胞。
6.根据权利要求1所述的疫苗系统，其特征在于：将癌细胞或肿瘤组织在-20℃～-273℃下冷冻，加水或不含增溶剂的水溶液后反复冻融裂解细胞，上清液为所述水溶性组分，沉淀中经增溶后可溶的部分为所述非水溶性组分。
7.根据权利要求6所述的疫苗系统，其特征在于：增溶所用的增溶剂选自尿素、盐酸胍、脱氧胆酸钠、十二烷基硫酸钠、甘油、蛋白质降解酶、白蛋白、卵磷脂、0.1-2000mg/mL的无机盐、Triton、吐温、醋酸、胆固醇、氨基酸、糖苷、胆碱、BrijTM-35、八乙二醇单月桂醚、3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐、洋地黄皂苷、月桂基二甲胺氧化物、
Figure FDA0003357813820000021
CA-630、二甲基亚砜、乙腈、乙醇、甲醇、N,N-二甲基甲酰胺、异丙醇、二氯甲烷、丙醇和乙酸乙酯中的一种或多种。
8.根据权利要求1所述的疫苗系统，其特征在于：所述水溶性组分或水溶性组分形成的混合物、所述非水溶性组分或非水溶性组分形成的混合物负载于递送粒子的内部和/或表面。
9.权利要求1-8所述的疫苗系统在制备预防或治疗癌症的药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述药物用于癌症发生前、癌症发生后或切除肿瘤组织后。
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