CN114099558A - 一种刺山柑果提取物的制备方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种刺山柑果提取物的制备方法及其应用，按如下步骤：去脂：刺山柑粉末，添加乙醇进行浸提；热水浸提：真空抽滤弃上清，滤渣加水，水浴后，超声辅助，再次真空抽滤，滤渣反复浸提多次，收集每次上清液；脱蛋白：将全部上清液置于真空旋转蒸发仪水浴浓缩10倍后脱蛋白，按浓缩液∶Sevage试剂＝3∶1比例混合，磁力搅拌，抽滤保留上清，反复脱蛋白数次；乙醇沉淀：添加无水乙醇至脱蛋白上清中使醇浓度达到80％，4℃过夜，抽滤弃上清，保留沉淀，无水乙醇洗沉淀一次，再用丙酮洗一次，自然晾干，得刺山柑水提物；用于治疗溃疡性结肠炎，具有抗炎、改善结肠组织病理形态的作用。
Description
技术领域
本发明涉及藤蔓类植物加工及应用技术领域，具体涉及一种刺山柑果提取物的制备方法及其应用。
背景技术
溃疡性结肠炎(UC)是一种慢性非特异性炎症性肠病，主要表现为腹痛、腹泻、里急后重及黏液脓血便等，病程迁延，多反复发作，严重时可发展为结肠癌，严重影响患者的生命质量。我国现有的流行病学资料统计数据显示，UC患病率、发病率均呈上升趋势，已成为我国的常见病和多发病。目前UC尚无特异的治疗方法，西医主要运用抗生素、糖皮质激素、5-氨基水杨酸(5-ASA)以及免疫抑制剂治疗，虽能够短期内缓解症状，但迁延难愈，尤其是对于顽固性UC治疗效果不理想。由于目前针对UC的治疗欠佳，大部分治疗方法及药物只能缓解病情，患者需要长期靠药物维持病情稳定，然而疾病仍易复发，因此，寻找新的研究方向以便更有效治疗UC迫在眉睫。
刺山柑(Capparis spinosa Linn.)属于山柑科山柑属植物，又名马槟榔、野西瓜，为藤本半灌木，根较长，呈辐射分布，叶呈圆形或椭圆形，极端耐旱，生于荒漠或半荒漠地带，在我国大多分布于新疆、甘肃、西藏等地区。刺山柑中含有丰富的黄酮、糖苷硫苷、生物碱、脂质及挥发性成分等。研究表明刺山柑具有多种药理活性，包括抑菌，抗炎止痛，抗氧化，降糖降脂，降血压，改善记忆，保肝及抗肿瘤等，刺山柑是一种常用的药用植物，在临床上主要用于银屑病、肩周炎、硬皮病、痛风及类风湿性关节炎等疾病的治疗。目前刺山柑多糖在治疗UC方面还未见报道。
因此，本领域技术人员提供了一种刺山柑果提取物的制备方法及其应用，以解决上述背景技术中提出的问题。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供一种刺山柑果提取物的制备方法，刺山柑果实粉碎后过60目筛备用，刺山柑粗多糖的提取及定量按如下步骤：
(1)、去脂：刺山柑粉末，添加乙醇进行浸提；
(2)、热水浸提：真空抽滤弃上清，滤渣加水，水浴后，超声辅助，离心取上清，滤渣反复浸提多次，收集每次上清液；
(3)、脱蛋白：将全部上清液置于真空旋转蒸发仪水浴浓缩10倍后脱蛋白，按浓缩液∶Sevage试剂＝3∶1比例混合，磁力搅拌，抽滤保留上清，反复脱蛋白数次；
(4)、乙醇沉淀：添加无水乙醇至脱蛋白上清中使醇浓度达到80％，4℃过夜，抽滤弃上清，保留沉淀，无水乙醇洗沉淀一次，再用丙酮洗一次，自然晾干，得刺山柑水提物；
(5)、得到0.22mm的过滤器除菌后密封保存。
优选的：所述步骤(1)中加入乙醇的体积占混合体积的95％，体积为1L，浸提时间为2h。
优选的：所述步骤(2)中加入1L温度为80℃的水，80℃搅拌3h。
优选的：所述步骤(2)中超声辅助时间为30min(50℃，300W)。
优选的：所述步骤(2)中离心为3000rpm，15min。
优选的：所述步骤(3)中真空旋转蒸发仪内水温为55℃。
优选的：所述步骤(4)自然晾干时间为3-4h。
本发明提供了一种刺山柑果提取物，该提取物主治溃疡性结肠炎，具有抗炎、改善结肠组织病理形态的作用。
本发明的技术效果和优点：
本发明用于治疗溃疡性结肠炎，能够有效减轻溃疡性结肠炎的炎症反应，改善肠道组织病理形态。
附图说明
图1是本发明药理学作用实验中各组小鼠体重变化图；
图2是本发明药理学作用实验中各组小鼠疾病活动指数分析图；
图3是本发明药理学作用实验中各组小鼠结肠形态对比图；
图4是本发明药理学作用实验中各组小鼠结肠长度分析图；
图5是本发明药理学作用实验中小鼠结肠组织形态变化；
图6是本发明药理学作用实验中各组小鼠小肠组织形态变化图；
图7是本发明药理学作用实验中炎性细胞因子的表达图；
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。本发明的实施例是为了示例和描述起见而给出的，而并不是无遗漏的或者将本发明限于所公开的形式。很多修改和变化对于本领域的普通技术人员而言是显而易见的。选择和描述实施例是为了更好说明本发明的原理和实际应用，并且使本领域的普通技术人员能够理解本发明从而设计适于特定用途的带有各种修改的各种实施例。
请参阅图1～7，在本实施例中提供一种刺山柑果提取物的制备方法，刺山柑果实粉碎后过60目筛备用，刺山柑粗多糖的提取及定量按如下步骤：
(1)、去脂：刺山柑粉末，添加乙醇进行浸提；
(2)、热水浸提：真空抽滤弃上清，滤渣加水，水浴后，超声辅助，离心取上清，滤渣反复浸提多次，收集每次上清液；
(3)、脱蛋白：将全部上清液置于真空旋转蒸发仪水浴浓缩10倍后脱蛋白，按浓缩液∶Sevage试剂＝3∶1比例混合，磁力搅拌，抽滤保留上清，反复脱蛋白数次；
(4)、乙醇沉淀：添加无水乙醇至脱蛋白上清中使醇浓度达到80％，4℃过夜，抽滤弃上清，保留沉淀，无水乙醇洗沉淀一次，再用丙酮洗一次，自然晾干，得刺山柑水提物；
(5)、得到0.22mm的过滤器除菌后密封保存。
实施例1
在本实施例中提供一种刺山柑果提取物的制备方法，刺山柑果实粉碎后过60目筛备用，刺山柑粗多糖的提取及定量按如下步骤：
(1)、去脂：刺山柑粉末100g，添加95％乙醇1L浸提2h；
(2)、热水浸提：真空抽滤弃上清，滤渣加水1L，80℃搅拌3h后，超声辅助30min(50℃，300W)，再次真空抽滤，滤渣反复浸提4次，收集每次上清液；
(3)、脱蛋白：将全部上清液置于真空旋转蒸发仪55℃水浴浓缩10倍后脱蛋白，按浓缩液∶Sevage试剂＝3∶1比例混合，磁力搅拌30min，抽滤保留上清，反复脱蛋白数次；
(4)、乙醇沉淀：添加无水乙醇至脱蛋白上清中使醇浓度达到80％，4℃过夜，抽滤弃上清，保留沉淀，无水乙醇洗沉淀一次，再用丙酮洗一次，自然晾干3h得刺山柑水提物；
(5)、得到0.22mm的过滤器除菌后密封保存。
药理学作用的实验：
1试验材料
实验动物：6-8周龄雄性昆明小鼠。
植物：采自新疆维吾尔自治区吐鲁番市风干的刺山柑果实，按上述方法制备刺山柑水提物。
试验材料：葡聚糖硫酸钠(DSS)，美沙拉嗪(5-ASA)，qRT-PCR试剂盒，糖原PAS染料试剂，Trizol试剂，甲苯胺蓝染料，氯仿，正丁醇，苯酚，硫酸，二甲苯，冰醋酸，无水乙醇。
2试验动物分组及处理
将小鼠随机分为5组(n＝7)，分别为对照(Untreated)组、葡聚糖硫酸钠(DSS)处理组、低浓度刺山柑粗水提物(CSWE(L))治疗组、高浓度刺山柑粗水提物(CSWE(H))治疗组和5-ASA阳性对照组。对照组给予蒸馏水，其余各组给予3％(wt/vol)DSS(MW 50000)连续7天诱导UC小鼠模型。DSS给药后，CSWE(L)组和CSWE(H)组分别灌胃200、400mg/kg/d的CSWE，5-ASA组灌胃220mg/kg/d的美沙拉嗪，连续7d。试验期间每隔一天记录体重和粪便出血度，评估疾病活动指数(DAI)以评判严重程度(见表1)。
表2-1疾病活动指数评分
3小鼠体重及结肠组织形态变化观察
试验期间小鼠隔天称重同时观察小鼠体重变化、粪便稀疏度及是否便血。第15天断颈处死小鼠，用无菌解剖刀，在无菌状态下取出整个肠道，测量结肠的长度。处死小鼠后，取结肠组织，过夜固定于4％多聚甲醛溶液中，然后经脱水、石蜡包埋，连续切片，随后对切片进行苏木精和伊红(Hematoxylin-eosinstaining，HE)染色，封片后在显微镜下观察拍照。并对组织病变程度进行评分(表2)。
表2组织学疾病评分
4炎性细胞因子的测定
(1)使用TRIzol试剂从结肠组织中提取RNA。
(2)用研钵在液氮中将组织磨碎，倒入EP管中。
(3)每管加入1mL预先冷却的TRIzol试剂，反复吹打至混匀后在冰盒中静置5min直至溶液澄清。
(4)将EP管在12000rpm离心5min后，收取上清液，加入200μ预冷氯仿，混匀后静置15min，12000rpm离心15min。
(5)收取无色上清液，加入500μL预冷的异丙醇混匀后静置5min，12000rpm离心10min，弃上清。
(6)将1mL预冷的DEPC水加入EP管中，12000rpm离心5min后，弃上清，此操作重复两次后，静置于冰上干燥8-10min。
(7)待提取的RNA干燥后，加入50μL RNase-Free H2O溶解RNA反复吹打，充分混匀后放置冰上静置20min，测定RNA浓度和纯度后，放入-80℃中备用。
(8)使用反转录试剂盒根据说明合成的cDNA，PCR在以下条件中进行：95℃持续10分钟，95℃持续15秒，52℃持续30秒(根据目标基因退后温度)，72℃持续45秒，40个循环。使用2-ΔΔCt方法计算基因的相对表达量。引物详细序列见表3-2。
表3 qRT-PCR引物序列
5试验结果
5.1体征变化
体重减轻，食欲不振，腹泻和便血是DSS诱导的结肠炎的典型特征。在DSS建模期间，于第3天开始出现食欲不振，粪便稀疏，第5天时体重明显下降，观察到不同程度的腹泻及明显的便血，表明建模成功。建模后CSWE给药期间，小鼠体征逐渐恢复，给药第五天，小鼠体重及粪便恢复正常状态。统计分析结果表明，与对照组相比，葡聚糖硫酸钠模型组(DSS组)，低浓度治疗组(200mg/ml CSWE组)体重显著降低(P＜0.05)；高浓度治疗组(400mg/mlCSWE组)与阳性对照(5-ASA组)无显著差异(图1)。疾病活动指数结果显示，DSS建模后DAI评分明显升高，而CSWE(L)，CSWE(H)组和5-ASA组DAI评分明显降低(如图2所示)。
5.2小鼠结肠形态学观察
各组小鼠结肠形态对比如图3，DSS建模组小鼠结肠充血肿胀，且结肠长度明显缩短，CSWE给药治疗后能够明显改善结肠充血肿胀及长度缩短特征，统计分析结果表明与对照组相比，DSS建模组结肠长度显著降低(P＜0.05)，其余治疗组呈现明显缓解小鼠结肠缩短的趋势(如图4所示)。
5.3 CSWE对DSS诱导的UC小鼠结肠及小肠组织学形态的影响
小鼠结肠组织的组织化学染色显微照片显示，DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠肠上皮细胞损失，杯状细胞浸润及隐窝损失严重(如图5a所示)。CSWE治疗后使隐窝恢复，肠上皮细胞及杯状细胞损害减轻，与阳性对照5-ASA治疗结果相一致。组织学疾病评分(如图5b所示)与DSS组相比，其余治疗组评分结果均显著低于DSS组(P＜0.001)。
小鼠小肠组织的组织化学染色显微照片显示，DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠小肠绒毛严重受损，CSWE及5-ASA治疗后显著改善了肠绒毛受损情况(如图6a所示)，且小肠绒毛量化结果(如图6b所示)同样表明CSWE及5-ASA治疗后小肠绒毛长度显著高于DSS组(P＜0.05)。
5.4 CSWE对DSS诱导的UC小鼠炎性细胞因子的影响
与对照组相比，DSS组干扰素-1β(IL-1β)的表达显著增加(P＜0.01)，肿瘤细胞坏死因子α(TNF-α)，白细胞介素-6(IL-6)及干扰素-γ(IFN-γ)明显升高，但无显著差异(图7)。与DSS组相比，CSWE治疗后显著降低了IL-1β的表达水平(P＜0.01)，且CSWE(H)处理组IL-6及IFN-γ的表达显著下降(P＜0.05)，CSWE(L)无显著差异，但呈下降趋势，表明CSWE治疗具有剂量依赖性。阳性对照5-ASA组结果表明促炎性细胞因子均呈现显著下降(P＜0.05)，CSWE治疗结果与阳性对照5-ASA治疗结果趋于一致(如图7所示)。
主治溃疡性结肠炎，具有抗炎、调控肠道菌群的效果。
临床表现为：腹痛、腹泻、里急后重及黏液脓血便等，治疗不及时则会导致贫血、消瘦、低蛋白血症和水电解质紊乱。
显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域及相关领域的普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都应属于本发明保护的范围。本发明中未具体描述和解释说明的结构、装置以及操作方法，如无特别说明和限定，均按照本领域的常规手段进行实施。
Claims (7)
1.一种刺山柑果提取物的制备方法，包括刺山柑果实粉碎后过60目筛备用，其特征在于，刺山柑粗多糖的提取及定量按如下步骤：
(1)、去脂：刺山柑粉末，添加乙醇进行浸提；
(2)、热水浸提：真空抽滤弃上清，滤渣加水，水浴后，超声辅助，离心取上清，滤渣反复浸提多次，收集每次上清液；
(3)、脱蛋白：将全部上清液置于真空旋转蒸发仪水浴浓缩10倍后脱蛋白，按浓缩液∶Sevage试剂＝3∶1比例混合，磁力搅拌，抽滤保留上清，反复脱蛋白数次；
(4)、乙醇沉淀：添加无水乙醇至脱蛋白上清中使醇浓度达到80％，4℃过夜，抽滤弃上清，保留沉淀，无水乙醇洗沉淀一次，再用丙酮洗一次，自然晾干，得刺山柑水提物；
(5)、得到0.22mm的过滤器除菌后密封保存。
2.根据权利要求1所述的一种刺山柑果提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中加入1L温度为80℃的水，80℃搅拌3h。
3.根据权利要求1所述的一种刺山柑果提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中超声辅助时间为30min(50℃，300W)。
4.根据权利要求1所述的一种刺山柑果提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中离心为3000rpm，15min 。
5.根据权利要求1所述的一种刺山柑果提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中真空旋转蒸发仪内水温为55℃。
6.根据权利要求1所述的一种刺山柑果提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)自然晾干时间为3-4h。
7.一种由权利要求1-6任一项所述刺山柑果提取物的应用，其特征在于，该提取物主治溃疡性结肠炎，具有抗炎、改善结肠组织病理形态的作用。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114949017A (zh) * | 2022-06-27 | 2022-08-30 | 新疆前进荣耀投资有限公司 | 一种刺山柑醇提物、制备方法及其在制备抗氧化产品和/或降血脂产品中的应用 |
| CN116889574A (zh) * | 2023-07-13 | 2023-10-17 | 深圳市中医院 | 白扁豆多糖在制备预防和/或治疗溃疡性结肠炎的产品中的应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101406497A (zh) * | 2008-11-26 | 2009-04-15 | 上海中医药大学 | 刺山柑提取物及其制备方法与应用 |
| CN102091104A (zh) * | 2009-12-15 | 2011-06-15 | 上海医药工业研究院 | 从刺山柑中获得精制提取物的方法及该提取物的应用 |
| CN109381497A (zh) * | 2017-08-08 | 2019-02-26 | 上海医药工业研究院 | 刺山柑提取物、其制备方法及应用 |
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Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101406497A (zh) * | 2008-11-26 | 2009-04-15 | 上海中医药大学 | 刺山柑提取物及其制备方法与应用 |
| CN102091104A (zh) * | 2009-12-15 | 2011-06-15 | 上海医药工业研究院 | 从刺山柑中获得精制提取物的方法及该提取物的应用 |
| CN109381497A (zh) * | 2017-08-08 | 2019-02-26 | 上海医药工业研究院 | 刺山柑提取物、其制备方法及应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 张瑜等: "刺山柑多糖提取及其抗炎镇痛作用研究", 《石河子大学学报(自然科学版)》 * |
| 朱晓薇等: "维药刺山柑水提物的降血糖作用研究", 《农垦医学》 * |
| 李明学: "槌果藤的药理研究", 《新疆中医药》 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114949017A (zh) * | 2022-06-27 | 2022-08-30 | 新疆前进荣耀投资有限公司 | 一种刺山柑醇提物、制备方法及其在制备抗氧化产品和/或降血脂产品中的应用 |
| CN116889574A (zh) * | 2023-07-13 | 2023-10-17 | 深圳市中医院 | 白扁豆多糖在制备预防和/或治疗溃疡性结肠炎的产品中的应用 |
| CN116889574B (zh) * | 2023-07-13 | 2024-06-04 | 深圳市中医院 | 白扁豆多糖在制备预防和/或治疗溃疡性结肠炎的药物中的应用 |
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