CN115671131B - 白簕多糖在制备治疗高尿酸疾病药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于中医药治疗高尿酸领域,具体涉及白簕多糖在制备治疗高尿酸疾病药物中的应用。当灌胃给药高尿酸血症大鼠250mg/kg,500mg/kg,1000mg/kg白簕多糖时,能降低血清中尿酸水平,且还具有可以缓解高尿酸血症机体内炎症和提高机体抗氧化能力的作用,能修复高尿酸引起的并发症肾功能损伤,与此同时,还能避免西药治疗引起的诸多肝肾、皮肤等不良反应,具有良好的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于中医药治疗高尿酸领域,具体涉及白簕多糖在制备治疗高尿酸疾病药物中的应用。
背景技术
痛风是一种由于嘌呤生物合成代谢增加,尿酸产生过多或因尿酸排泄不良而致血中尿酸升高,尿酸盐结晶沉积在关节滑膜、滑囊、软骨及其他组织中引起的反复发作性炎性疾病。以关节液和痛风石中可找到有双折光性的单水尿酸钠结晶为其特点。其临床特征为:高尿酸血症及尿酸盐结晶、沉积所致的特征性急性关节炎、痛风石、间质性肾炎,严重者见关节畸形及功能障碍,常伴尿酸性尿路结石。
目前西药是高尿酸血症的主要治疗手段,西药是高尿酸血症的主要治疗手段,根据药物的不同作用靶点可以将西药分为四大类,包括尿酸生成抑制剂、促尿酸排泄剂、加速尿酸溶解类药、兼具抑制尿酸生成与促尿酸排泄的药物。但是研究发现,上述西药使用后引起的并发症即药物相关不良反应较多,如别嘌醇的皮肤不良反应,苯溴马隆潜在的肝毒性,以及使用拉布立酶可能会导致患者出现一过性尿酸水平升高,部分不耐受的患者出现呕吐、发热、皮疹等不良反应,给患者造成了较为明显的不良后果。
因此急需一种既能降低高尿酸血症机体的尿酸水平,可以保护和修复痛风引起的肾功能损伤,同时减小不良反应的药物。
白簕(拉丁文名:Eleutherococcus trifoliatus),披散灌木,常攀附干其他灌木或乔木上。掌状复叶通常有小叶3片,叶柄有刺,小叶椭圆状卵形。根和叶入药,有清热解毒、祛风除湿之效。目前已研究发现,白簕具有治疗高血糖、抗疲劳等作用,但未见其有治疗高尿酸的良好作用。
发明内容
针对现有技术存在的不足,本发明提供白簕多糖在制备治疗高尿酸疾病药物中的应用。
为了实现本发明目的,采用的技术方案如下:
白簕多糖在制备治疗高尿酸疾病药物中的应用。
优选地,所述白簕多糖在制备降低血清中尿酸水平药物中的应用。
优选地,所述白簕多糖在制备修复高尿酸血症所致肾功能损伤的药物中的应用。
优选地,所述白簕多糖在制备降低血清中尿素氮和/或肌酐水平药物中的应用。
优选地,所述白簕多糖在制备缓解高尿酸血症机体内炎症的药物中的应用。
优选地,所述白簕多糖在制备降低血清中IL-6和/或TNF-α水平的药物中的应用。
优选地,所述白簕多糖在制备提高高尿酸血症机体抗氧化能力药物中的应用。
优选地,所述白簕多糖在制备降低MDA水平和/或升高血清中SOD水平药物中的应用。
优选地,成人体重以60kg计算,所述白簕多糖的人用剂量为1.8~7.2g/人/天,即30mg/kg/d~120mg/kg/d。
优选地,所述白簕多糖为从白簕中提取的成分。
优选地,所述白簕多糖的纯度为78~84%。
优选地,所述白簕多糖的提取方法包括:采用水提醇沉的方法提取多糖物质。
优选地,所述方法包括水提醇沉后,然后脱蛋白,过色谱柱纯化即得。
优选地,采用Sevag法脱蛋白。
优选地,所述提取方法为将干燥的白簕药材粉碎,加入 9~11 倍重量的蒸馏水,90~ 100℃水浴浸提 1~3 h,过滤,向滤渣中再次加入9~11倍重量的蒸馏水,90~100℃水浴浸提1~2 h,过滤,合并两次水提液,浓缩至固形物含量为10~20%,静置后6~8h后离心,将离心液浓缩至固形物含量为20~30%,过滤。
优选地,所述纯化为将用Sevag法脱蛋白后的滤液,依次经DEAE-52色谱柱、SephadexG-75色谱柱纯化处理,干燥,得白簕多糖。
优选地,白簕多糖制备方法为:将干燥的白簕药材粉碎,加入9~11倍重量的蒸馏水,90~100℃水浴浸提1~3 h,过滤,向滤渣中再次加入9~11倍重量的蒸馏水90~ 100℃水浴浸提1~2 h,过滤,合并两次水提液,浓缩至固形物含量为10~20%,静置后6~ 8h后离心,将离心液浓缩至固形物含量为20~30%,过滤,将滤液用Sevag法脱蛋白后,用DEAE-52色谱柱初步分离,依次用蒸馏水、浓度为0.05mol/L和0.2mol/L的氯化钠溶液梯度洗脱,流速为1.3mL/min,收集多糖组分,随后用SephadexG-75色谱柱纯化,蒸馏水洗脱,流速为0.5mL/min,合并流分,浓缩,透析,干燥,得白簕多糖。
与现有技术相比,本发明的有益效果:
(1)本发明研究发现,白簕多糖可显著降低高尿酸血症模型小鼠血清尿酸水平并修复高尿酸血症模型所致肾功能损伤,且呈量效关系。
(2)适量的白簕多糖可显著降低高尿酸血症模型小鼠血清IL-6水平、TNF-α水平,可有效缓解高尿酸血症模型小鼠体内炎症。
(3)白簕多糖均可显著降低高尿酸血症模型小鼠体内MDA水平,升高SOD水平,可提升机体抗氧化能力,有效缓解体内应激症状。
(4)白簕多糖可修复高尿酸血症模型所致肾脏病变,有效改善肾功能损伤。
附图说明
图1为实施例中空白组小鼠肾脏组织结构图;
图2为实施例中模型组小鼠肾脏组织结构图;
图3为实施例中阳性组小鼠肾脏组织结构图;
图4为实施例中白簕多糖低剂量组小鼠肾脏组织结构图;
图5为实施例中白簕多糖中剂量组小鼠肾脏组织结构图;
图6为实施例中白簕多糖高剂量组小鼠肾脏组织结构图。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明做进一步说明。
白簕多糖制备方法为:将干燥的白簕药材粉碎,加入9~11倍重量的蒸馏水,90~100℃水浴浸提1~3 h,过滤,向滤渣中再次加入9~11倍重量的蒸馏水90~ 100℃水浴浸提1~2 h,过滤,合并两次水提液,浓缩至固形物含量为10~20%,静置后6~8h后离心,将离心液浓缩至固形物含量为20~30%,过滤,将滤液用Sevag法脱蛋白后,用DEAE-52色谱柱初步分离,依次用蒸馏水、浓度为0.05mol/L和0.2mol/L的氯化钠溶液梯度洗脱,流速为1.3mL/min,收集多糖组分,随后用SephadexG-75色谱柱纯化,蒸馏水洗脱,流速为0.5mL/min,合并流分,浓缩,透析,干燥,得白簕多糖。制得的白簕多糖的纯度为78~84%。
以下实施例降尿酸试验采用的白簕多糖制备方法为:将干燥的白簕药材粉碎,加入10倍重量的蒸馏水,100℃水浴浸提2 h,过滤,向滤渣中再次加入10倍重量的蒸馏水100℃水浴浸提1h,过滤,合并两次水提液,浓缩至固形物含量为15%,静置后7h后离心,将离心液浓缩至固形物含量为25%,过滤,将滤液用Sevag法脱蛋白后,用DEAE-52色谱柱初步分离,依次用蒸馏水、浓度为0.05mol/L和0.2mol/L的氯化钠溶液梯度洗脱,流速为1.3mL/min,收集多糖组分,随后用SephadexG-75色谱柱纯化,蒸馏水洗脱,流速为0.5mL/min,合并流分,浓缩,透析,干燥,得白簕多糖。经测定,白簕多糖的纯度为80%。
实施例白簕多糖降尿酸作用
1.动物分组
选取36只18-22g雄性KM小鼠,SPF 级环境适应性喂养一周,随机分为6组:正常组、模型组、阳性组、白簕低、中、高剂量组,每组6只。
2.动物造模及给药
除正常组外,其余各组动物给予氧嗪酸钾(250mg/kg)联合次黄嘌呤(300mg/kg)腹腔注射建立高尿酸血症小鼠模型。小鼠进行分组后,分别于上午9时进行造模给药,造模给药2h后进行治疗给药。阳性组给予别嘌呤醇5mg/kg,低、中、高剂量组分别灌胃250mg/kg,500mg/kg,1000mg/kg白簕多糖,连续给药4周。
试验期间,于每周固定时间测量小鼠体重并观察动物变化情况。第4周末次给药后,禁食不禁水12h,眼眶取血,4℃ 4000r离心15min,取血清于-80℃保存待用。取肾脏置于4%多聚甲醛中保存。
3.实验检测及结果分析
3.1实验结束后采用全自动生化分析仪检测小鼠血清中尿酸(UA)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cre)水平,结果见表1;
结果分析:如表1所示,模型组小鼠血清UA、BUN、Cre值均显著(P<0.01)高于空白组,提示高尿酸血症模型造模成功。
灌胃给药4周,低、中、高剂量白簕多糖均能显著降低高尿酸血症模型小鼠血清UA。BUN和Cre是评价肾功能的经典指标,低中高剂量白簕多糖均能显著降低高尿酸血症模型小鼠血清BUN;中、高剂量白簕多糖能够显著降低高尿酸模型小鼠血清Cre。结果表明,白簕多糖可显著降低高尿酸血症模型小鼠血清尿酸水平并修复高尿酸血症模型所致肾功能损伤,且呈量效关系。
3.2采用Elisa法检测血清中IL-6,TNF-α,MDA,SOD水平,结果见表2;
表2 白簕多糖对高尿酸血症模型小鼠血清IL-6、TNF-α、MDA、SOD的影响
IL-6(pg/mL) | TNF-α(nmol/L) | MDA(ng/L) | SOD(pg/mL) | |
空白组 | 109.335±19.04* | 787.92±46.55** | 7.24±0.97** | 53.22±7.15* |
模型组 | 137.26±18.29 | 928.19±84.20 | 9.56±0.53 | 44.65±4.90 |
阳性组 | 108.90±12.96* | 820.85±74.66* | 6.78±0.67** | 59.46±4.70** |
低剂量组 | 132.79±20.84 | 829.75±90.82 | 7.99±1.32** | 50.89±4.42* |
中剂量组 | 124.43±8.32 | 802.59±65.17* | 7.73±0.73** | 54.14±8.19* |
高剂量组 | 109.82±13.27* | 761.76±76.34** | 7.16±0.51** | 54.58±4.97* |
注:与模型组相比,*P<0.05,**P<0.01
结果分析:如表2所示,模型组小鼠血清IL-6、TNF-α、MDA水平均显著高于空白组SOD水平显著低于空白组,说明高尿酸血症模型小鼠体内存在炎症、应激反应。
IL-6、TNF-α是炎症影响因子,高剂量白簕多糖可显著降低高尿酸血症模型小鼠血清IL-6水平;中、高剂量白簕多糖可显著降低高尿酸血症模型小鼠血清TNF-α水平,提示白簕多糖可有效缓解高尿酸血症模型小鼠体内炎症。MDA、SOD是抗氧化指标,低中高剂量白簕多糖均可显著降低高尿酸血症模型小鼠体内MDA水平,升高SOD水平,提示白簕多糖可提升机体抗氧化能力,有效缓解体内应激症状。
3.3通过HE染色观察肾脏的组织结构变化,结果见图1-6。对比给药组(低、中、高剂量组)与空白组、模型组间的差异,评价治疗效果。
结果分析:如图1-6所示,空白组肾单位结构完整,肾小管结构清晰,细胞形态正常且饱满,肾小球结构清楚。模型组胞质疏松,部分严重至空泡化,肾小管扩张并产生局部炎性细胞浸润,肾小球边缘模糊。阳性组广泛肾小管扩张,肾小球萎缩变形,炎性细胞浸润,管腔内可见炎性细胞和坏死细胞碎片。经给药干预后,肾小球形态正常,界限清晰,空泡数量减少、体积减小,炎性细胞浸润情况有所缓解,且高剂量组尤为明显。提示高尿酸血症模型小鼠肾脏存在一定程度病变,阳性药别嘌呤醇具有肾脏毒性,白簕多糖可修复高尿酸血症模型所致肾脏病变,有效改善肾功能损伤。
上述详细说明是针对本发明其中之一可行实施例的具体说明,该实施例并非用以限制本发明的专利范围,凡未脱离本发明所为的等效实施或变更,均应包含于本发明技术方案的范围内。
Claims (5)
1.白簕多糖在制备治疗高尿酸血症药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述白簕多糖能降低血清中尿酸水平。
3.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述白簕多糖能降低血清中尿素氮和/或肌酐水平。
4.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,成人体重以60kg计算,所述白簕多糖的成人用药剂量为1.8~7.2g/人/天。
5.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述白簕多糖为从白簕中提取的成分。
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